[논문]십자화과 작물 종자에서 종자전염 세균 및 바이러스 동시 검출을 위한 One-step Multiplex RT-PCR 방법

정규식; 소은희

doi:10.5423/rpd.2011.17.1.052

십자화과 작물 종자에서 종자전염 세균 및 바이러스 동시 검출을 위한 One-step Multiplex RT-PCR 방법
One-step Multiplex RT-PCR Method for Simultaneous Detection of Seed Transmissible Bacterium and Virus Occurring on Brassicaceae Crop Seeds 원문보기

Research in plant disease = 식물병연구, v.17 no.1, 2011년, pp.52 - 58

초록
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우리나라에서 주로 재배되는 십자화과 작물(상추, 콜라비, 무, 배추, 양배추)의 종자 전염 병원균 중에서 세균성 병원균 Xanthomonns campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스 병원균 Lettuce Mosaic Virus(LMV)를 종자에서 동시검출하기 위한 One-step multiplex RT-PCR을 개발하였다. 각각의 병원균을 특이적으로 증폭시키는 병원균 검출용 프라이머 2종(Xcc-F/R, LMV-F/R)을 primerblast 프로그램을 이용하여 제작하였고 이들 프라이머 세트는 프라이머간 또는 병원균 cDNA간의 간섭없이 특이적으로 타겟 병원균만을 검출하였다. PCR을 이용한 병원균의 검출 최소 민감도는 1 ng이었다. 십자화과 작물중에서 유통 중인 콜라비 10품종, 상추 50품종, 무 20품종, 배추 20품종 그리고 양배추 20품종에 대한 종자 감염 병원균 검출을 위한 One-step multiplex RT-PCR 수행 결과, LMV는 전체 120품종 중에서 39품종에서 검출되었고, Xcc는 2개 품종에서 검출되었다. 그리고 50품종의 상추 종자 시료 중에 8품종의 시료에서 LMV와 Xcc가 동시 검출되었다.

Abstract ▼ AI-Helper

The aim of this research was to develop specific and sensitive PCR-based procedures for simultaneous detection of economically important plant pathogenic bacteria and seed borne virus in commercial Brassicaceae crop seeds, Xanthomonns campestris pv. campestris (Xcc) and Lettuce Mosaic Virus (LMV). Bacterial and virus diseases of Brassicaceae leaves are responsible for heavy losses. PCR with arbitral primers: selection of specific primers, performance of PCR with specific primers and determination of the threshold level for pathogens detection. To detect simultaneously the Xcc and LMV in commercial Brassicaceae crop seeds (lettuce, kohlrabi, radish, chinese cabbage and cabbage), two pairs of specific primer (LMV-F/R, Xcc-F/R) were synthesized by using primer-blast program (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/). The multiplex PCR for the two pathogens in Brassicaceae crop seeds could detect specifically without interference among primers and/or cDNA of other plant pathogens. The pathogen detection limit was determined at 1 ng of RNA extracted from pathogens. In the total PCR results for pathogen detection using commercial kohlrabi (10 varieties), lettuce (50 varieties), radish (20 varieties), chinese cabbage (20 varieties) and cabbage (20 varieties), LMV and Xcc were detected from 39 and 2 varieties, respectively. In the PCR result of lettuce, LMV and Xcc were simultaneously detected in 8 varieties.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 따라 시간 및 비용을 절감하며 세균과 바이러스를 동시에 검출할 수 있는 One-step multiplex RT-PCR 방법을 개발하여 유통중인 십자화과 작물 종자에 적용하여 검출 효능을 검정하였다. 개발된 Onestep multiplex RT-PCR 방법으로 민원 발생 종자의 분쟁 원인을 파악하고 신속한 민원 해결과 농업 현장의 지도 연구기관에서 보다 저렴하고 신속하며, 신뢰성 있는 진단에 도움을 주기 위해 새로운 동시검출법을 국내 최초로 개발하여 보고하고자 한다.

제안 방법

1 µl 5’,3’-primer (10 µM), 5 µl 10×buffer, 1 µl dNTP mixture (2.5 mM), 2.5 µl MgCl2 (50 mM), 1 µl AMV RT Taq polymerase, 2 µl DNA Taq polymerase와 DEPC D.W.를 첨가하여 전체 용량을 50 µl로 조절 하였다.
4품종의 콜라비 종자, 20품종의 상추 종자, 5품종의 무종자, 6품종의 배추 종자 그리고 4품종의 양배추 종자 시료에서 Positive control의 2개 증폭 단편 중 LMV의 증폭 단편과 같은 크기로 증폭된 DNA 단편을 확인하였다(Fig. 3, 4, 5). 8개의 상추 품종 시료에서는 두 가지 병원균의 증폭 단편과 같은 크기의 증폭된 DNA 단편을 확인하여 두 병원균이 동시 검출된 것을 확인하였다(Fig.
Nutrient agar 플레이트에서 배양된 세균과 분양받은 바이러스 감염주로부터 RNA 추출은 NucleoSpin® RNA II kit(Macherey-Nagel, Germany)를 이용하여 추출하였다.
특이적으로 합성한 프라이머 세트(Table 2)를 이용하였다. One-step multiplex RT-PCR은 RobusT^TM I RT-PCR kit(Finnzymes, Finland)의조건을 약간 수정하여 수행하였으며 프라이머의 특이성을 검정하기 위한 PCR 조건과 종자에서 병원균을 검출하기 위한 PCR 조건 등 2가지로 나누어서 수행하였다. 특이성 검정을 위한 PCR 조건으로 추출 키트를 이용하여 각각의 병원균에서 추출한 50 µl의 RNA중에 2 µl를 Templete(RNA)로 이용하였고, 종자에서 병원균 검출을 위한 PCR 조건으로 50 µl의 추출 RNA중에 5 µl를 이용하였다.
를 첨가하여 전체 용량을 50 µl로 조절 하였다. PCR 온도조건은 Tm을 48℃, 50℃, 53℃, 55℃, 58℃로 설정하고 42℃에서 60분간 Reverse Transcription 반응을 시키고 94℃ 2분간 denaturation시킨 다음, 94℃에서 30초, Tm에서 30초, 72℃에서 1분간의 과정으로 40회 반복 수행 후, 최종적으로 72℃에서 10분간 반응시켰다. PCR 반응 후에 반응산물을 6× Lodding STAR(DYNE bio, Korea) 염색시약과 혼합하였고 이중 10 µl를 전기영동에 사용하였다.
RNA 추출은 NucleoSpin® Plant kit (Macherey-Nagel, Germany) 사용하여 추출하였다.
Xcc는 독특한 병원성 인자 발현유전자인 hrpF의 exon 부분의 염기서열을, LMV 경우는 외피단백질 유전자의 염기서열을 NCBI 홈페이지를 이용하여 탐색하였고 증폭산물이 일정한 크기로 각각 구별될 수 있도록 증폭산물의 크기를 고려하여 프라이머를 합성하였다(Table 2). 합성된 프라이머를 이용하여 Table 1에 열거된 병원균중에서 십자화과 작물 종자 전염병원균인 Xcc, LMV의 RNA를 추출하여 Table 2에서 열거된 프라이머 염기서열을 근거로 Tm을 48^oC, 50^oC, 53^oC, 55^oC, 58^oC로 각각 설정하고 바이러스와 세균에서 추출한 RNA를 동량으로 혼합한 시료에 합성된 프라이머 세트(Table 2)를 넣고 RT-PCR을 수행한 결과, Tm 50^oC의 경우 Xcc가 증폭되지 않았고 Tm 58^oC의 경우 LMV가 증폭되지 않았다.
우리나라에서 주로 재배되는 십자화과 작물(상추, 콜라비, 무, 배추, 양배추)의 종자 전염 병원균 중에서 세균성 병원균 Xanthomonns campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스 병원균 Lettuce Mosaic Virus(LMV)를 종자에서 동시검출하기 위한 One-step multiplex RT-PCR을 개발하였다. 각각의 병원균을 특이적으로 증폭시키는 병원균 검출용 프라이머 2종(Xcc-F/R, LMV-F/R)을 primer blast 프로그램을 이용하여 제작하였고 이들 프라이머 세트는 프라이머간 또는 병원균 cDNA간의 간섭없이 특이적으로 타겟 병원균만을 검출하였다.
campestris(Xcc)와 바이러스 병원균 Lettuce Mosaic Virus(LMV)를 종자에서 동시검출하기 위한 One-step multiplex RT-PCR을 개발하였다. 각각의 병원균을 특이적으로 증폭시키는 병원균 검출용 프라이머 2종(Xcc-F/R, LMV-F/R)을 primer blast 프로그램을 이용하여 제작하였고 이들 프라이머 세트는 프라이머간 또는 병원균 cDNA간의 간섭없이 특이적으로 타겟 병원균만을 검출하였다. PCR을 이용한 병원균의 검출 최소 민감도는 1 ng이었다.
개발된 PCR 검출 방법을 실제 유통 중인 십자화과 작물 종자인 순무(10품종), 상추(50품종), 무(20품종), 배추(20품종) 그리고 양배추(20품종) 종자에 적용하여 전염병원균의 유ㆍ무를 조사하였다. 종자 표면이 약품으로 코팅되어 있는 경우 코팅 처리된 약품이 PCR 반응을 저해할 수도 있기 때문에 종자를 멸균된 증류수로 잘 씻어 내고 하루 동안 건조시킨 후에 RNA 추출 방법을 이용하여 추출하였다.
십자화과 작물에 발생하는 종자 전염 바이러스(1종)과 세균(1종)의 검출을 위한 프라이머 2셋트를 제작하였다(Table 2). 프라이머 제작 프로그램은 primer-blast(http://www.
5%로 하여 110 volts로 90분간 수행하였을 때 증폭산물의 크기별로 뚜렷이 구별되었다. 이러한 결과로 multiplex RT-PCR을 수행하기 위한 최적의 Tm을 55^oC로 결정하였다. Tm을 55^oC로 설정하고 각각의 병원균에서 추출한 RNA를 100 ng부터 0.
이와 같이 이미 개발된 방법들은 세균과 바이러스를 대상으로 하여 여러가지 세균과 바이러스를 각각 따로 검출함에 따른 오랜 시간 소요와 multiplex IC/RT-PCR 방법, multiplex real-time PCR 방법 등은 검사 비용의 단점들을 가지고 있다. 이에 따라 시간 및 비용을 절감하며 세균과 바이러스를 동시에 검출할 수 있는 One-step multiplex RT-PCR 방법을 개발하여 유통중인 십자화과 작물 종자에 적용하여 검출 효능을 검정하였다. 개발된 Onestep multiplex RT-PCR 방법으로 민원 발생 종자의 분쟁 원인을 파악하고 신속한 민원 해결과 농업 현장의 지도 연구기관에서 보다 저렴하고 신속하며, 신뢰성 있는 진단에 도움을 주기 위해 새로운 동시검출법을 국내 최초로 개발하여 보고하고자 한다.
개발된 PCR 검출 방법을 실제 유통 중인 십자화과 작물 종자인 순무(10품종), 상추(50품종), 무(20품종), 배추(20품종) 그리고 양배추(20품종) 종자에 적용하여 전염병원균의 유ㆍ무를 조사하였다. 종자 표면이 약품으로 코팅되어 있는 경우 코팅 처리된 약품이 PCR 반응을 저해할 수도 있기 때문에 종자를 멸균된 증류수로 잘 씻어 내고 하루 동안 건조시킨 후에 RNA 추출 방법을 이용하여 추출하였다.
4). 증폭된 DNA가 LMV의 유전자 염기서열과 동일 여부를 검증하기 위해 NucleoSpin^R ExtractII kit(Macherey-Nagel, Germany)를 이용하여 증폭된 단편을 추출하여 염기서열을 분석하였다. NCBI Blast 프로그램을 이용하여 분석된 염기서열의 homology를 조사한 결과 LMV의 유전자 염기서열과 100%의 homology를 보여 검출된 병원균이 LMV임을 확인하였다.
추출된 RNA는 Qubit® fluorometer (Invitrogen, USA)를 이용하여 정량하였다.
추출된 RNA를 100 ng으로 정량한 후 10배 희석법으로 각각 100, 10, 1, 0.1 ng이 되도록 희석한 후에 PCR 민감도 검사에 이용하 였고 10 ng으로 정량한 여러 세균과 바이러스 추출 RNA 를 동량으로 혼합하여 Multiplex RT-PCR을 수행 후 프라이머 특이성을 확인하였다.
특이성 검정을 위한 PCR 조건으로 추출 키트를 이용하여 각각의 병원균에서 추출한 50 µl의 RNA중에 2 µl를 Templete(RNA)로 이용하였고, 종자에서 병원균 검출을 위한 PCR 조건으로 50 µl의 추출 RNA중에 5 µl를 이용하였다.

대상 데이터

2. Detection sensitivity test (Xcc KACC10377 and LMV 53) with 10 fold dilution RNA samples which were extracted from each pathogen. M, size marker (100 bp DNA ladder), Lane 1, 100 ng RNA extracted from each pathogen; Lane 2, 10 ng RNA extracted from each pathogen ; Lane 3, 1 ng RNA extracted from each pathogen; Lane 4, 0.
세균인 Xcv, Ecc, Cmm, Xcc, Pst는 농촌진흥청 유전자원센터(RDA gene bank)에서 분양받아 사용하였고 바이러스인 LMV, MNSV, SqMV, CGMMV, KGMMV, PMMoV, TMGMV는 농촌진흥청 농업과학원(RDA NAAS)에서 바이러스 감염주를 분양받아 사용하였다(Table 1). 그리고 각각의 병원균은 −80℃ 초저온 냉동고에 보관하며 실험에 사용하였다.
특이적으로 합성한 프라이머 세트(Table 2)를 이용하였다. One-step multiplex RT-PCR은 RobusT^TM I RT-PCR kit(Finnzymes, Finland)의조건을 약간 수정하여 수행하였으며 프라이머의 특이성을 검정하기 위한 PCR 조건과 종자에서 병원균을 검출하기 위한 PCR 조건 등 2가지로 나누어서 수행하였다.
십자화과 작물에 발생하는 종자 전염 바이러스(1종)과 세균(1종)의 검출을 위한 프라이머 2셋트를 제작하였다(Table 2). 프라이머 제작 프로그램은 primer-blast(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)로 NCBI 홈페이지에서 이용 가능한 프로그램을 사용하였다. 각각의 프라이머는 2종의 세균과 바이러스를 동시 진단할 경우에 프라이머간의 간섭 현상이 없는 조합을 선발하여 One-step multiplex RT-PCR에 이용하였다.

이론/모형

gov/tools/primer-blast/)로 NCBI 홈페이지에서 이용 가능한 프로그램을 사용하였다. 각각의 프라이머는 2종의 세균과 바이러스를 동시 진단할 경우에 프라이머간의 간섭 현상이 없는 조합을 선발하여 One-step multiplex RT-PCR에 이용하였다.

성능/효과

3, 4, 5). 8개의 상추 품종 시료에서는 두 가지 병원균의 증폭 단편과 같은 크기의 증폭된 DNA 단편을 확인하여 두 병원균이 동시 검출된 것을 확인하였다(Fig. 4). 증폭된 DNA가 LMV의 유전자 염기서열과 동일 여부를 검증하기 위해 NucleoSpin^R ExtractII kit(Macherey-Nagel, Germany)를 이용하여 증폭된 단편을 추출하여 염기서열을 분석하였다.
증폭된 DNA가 LMV의 유전자 염기서열과 동일 여부를 검증하기 위해 NucleoSpin^R ExtractII kit(Macherey-Nagel, Germany)를 이용하여 증폭된 단편을 추출하여 염기서열을 분석하였다. NCBI Blast 프로그램을 이용하여 분석된 염기서열의 homology를 조사한 결과 LMV의 유전자 염기서열과 100%의 homology를 보여 검출된 병원균이 LMV임을 확인하였다. 따라서 개발된 One-step multiplex RT-PCR 방법이 종자의 cDNA와 간섭없이 성공적으로 RT-PCR이 수행되어 특이적으로 LMV를 검출하였다는 것을 확인할 수 있었다.
1). PCR 수행 결과는 agarose gel의 농도를 1.5%로 하여 110 volts로 90분간 수행하였을 때 증폭산물의 크기별로 뚜렷이 구별되었다. 이러한 결과로 multiplex RT-PCR을 수행하기 위한 최적의 Tm을 55^oC로 결정하였다.
이러한 결과로 multiplex RT-PCR을 수행하기 위한 최적의 Tm을 55^oC로 결정하였다. Tm을 55^oC로 설정하고 각각의 병원균에서 추출한 RNA를 100 ng부터 0.1 ng까지 10배 희석법을 이용하여 희석시킨 시료를 가지고 One-step RT-PCR을 수행한 결과, 1 ng까지 PCR 증폭 산물을 확인할 수 있었다(Fig. 2). 따라서 병원균 검출 한계의 최소 농도를 1 ng으로 결정하였다.
각각 1품종의 무 종자와 배추 종자 시료에서 Xcc의 증폭 단편과 같은 크기로 증폭된 DNA 단편을 확인하였으며(Fig. 5) 증폭된 단편의 유전자를 분석하여 homology를 조사한 결과 Xcc의 염기서열과 100%의 homology를 보여 특이적으로 Xcc를 검출하였다는 것을 확인할 수 있었다. 무와 배추 품종 종자에서 Xcc의 감염율은 각각 5%씩 나타냈다.
십자화과 작물 중에서 유통 중인 콜라비 10품종, 상추 50품종, 무 20품종, 배추 20품종 그리고 양배추 20품종에 대한 종자 감염 병원균 검출을 위한 One-step multiplex RT-PCR 수행 결과, LMV는 전체 120품종 중에서 39품종에서 검출 되었고, Xcc는 2개 품종에서 검출되었다. 그리고 50품종의 상추 종자 시료 중에 8품종의 시료에서 LMV와 Xcc 가 동시 검출되었다.
기존의 multiplex PCR 방법은 세균과 바이러스를 각각 단독으로 개발하여 세균과 바이러스를 검출하기 위해서 개별적인 PCR을 수행하였기 때문에 시간과 비용이 이중으로 소비되었지만 본 실험에서 개발된 One-step multiplex RT-PCR 방법은 세균과 바이러스를 동시에 검출할 수 있으므로 시간과 비용을 절감하면서 효율적으로 종자 감염 병원균을 검출할 수 있었다.
NCBI Blast 프로그램을 이용하여 분석된 염기서열의 homology를 조사한 결과 LMV의 유전자 염기서열과 100%의 homology를 보여 검출된 병원균이 LMV임을 확인하였다. 따라서 개발된 One-step multiplex RT-PCR 방법이 종자의 cDNA와 간섭없이 성공적으로 RT-PCR이 수행되어 특이적으로 LMV를 검출하였다는 것을 확인할 수 있었다. 콜라비, 상추, 무, 양배추 그리고 배추 품종 종자에서 LMV의 감염율은 각각 40%, 40%, 25%, 30% 그리고 20%를 나타냈다.
이는 낮은 Tm으로 인해 Annealing 과정에서 프라이머가 타겟 유전자 부분 이외의 부분에 비특이적으로 결합되어 증폭되어진 것으로 추측 되어진다. 반면 Tm 55^oC로 설정하고 PCR 증폭 산물을 NucleoSpin^R Extract II kit(Macherey-Nagel, Germany)을 이용하여 세척한 후에 전기영동한 결과 모든 병원균이 특이적으로 증폭되는 것을 확인하였으며 각각의 프라이머와 RT(Reverse Transcription) 단계에서 만들어진 병원균들의 cDNA간에 상호간섭 없이 PCR이 수행되어 특이적으로 각각의 산물이 증폭되는 결과를 얻었다(Fig. 1). PCR 수행 결과는 agarose gel의 농도를 1.
PCR을 이용한 병원균의 검출 최소 민감도는 1 ng이었다. 십자화과 작물 중에서 유통 중인 콜라비 10품종, 상추 50품종, 무 20품종, 배추 20품종 그리고 양배추 20품종에 대한 종자 감염 병원균 검출을 위한 One-step multiplex RT-PCR 수행 결과, LMV는 전체 120품종 중에서 39품종에서 검출 되었고, Xcc는 2개 품종에서 검출되었다. 그리고 50품종의 상추 종자 시료 중에 8품종의 시료에서 LMV와 Xcc 가 동시 검출되었다.
따라서 개발된 One-step multiplex RT-PCR 방법이 종자의 cDNA와 간섭없이 성공적으로 RT-PCR이 수행되어 특이적으로 LMV를 검출하였다는 것을 확인할 수 있었다. 콜라비, 상추, 무, 양배추 그리고 배추 품종 종자에서 LMV의 감염율은 각각 40%, 40%, 25%, 30% 그리고 20%를 나타냈다.
특히 50개의 상추 품종 종자 시료 중에 8개의 품종 시료에서 LMV와 Xcc의 증폭 단편과 같은 크기로 증폭된 DNA 단편을 확인하였으며(Fig. 4) 증폭된 단편의 유전자를 분석하여 homology를 조사한 결과 LMV와 Xcc의 염기서열과 100%의 homology를 보여 특이적으로 LMV와 Xcc를 검출하였다는 것을 확인할 수 있었다. 동시 검출되었다는 것으로 개발된 PCR 방법이 복합 감염된 종자 시료에서 두 가지의 병원균을 성공적으로 동시 검출할 수 있다는 것을 의미하겠다.
Xcc는 독특한 병원성 인자 발현유전자인 hrpF의 exon 부분의 염기서열을, LMV 경우는 외피단백질 유전자의 염기서열을 NCBI 홈페이지를 이용하여 탐색하였고 증폭산물이 일정한 크기로 각각 구별될 수 있도록 증폭산물의 크기를 고려하여 프라이머를 합성하였다(Table 2). 합성된 프라이머를 이용하여 Table 1에 열거된 병원균중에서 십자화과 작물 종자 전염병원균인 Xcc, LMV의 RNA를 추출하여 Table 2에서 열거된 프라이머 염기서열을 근거로 Tm을 48^oC, 50^oC, 53^oC, 55^oC, 58^oC로 각각 설정하고 바이러스와 세균에서 추출한 RNA를 동량으로 혼합한 시료에 합성된 프라이머 세트(Table 2)를 넣고 RT-PCR을 수행한 결과, Tm 50^oC의 경우 Xcc가 증폭되지 않았고 Tm 58^oC의 경우 LMV가 증폭되지 않았다. 그러나 Tm 48^oC, 53^oC의 경우 비특이적으로 결합된 증폭산물이 확인되었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	우리나라에서 재배되는 십자화과 작물에는 무엇이 있는가?	우리나라에서 주로 재배되는 십자화과 작물은 무, 배추, 상추, 양배추 그리고 순무 등이 있으며 십자화과작물의 주요 종자전염 병원균은 세균인 Xanthomonas campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스인 Lettuce Mosaic Virus (LMV)가 있다.
	십자화과 작물의 주요 종자전염 병원균에는 무엇이 있는가?	우리나라에서 주로 재배되는 십자화과 작물은 무, 배추, 상추, 양배추 그리고 순무 등이 있으며 십자화과작물의 주요 종자전염 병원균은 세균인 Xanthomonas campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스인 Lettuce Mosaic Virus (LMV)가 있다. 검은썩음병(black rot)의 원인인 Xanthomonas campestris pv.
	세균인 Xanthomonas campestris pv. campestris(Xcc)와 바이러스인 Lettuce Mosaic Virus (LMV)의 치료가 어려운 이유는?	Potyviridae 과에 속하는 사상형의 외가닥 RNA 바이러스인 LMV도전세계적으로 십자화과 작물에 광범위하게 발병하여 잎에 얼룩, 누렁증상 후에 뒤틀림 증상이 나타나고 마지막엔 잎 주위가 괴사하여 상품적 가치를 떨어뜨려 Xcc와마찬가지로 재배 농가에 경제적 피해를 입히는 병원균이다(Lee, 1981). 두 병원균 모두 대부분 종자로 전염을 하며 감염 후에는 세균의 경우 세포 간극에 존재하고 바이 러스는 세포의 핵안에 존재하므로 화학적 방법으로 방제하거나 치료가 매우 어렵다(식물병리학 교재연구모임, 2006). 따라서 종자 상태에서부터 병원균 검출을 통한 종자의 병원균 감염 유ㆍ무를 확인하고 무균 종자를 보급 하는 방법만이 병 발생을 최소화 시킬 수 있는 대안책이 됨에 따라 이러한 병원균을 검출하기 위한 다양한 방법 들이 예전부터 시도되어 보고되어 왔다.

참고문헌 (21)

식물병리학 교재연구모임. 2006. 식물병리학(제5판). 월드싸이언스. 653-654, 764-769 pp.
홍성준, 홍연규, 이봉춘, 임미정, 윤영남, 황재복, 송석보, 박성태. 2007. PCR assay 이용 콩 종자에서 Xanthomonas axonopodis pv. glycines 검출 및 종자오염 조사. 식물병연구 13: 145-151.

원문보기 상세보기
Berg, T., Tesoriero, L. and Hailstones, D. L. 2006. A multiplex real-time PCR assay for detection of Xanthomonas campestris from brassicas. Lett. Appl. Microbiol. 42: 624-630.

상세보기
Cho, J. D., Kim, J. S., Lee, S. H. and Chung, B. N. 2007. Triplex Virion Capture (VC)/RT-PCR for Three Seed Transmissible Tobamoviruses of CGMMV, ZGMMV and KGMMV Occurring on Cucurbitaceae. Res. Plant Dis. 13: 82-87.

원문보기 상세보기
De Leon, L., Siverio, F. and Rodriguez, A. 2006. Detection of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis in tomato seeds using immunomagnetic separation. J. Microbiol. Methods 67: 141-149.

상세보기
Franken, A. A. J. M. 1992. Application of polyclonal and monoclonal antibodies for the detection of Xanthomonas campestris pv. campestris in crucifer seeds using immunofluorescence microscopy. Eur. J. Plant Pathol. 98: 95-106.
Ghabrial, S. A., Li, D. and Shepherd, R. J. 1982. Radioimmunosorbent Assay for Detection of Lettuce Mosaic Virus in Lettuce Seed. Plant Disease 66: 1037-1040.

상세보기
Jin, K. S., Kang, I. B., Ko, K. I., Lee, E. S., Heo, J. Y., Kang, Y. K. and Kim, B. K. 2001. Detection of Xanthomonas axonopodis pv. citri an Citrus Fruits Using Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Plant Pathol. J. 17: 62-66.

원문보기 상세보기
Kim, J. H., Choi, G. S., Kim, J. S., Lee, S. H., Choi, J. K. and Ryu, K. H. 2006. Development of single-tube multiplex immunocapture RT-PCR Assay for simultaneous detection of two pepper Tobamoviruses. Plant Pathol. J. 22: 164-167.

원문보기 상세보기
Kim, S. W., Kim, M. G., Kim, J., Lee, H. S. and Ro, H. S. 2007.Detection of a mycovirus OMSV in edible mushroom Pleurotus ostreatus using SPR biosensor chip. J. Virol. Methods.
Lee, S. H. 1981. Studies on virus disease occurring in various crops in Korea. Res. Report RDA 23: 62-74.
Lee, Y. A., Sung, A. N., Liu, T. F. and Lee, Y. S. 2009. Combination of chromogenic differential medium and estAspecific PCR for isolation and detection of phytopathogenic Xanthomonas spp. Appl. Environ. Microbiol. 75: 6831-6838.

상세보기
Massomo, S. M. S., Nielsen, H., Mabagala, R. B., Mansfeld-Giese, K., Hockenhull, J. and Mortensen, C. N. 2003.Identification and Characterisation of Xanthomonas campestris pv. campestris strains from tanzania by pathogenicity tests, biolog, rep-PCR and fatty acid methyl ester analysis. J. Plant Pathol. 109: 775-789.

상세보기
Park, D. S., Shim, J. K., Kim, J. S., Lim, C. K., Shrestha, R.,Hahn, J. H., Parrella, G., Verdin, E., Gognalons, P. andMarchoux, G. 2006. Detection and characterization of tobacco mild green mosaic virus (TMGMV) large type isolate from trailing petunia in france. Commun. Agric Appl. Biol. Sci. 71: 1237-1244.
Park, Y. J., Lee, B. M., Hahn, J. H., Lee, G. B. and Park, D. S.2004. Sensitive and specific detection of Xanthomonas campestis pv. campestris by PCR using species-specific primers based on hrpF gene sequence. Microbiological Research, 159: 419-423.

상세보기
Ro, H. S., Lee, N. J., Lee, C. W. and Lee, H. S. 2006. Isolation of a novel mycovirus OMIV in Pleurotus ostreatus and its detection using a triple antibody sandwich-ELISA. J. Virol. Methods 138: 24-29.

상세보기
Schaad, N. W. 1979. Serological identification of plant pathogenic bacteria. Annu. Rev. Phytopathol. 17: 123-147.

상세보기
Schaad, N. W. ed. 1980. Laboratory Guide of Identification of Plant Pathogenic Bacteria. APS Press, St. Paul, MN.
Sharman, M., Thomas, J. E. and Dietzgen, R. G. 2000. Development of a multiplex immunocapture PCR with colourimetric detection for viruses of banana. J. Virol. Methods 89: 75-88.

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Suehiro, N., Matsuda, K., Okuda, S. and Natsuaki, T. 2005. A simplified method for obtaining plant viral RNA for RT-PCR. J. Virol. Methods 125: 67-73.

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Zaccardelli, M., Campanile, F., Spasiano, A. and Merighi, M. 2007. Detection and identification of the crucifer pathogen, Xanthomonas campestris pv. campestris, by PCR amplification of the conserved Hrp/type III secretion system gene hrcC. Eur. J. Plant Pathol. 118: 299-306.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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