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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 건강한 rat에서 사염화탄소 투여 후 헛개나무 열수 추출물의 투여가 급성 간 및 신장 손상 시에 어떤 치료 효과가 있는지를 알아보고자 혈액학적, 혈액생화학적 검사를 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 따라서 본 연구에서는 헛개나무 열수 추출액이 rat에서 사염화탄소(CCl4)투여로 유발된 급성 간 손상 및 신장 손상시의 치료효과를 혈액학적, 혈액생화학적 측면에서 확인하고자 본 실험을 실시하였다.
제안 방법
- AST, ALT, GGT, ALP, Total cholesterol, Triglyce-ride, Total bilirubin, Amylase, Glucose, BUN, Creatinine은 dry chemistry analyzer (SpotchemTM SP-4410®, Kyoto Daiichi kagaku Co., Ltd. Japan) 기기를 사용하여 측정하였다.
- 본 실험에서는 헛개나무 열수 추출물이 rat에서 CCl4투여로 유발된 간장 손상 및 신장 손상 시 그 치료효과 유무를 확인하고자 rat에 사염화탄소 2.5 mg/kg을 복강 투여하여 급성 간 및 신장 손상을 유발한 후 사염화탄소 투여 12시간 후에 헛개나무 열수 추출물 100 mg/kg과 실리마린 50 mg/kg를 투여하고, 1일, 3일 및 7일째에 혈액학적, 혈액생화학적 검사를 실시하였다.
- 사염화탄소(CCl4)와 olive oil을 1:1로 희석한 후 2.5 mL/kg를 1회 복강 투여하였다. 실험군으로는 증류수 2.
- 실험군으로는 증류수 2.5 mL/kg를 투여한 DW군(정상 대조군), 사염화탄소(CCl4) 2.5 mL/kg를 투여한 CCl4군, 사염화탄소(CCl4) 2.5 mL/kg 투여 12시간 후 헛개나무 열수 추출물 100 mL/kg 투여한 CCl4+HDT군, CCl4 2.5 mL/kg 투여 12시간 후 Silymarin® 50 mL/kg를 투여한 CCl4+ Sily군으로 분군하였으며, 각 군당 18두의 rat를 사용하였다.
- 이상에서와 같이 본 연구에서 헛개나무 열수 추출물이 CCl4투여로 유발된 급성 간 및 신장 손상 시 Silymarin과 유사하게 간 세포 변성과 신장 세포 변성을 초기에 감소시켜 치유하는 치료효과가 있는 결과를 혈액생화학적 측면에서 확인하였다.
- 채혈은 복강대동맥에서 실시하였으며, 투여 후 1, 3, 7일에 각 군당 6두씩 채혈하였다. 채혈한 혈액은 2Na-EDTA가 35 μL 함유된 eppendorf tube에 1.
- 채혈한 혈액은 2Na-EDTA가 35 μL 함유된 eppendorf tube에 1.5 mL씩 분주하여 즉시 검사하였다.
대상 데이터
- 대구광역시 약령시장내 한약 건재상에서 구입한 헛개나무 열매를 음건하여 추출 수율을 향상시키기 위하여 분쇄기로 분쇄하여 사용하였다. 헛개나무 열매 분쇄물 100 g에 증류수 1 L를 혼합하여 37°C 항온수조에서 진탕(140 rpm, 4 hrs)한 후 이를 원심분리(4°C, 3000 rpm, 20 mins)한 후 여과(No.
- 실험동물로는 생후 7주령의 평균체중 200 g인 수컷 SD Rat 72두(오리엔트, 대전)를 사용하였고, 7일간 환경적응(22 ± 1°C, 습도 60 ± 5%, 빛 08:00-20:00)을 시켰으며 사료와 음수는 자유 급식하였다.
데이터처리
- 실험결과 각 군간의 유의성은 Student's t-test로 유의성(p < 0.01,p < 0.05)을 검정하였다.
이론/모형
- 총 적혈구 수(RBC), 총 백혈구 수(WBC)는 Neubauer 혈구계산판을 사용하였고, Hemoglobin(Hb)은 Hemocue®(Hb Concentration analyzer)를 이용하였고, 혈구용적(PCV)은 Microhematocrit법을 이용하였으며, 상기의 결과를 이용하여 MCV, MCH, MCHC를 계산하였다.
성능/효과
- 1. RBC와 PCV 수치는 전 실험군에서 실험기간동안 정상 대조군에 비하여 유의한 증가 경향을 나타내었으나(p < 0.01, p < 0.05), 이러한 변화는 정상 범위 내에서의 변화로 나타났다.
- 2. AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin, TG 활성치는 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4군, 헛개나무 추출액 투여군, Silymarin 투여군에서 현저한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 3개군 모두 실험 7일째에 정상 수치로 환원되었다.
- 3. ALP 활성치는 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4군에서 현저한 증가를 나타내었지만(p < 0.05) 헛개나무 추출액 투여군에서는 실험 3일째에 정상 대조군에 비하여 유의한감소를 나타내었다(p < 0.05).
- 4. BUN 활성치는 실험 7일째 정상 대조군에 비하여 CCl4 단독 투여군에서 현저한 증가를 나타낸(p < 0.05) 반면 헛개나무 추출액과 Silymarin 투여군에서는 전 실험기간동안 정상수치를 나타내었다.
- ALP 활성치는 실험 3일째 정상 대조군(165 IU/L)에 비하여 CCl4 + HDT군은 120 IU/L로 유의한 감소가 나타났다(p < 0.05) (Fig 8).
- ALP 활성치는 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4군에서 현저한 증가를 나타내었지만(p < 0.05) CCl4 + HDT군에서는 현저한 감소를 나타낸 바(p < 0.05) 이러한 경향은 간과 신장 손상에 의해 CCl4군과 CCl4 + Sily군에서 증가한 것으로 판단되며 CCl4 + HDT군이 CCl4군과 CCl4 + Sily군에 비해서 훨씬 낮게 나타낸 점이 주목할 만한 것으로 판단된다.
- AST 활성치는 실험 3일째 정상 대조군(68 IU/L)에 비하여 CCl4군은 7647 IU/L, CCl4 + HDT군은 6670 IU/L, CCl4 + Sily군은 5000 IU/L로 현저한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 7일째 정상 수치로 환원되었다(Fig 3).
- BUN 활성치는 실험 7일째 정상 대조군(19 mg/dl)에 비하여 CCl4군은 30 mg/dl로 유의한 증가를 나타낸(p < 0.05) 반면 CCl4 + HDT군은 17 mg/dl, CCl4 + Sily군은 18 mg/dl로 정상수치를 나타내었다(Fig 10).
- Cre 활성치는 실험 3일째 정상 대조군(0.7 mg/dl)에 비하여 CCl4군은 1.2 mg/dl로 유의한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 7일째 정상수치를 나타낸 반면, CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 전 실험기간동안 유의한 변화가 나타나지 않았다(Fig 11).
- Cre 활성치는 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4군에서 유의한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 7일째 정상수치를 나타낸 반면, CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 전 실험기간동안 유의한 변화가 나타나지 않았다.
- Creatinine 활성치 역시 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4단독 투여군에서 실험 3일째에 현저한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 실험 7일째에 정상 수치로 환원되었으나, 헛개나무 추출액 및 Silymarin 투여군에서는 전 실험기간동안 유의한 변화가 나타나지 않았다.
- T-Bil 활성치는 실험 3일째 정상 대조군(0.2 mg/dl)에 비하여 CCl4군은 1.5 mg/dl, CCl4 + HDT군은 1.3 mg/dl, CCl4 + Sily군은 0.8 mg/dl로 현저한 증가를 나타낸 후(p < 0.01) 7일째 정상 수치로 환원되었다(Fig 6).
- TG 활성치는 실험 3일째 정상 대조군(177 mg/dl)에 비하여 CCl4군은 324 mg/dl, CCl4 + HDT군은 236 mg/dl, CCl4 + Sily군은 259 mg/dl로 현저한 증가를 나타낸 후(p < 0.05) 7일째 정상 수치로 환원되었다(Fig 7).
- 05), 이러한 변화는 정상 범위 내에서의 변화로 나타났다. 따라서 CCl4투여로 인해 3개의 실험군 모두 RBC와 PCV 수치가 증가하는 경향을 나타내었지만 서로 간의 큰 차이점은 관찰되지 않았다. 한편 Hb, MCH, MCV 및 MCHC 수치는 전 실험군에서 실험기간동안 유의한 변화가 인정되지 않았다.
- 와 D-Glactosamine/Lipopoly-saccharide로 유발된 급성 간 손상 시 혈청 ALT와 AST 수치 증가를 막는다고 보고하였다. 본 연구에서도 헛개나무 열수 추출물이 CCl4투여로 유발된 급성 간 및 신장 손상 시에 AST, ALT 효소치의 현저한 감소를 나타낸바 이러한 결과는 지금까지의 보고와 일치하는 결과로 생각된다.
- 실험 1일째 CCl4를 투여하지 않고 증류수만을 투여한 정상 대조군에 비하여 CCl4군, CCl4 + HDT군, CCl4 + Sily군에서 AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin, TG의 활성치가 증가하기 시작한 것은 간과 신장세포가 손상되기 시작했다는 것을 의미하고 특히 AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin, TG 활성치는 실험 3일째 정상 대조군에 비하여 CCl4군, CCl4 + HDT군, CCl4 + Sily군에서 현저한 증가를 나타내었는데(p < 0.05) 이러한 경향은 간과 신장 손상 정도가 CCl4군에서 가장 높은 것으로 판단되며 AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin 활성치의 경우 CCl4군에 비해서 CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 현저한 감소를 나타내었으며 CCl4 + HDT군은 CCl4 + Sily군에 비하여서는 효과가 낮았으나 CCl4군에 비하여서는 유의한 감소를 나타낸 점과 TG 활성치의 경우 CCl4군에 비해서 CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 현저한 감소를 나타내었으며 특히 CCl4 + HDT군은 CCl4군과 CCl4 + Sily군에 비하여 감소경향을 나타내었으나 모든 실험군에서 실험 7일째에 정상 수치로 환원되었다.
- 이러한 결과를 통해 CCl4투여로 유발된 급성 간 및 신장 손상 시 헛개나무 열수 추출물 투여에 따라 실험 3일째 ALP 활성치의 현저한 감소가 나타난 것은 손상 초기에 헛개나무 열수 추출물의 치료효과가 있는 것으로 사료된다.
- 05) 이러한 경향은 간과 신장 손상 정도가 CCl4군에서 가장 높은 것으로 판단되며 AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin 활성치의 경우 CCl4군에 비해서 CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 현저한 감소를 나타내었으며 CCl4 + HDT군은 CCl4 + Sily군에 비하여서는 효과가 낮았으나 CCl4군에 비하여서는 유의한 감소를 나타낸 점과 TG 활성치의 경우 CCl4군에 비해서 CCl4 + HDT군과 CCl4 + Sily군에서는 현저한 감소를 나타내었으며 특히 CCl4 + HDT군은 CCl4군과 CCl4 + Sily군에 비하여 감소경향을 나타내었으나 모든 실험군에서 실험 7일째에 정상 수치로 환원되었다. 이러한 결과를 통해 CCl4투여로 유발된 급성 간 및 신장 손상 시 헛개나무 열수 추출물 투여에 의하여 실험 3일째 AST, ALT, T-cholesterol, T-bilirubin, TG 활성치의 현저한 감소가 나타난 것은 손상 초기에 헛개나무 열수 추출물의 치료효과가 있는 것으로 사료된다.
후속연구
- 그러나 헛개나무 열수 추출물이 사염화탄소(CCl4)투여로 유발된 급성 간 손상 및 신장 손상 시 치료효과를 나타내는 유효 성분(정확한 약효 성분)들에 대한 동정, 생리활성 평가, 작용 기전 및 치료 기전에 관한 규명 등이 계속 연구되어져야 할 것으로 사료된다.
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