선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 이에 본 연구에서는 PCVD로 진단된 이유자돈 환축의 조직 및 혈액에서 one-step PCR과 nPCR의 검출률을 비교하고 genotypes을 조사하여 농가 예방접종과 방역지도의 기초 자료로 활용하고자 시험을 실시하였다.
제안 방법
- 1차 PCR 산물을 primer 2a-F (fpward) 5'-AACAATCCACGGAGGAAGG-3'와 2a-R (reverse) 5'-GGGACCAACAAAATCTCY-3', 2b-F (foward) 5'-CTGTTTTCGAACGCAGTG-3'와 2b-R(reverse) 5'-CTCAAACCCCCGCTCTG-3'로 제작하여 각 primer 1 μl 를 PCR premix(Maxime PCR Premix i-StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 30초 57℃에 30초 및 72℃에 30초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하였다.
- 혈액 시료는 leucosep tube에 lymphocyte 용액을 분주하여 원심분리 후 혈액 3 ml을 넣어 2,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 백혈구층을 분리 후 냉동하여 실험에 사용하였다. DNA 는 Bioneer ExiPrep 16 automated nucleic acid extraction system을 사용하여 Viral DNA/RNA kit (Bioneer, Korea)를 이용하였으며 추출 후 NanoQuant Infinite M 200 (Tecan, Switzerland)으로 농도를 확인하였다.
- 1차 PCR 산물을 primer 2a-F (fpward) 5'-AACAATCCACGGAGGAAGG-3'와 2a-R (reverse) 5'-GGGACCAACAAAATCTCY-3', 2b-F (foward) 5'-CTGTTTTCGAACGCAGTG-3'와 2b-R(reverse) 5'-CTCAAACCCCCGCTCTG-3'로 제작하여 각 primer 1 μl 를 PCR premix(Maxime PCR Premix i-StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 30초 57℃에 30초 및 72℃에 30초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하였다. PCR 반응 산물은 MuiltiNA (SHIMADZU Bio, Japan) 자동전기영동 장치를 이용하여 증폭 band를 확인하였다.
- Primer는 Cap1 5'-ATGACGTATCCAAGGAGGCG-3' (1735∼1716)와 Cap2 5'-GGGTTTAAGTGGGGGGTCT-3' (1037∼1055)를 각 1 μl씩 PCR premix (Maxime PCR Premix i-StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 1분 50℃에 1분 및 72℃에 2분씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하여 PCV2 항원 양성을 확인하였다.
- Primer는 VF-2 (foward) 5'-GAAGAATGGAAGAAGCGG-3'과 nest-R (reverse) 5'-ACAGTCAGAACGCCCTCCT-3'로 각 primer 1 μl를 PCR premix(Maxime PCR Premix i- StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 30초 54℃에 30초 및 72℃에 40초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하였다.
- 또한, nPCR의 적용은 Lyoo 등(2008)과 동일한 방법으로 primer를 제작하여 실험하였다. Primer는 VF-2 (foward) 5'-GAAGAATGGAAGAAGCGG-3'과 nest-R (reverse) 5'-ACAGTCAGAACGCCCTCCT-3'로 각 primer 1 μl를 PCR premix(Maxime PCR Premix i- StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 30초 54℃에 30초 및 72℃에 40초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하였다.
대상 데이터
- 전북지역 양돈장에서 2006년부터 2010년까지 질병검사 의뢰된 40∼60일령의 자돈 가운데 위축 소견을 보인 48농가유래 52두의 폐 림프절 및 신장 조직과 2010년 의뢰된 관내 종돈장 2개소의 18두 및 양돈장 3개소의 24두의 혈액에서 백혈구를 분리하여 실험에 사용하였다.
이론/모형
- One-step PCR 검사는 Kim 등(2009)과 동일한 PCV-2의 ORF 2 gene에서 디자인한 primer를 제작하여 사용하였다. Primer는 Cap1 5'-ATGACGTATCCAAGGAGGCG-3' (1735∼1716)와 Cap2 5'-GGGTTTAAGTGGGGGGTCT-3' (1037∼1055)를 각 1 μl씩 PCR premix (Maxime PCR Premix i-StarTaq, iNtRON)에 첨가하여 94℃에서 5분, 94℃에 1분 50℃에 1분 및 72℃에 2분씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분 반응하여 PCV2 항원 양성을 확인하였다.
성능/효과
- PCV-2의 항원을 5개소의 농장 42건 혈액에서 검사한 결과 one-step PCR에서 21건(50.0%), nPCR에서 37건(88.1%)건이 양성이었으며 이중 종돈장(A, B) 2개소의 혈액 18건 중 one-step PCR에서 10건(55.6%), nPCR에서 13건(72.2%)건이 양성으로 16.6% 더 양성이 검출되었다. 또한, genotype 검사에서 A종돈장은 nPCR 양성 8건 중 PCV 2b만이 확인되었고 B종돈장은 PCV 2b가 3건(37.
- 9%)으로 확인되었다. 검사 결과를 년도별로 살펴보면 2010년 15개 시료 중 PCV 2a는 2건(13.3%), PCV 2b는 10건 (66.7)이었고, PCV 2a와 2b의 복합감염은 3건(20.0%)으로 나타났다. 또한, 2009년에서 2006년의 시료에서 PCV 2a는 확인되지 않았으며 PCV 2b의 단독감염과 PCV 2a와 2b의 복합감염은 2009년 10건(71.
- 그리고 PCV-2 항원의 검출률 비교에서 조직은 one-step PCR과 nPCR에서 100%로 양성률의 차이는 없었으며 genotype도 PCV 2a와 PCV 2b의감염 확인이 가능하였다. 그러나 혈액에서는 one-step PCR은 50.0%, nPCR은 88.1%의 양성률을 보여 검사법에 따른 검출률의 차이를 확인하였고, one-step PCR에서 음성축인 16두가 nPCR에서 양성으로 확인 되었고 검출률도 nPCR에서 38.1% 높게 나타나 시료에 따른 검사법의 검토가 필요할 것으로 확인되었다.
- 이것은 Kim 등(2010)이 국내 PMWS 감염축에서 2000년 이후 PCV 2a에서 PCV 2b로의 감염의 이동을 확인한 결과와 일치하였다. 그리고 PCV-2 항원의 검출률 비교에서 조직은 one-step PCR과 nPCR에서 100%로 양성률의 차이는 없었으며 genotype도 PCV 2a와 PCV 2b의감염 확인이 가능하였다. 그러나 혈액에서는 one-step PCR은 50.
- 5%)이었다. 농장별로 검사결과를 살펴보면 C양돈장은 PCV 2b는 7건(87.5%), PCV2a와 2b의 복합감염이 1건(12.5%), D양돈장은 PCV 2b만이 8건(100%), E양돈장은 PCV 2b는 6건(75.0%), PCV 2a와 2b의 복합감염이 2건(25.0%)이었다. 즉 혈액에서의 검사결과를 보면 PCV-2 항원은 one-step PCR보다 nPCR에서 38.
- 6% 더 양성이 검출되었다. 또한, genotype 검사에서 A종돈장은 nPCR 양성 8건 중 PCV 2b만이 확인되었고 B종돈장은 PCV 2b가 3건(37.5%), PCV 2a와 2b의 복합감염은 2건(25.0%)이었다. 양돈장(C-E) 혈액 24두의 PCV-2 항원 검사에서는 one-step PCR은 11건(45.
- 9%)이었다. 또한, 조직에 대해 PCV 2a와 2b의 primer를 이용 하여 직접 PCR 검사를 실시한 바, 52건 중 50건(96.1%)이 양성이었으며, 그 중 PCV 2a는 1건(1.9%), PCV 2b는 38건(75.0%), PCV 2a와 2b의 복합감염은 10건(19.2%)으로 확인되었다.
- 1). 또한, 조직에서 primer PCV 2a와 2b를 사용하여 직접 PCR을사용하여 검사한 결과 52건 중 50건(96.1%)이 양성이었으며 이중 PCV 2a는 1건(1.9%), PCV 2b는 39건 (75.0%), PCV 2a와 2b 복합감염은 10건(19.2%)으로 확인되었다.
- 7%로 보고하여 두 가지 genotype의 복합감염을 증명하였고, Cortey 등(2010)은 스페인의 PCV-2 genotype을 분석한 결과 1990년대에는 PCV 2a의 발생이 많았고 PMWS 발생이 증가하는 2000년대에 PCV 2b 발생이 증가한다고 보고했다. 본 조사에서도 nPCR법을 적용 하여 2006년에서 2010년까지 의뢰된 이유자돈 검사 대상물에서 PCV 2a와 2b의 복합감염을 확인하였고, PCV 2b의 감염률이 조직에서 67.3%와 혈액에서 76.2%로 주 원인체임을 확인할 수 있었다. 이것은 Kim 등(2010)이 국내 PMWS 감염축에서 2000년 이후 PCV 2a에서 PCV 2b로의 감염의 이동을 확인한 결과와 일치하였다.
- 조직에서 one-step PCR 검사결과 양성으로 확인된 52두의 동일 시료를 nPCR로 검사하여 모든 시료에서 양성을 확인하였으며 PCV-2 genotype을 검사한 결과 전체 52두 중 PCV 2a는 2건(3.8%), PCV 2b는 35건(67.3%), PCV 2a와 2b의 복합감염은 15건(28.9%)으로 확인되었다. 검사 결과를 년도별로 살펴보면 2010년 15개 시료 중 PCV 2a는 2건(13.
- 5%)이 양성이었다. 즉 혈액 42건 중 one-step PCR에서 21건 (50.0%)이, nPCR에서는 37건(88.1%)이 양성으로 조사 되어 혈액에서 PCV-2 검출률은 nPCR이 38.1% 더 높은 것으로 확인되었다.
- 0%)이었다. 즉 혈액에서의 검사결과를 보면 PCV-2 항원은 one-step PCR보다 nPCR에서 38.1% 양성이 더 검출되는 것을 확인하였다(Table 2).
- 혈액에서 PCV-2 검출률을 비교하기 위해 5개소 42건을 검사한 결과 종돈장의 핼액 18건 중 one-step PCR에서 10건(55.6%)이, nPCR에서는 13건(72.2%)이 양성이었다. genotype은 PCV2b 11건(61.
후속연구
- 또한, PRRS는 항원 및 항체 검사를 병행하여 관리하고 있으나 PCV-2는 항원만 실시하고 있으며 우수종 돈장 검사항목 중 10종 이상 발생하지 않으면 최우수, 8종 이상 발생하지 않으면 우수종돈장으로 인증 받을 수 있다. 그러나 이러한 검사체계는 PCV-2에 대한 종돈장에서의 철저한 관리가 우선시 되어야 양돈장의 질병을 관리할 수 있는 점을 고려할 때 더 철저한 규제가 필요하며 사육단계별 항원 검사는 혈액에서 이루어진다는 점을 감안할 때 PRRS뿐 아니라 PCV-2 에 대한 항원 검사의무화 및 방법에 대한 검토가 필요할 것으로 생각된다. 또한, 종돈장에서는 국가에서 규제를 위한 검사가 아닌 자율적인 검사와 방역이 이루어질 수 있도록 체계적인 질병 관리 시스템이 도입되어야 할 것이다.
- 그러나 이러한 검사체계는 PCV-2에 대한 종돈장에서의 철저한 관리가 우선시 되어야 양돈장의 질병을 관리할 수 있는 점을 고려할 때 더 철저한 규제가 필요하며 사육단계별 항원 검사는 혈액에서 이루어진다는 점을 감안할 때 PRRS뿐 아니라 PCV-2 에 대한 항원 검사의무화 및 방법에 대한 검토가 필요할 것으로 생각된다. 또한, 종돈장에서는 국가에서 규제를 위한 검사가 아닌 자율적인 검사와 방역이 이루어질 수 있도록 체계적인 질병 관리 시스템이 도입되어야 할 것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.