선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 승마(CR) 에탄올 추출물의 중추신경계 약리효능을 검정하기 위하여 행동약리 실험을 수행하였으며, 이 과정에서 승마(CR) 에탄올 추출물의 진정효능을 확인하였다. 이에 따라 승마(CR) 에탄올 추출물의 진정효능에 기여하는 활성성분을 확인하고자 추출물에서 분리된 주요성분인 cimicifugoside(CF), 24-epi-7,8-didehydrocimigenol-3-xyloside(24-epi), 27-deoxyacetein(27-deoxy)의 행동약리 실험도 수행하였다.
- 이에 따라 승마(CR) 에탄올 추출물의 진정효능에 기여하는 활성성분을 확인하고자 추출물에서 분리된 주요성분인 cimicifugoside(CF), 24-epi-7,8-didehydrocimigenol-3-xyloside(24-epi), 27-deoxyacetein(27-deoxy)의 행동약리 실험도 수행하였다. 진정효능은 중추신경계에서 작용하는 대표적인 억제성 신경전달물질인 GABA 성 신경을 통해 나타나는 것으로 알려져 있으므로,3) 승마(CR) 에탄올 추출물과 그 성분의 진정효과 기전이 GABA성 신경을 통해 나타나는지 확인하기 위해 전기 생리학적 실험을 수행하였다.
가설 설정
- 승마 성분 중에서는 24-epi.가 염소이온의 유입에 기여할 것으로 사료된다.
제안 방법
- 1주일간의 안정화 기간과 실험기간 중에는 항온(22±3o C), 항습(55±5%)이 유지되고, 적절한 조명(200~300 LUX)이 주어졌고 하루 12시간 단위로 명암 주기가 조절되었으며, 40 dB 이하의 소음이 없는 환경에서 사육하였고, 사육기간 동안 사료와 물은 자유롭게 먹을 수 있도록 하였다.
- 5, 10, 20 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였으며, 대조군은 같은 용량의 생리식염수를 경구투여 하였다. DZP(5 mg/kg)와 thiopental sodium(50 mg/kg)은 복강 내로 투여하였다. 행동약리실험은 각 시약을 투여하고 30분 후에 시행하였다.
- 모든 형광 값은 MQAE 이온-선택적 신호를 최대로 제거하는 5 µM valinomycin을 포함하는 HEPES-buffered KSCN 용액을 이용하여 따로 측정한 배경형광치(background fluorescence)를 통해 보정하였다.
- 세포내 염소이온의 농도 변화는 배양된 human neuroblastoma cell인 SH-SY5Y에 염소이온에 민감한 형광탐침인 N-(6- methoxyquinolyl) acetoetylester(MQAE)를 세포내로 봉입시킨후 실험을 통해 측정하였다.12) 실험과정은 West and Molly13)에 의해 설계된 방법으로 진행되었다.
- 승마 에탄올 추출물의 진정 효능을 검정하기 위해 승마 에탄올 추출물을 경구투여 한 생쥐에게 thiopental sodium을 복강 내 투여하여 수면 유도 시간과 수면 지속 시간이 어떻게 변화하는지 측정하였다. 수면의 시작은 정좌반사가 소실되는 시점을 기준으로 하였다.
- Methylphenidate(MPH)는 환인제약(주)(서울, 한국)에서 공급받아 사용하였다. 승마(CR) 에탄올 추출물은 증류수에 녹여 50, 100, 200 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였다. 승마(CR)의 세 가지 함유성분은 2.
- 승마(CR) 에탄올 추출물은 증류수에 녹여 50, 100, 200 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였다. 승마(CR)의 세 가지 함유성분은 2.5, 10, 20 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였으며, 대조군은 같은 용량의 생리식염수를 경구투여 하였다. DZP(5 mg/kg)와 thiopental sodium(50 mg/kg)은 복강 내로 투여하였다.
- 시험 박스(42×42×47 cm) 중앙에 생쥐를 놓고 10분간 움직이는 거리와 움직이는 시간, rearing frequency, turn angle degree를 측정하였으며, 가로, 세로 15 cm의 중앙에서의 일반운동 활성도 측정하였다.
- 1주일간의 안정화 기간과 실험기간 중에는 항온(22±3o C), 항습(55±5%)이 유지되고, 적절한 조명(200~300 LUX)이 주어졌고 하루 12시간 단위로 명암 주기가 조절되었으며, 40 dB 이하의 소음이 없는 환경에서 사육하였고, 사육기간 동안 사료와 물은 자유롭게 먹을 수 있도록 하였다. 실험 당일에는 승마(CR) 에탄올 추출물과 투여 약물을 경구투여 하고 30분 후에 각 실험을 시행하였다.
- 5 cm, 36 rpm 속도의 회전판(UGO BASILE, Italy)에서 떨어질 때까지 견디는 시간과 20분 동안 떨어지는 횟수를 측정하였다. 이 실험을 통해 동물의 운동 협응 능력과 균형감각, 근이완 작용을 평가하였다.
- 본 연구에서는 승마(CR) 에탄올 추출물의 중추신경계 약리효능을 검정하기 위하여 행동약리 실험을 수행하였으며, 이 과정에서 승마(CR) 에탄올 추출물의 진정효능을 확인하였다. 이에 따라 승마(CR) 에탄올 추출물의 진정효능에 기여하는 활성성분을 확인하고자 추출물에서 분리된 주요성분인 cimicifugoside(CF), 24-epi-7,8-didehydrocimigenol-3-xyloside(24-epi), 27-deoxyacetein(27-deoxy)의 행동약리 실험도 수행하였다. 진정효능은 중추신경계에서 작용하는 대표적인 억제성 신경전달물질인 GABA 성 신경을 통해 나타나는 것으로 알려져 있으므로,3) 승마(CR) 에탄올 추출물과 그 성분의 진정효과 기전이 GABA성 신경을 통해 나타나는지 확인하기 위해 전기 생리학적 실험을 수행하였다.
- 직경 3.5 cm, 36 rpm 속도의 회전판(UGO BASILE, Italy)에서 떨어질 때까지 견디는 시간과 20분 동안 떨어지는 횟수를 측정하였다. 이 실험을 통해 동물의 운동 협응 능력과 균형감각, 근이완 작용을 평가하였다.
- DZP(5 mg/kg)와 thiopental sodium(50 mg/kg)은 복강 내로 투여하였다. 행동약리실험은 각 시약을 투여하고 30분 후에 시행하였다.
대상 데이터
- 승마(CR) 에탄올 추출물과 활성 성분들(24-epi, CF, 27-deoxy)은 한약재 과학화 사업단에서 공급받아 사용하였다. Diazepam (DZP, 명인제약)과 thiopental sodium(중외제약)은 성십자약품(주) (서울, 한국)에서 구입하였으며, N-(6-methoxy-quinolyl)acetoetylester(MQAE)는 Invitrogen(Carlsbad, USA)에서 구입하였다. Methylphenidate(MPH)는 환인제약(주)(서울, 한국)에서 공급받아 사용하였다.
- Diazepam (DZP, 명인제약)과 thiopental sodium(중외제약)은 성십자약품(주) (서울, 한국)에서 구입하였으며, N-(6-methoxy-quinolyl)acetoetylester(MQAE)는 Invitrogen(Carlsbad, USA)에서 구입하였다. Methylphenidate(MPH)는 환인제약(주)(서울, 한국)에서 공급받아 사용하였다. 승마(CR) 에탄올 추출물은 증류수에 녹여 50, 100, 200 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였다.
- 승마(CR) 에탄올 추출물과 활성 성분들(24-epi, CF, 27-deoxy)은 한약재 과학화 사업단에서 공급받아 사용하였다. Diazepam (DZP, 명인제약)과 thiopental sodium(중외제약)은 성십자약품(주) (서울, 한국)에서 구입하였으며, N-(6-methoxy-quinolyl)acetoetylester(MQAE)는 Invitrogen(Carlsbad, USA)에서 구입하였다.
- 실험동물은 4주령 웅성 ICR 마우스를 한림 실험동물 주식회사(화성, 한국)에서 구입하였다. 1주일간의 안정화 기간과 실험기간 중에는 항온(22±3o C), 항습(55±5%)이 유지되고, 적절한 조명(200~300 LUX)이 주어졌고 하루 12시간 단위로 명암 주기가 조절되었으며, 40 dB 이하의 소음이 없는 환경에서 사육하였고, 사육기간 동안 사료와 물은 자유롭게 먹을 수 있도록 하였다.
- 시험 박스(42×42×47 cm) 중앙에 생쥐를 놓고 10분간 움직이는 거리와 움직이는 시간, rearing frequency, turn angle degree를 측정하였으며, 가로, 세로 15 cm의 중앙에서의 일반운동 활성도 측정하였다. 이 실험을 통해 얻은 결과는 정신 운동 기능의 항진과 저하, 진정, 흥분, 불안, 우울, 회피 정도의 자료로 활용하였다.9,10)
- 배양된 세포를 Hank's solution으로 두번 세척하였다. 형광(excitation wavelength=355 nm; emission wavelength=450 nm)을 교반중인 cuvette 내에서 측정하였다. 실험은 실온에서 시행하여 형광탐침이 새어 나오는 것을 최소화하였다.
데이터처리
- 05를 기준으로 하였다. Newman-Keuls test를 통해 모든 군의 유의성을 비교하였다.
- 통계처리를 위해 Oneway ANOVA를 사용하였으며, 유의성 검정은 p<0.05를 기준으로 하였다.
이론/모형
- 12) 실험과정은 West and Molly13)에 의해 설계된 방법으로 진행되었다. 배양된 세포를 4×105 cells/ ml로 Hank's solution에 현탁시킨후 MQAE를 최종농도 5 mM로 2시간 이상 배양하였다.
- 실험동물의 일반운동 활성을 측정하기 위해 비디오 모니터-컴퓨터 시스템으로 체계화된 EthoVision system(Noldus IT b.v., Netherlands)을 활용하였다. 시험 박스(42×42×47 cm) 중앙에 생쥐를 놓고 10분간 움직이는 거리와 움직이는 시간, rearing frequency, turn angle degree를 측정하였으며, 가로, 세로 15 cm의 중앙에서의 일반운동 활성도 측정하였다.
성능/효과
- 여러 가지 신체질환들이 통증, 메스꺼움, 이상감각, 호흡곤란, 위식도 역류, 죽음에 대한 불안 및 공포를 유발하며 동시에 불면증을 일으킬 수도 있다.1) 불면증의 유병율 조사에 의하면 성인의 약 30%가 불면증을 경험한다.2) 이 중 최소한 10%가 만성적인 불면증을 앓고 있다.
- 그러나 저용량을 사용할 때조차 항콜린성 부작용이 나타날 수 있다.1) 항히스타민제는 수면제로 사용하기에 효과가 약하다. Benzodiazepines는 안전하고 빠른 작용시간으로 인해 널리 사용되고 있다.
- 일반운동 활성은 동물의 운동 기능과 각성, 진정, 불안, 우울 등의 정서를 확인하는데 활용 된다.14) 일반운동 활성의 저하는 승마(CR)의 에탄올 추출물이 진정효과가 있음을 시사한다. 승마(CR)의 진정 효능은 다른 연구자도 보고한바 있으나 그 근원식물을 비교할 수는 없었다.
- )의 동속식물은 전 세계에 약 20여종이 분포하는 것으로 보고되어 있다.4) 우리나라에는 승마의 동속식물로 눈빛승마(C. dahurica Huth), 황새승마(C. foetida L.), 촛대승마(C. simplex Wormsk ex DC.) 등이 있다. 중국에서는 승마를 대삼엽승마로, 눈빛승마를 흥안승마로, 황새승마를 승마라고 한다.
- 6) 승마(CR)에 함유되어 있는 phenylpropanoid계열의 화합물은 isoferulic acid, ferulic acid, caffeic acid이다. 이들은 발한 및 피부의 발진을 촉진하며 진통작용을 나타낸다.
- Ferulic acid와 isoferulic acid를 influenza virus(1,000 PFU)를 감염시킨 실험동물에 경구투여하면 virus yield에는 영향을 미치지 않으나 murine IL-8의 생성을 강력하게 차단하여 염증 생성을 억제한다.7) Chromone계열의 visamminol, visnagin은 진경효과가 있고, cimicifugin은 중추억제작용을 나타낸다.8)
- 또한 수면 지속 시간을 증가시키는 효과가 있었다. GABAA receptor의 작용을 확인하기 위한 Cl- influx test에서 승마 에탄올 추출물은 염소이온의 유입을 증가시켰으며, 이러한 작용은 GABA 길항제인 bicuculline에 의해 차단되었으므로, 승마 에탄올 추출물의 효과가 GABA 수용체와 관련되어 있음을 간접적으로 확인할 수 있었다. 승마 성분 중에서는 24-epi.
- 와 27- deoxy. 또한 수면 지속 시간을 증가시키는 효과가 있었다. GABAA receptor의 작용을 확인하기 위한 Cl- influx test에서 승마 에탄올 추출물은 염소이온의 유입을 증가시켰으며, 이러한 작용은 GABA 길항제인 bicuculline에 의해 차단되었으므로, 승마 에탄올 추출물의 효과가 GABA 수용체와 관련되어 있음을 간접적으로 확인할 수 있었다.
- 승마 에탄올 추출물은 100 mg/kg의 용량에서 유의성 있게 수면 유도 시간을 감소시키는 효과가 있었다. 수면 지속 시간은 용량 의존적으로 유의성 있게 증가시켰다.
- 3). 승마 에탄올 추출물은 thiopental sodium의 수면 효과를 증가시킴으로써 진정 효과가 있음을 확인하였다. 이러한 효과에 기여 하는 성분으로는 24-epi.
- 실험은 실온에서 시행하여 형광탐침이 새어 나오는 것을 최소화하였다. 실험결과는 세포내 염소이온과 비례하는 값인 상대적 형광(F/F0; F0=염소이온이 없을 때 형광치, F=시간에 따른 형광치)으로 나타내었다. 모든 형광 값은 MQAE 이온-선택적 신호를 최대로 제거하는 5 µM valinomycin을 포함하는 HEPES-buffered KSCN 용액을 이용하여 따로 측정한 배경형광치(background fluorescence)를 통해 보정하였다.
- 이러한 결과를 종합해 볼 때 승마 에탄올 추출물은 일반운동 활성을 감소시키고, rotarod에서 떨어지는 횟수를 증가시켜 진정 효능을 나타내었다. 승마 에탄올 추출물은 thiopental sod.
- 2). 이러한 결과를 통해, 승마 에탄올 추출물이 일반운동 활성을 감소시킨 결과와 일치하게 진정효과를 초래함을 확인할 수 있었다.
후속연구
- 승마 에탄올 추출물과 그 함유성분의 진정 효능은 향후 불면증 치료제로써 개발 가능하다. 본 연구 결과는 부작용이 적은 불면증 치료제로써 승마 에탄올 추출물과 그 함유성분에 대한 연구가 더 필요함을 시사한다.
- 일 것으로 추정된다. 승마 에탄올 추출물과 그 함유성분의 진정 효능은 향후 불면증 치료제로써 개발 가능하다. 본 연구 결과는 부작용이 적은 불면증 치료제로써 승마 에탄올 추출물과 그 함유성분에 대한 연구가 더 필요함을 시사한다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.