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문제 정의
- 그런데, 한약 또는 한약재에 대하여 임신 중독을 유발하는 지의 여부는 실제 사람을 대상으로 하는 임상실험에서 그 결과를 살펴보아야 하지만, 힘든 측면이 많으므로, 사람과 유전형질이 비슷한 동물의 실험을 통해서 그 사실 여부를 간접적으로 입증할 수밖에 없는 형편이다. 이러한 이유 때문에 桃仁과 益母草가 임신의 독성에 미치는 영향을 살펴보기 위하여, 체중, 생식지수, 혈청 성분, 호르몬의 변화에 미치는 영향을 측정하여서, 임신 흰쥐에 대하여 의미 있는 결과를 얻었다.
- 따라서, 임신 중 금기약물의 한약재를 임신 쥐에게 투여해 봄으로써, 직접적인 동물실험을 통하여 실제 금기해야 하는지를 확인할 필요가 있다고 생각된다. 이번 연구에서는 현재 시중에서 活血祛瘀藥으로 무난하게 많이 활용되고 있는 益母草와 桃仁을 이용하여 임신 중 복용가능성 여부를 실험하게 되었다.
- 이와 같은 이유로 인하여, 益母草와 桃仁이 임신 독성에 미치는 영향을 살펴보기 위하여, 임신 흰쥐에 益母草와 桃仁의 물 추출물을 투여한 후에 체중, 생식지수, 혈청성분, 호르몬의 변화에 미치는 영향을 측정한 결과, 의미 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- rat의 체중을 임신 1일(질 도말 표본에 정충이 발견된 날)과 21일에 각각 측정하여 이 기간 동안의 증체량을 조사하였다.
- 益母草投與群과 桃仁投與群에는 각각의 물 추출액을 rat 100 g 당 1 ml(體重 100 g 당 益母草 혹은 桃仁 각 2g)씩 1일 1회 경구 투여하였다. 對照群에는 rat 100 g 당 1 ml의 생리식염수를 투여하였다.
- 益母草投與群과 桃仁投與群에는 각각의 물 추출액을 rat 100 g 당 1 ml(體重 100 g 당 益母草 혹은 桃仁 각 2g)씩 1일 1회 경구 투여하였다. 對照群에는 rat 100 g 당 1 ml의 생리식염수를 투여하였다.
- 益母草와 桃仁은 각 100 g 에 증류수 1,300㏄를 가하고直火 위에서 2시간 30분 동안 가열하고(대웅약탕기, 한국), 추출, 여과한 후 감압농축기를 활용하여 최종 50 ml 로 농축하여 실험에 이용하였다.
- 수정하여 임신을 확인한 후, 임신 2일째부터 8일째까지 1주일간 대조군과 益母草를 투여한 益母草投與群(이하 LSH group)과 桃仁을 투여한 桃仁投與群(이하 PPS group)으로 나누어서, 그 다음날(수정 후 2일째 날)부터 일주일간 약물을 경구투여 하였는데, 각 群 당 7마리씩 배치하여 실험에 응용하였다.
- 임신 21일에 ketamine(60 mg/㎏)으로 마취하고 開腹한 다음 자궁과 난소를 완전히 노출시켜 주위 조직으로부터 분리한 후, 황체수와 착상수를 조사한 다음, 태아를 획득하여 생존 태아수와 죽은 태아수, 태아와 태반의 무게를 조사하였다. 그리고 착상전과 착상 후 배아폐사율은 Fujinaga와 Mazze의 방법7)에 준하여 계산하였다.
- 임신 21일째가 되면 ketamine(60 mg/㎏)으로 마취하고 開腹하여 後大靜脈에서 採血해서 血漿을 분리하였고, 태아와 태반은 태막을 절개하여 각각 획득하여 생식지수를 조사하였다.
- 채취한 혈액에서 Na, K, BUN(blood urea nitrogen), creatine, ALT(alanine aminotransferase；GPT(glutamic pyruvate transaminase)), AST(aspartate aminotransferase；GOT(glutamic oxalacetic transaminase)), ALP(alkaline phosphatase), progesteron을 조사하였다. ALT는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto ALT 검사 시약(Daiichi, 일본), AST는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto AST 검사시약(Daiichi, 일본), ALP(alkaline phosphatase)의 활성도 측정은 JSCC법에 의해서 Pure auto ALP 검사시약(Daiichi, 일본), Na, K는 ISE 법에 의해서, BUN(blood urea nitrogen)은 Urea with GLDH(coupled enzyme) 법에 의해서 Pure auto UN 검사시약(Daiichi, 일본), creatine은 Jaffe 법에 의해서 Pure auto Cre(Daiichi, 일본) 검사시약으로 생화학 자동 분석기(Hitachi 7170 A, Hitachi, 일본)를 사용하여 측정하였다8).
대상 데이터
- Sprague-Dawley계 수컷 rat 1마리당 암컷 rat 2마리씩 1 cage에 담아서 임신을 유도하였다. 임신 확인은 임신 유도 시행 다음날 오전에 면봉으로 질 smear를 통해 현미경(×100)으로 확인하였다.
- 本 實驗에 사용한 益母草(한국산)와 桃仁(한국산)은 계림약업사(대구)에서 구입하여 대구한의대학교 본초학교실에서 검증한 후에 精選處理하여 사용하였다.
- 실험동물은 건강한 Sprague-Dawley계 雌性 임신 흰쥐를 固形飼料(삼양사)로 사육하면서 실험에 활용하였다.
데이터처리
- 各 群間의 實驗 結果 分析은 Student's t-test를 하여 有意性(P<0.05)을 檢證하였다.
이론/모형
- 채취한 혈액에서 Na, K, BUN(blood urea nitrogen), creatine, ALT(alanine aminotransferase；GPT(glutamic pyruvate transaminase)), AST(aspartate aminotransferase；GOT(glutamic oxalacetic transaminase)), ALP(alkaline phosphatase), progesteron을 조사하였다. ALT는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto ALT 검사 시약(Daiichi, 일본), AST는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto AST 검사시약(Daiichi, 일본), ALP(alkaline phosphatase)의 활성도 측정은 JSCC법에 의해서 Pure auto ALP 검사시약(Daiichi, 일본), Na, K는 ISE 법에 의해서, BUN(blood urea nitrogen)은 Urea with GLDH(coupled enzyme) 법에 의해서 Pure auto UN 검사시약(Daiichi, 일본), creatine은 Jaffe 법에 의해서 Pure auto Cre(Daiichi, 일본) 검사시약으로 생화학 자동 분석기(Hitachi 7170 A, Hitachi, 일본)를 사용하여 측정하였다8). Progesterone은 CLIA법에 의해서 ADVIA Centaur(Bayer, USA) 검사시약으로 ADVIA Centau(Bayer, USA)을 사용하여 측정하였다8).
- ALT는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto ALT 검사 시약(Daiichi, 일본), AST는 GSCC(DGKC)법에 의해서 Pure auto AST 검사시약(Daiichi, 일본), ALP(alkaline phosphatase)의 활성도 측정은 JSCC법에 의해서 Pure auto ALP 검사시약(Daiichi, 일본), Na, K는 ISE 법에 의해서, BUN(blood urea nitrogen)은 Urea with GLDH(coupled enzyme) 법에 의해서 Pure auto UN 검사시약(Daiichi, 일본), creatine은 Jaffe 법에 의해서 Pure auto Cre(Daiichi, 일본) 검사시약으로 생화학 자동 분석기(Hitachi 7170 A, Hitachi, 일본)를 사용하여 측정하였다8). Progesterone은 CLIA법에 의해서 ADVIA Centaur(Bayer, USA) 검사시약으로 ADVIA Centau(Bayer, USA)을 사용하여 측정하였다8).
- 임신 21일에 ketamine(60 mg/㎏)으로 마취하고 開腹한 다음 자궁과 난소를 완전히 노출시켜 주위 조직으로부터 분리한 후, 황체수와 착상수를 조사한 다음, 태아를 획득하여 생존 태아수와 죽은 태아수, 태아와 태반의 무게를 조사하였다. 그리고 착상전과 착상 후 배아폐사율은 Fujinaga와 Mazze의 방법7)에 준하여 계산하였다.
성능/효과
- 1. 임신 rat의 증체량을 조사한 결과, 임신 후 21일의 측정값이 1일의 측정값에 비해서 益母草投與群과 桃仁投與群은 대조군에 비하여 유의성 있는 변화를 나타내지 않았다.
- 2. 임신 rat의 생식지수에 미치는 影響을 살펴보았는데, corpora lutea(황체)의 수, 착상(implantation)의 수, 생존태아(viable fetuses)의 수, 착상전 배아폐사율(pre-implantation loss)(%), 착상후 배아폐사율(post-implantation loss)(%), 태아와 태반의 무게에서 益母草 投與群과 桃仁 투여군은 대조군에 비해서 유의성 있는 변화를 보이지 않았다.
- 3. 益母草 투여군과 桃仁 투여군에서는 BUN, creatine의 측정값이 대조군과 비교해서 유의성 있는 변화를 나타내지 않았다. 益母草 투여군과 桃仁 투여군에서는 ALT, AST, ALP의 측정값이 대조군과 비교해서 유의성 있는 변화를 나타내지 않았다.
- 4. 임신 호르몬의 변화를 측정하였는데, 혈청 progesterone의 함량은 益母草 投與群과 桃仁 투여군은 대조군에 비해서 유의성 있는 변화를 보이지 않았다.
- 5. 혈청 중 Na 함량과 K 함량을 측정한 결과, 益母草 투여군과 桃仁 투여군에서는 두 가지의 측정값이 대조군과 비교해서 유의성 있는 변화를 나타내지 않았다.
- . 그런데, 임신 rat의 증체량을 조사한 결과, 임신 후 21일의 측정값이 1일의 측정값에 비해서 益母草投與群은 56.90(%)가 증가하였고, 桃仁投與群은 57.31(%)가 증가하였으며, 두 가지 약물의 투여군은 생리식염수를 투여한 대조군이 52.45(%)가 증가한 것에 비하여 유의성 있는 변화는 없었다(Table 1). 따라서, 益母草와 桃仁은 임신 rat에 대하여 체중감소를 유발할 만큼의 독성은 없는 것으로 생각된다.
- 임신 흰쥐의 생식지수에 미치는 影響을 살펴보았는데, corpora lutea(황체)의 수, 착상(implantation)의 수, 생존태아(viable fetuses)의 수, 착상전 배아폐사율(pre-implantation loss)(%), 착상 후 배아폐사율(post-implantation loss)(%), 태아와 태반의 무게에서 益母草 投與群과 桃仁 투여군은 모두 대조군에 비해서 유의성 있는 변화를 보이지 않았다(Table 2). 따라서, 益母草와 桃仁은 생식에 전혀 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다. 그런데, 김 등25)은 桃仁이 姙娠에 미치는 影響의 연구에서 임신 15일째부터 투여하고 18일째에 開腹한 임신 쥐의 자궁의 卵着床數를 유의하게 감소하였다는 연구결과를 발표하였다.
- 생존태아수(viable fetuses)를 보면, 대조군이 14.857 ±1.902 이었고, 반면에 益母草 投與群은 15.286 ± 0.522, 桃仁 투여군은 16 ± 0.535 이었으며, 두 약물 투여군 모두의 값이 대조군에 비해서 유의성 있는 변화는 없었다.
- 274에 비하여 유의성 있는 변화는 없었다(Table 4). 이 결과로 보아서, 두 가지 약물은 progesterone의 분비를 억제하지 않아서 임신유지를 방해하지 않는 것으로 판단할 수 있다.
- 이상의 결과를 종합해볼 때, 益母草와 桃仁은 임신 흰쥐에 대해서 별다른 임신중독 증상을 일으키지 않는 것으로 조사되었다.
- 이상의 결과를 종합해볼 때, 益母草와 桃仁은 임신 흰쥐에 대해서 별다른 임신중독 증상을 일으키지 않는 것을 알 수 있었다.
- 임신 rat의 생식지수에 미치는 影響을 살펴보았는데, corpora lutea(황체수)는 대조군이 17.143 ± 0.595 이었고, 반면에 益母草 投與群은 17.143 ± 0.508, 桃仁 투여군은 17.857 ± 0.404 이었으며, 두 약물 투여군 모두의 값이 대조군에 비해서 유의성 있는 변화는 없었다.
- 임신 rat의 증체량을 조사한 결과, 임신 후 21일의 측정값이 1일의 측정값에 비해서 대조군은 52.45(%)가 증가하였다. 반면에, 益母草投與群은 56.
- 임신 중에는 양약이나 한약재를 잘 못 복용하면 심각한 부작용을 미칠 수 있다. 임신 흰쥐의 생식지수에 미치는 影響을 살펴보았는데, corpora lutea(황체)의 수, 착상(implantation)의 수, 생존태아(viable fetuses)의 수, 착상전 배아폐사율(pre-implantation loss)(%), 착상 후 배아폐사율(post-implantation loss)(%), 태아와 태반의 무게에서 益母草 投與群과 桃仁 투여군은 모두 대조군에 비해서 유의성 있는 변화를 보이지 않았다(Table 2). 따라서, 益母草와 桃仁은 생식에 전혀 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다.
- 혈청 중 progesterone 함량을 측정한 결과, 대조군의 progesterone 함량(ng/ml)은 37.544 ± 4.274 이었다.
- 흰쥐 혈청 중의 tansaminase 활성도를 측정한 결과, ALT(IU/L)의 변화를 보면, 대조군에서는 53 ± 3.071 이었으며, 반면에 益母草 투여군은 57.143 ± 3.232, 桃仁 투여군은 60.429 ± 2.776 로 나타났으며, 모두 대조군에 비하여 유의성 있는 변화는 없었다.
후속연구
- 따라서, 임신 중 금기약물의 한약재를 임신 쥐에게 투여해 봄으로써, 직접적인 동물실험을 통하여 실제 금기해야 하는지를 확인할 필요가 있다고 생각된다. 이번 연구에서는 현재 시중에서 活血祛瘀藥으로 무난하게 많이 활용되고 있는 益母草와 桃仁을 이용하여 임신 중 복용가능성 여부를 실험하게 되었다.
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