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문제 정의
- 따라서 본 연구는 가축분뇨액비를 퇴비단여과법 (Slurry Composting and Biofiltering, SCB)을 통해 처리 후 생성된 SCB저농도액비의 기능성향상을 위해 유기물분해 균주인 섬유소분해 미생물을 탐색하여 선발하고자 한다.
제안 방법
- 각 공시미생물의 섬유소분해 능력 정도를 확실히 검정하기 위하여 1차 기초조사, 2차 확인조사를 각각 실시하였다. 1차 조사에서 섬유소분해 능력이 있는 미생물을 선별하여 72시간동안 NB(Nutrient broth) 배지에 배양하여 20 μ1씩 섬유소 분해배지(TSA+ 1% CMC) 에 도말하여 clear zone의 밝기여부로 2차 조사하였다.
- 잔디 병원균을 5 mm Cork Borer를 이용하여 균일하게 자른 후, 중앙에 치상하였다. 25℃ Incubator에서 5~7일 배양한 후 병원균의 균사생장억제율을 측정하였다. 항균력 시험을 위해 사용된 균주는 Sclerotinia homoeocarpa, R.
- SCB저농도액비에 5종의 섬유소분해 미생물균주을 넣고 25, C에서 18시간 배양한 후 paper disc에 20 μ1씩 점적한 후 PDA(Potato dextrose agar)배지 가장자리에 치상하였다. 잔디 병원균을 5 mm Cork Borer를 이용하여 균일하게 자른 후, 중앙에 치상하였다.
- 혼합 배양하여 사용하였다. TSB(Tryptic soy broth), NB배지에 24시간 동안 전배양한 섬유소분해 미생물 균주를 25 ml의 TSB와 NB배지가 담긴 conical tube에 0.1%를 접종하고 진탕배양기(25℃, 180rpm)에서 배양하였고, 분광광도계(UV - 6800. Hitach, Japen)를 이용하여 접종 후 6 시간 간격으로 멸균수와 1:1 희석하여 흡광도를 조사하였다.
- 1%의 congo red solution로 10분간 염색시킨 후, 배지를 물로 세척하여 말린 다음 clear zone(cellulase 생산)의 생성여부를 확인하고 미생물을 분리하였다. 각 공시미생물의 섬유소분해 능력 정도를 확실히 검정하기 위하여 1차 기초조사, 2차 확인조사를 각각 실시하였다. 1차 조사에서 섬유소분해 능력이 있는 미생물을 선별하여 72시간동안 NB(Nutrient broth) 배지에 배양하여 20 μ1씩 섬유소 분해배지(TSA+ 1% CMC) 에 도말하여 clear zone의 밝기여부로 2차 조사하였다.
- 잔디 예초물 퇴비시료를 5g씩 정량하여 증류수 45 ml에 넣고 30분간 진탕한 후 적절히 희석하여 희석액 100μl를 섬유소 분해배지(TSA + 1% CMC)에 도말한 후 25。(:에서 7일간 배양하였다. 배양된 plate에 0.1%의 congo red solution로 10분간 염색시킨 후, 배지를 물로 세척하여 말린 다음 clear zone(cellulase 생산)의 생성여부를 확인하고 미생물을 분리하였다. 각 공시미생물의 섬유소분해 능력 정도를 확실히 검정하기 위하여 1차 기초조사, 2차 확인조사를 각각 실시하였다.
- 선발된 섬유소분해미생물균주의 배지에 따른 생장은 TSB와 NB배지에서 조사되었다. TSB배지에서는 접종 후 6시간까지 균생장이 거의 이루어지지 않다가 12시간이 지나면서 급격히 증가하여 18시간 후에 균생장이 최고조를 이룬 뒤 30시간 이후에는 사멸기가 시작되는 것으로 조사되었고, NB배지에서는 30시간 이후에 CDMs의 생장은 최고조를 이루었다.
- 섬 유소분해 미 생 물균주를 SCB저 농도액 비 에 처리 하여 잔디 병원균의 생육 억제여부를 검토하였다. 공시비료는 SCB저농도액비로 수행하였다.
- 잔디 병원균을 5 mm Cork Borer를 이용하여 균일하게 자른 후, 중앙에 치상하였다. 25℃ Incubator에서 5~7일 배양한 후 병원균의 균사생장억제율을 측정하였다.
- 1%를 접종하고 진탕배양기(25℃, 180rpm)에서 배양하였다. 접종 후 6시간 간격으로 희석하여 TSA(Tryptic soy agar)배지에 100ml 도말하여 colony수를 조사하였다.
대상 데이터
- solani AG2-2(IV), NO.40151 R. solani AG2-2(ⅢB)는 KACC(Korean Agricultural Culture Collec- tioii)에서 분양받아 이용하였다.
- 공시비료는 SCB저농도액비로 수행하였다. SCB저농도액비는 질소 0.
- 본 연구는 2010년 4월부터 2010년 11월까지 8개월 동안 (주)에이엠 이앤씨 부설 에이엠잔디연구소에서 수행하였고, 경기도 포천시 소재의 A골프클럽과 경기도 광주시 소재의 B 컨트리클럽에서 잔디 예초물 퇴비시료를 채취하였다. 잔디 예초물 퇴비시료를 5g씩 정량하여 증류수 45 ml에 넣고 30분간 진탕한 후 적절히 희석하여 희석액 100μl를 섬유소 분해배지(TSA + 1% CMC)에 도말한 후 25。(:에서 7일간 배양하였다.
- 잔디 예초물 퇴비시료에서 분리된 5종의 균주를 전 배양부터 혼합 배양하여 사용하였다. TSB(Tryptic soy broth), NB배지에 24시간 동안 전배양한 섬유소분해 미생물 균주를 25 ml의 TSB와 NB배지가 담긴 conical tube에 0.
성능/효과
- SCB저농도액비만을 이용하여 배양한 결과는 30시간이후에 균생장이 최고조를 이루었다. SCB저농도액비에서 배양한 섬유소분해 미생물균주는 36시간에 196xl05 cfii/ml으로 균생장이 가장 높았다(Table 3).
- 선발된 섬유소분해미생물균주의 배지에 따른 생장은 TSB와 NB배지에서 조사되었다. TSB배지에서는 접종 후 6시간까지 균생장이 거의 이루어지지 않다가 12시간이 지나면서 급격히 증가하여 18시간 후에 균생장이 최고조를 이룬 뒤 30시간 이후에는 사멸기가 시작되는 것으로 조사되었고, NB배지에서는 30시간 이후에 CDMs의 생장은 최고조를 이루었다. 배양된 섬유소분해미생물균주는 배지에 따라 생장시간이 달랐으며, 선발된 대취분해미생물균주의 배지에 따른 시간별 생장을 백분율로 환산한 결과, TSB와 NB배지에서 균생장이 최고를 이루는 시간이 각각 18와 30시간으로 나타났다(Fig.
- TSB배지에서는 접종 후 6시간까지 균생장이 거의 이루어지지 않다가 12시간이 지나면서 급격히 증가하여 18시간 후에 균생장이 최고조를 이룬 뒤 30시간 이후에는 사멸기가 시작되는 것으로 조사되었고, NB배지에서는 30시간 이후에 CDMs의 생장은 최고조를 이루었다. 배양된 섬유소분해미생물균주는 배지에 따라 생장시간이 달랐으며, 선발된 대취분해미생물균주의 배지에 따른 시간별 생장을 백분율로 환산한 결과, TSB와 NB배지에서 균생장이 최고를 이루는 시간이 각각 18와 30시간으로 나타났다(Fig. 2). NB배지에서 보다 TSB 배지에서 CDMs의 생장속도가 빠른 것으로 조사되었다.
- 선발된 섬유소분해 미생물균주를 TSB배지에서 18시간 전 배양하여 SCB저농도액비에 접종한 결과, 접종 후 18시간에는 균생장이 거의 이루어지지 않다가 24시간이 지나면서 급격히 증가하여 36시간이 경과한 후에 균생장이 최고조를 이룬 뒤 48시간 이후에는 사멸기가 시작되는 것으로 확인되었다. SCB저농도액비만을 이용하여 배양한 결과는 30시간이후에 균생장이 최고조를 이루었다.
- solani AG2-2(IV)와 Pythium spp.에서 SCB저농도액비는 9.8, 3.9, 28.0%로 균사생장억제 효과을 보였으며, CDMs이 첨가된 SCB저농도액비는 각각 14.1, 11.0, 26.8% 균사생장이 억제되었다(Fig. 3). R.
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