[논문]갈대(Phragmites communis Trinius.)의 종자배양에 있어서 식물생장조절물질이 캘러스 유도와 식물체 재분화에 미치는 영향

김용구; 김경희; 이병현

doi:10.5333/kgfs.2011.31.3.229

갈대(Phragmites communis Trinius.)의 종자배양에 있어서 식물생장조절물질이 캘러스 유도와 식물체 재분화에 미치는 영향
Effect of Plant Growth Regulators on Callus Induction and Plant Regeneration from Seed Culture of Reed 원문보기

한국초지조사료학회지 = Journal of the Korean Society of Grassland and Forage Science, v.31 no.3, 2011년, pp.229 - 234

김용구 (경상대학교 응용생명과학부 동물생명과학과) , 김경희 (경상대학교 응용생명과학부 동물생명과학과) , 이병현 (경상대학교 응용생명과학부 동물생명과학과)

초록
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갈대의 성숙종자로부터 최적 조직배양조건을 확립하기 위하여 종자로부터 캘러스 유도 및 식물체 재분화 체계를 확립하였다. 종자로부터 캘러스 유도시 첨가되는 auxin으로는 2,4-D가 가장 효율적이었으며, 1.0 mg/L 2,4-D와 0.5 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 가장 높은 빈도로 캘러스가 유도되었다. 캘러스로부터 식물체 재분화는 cytokinin류인 BA와 kinetin이 첨가되지 않은 MS 배지에서 59.6%로 높은 재분화 효율을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 성숙종자로부터의 고효율 재분화 시스템은 유전자 형질전환기술을 이용한 신품종 갈대 개발에 유용하게 이용 될 수 있을 것이다.

Abstract ▼ AI-Helper

In order to develop an efficient, reliable and reproducible tissue culture system for reed (Phragmites communis Trinius), an efficient plant regeneration system via callus induction was established using mature seeds as explants. MS medium containing 1 mg/L 2,4-D and 0.5 mg/L BA was optimal for callus induction from mature seeds. The highest frequency (88.7%) of callus formation was obtained in 1.0 mg/L 2,4-D. The highest plant regeneration frequency (59.6%) was found when the embryogenic calli were subcultured on MS medium supplemented with 100 mg/L myo-inositol, whereas, adding of plant growth regulators was not so promising in this case. Our result would be useful for development of transgenic reed plants.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

특히 대부분의 화본과 식물에 있어서 식물체 재분화는 유전적 요인이나 배양조건에 따라 많은 영향을 받는 것으로 알려져 있으며, 그 중에서도 특히 식물생장조절물질의 종류와 농도 등의 조합에 의해 가장 많은 영향을 받는 것으로 알려져 있다 (George 등, 1987). 따라서 본 연구에서는 갈대의 성숙종자로부터 캘러스를 유도하여 단기간 내에 완전한 식물체로 재분화시킬 수 있는 고효율 시스템을 확립하고자 각 배양단계에 있어서 영향을 미치는 주요 요인에 대한 영향을 조사하고자 하였다.
본 실험을 통하여 갈대에 있어서 식물생장조절물질의 종류가 캘러스 유도와 캘러스로부터 식물체 재분화에 미치는 영향을 조사하였다. 갈대의 성숙종자를 1.
d). 본 연구를 통하여 갈대의 성숙종자로부터 캘러스를 유도하고, 이들로부터 식물체를 재분화 시킬 수 있는 고효율 재분화 체계를 확립하였다. 이와 같은 고효율 재분화 시스템은 갈대로의 유전자 도입에 필요한 형질전환시스템 확립에 있어서 매우 유용한 자료로 활용될 수 있을 것이며, 다른 비식용 화본과 작물의 형질전환을 위한 자료로도 활용될 수 있을 것이다.

가설 설정

a: Callus induction from mature seed of reed. b: Representative embryogenic callus. c: Rooting of regenerated plantlets.
c: Rooting of regenerated plantlets. d: Regenerated plants grown in pot.

제안 방법

갈대의 성숙종자 유래의 캘러스로부터 식물체 재분화를 위한 적정 식물생장 조절물질의 종류와 농도를 조사하기 위하여 1.0 mg/L의 2,4-D와 0.5 mg/L BA 혼용처리하여 얻은 캘러스를 cytokinin류인 BA와 kinetin이 다양한 농도로 첨가된 MS 재분화 배지에 옮겨 배양한 후, 식물체 재분화율을 조사하였다 (Table 3). 캘러스로부터 식물체 재분화에는 cytokinin류가 첨가되지 않은 배지에서 캘러스 재분화율이 56~59.
갈대의 성숙종자로부터 최적 조직배양조건을 확립하기 위하여 종자로부터 캘러스 유도 및 식물체 재분화 체계를 확립하였다. 종자로부터 캘러스 유도시 첨가되는 auxin으로는 2,4-D가 가장 효율적이었으며, 1.
갈대의 종자배양에 있어서 캘러스 유도배지에 첨가되는 식물생장조절물질의 종류와 농도에 따른 효과를 규명하고자 2,4-D와 dicamba, NAA를 각각 0~5 mg/L의 농도로 단용 처리한 후 캘러스 유도효율을 조사해 본 결과는 Table 1과 같다. 종자로부터의 캘러스 유도효율은 2,4-D와 dicamba 처리구가 NAA 처리구 보다 높게 나타났다.
0 mg/L의 2,4-D와 cytokinin류인 BA의 혼용처리가 캘러스 유도에 가장 효율적인 것으로 판단되었다. 따라서 갈대 성숙종자로부터 캘러스를 유도함에 있어 캘러스 유도배지에는 1.0 mg/L의 2,4-D와 0.5 mg/L BA의 혼용 처리하여 사용하였다.
성숙종자 배 유래 캘러스를 얻기 위하여 MS 기본배지 (Murashige와 Skoog, 1962)에 sucrose 30 g/L와 gelrite 3 g/L을 첨가하여 pH5.8로 조정된 MS 기본 고형배지를 사용하였으며, 이때 첨가되는 각 식물생장조절물질의 종류와 농도에 따른 배양효과를 규명하기 위하여 auxin류로는 2,4-D (2,4-dichloro phenoxy acetic acid), NAA (α-naphthalene acetic acid) 및 Dicamba (3,6-dichloro-2-methoxybenzoic acid)를, cytokinin류로는 BA와 kinetin을 다양한 농도와 조합으로 배지에 첨가한 후 캘러스 유도에 미치는 영향을 조사하였다.
캘러스 유도를 위한 종자의 살균은 이 등 (2003)의 방법에 준하여 실시하였다. 성숙종자의 종피를 제거한 다음 70% ethanol에서 1분간 표면살균하고 멸균수로 3회 세정한 후, 다시 30% (v/v) sodium hypochlorite 용액을 첨가하여 30분간 교반하면서 표면살균 하였다. 살균된 종자는 멸균수로 3회 이상 세정하고 멸균된 filter paper에서 수분을 완전히 제거하고, 캘러스 유도배지에 치상하였다.
8로 조정된 MS 기본 고형배지를 사용하였으며, 이때 첨가되는 각 식물생장조절물질의 종류와 농도에 따른 배양효과를 규명하기 위하여 auxin류로는 2,4-D (2,4-dichloro phenoxy acetic acid), NAA (α-naphthalene acetic acid) 및 Dicamba (3,6-dichloro-2-methoxybenzoic acid)를, cytokinin류로는 BA와 kinetin을 다양한 농도와 조합으로 배지에 첨가한 후 캘러스 유도에 미치는 영향을 조사하였다. 유도된 캘러스는 각각 상기 조건의 생장호르몬 배지에서 2주 간격으로 계대배양하면서 체세포 배 발생 캘러스의 유도효율을 조사 하였다.
치상 후 6주령의 캘러스를 MS 기본배지 (Murashige와 Skoog, 1962)에 100 mg/L myoinositol, 30 g/L sucrose 및 2 g/L Gelrite가 첨가된 배지를 기본으로 하여 다양한 식물생장조절물질 조합을 처리함으로써 성숙종자 유래의 캘러스로부터 식물체를 재분화 시키기 위한 최적 조건을 조사하였다.
캘러스로부터 식물체 재분화 배지에 첨가되는 식물생장조절물질의 종류와 농도에 따른 배양효과를 규명하기 위하여 auxin류로 2,4-D, dicamba 및 NAA, cytokinin류로 BA와 kinetin을 다양한 농도와 조합으로 혼용 첨가한 배지에 캘러스를 치상하여 24±2℃, 16 h light/8 h dark 조건에서 3주간 배양하고 동일성분의 새 배지에 계대한 후 3주간 더 배양하여 각각의 처리구에서 1 cm 이상으로 자란 신초를 재분화 개체로 조사하였다.

대상 데이터

식물재료로는 갈대(Phragmites communis Trinius.)의 성숙종자를 사용하였다. 캘러스 유도를 위한 종자의 살균은 이 등 (2003)의 방법에 준하여 실시하였다.

이론/모형

)의 성숙종자를 사용하였다. 캘러스 유도를 위한 종자의 살균은 이 등 (2003)의 방법에 준하여 실시하였다. 성숙종자의 종피를 제거한 다음 70% ethanol에서 1분간 표면살균하고 멸균수로 3회 세정한 후, 다시 30% (v/v) sodium hypochlorite 용액을 첨가하여 30분간 교반하면서 표면살균 하였다.

성능/효과

5 mg/L 의 BA와 kinetin을 혼용처리 했을 때의 캘러스 유도효율을 조사한 결과는 Table 2와 같다. 1 mg/L 2,4-D와 cytokinin류를 혼용처리했을 때의 캘러스 유도 효율은 0.5 mg/L BA를 혼용처리 하였을 때 88.7%로 가장 높았으며 0.5 mg/L dicamba와 cytokinin류 혼용처리구의 경우도 0.5 mg/L BA와 혼용처리 하였을 때 66%로 높게 나타났다.
또한 kinetin 보다는 BA에서 재분화율이 조금 더 높게 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 두 종류의 cytokinin의 농도가 증가할수록 재분화율은 감소하는 경향을 나타내었다. 이와 같은 결과는 캘러스로부터 재분화를 통한 신초형성에는 cytokinin류의 첨가 배지가 더 효율적이라는 다른 화본과 작물의 결과와 상반되는 결과이다 (이 등, 2003; 2005a; 2005b; 2007).
이와 같은 결과는 캘러스로부터 재분화를 통한 신초형성에는 cytokinin류의 첨가 배지가 더 효율적이라는 다른 화본과 작물의 결과와 상반되는 결과이다 (이 등, 2003; 2005a; 2005b; 2007). 따라서 갈대의 효율적인 재분화를 위한 적정 식물생장조절물질의 처리는 캘러스 유도시에는 1.0 mg/L의 2,4-D와 0.5 mg/L BA의 혼용으로 첨가해주어 재분화효율이 우수한 캘러스를 형성시키고, 이 캘러스를 BA와 kinetin이 첨가되지 않은 MS 배지에서 배양함으로써 59% 이상의 높은 재분화율을 얻을 수 있을 것으로 판단된다. 이와 같은 높은 재분화율은 효율적인 형질전환시스템 확립에 매우 유용하게 이용 될 수 있을 것이다.
6%로 높게 나타났다. 또한 kinetin 보다는 BA에서 재분화율이 조금 더 높게 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 두 종류의 cytokinin의 농도가 증가할수록 재분화율은 감소하는 경향을 나타내었다.
이상의 Table 1과 2의 결과를 종합해보면, 전체적으로 auxin로는 2,4-D와 dicamba가 NAA에 비해 높은 캘러스 유도효율을 나타내었으며, auxin류의 단용처리보다 1.0 mg/L의 2,4-D와 cytokinin류인 BA의 혼용처리가 캘러스 유도에 가장 효율적인 것으로 판단되었다. 따라서 갈대 성숙종자로부터 캘러스를 유도함에 있어 캘러스 유도배지에는 1.
갈대의 성숙종자로부터 최적 조직배양조건을 확립하기 위하여 종자로부터 캘러스 유도 및 식물체 재분화 체계를 확립하였다. 종자로부터 캘러스 유도시 첨가되는 auxin으로는 2,4-D가 가장 효율적이었으며, 1.0 mg/L 2,4-D와 0.5 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 가장 높은 빈도로 캘러스가 유도되었다. 캘러스로부터 식물체 재분화는 cytokinin류인 BA와 kinetin이 첨가되지 않은 MS 배지에서 59.
갈대의 종자배양에 있어서 캘러스 유도배지에 첨가되는 식물생장조절물질의 종류와 농도에 따른 효과를 규명하고자 2,4-D와 dicamba, NAA를 각각 0~5 mg/L의 농도로 단용 처리한 후 캘러스 유도효율을 조사해 본 결과는 Table 1과 같다. 종자로부터의 캘러스 유도효율은 2,4-D와 dicamba 처리구가 NAA 처리구 보다 높게 나타났다. 대부분의 화본과 식물의 경우에는 낮은 농도 (0~1 mg/L) 보다는 오히려 높은 농도 (1 mg/L 이상)의 2,4-D가 캘러스 형성에 효과적이라고 보고된 바 있으나 (Sopory and Munshi, 1997) 본 실험의 경우 2,4-D를 1 mg/L 농도로 첨가해 주었을 때 86.
5 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 가장 높은 빈도로 캘러스가 유도되었다. 캘러스로부터 식물체 재분화는 cytokinin류인 BA와 kinetin이 첨가되지 않은 MS 배지에서 59.6%로 높은 재분화효율을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 성숙종자로부터의 고효율 재분화 시스템은 유전자 형질전환기술을 이용한 신품종 갈대 개발에 유용하게 이용 될 수 있을 것이다.
5 mg/L BA 혼용처리하여 얻은 캘러스를 cytokinin류인 BA와 kinetin이 다양한 농도로 첨가된 MS 재분화 배지에 옮겨 배양한 후, 식물체 재분화율을 조사하였다 (Table 3). 캘러스로부터 식물체 재분화에는 cytokinin류가 첨가되지 않은 배지에서 캘러스 재분화율이 56~59.6%로 높게 나타났다. 또한 kinetin 보다는 BA에서 재분화율이 조금 더 높게 나타나는 것을 관찰할 수 있었다.

후속연구

이와 같은 고효율 재분화 시스템은 갈대로의 유전자 도입에 필요한 형질전환시스템 확립에 있어서 매우 유용한 자료로 활용될 수 있을 것이며, 다른 비식용 화본과 작물의 형질전환을 위한 자료로도 활용될 수 있을 것이다. 나아가 유용유전자의 형질전환을 통한 국내 자생 갈대의 분자육종은 장차 새로운 신품종 바이오 에너지 갈대자원의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
또한 갈대는 중금속이나 카드뮴 등에 의해 오염된 수질을 정화시켜주는 작용이 강하여 phytoremidation 소재로도 많이 활용되고 있다 (Negri, 1996; Ye 등, 1998). 따라서 습지에서 주로 자생하는 갈대를 건조, 고염 등과 같은 환경스트레스에 대한 내성을 증가시켜 구릉지나 간척지 등에서 재배하여 수확량을 증대시키거나, 세포벽 구성성분인 셀룰로즈의 함량을 증가시킨 품종을 육성하게 되면 고효율 바이오에너지 작물 신품종 개발이 가능할 것이다. 이러한 신품종 개발을 위해서는 형질전환기술을 이용한 분자육종기술이 필수적이며, 최적의 형질전환체계의 확립을 위해서는 우선 단기간 내에 높은 재분화율을 나타내는 고효율 조직배양기술체계 확립이 필수적이라 할 수 있다 (Forster와 Spangenberg, 1999).
6%로 높은 재분화효율을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 성숙종자로부터의 고효율 재분화 시스템은 유전자 형질전환기술을 이용한 신품종 갈대 개발에 유용하게 이용 될 수 있을 것이다.
본 연구를 통하여 갈대의 성숙종자로부터 캘러스를 유도하고, 이들로부터 식물체를 재분화 시킬 수 있는 고효율 재분화 체계를 확립하였다. 이와 같은 고효율 재분화 시스템은 갈대로의 유전자 도입에 필요한 형질전환시스템 확립에 있어서 매우 유용한 자료로 활용될 수 있을 것이며, 다른 비식용 화본과 작물의 형질전환을 위한 자료로도 활용될 수 있을 것이다. 나아가 유용유전자의 형질전환을 통한 국내 자생 갈대의 분자육종은 장차 새로운 신품종 바이오 에너지 갈대자원의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
5 mg/L BA의 혼용으로 첨가해주어 재분화효율이 우수한 캘러스를 형성시키고, 이 캘러스를 BA와 kinetin이 첨가되지 않은 MS 배지에서 배양함으로써 59% 이상의 높은 재분화율을 얻을 수 있을 것으로 판단된다. 이와 같은 높은 재분화율은 효율적인 형질전환시스템 확립에 매우 유용하게 이용 될 수 있을 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	환경오염 및 지구온난화 문제 해결을 위해 선진국에서 하고 있는 정책은 무엇인가?	최근 전 세계적으로 화석 연료의 과다 사용에 따른 자원 고갈 및 환경오염에 대한 우려가 증가함에 따라 자연과 공존하며 안정적이고 지속적으로 에너지를 생산하는 신재생 대체에너지 개념이 화두가 되고 있다. 특히 선진국을 중심으로 환경오염 및 지구온난화 문제 해결을 위해 화석 연료의 사용에 대한 규제를 강화하고 환경 친화적 신재생 에너지의 보급을 확산하려는 정책이 입안되고 있다 (한, 2007). 이러한 가운데 지구상에서 가장 풍부하고 고갈 없이 재생이 가능한 식물자원으로부터 바이오에너지를 생산하는 것은 지구온난화 방지를 막는 매우 유용한 방법 중의 하나이며, 특히 식량 또는 사료와 경쟁적이지 않는 비식용 식물을 바이오에너지 작물로 이용하는 것은 매우 바람직한 접근 방법이라 할 수 있다.
	신재생 대체에너지에 대한 관심이 증가하는 이유는 무엇인가?	최근 전 세계적으로 화석 연료의 과다 사용에 따른 자원 고갈 및 환경오염에 대한 우려가 증가함에 따라 자연과 공존하며 안정적이고 지속적으로 에너지를 생산하는 신재생 대체에너지 개념이 화두가 되고 있다. 특히 선진국을 중심으로 환경오염 및 지구온난화 문제 해결을 위해 화석 연료의 사용에 대한 규제를 강화하고 환경 친화적 신재생 에너지의 보급을 확산하려는 정책이 입안되고 있다 (한, 2007).
	식물자원으로 다년생 화본과 식물을 사용하는 것이 좋은 이유는 무엇인가?	이러한 가운데 지구상에서 가장 풍부하고 고갈 없이 재생이 가능한 식물자원으로부터 바이오에너지를 생산하는 것은 지구온난화 방지를 막는 매우 유용한 방법 중의 하나이며, 특히 식량 또는 사료와 경쟁적이지 않는 비식용 식물을 바이오에너지 작물로 이용하는 것은 매우 바람직한 접근 방법이라 할 수 있다. 그 중에서도 다년생 화본과 식물의 경우 biomass 수량이 많고 작물을 재배하는데 있어서 비료와 에너지 투입이 많이 요구되지 않음으로서 바이오에너지 작물로서 매우 효율적으로 활용될 수 있다.

참고문헌 (16)

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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