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제안 방법
- 05 g)을 10 mL의 증류수와 함께 스테인리스 관(14×1 cm2)에 넣고 뚜 껑으로 단단히 막은 후 원하는 온도의 고온 가마(Daeil Engineering, Seoul, Korea)에 방치하였다. 고온 가마의 온 도는 50, 100, 200, 300℃(스테인리스 관의 내부 압력은 0.002 ～5 MPa)로 조절하였고, 추출 시간은 각각 10, 30, 60분이었다. 추출 후, 스테인리스 관을 고온 가마에서 꺼내어 실온에 서 냉각하였다.
- 페놀성 화합물 이 반응을 억제시킬 수 있는 것은 페놀이 수소원자를 라디칼 에 제공하여 라디칼을 안정하게 만들고, 공명 혼성체를 형성 할 수 있으므로 비교적 안정하여 산소와 반응이 어려워서 유리 라디칼을 안정화시키기 때문이다(20). 따라서 일반적 으로 식물성분의 항산화 활성은 페놀성 화합물이 원인물질 로 관련되어 있는 것으로 알려져 있어 아임계수 추출 조건이 어성초의 페놀 물질 유리화에 미치는 영향을 분석하였다 (Table 2). 어성초를 50℃에서 물로 추출할 경우, 시간이 경 과함에 따라 10분간 추출 시 10.
- 아임계수 추출은 전통적인 추출 기술보다 빠르고, 일반적으로 높은 수율과 유기 용매의 사용을 억제할 수 있는 친환경적인 이점을 제공하는데(11), 이로 인해 로즈마리(12), 감초(13), 차가버섯(14) 등으로부터 아임계수를 이용하여 항산화물질을 추출한 연구가 보고된 바 있다. 본 연구에서는 어성초로부터 아임계수를 포함하는 다양한 온도(50, 100, 200, 300℃)에서 추출하여 인체에 유용 한 생리활성물질인 페놀 함량, 플라보노이드 함량, quercetin 함량을 분석하였으며, 대표적인 생리활성기능인 항산화 활성과 acetylcholinesterase 저해 활성을 분석하였다.
- 어성초(H. cordata Thunb) 건조 분말(0.05 g)을 10 mL의 증류수와 함께 스테인리스 용기에 넣고 밀봉한 후 여러 온도 (50, 100, 200, 300℃)에서 10, 30, 60분간 추출하였다. 추출 온도와 시간은 어성초 추출물의 중요 성분, 항산화 활성, acetylcholinesterase 저해 활성에 크게 영향을 미쳤다.
- 어성초에서는 여러 화합물이 생리활성물질이 발견되었는 데, 본 실험에서는 그중에서 항산화능이 잘 알려진 quercetin 의 함량을 HPLC로 분석하여 Table 4에 나타내었다. 300℃ 에서 30분간 처리한 어성초 추출물에서 15.
- 어성초의 아임계수 추출물에 존재하는 quercetin의 정량 분석을 위하여 HPLC(Shimadzu Co. Ltd.)를 사용하였다. HPLC는 Shimadzu LC-6AD pumps, Shimadzu SPD10AVP UV-VIS detector로 구성되었으며, 칼럼은 Shimpack VP-ODS(5 μm, 250×4.
- )를 이용하였다. 용매는 0.1% formic acid(buffer A)와 100% methanol(buffer B)을 사용하였고, 1 mL/min의 유속으로 375 nm에서 분석하였다. 자세한 HPLC 분석 조건은 Table 1에 나타내었다.
- 이 반응물에 1.25 mM의 ABTS와 peroxidase(1 U/mL) 를 각각 30 μL 넣고 다시 37℃에서 10분간 반응을 시킨 후, 405 nm에서 Multiplate Reader(Sunrise RC/TS/TS ColorTC/TW/BC/6Filter, Tecan Austria GmbH, Grödig, Austria)를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
- 총 페놀 함량은 Gutfinger의 방법(15)을 변형하여 측정하 였다. 즉, 어성초 추출액을 10배로 희석한 후 1 mL를 취하여 2%(w/v) Na2CO3용액 1 mL를 가하고 3분간 방치한 후, 50% Folin-Ciocalteu 시약 0.
- 추출액을 0.2 μm 여과막(Advantec, Tokyo, Japan)으로 여과한 후, -70℃ 심온냉동고(Operon Co., Seoul, Korea)에 저장하면서 필요할 때마다 꺼내어 해동한 후 분석에 이용하였다.
대상 데이터
- Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, Folin-Ciocalteu 시약 은 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(Osaka, Japan)에 서 구입하였다. Aluminum chloride hexahydrate는 Daejung Chemical Co.
- Aluminum chloride hexahydrate는 Daejung Chemical Co.(Siheung, Korea), quercetin hydrate는 Acros Organics(Geel, Belgium)에서 구입하였다. 기타 시약 및 용매는 모두 일급 이상의 등급을 사용하였다.
- 본 실험에서 사용된 어성초는 금강제약(Changwon, Korea)에서 2011년에 구입하였으며, 동결건조한 후 분쇄하여 500 nm 이하의 분말로 만들었다. 어성초 분말(0.
- 어성초 분말(0.05 g)을 10 mL의 증류수와 함께 스테인리스 관(14×1 cm2)에 넣고 뚜 껑으로 단단히 막은 후 원하는 온도의 고온 가마(Daeil Engineering, Seoul, Korea)에 방치하였다.
이론/모형
- ABTS 라디칼 소거능은 Pellegrini 등(18)의 방법에 따라 측정하였다. 10배로 희석한 시료 100 μL에 0.
- AChE 저해 활성 측정은 acetylcholine iodide를 기질로 사용하는 Lee 등(19)의 방법으로 측정하였다. 10배로 희석한 시료 30 μL에 phosphate buffer(100 mM, pH 8.
- DPPH 라디칼 소거능은 Jeong 등(17)의 방법에 준하여 10배로 희석한 어성초 추출액 0.1 mL에 0.041 mM DPPH 용액 0.9 mL를 가한 후 상온에서 30분간 반응시켜 517 nm에 서 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 DPPH 라디칼 소거능은 아래의 식으로 계산하여 백분율로 나타내었다.
- 모든 실험은 3회 반복으로 이루어졌으며, 그 평균값은 SPSS software(Ver. 12, SPSS Academy, Seoul, Korea)를 사용하여 General Linear Model의 방법에 따라 처리하였다. 모든 처리값의 차이는 신뢰수준 95%(p<0.
- 총 플라보노이드 함량은 Chang (16)의 방법을 이용하여 비색 정량하였다. 10배로 희석한 어성초 추출액 0.
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