[논문]양식 동남아산 뱀장어, Anguilla bicolor의 Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) 감염증

박성우; 정은빈; 김동완

doi:10.7847/jfp.2012.25.3.151

양식 동남아산 뱀장어, Anguilla bicolor의 Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) 감염증
Outbreak of Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) infection in cultured shortfin eel (Anguilla bicolor) in Korea 원문보기

韓國魚病學會誌= Journal of fish pathology, v.25 no.3, 2012년, pp.151 - 158

박성우 (군산대학교 수산생명의학과) , 정은빈 (농림수산검역검사본부 완도사무소) , 김동완 (동경미생물)

초록
AI-Helper

양식 동남아산 뱀장어 Anguilla bicolor에 아가미의 출혈 및 간장의 충혈을 특징으로 하는 질병의 원인을 조사한 결과 Anguillid herpesvirus (AngHV-1) 의 감염이 확인되었다. 병어는 병리조직학적으로 아가미의 상피세포의 증생과 모세혈관의 출혈, 간장의 공포변성 및 중심정맥의 충혈이 관찰되었다. 병어를 $35^{\circ}C$에 10일간 승온 사육한 결과 아가미의 형태가 건강어의 아가미와 유사한 형태로 회복되었으며, 폐사율도 10%로 승온 처리가 폐사율 감소에 효과적인 것으로 나타났다.

Abstract ▼ AI-Helper

Diseased eel (Anguilla bicolor) displayed severe hemorrhages in the gills, and congestion and swelling in the liver. During the epizootic, the water temperature was $28^{\circ}C$ and the morality rates were about 5%. No parasites were found on the gills and skin. Bacteria were not cultured from any internal organs using TSA or SS agar at $28^{\circ}C$ for 48 hrs. Histopathologically, the gills showed epithelial hyperplasia in the base of secondary gill lamellae and hemorrhages in the capillaries. Some cells in the proliferated interlamellar epithelia exhibited marginal hyperchromatosis. And severe vacuolated changes in the parenchymal cells and congestion in the central veins were observed in the liver. The specific amplicon (396 bp) was detected from gills and opercula of affected eel PCR using Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) -specific primer sets HVAPOLVPSD (5-'GTG TCG GGC TTT GTG GTG C-3') and HVAPOLOOSN (5'-CAT GCC GGG AGT CTT TTT GAT-3'). Sequencing analysis of the amplicon demonstrated that this gene was 99% homologous to the AngHV-1 sequence deposited in GenBank. This is the first report of AngHV-1 outbreak in the farmed shortfin eels (A. bicolor) in Korea. When diseased fish were maintained for 10 days at water temperatures of $32^{\circ}C$ and $35^{\circ}C$, the cumulative mortalities were 100% and 10%, respectively. Even though the AngHV-1 genome in the gills from the eel kept at $35^{\circ}C$ was detected using PCR, the structure of gill filaments was similar with that of normal fish. Increasing the water temperature to $35^{\circ}C$ was an effective way to diminish the mortality of AngHV-1 affected eel.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

본 연구는 종래 A. japonica를 사육하였던 수조에 서 사육중인 A. bicolor치어에서 아가미와 간장의 충혈을 주 증상으로 하는 질병의 원인, 병리조직학적 성상 및 치료 방법에 관하여 검토한 결과를 보고한다.

가설 설정

E: Negative control (only primer). F: Positive control. Gills from Anguilla japonica (Kim et al, 2012).

제안 방법

The amplicons of Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) DNA polymerase genes (394 bp) from the gills (A), kidney and spleen (B), and liver (C), operculum (D) of diseased eel by PCR using species-specific primer sets, HVAPOLVPSD (5-'GTG TCG GGC TTT GTG GTG C-3') and HVAPOLOOSN ( 5'-CAT GCC GGG AGT CTT TTT GAT-3').
병어의 아가미뚜껑, 아가미, 간장, 비장 및 신장을 Bouin액에 24시간 동안 고정하였다. 고정 후, 알코올 탈수계열을 거쳐 파라핀으로 포매한 다음 5 ㎛의 절편조직을 만들어 Mayer hematoxylin-eosin염색을 실시하여 검경하였다.
사육기간 중 먹이는 투여하지 않았으며, 매일 1/3사육수를 같은 온도로 미리 조정한 신선한 물로 교환하면서 폐사 미수를 계수하였다. 또 경시적으로 각각 임의의 6마리를 채집하여 아가미의 변화와 PCR에 의한 AngHV-1의 검출율을 보기 위하여 각각 3미씩을 사용하였다. 사육 중 폐사한 개체로부터의 AngHV-1검출유무는 PCR로 확인하였으며, 아가미의 도말표본을 만들어 아가미의 상태를 비교하였다.
병어의 신장, 비장, 간장 및 혈액을 tryptic soy agar (TSA, Difco) 및 Samonella-Shigella (SS) agar (Difco)에 접종하여 25℃에서 48시간동안 배양 후 원인균의 분리를 시도하였다. 또한 피부의 점액 및 아가미를 절취하여 기생충의 존재 유무를 현미경으로 검경하였다.
바이러스 감염 여부 조사를 위해 Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) 의 특이적 primers 인 HVAPOLVPSD (5-'GTG TCG GGC TTT GTG GTGC-3') 와 HVAPOLOOSN ( 5'-CAT GCC GGG AGT CTT TTT GAT-3') (Rijsewijk et al., 2005; Kim et al., 2012) 을 사용하였으며, PCR 조건으로는 10분/94℃ (initial denaturation), 30초/94℃ (denaturation), 45초/65℃ (annealing), 60초/72℃ (elongation), 7분/72℃ (final elongation) 로서 총 40회 DNA증폭을 실시하였다.
발병한 양어장에서 전형적인 아가미 뚜껑의 발적을 나타내는 병어 20마리를 별도로 입수하여 수량 0.25t의 플라스틱 사각 수조에 수용하여 수온을 32℃와 35℃로 조정하였다. 사육기간 중 먹이는 투여하지 않았으며, 매일 1/3사육수를 같은 온도로 미리 조정한 신선한 물로 교환하면서 폐사 미수를 계수하였다.
병어의 신장, 비장, 간장 및 혈액을 tryptic soy agar (TSA, Difco) 및 Samonella-Shigella (SS) agar (Difco)에 접종하여 25℃에서 48시간동안 배양 후 원인균의 분리를 시도하였다. 또한 피부의 점액 및 아가미를 절취하여 기생충의 존재 유무를 현미경으로 검경하였다.
병어의 아가미뚜껑, 아가미, 간장, 비장 및 신장을 Bouin액에 24시간 동안 고정하였다. 고정 후, 알코올 탈수계열을 거쳐 파라핀으로 포매한 다음 5 ㎛의 절편조직을 만들어 Mayer hematoxylin-eosin염색을 실시하여 검경하였다.
또 경시적으로 각각 임의의 6마리를 채집하여 아가미의 변화와 PCR에 의한 AngHV-1의 검출율을 보기 위하여 각각 3미씩을 사용하였다. 사육 중 폐사한 개체로부터의 AngHV-1검출유무는 PCR로 확인하였으며, 아가미의 도말표본을 만들어 아가미의 상태를 비교하였다.
25t의 플라스틱 사각 수조에 수용하여 수온을 32℃와 35℃로 조정하였다. 사육기간 중 먹이는 투여하지 않았으며, 매일 1/3사육수를 같은 온도로 미리 조정한 신선한 물로 교환하면서 폐사 미수를 계수하였다. 또 경시적으로 각각 임의의 6마리를 채집하여 아가미의 변화와 PCR에 의한 AngHV-1의 검출율을 보기 위하여 각각 3미씩을 사용하였다.
아가미, 아가미뚜껑 및 간장의 일부를 절취하여 시판용DNA 추출 kit (Bioneer Co, Korea) 를 이용하여 DNA를 추출하였다. 바이러스 감염 여부 조사를 위해 Anguillid herpesvirus-1 (AngHV-1) 의 특이적 primers 인 HVAPOLVPSD (5-'GTG TCG GGC TTT GTG GTGC-3') 와 HVAPOLOOSN ( 5'-CAT GCC GGG AGT CTT TTT GAT-3') (Rijsewijk et al.
, 2012) 을 사용하였으며, PCR 조건으로는 10분/94℃ (initial denaturation), 30초/94℃ (denaturation), 45초/65℃ (annealing), 60초/72℃ (elongation), 7분/72℃ (final elongation) 로서 총 40회 DNA증폭을 실시하였다. 증폭된 DNA 16 ㎕를 TAE electrophoresis buffer (40mM Tris, 20 mM acetate, 2 mM EDTA) 에 용해시킨 1.5% agarose gel상에서 전기영동하여 자외선 하에서 394 bp의 특이 밴드를 확인하였다.

대상 데이터

2011년 12월 인도네시아에서 수입한 동남아산 뱀장어 (A. biclolor) 실뱀장어를 충남 소재의 순환여과식 양식장 (15m×15m×0.5m) 에 수용하여 사육 중 아가미의 충혈과 간장의 발적 종대를 주된 증상으로 하는 평균 체장 9.7 cm (8.6-10.3cm) 의 병어 12마리를 시료로 사용하였다.

성능/효과

즉 AnHV-1과 잉어류의 herpesvirus (Cyprinus herpesvirs 1, CyHV-1; Cyprinus herpesvirus 2, CyHV-2; Cyprinus herpesvirus 3, CyHV-3) 가 속하는 것과 Ictalurid herpesvirus 1 (IcHV-1) 과 개구리의 herpesvirus (ranid herpersviruses 1 & 2, RaHV 1, RaHV 2) 가 속하는 것으로 뱀장어류에 발병하는 AngHV-1은 잉어과의 Herpesvrius와 유사한 특성을 가진 종으로 분류되고 있다. 국내에서 뱀장어의 Herpesvirus감염은 Kim et al. (2012) 의 보고뿐이었지만, 새로운 양식종으로 사육이 시도되고 있는 A. bicolor에도 AngHV-1이 주요한 질병으로 작용할 가능성이 있음을 본 연구에서 처음으로 제시하였다.
japonica 실뱀장어의 수요량에 비해 공급량이 절대적으로 부족하여, 실뱀장어 가격 또한 마리당 약 2,800원으로 kg당 가격은 약 30,000,000원을 호가하고 있을 뿐만 아니라 실뱀장어의 구입이 불가능하여 폐업하는 뱀장어 양식장도 증가하고 있다. 그럼으로 뱀장어 양식업계에서는 한 마리 당 실뱀장어 가격이 약 300-400원 (kg당 2,000,000-2,500,000원) 으로 상대적으로 저렴한 동남아시아산 뱀장어 (Anguilla bicolor) 또는 아프리카산 실뱀장어 (Anguilla mosambica) 를 구입하여 사육하는 양식업자의 수가 증가하였다. 그러나 국산 실뱀장어 대신에 입식한 동남아산 실뱀장어의 양식법에 관한 자료가 전무한 관계로 기존의 국산 뱀장어 사육 방식으로 사육하고 있지만, 양식의 성패는 아직 미지수이다.
발병 양식장의 사육 수온은 32℃, 사료 (백자사료) 의 일간투여량은 어체중의 약 8%, 환수량은 1일 80% 였다. 발병 뱀장어는 뱀장어 전용 입붙임사료 (Nisshin, Japan) 로 １５일간 먹이 붙임하여, 백자사료 ( (Nisshin, Japan) 로 전환한 13일 (입붙임부터 28일) 째에 처음 발병이 확인되어 시료채취일 (입붙임 부터 43일) 에도 증상이 나타나고 있었다.
병어를 35℃에 10일간 승온 사육한 결과 아가미의 형태가 건강어의 아가미와 유사한 형태로 회복되었으며, 폐사율도 10%로 승온 처리가 폐사율 감소에 효과적인 것으로 나타났다.
양식 동남아산 뱀장어 Anguilla bicolor에 아가미의 출혈 및 간장의 충혈을 특징으로 하는 질병의 원인을 조사한 결과 Anguillid herpesvirus (AngHV-1) 의 감염이 확인되었다. 병어는 병리조직학적으로 아가미의 상피세포의 증생과 모세혈관의 출혈, 간장의 공포변성 및 중심정맥의 충혈이 관찰되었다.
5에 표시한 것처럼 35℃에서는 10%에 불과하였지만, 32℃에서는 전 사육기간 지속적으로 폐사하여 10일후에는 20미 모두 새변의 증생과 유착 증상을 나타내면서 폐사하였다. 폐사어의 아가미를 시료로 하여 PCR로 AnHV-1의 존재 유무를 조사한 결과 32℃에서의 모든 폐사어는 모두 양성으로 나타났다. 또한 35℃ 에서 사육한 생존어의 아가미에서도 PCR법으로 조사하였을 때, AnHV-1는 양성임에도 불구하고 폐사는 발생하지 않아 보균상태로 전환하는 것으로 생각 되었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	동남아산 뱀장어의 사육 중 발생하는 질병은?	동남아산 뱀장어의 사육 중 발생하는 질병에 관한 자료는 Dorairaj (1984) 가 보고한 수생균, Aeromonas 병, Flavobacterium감염에 의한 부식병, 가스병 및 Heterosporis가 알려져 있지만, 이는 유수식 양식장에서 발병한 질병이다. Wang et al.
	태국에서 자연 서식하는 동남아산 뱀장어의 소화관에는 어떤 질병이 감염되는가?	한편 태국에서 자연 서식하는 A. bicolor의 소화관에는 Procamallanus anguillae (=Spirocamallanus anguillae) 와 Physalopteridaegen. sp.와 Anisakis sp.가 감염되는 것으로 보고되었다 (Moravee et al, 2006).
	A. bicolor의 형태는?	A. bicolor는 두부가 짧고, 주둥이가 넓으며, 아래턱이 명확하지 않고, 두부의 눈과 눈 사이의 간격이 넓고, 등지느러미가 항문 위에서 시작되며, 체색은 등쪽은 진한 올리브색이며, 배쪽은 노란색을 띄는등 A. japonica와는 형태적으로 차이가 나지만, 생활사는 거의 유사한 것으로 보고되어 있다 (Marine Fisheries Information Service, 1980).

참고문헌 (13)

Dorairaj, K.: Some observations on the disease of the short finned eel, Anguilla bicolor bicolor McClelland. Proc. Symp. Costal Aquaculture. 3: 906-909, 1984.
Fijan, N.: Diseases of cyprinids in Europe. Fish Pathol., 10: 129-132, 1976.

상세보기
Haenen, O. L. M., Dijkstra, S. G., van Tulden, P. W., Davidse, A. D., van Nieuwstadt, A. P., Wagenaar, F., and Wellenberg, G. J.: Herpesvirus anguillae (HVA) isolations from disease outbreak in cultured European eel, Anguilla anguilla in the Netherlands since 1996. Bull. Eur. Ass. Fish Pathol., 22: 247-257, 2002.
Jakob, E., Neuhaus, H., Steinhagen, D., Luckhardt, B., and Hanel, R.: Monitoring of Herpesvirus anguillae (HVA) infections in European eel, Anguilla anguilla (L.), in northern Germany. J. Fish Dis., 32: 557-561, 2009.

상세보기
Kim, H. J., Yu, J-H., Kim, D-W., Kwon, S. R., and Park, S-W.: Molecular evidence of anguillid herpesvirus-1 (AnHV-1) in the farmed Japanese eel, Anguilla japonica, Temminck & Schlegel, in Korea. J. Fish Dis., 35: 312-319, 2012.
Lee N.S., Kobayashi J. & Miyazaki T.: Gill filament necrosis in farmed Japanese eel, Anguilla japonica (Temminck et Schlegel), infected with Herpesvirus anguillae. J. Fish Dis., 22: 457-463, 1999.

상세보기
Marine Fisheries Information Service: Technical and extension series No 23. Eel culture in India. Central Marine Fisheries Research Institute, Cochin, India. 1980.
Moravee, F., Taraschewski, H., Anataphruti, M. T., Maipanich, W., and Laoprasert, T.: Procamallanus (Spirocamallanus) anguillae sp. n. (Camallanidae) and some other nematodes from the Indonesian shortfin eel Anguilla bicolor in Thailand. Parasitol. Res., 100: 69-75, 2006.

상세보기
Rijsewijk, F., Pritz-Verschuren, S., Kerkhoff, S., Botter, A., Willemsen, M., van Nieuwstadt, A., and Haenen, O.: Development of a polymerase chain reaction for the detection of Anguillid herpesvirus DNA in eels based on the herpesvirus DNA polymerase gene. J. Virol. Methods, 124: 87-94, 2005.

상세보기
Ronen, A. A., Perelberg, A., Abramowitz, J., Hutoran, M., Tinman, S., Bejerano, I., Steinitz, M., and Kotler, M.: Efficient vaccine against the virus causing a lethal disease in cultured Cyprinus carpio. Vaccine, 21: 4677-4684, 2003.

상세보기
Wang, W.-S., Hung, S.-W., Lin, Y.-H., Shih, C.-W., Tu, C-Y., Tung, K-C., Chen, B.-R., and Ooi, H.-K.: Parasitosis of short-finned eel Anguilla australis schmdti, in Taiwan. Bull. Eur. Ass. Fish Pathol., 26: 106-111, 2006.
van Beurden, S. J., Bossers, A., Voorbergen-Laarman, M. H. A., Haenen, O. L. M., Peters, S., Abma-Henkens, M. H. C., Peeters, B. P. H., Rottier, P. J. M., and Engelsma, M. Y.: Complete genome sequence and taxonomic position of anguilld herpesvirus 1. J. Gen. Virol., 91: 880-887, 2010.

상세보기
根本孝, 中谷仁崇, 荒井？人, 野？孝則: 昇？？理したコイヘルペスウイルス感染魚のＫＨＶ感染水域での長期飼育？察. 茨城？水試？報, 44: 13∼17, 2011.

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증