[논문]호장근(Reynoutria elliptica)으로부터 항균활성 물질의 분리 및 구조결정

황주태; 박영식; 김영신; 김진철; 임치환

doi:10.7744/cnujas.2012.39.4.583

[국내논문] 호장근(Reynoutria elliptica)으로부터 항균활성 물질의 분리 및 구조결정
Isolation and identification of antifungal compounds from Reynoutria elliptica 원문보기

농업과학연구 = CNU Journal of agricultural science, v.39 no.4, 2012년, pp.583 - 589

황주태 (충남대학교 생물환경화학과) , 박영식 (충남대학교 생물환경화학과) , 김영신 (충남대학교 생물환경화학과) , 김진철 (한국화학연구원 바이오 정밀화학연구센터) , 임치환 (충남대학교 생물환경화학과)

Abstract ▼ AI-Helper

In the continued research on natural fungicides for the control of plant diseases by using plant-derived products, we found that Reynoutria elliptica. had a strong fungicidal activity against several plant pathogens. R. elliptica (3.2 kg) were extracted with 80% aq. MeOH and the concentrated extracted was partitioned with n-hexane, EtOAc, n-BuOH and $H_2O$ successively. The four layers were tested their disease control efficacies against 4 plant disease such as rise blast (RCB), tomato grey mold (TGM), tomato late blight (TLB), and barly powdery mildew (BPM). The n-hexane fraction was highly active showing over 95% control against TLB and BPM. and the EtOAc fraction was highly active showing over 95% control against RCB, TLB, and BPM. By using silica gel chromatography, MPLC, and HPLC, three compounds that were expected to have antifungal activity were isolated. Their chemical structures were elucidated as physcion, emodin, and emodie-8-O-glucoside by EI-MS and NMR spectroscopic analyses.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 호장근의 메탄올 추출물을 이용하여 식물병원균에 대한 항균 활성을 확인하여 항균 물질을 분리·정제 및 구조 결정하고 환경 친화형 작물보호제로서 가능성을 판단하고자 한다.

제안 방법

6종의 식물 병원균에 대한 추출 용매별 예방효과를 조사하였다. 호장근 분획물(n-hexane, EtOAc, n-BuOH, H2O) 각 80 mg을 10 mL의 acetone이나 5 mL의 MeOH에 녹이고 Tween 20(250 μL/mL) 용액을 가하여 최종 부피가 40 mL이 되도록 시료를 제조하였다(물질 최종 농도: 2,000 ppm).
각 병원균에 대한 활성은 80%이상의 저해율을 나타내는 시료에 대하여 항균활성이 있다고 판단하고 항균 물질 분리에 이용하였다.
, 2006). 각각의 실험은 3반복으로 실시하였으며 방제가는 다음 식에 따라 계산 하였다.
1). 본 연구에서는 강한 항균활성을 가지는 n-hexane 분획과 EtOAc 분획을 이용하여 항균활성물질의 분리를 실시하여, 3종의 활성물질을 분리하고 구조결정을 하였다.
5 cm의 플라스틱 포트에 수도용 상토 또는 원예용 상토를 70% 정도 채운 후, 종자를 파종하여 25±5℃의 온실에서 1주 내지 4주간 재배하여 사용하였다. 시료가 식물체에 골고루 분무될 수 있도록 turn table에 놓고 처리구는 2000 ppm의 시료 50 mL를, 대조구는 Tween 20 solution 50 mL를 살포하고 풍건한 다음 실온에서 1일 동안 방치한 후 병원균을 접종하고 3일 내지 8일 후에 발병도를 조사하였다(Kim et al., 2001; Cho et al., 2006). 각각의 실험은 3반복으로 실시하였으며 방제가는 다음 식에 따라 계산 하였다.
우선 n-hexane 분획으로부터 잔사를 여과하여 silica gel column chromatography(n-hexane → chloroform)를 수행하여 7개의 소분획(H1-H7)을 얻었으며 H1 분획의 잔사를 여과하여 노란색의 화합물 1(80 mg)을 분리하였다.
우선 n-hexane 분획으로부터 잔사를 여과하여 silica gel column chromatography(n-hexane → chloroform)를 수행하여 7개의 소분획(H1-H7)을 얻었으며 H1 분획의 잔사를 여과하여 노란색의 화합물 1(80 mg)을 분리하였다. 이어서 EtOAc 분획을 이용해 MPLC(silica gel packed column, MeOH-chloroform/4:1, v/v)를 수행하여 6개의 소분획(Fr.EA.1-Fr.EA.6)을 얻었다. 이중 Fr.
MeOH에 침지한 후 상온에서 3회 추출하고 감압 농축하여 추출물 313 g을 얻었다. 추출물을 n-hexane, EtOAc, n-BuOH의 순으로 분획한 후 감압 농축하여 각각 8 g, 250 g, 55 g의 분획물을 얻었다. 이 분획물을 이용해 벼 도열병균, 토마토 잿빛곰팡이병, 토마토 역병 그리고 보리 흰가루병를 대상으로 항균활성을 확인한 결과 n-hexane 분획과 EtOAc 분획이 90% 이상의 활성을 보였다.
그리고 221, 252, 265, 287 nm 그리고 440 nm에서 λ_max(MeOH)를 보였다. 화합물 2의 NMR data는 화합물 1의 NMR data와 유사하여 anthraquinon계 화합물로 추정하였다. 1H-NMR spectrum을 해석한 결과, 화합물 1에서 관측되었던 methoxy group의 proton peak는 관측되지 않았고, 2.

대상 데이터

NMR용 용매는 CD₃OD(Merck, Germany)와 DMSO-d6(methyl sulfoxide, Aldrich, USA), HPLC 용매로 사용한 acetonitrile(ACN)은 Burdic & Jackson사의 HPLC grade를, MeOH은 공업용 MeOH를 정제하여 사용하였다. Flash column chromatography용 silica gel은 Merck사의 제품(70-230 mesh, Merck, Germany), 분석용 및 분취용 silica gel TLC는 Merck사의 Kiesel gel 60F254(0.25 mm) 및 Kiesel gel 60F254(0.5mm) plate를 사용하였다. 발색시약은 10% H₂SO₄ 및 vaniline-H₂SO₄를 사용하였으며, UV 254와 365nm로 검출하였다.
MPLC는 Combi Flash(Isco, USA)를, high performance liquid chromatography(HPLC)는 JASCO LC 900(Japan), rotary vacuum evaporator는 Rotavapor R200(Büchi, Swiss), nuclear magnetic resonance(NMR) spectrometer는 JNM-AL400(400MHz/100MHz, JEOL Ltd, Japan)을 사용하였다.
NMR용 용매는 CD3OD(Merck, Germany)와 DMSO-d6(methyl sulfoxide, Aldrich, USA), HPLC 용매로 사용한 acetonitrile(ACN)은 Burdic & Jackson사의 HPLC grade를, MeOH은 공업용 MeOH를 정제하여 사용하였다.
5mm) plate를 사용하였다. 발색시약은 10% H₂SO₄ 및 vaniline-H₂SO₄를 사용하였으며, UV 254와 365nm로 검출하였다.
실험에 사용한 벼와 토마토, 그리고 보리는 지름 4.5 cm의 플라스틱 포트에 수도용 상토 또는 원예용 상토를 70% 정도 채운 후, 종자를 파종하여 25±5℃의 온실에서 1주 내지 4주간 재배하여 사용하였다.
호장근은 서울 경동시장에서 구입하여 실험에 사용하였으며, 표본품은 충남대학교 농업생명과학대학 천연물 농약 화학연구실에 보관하고 있다. 항균 활성실험에 사용한 벼도열병균(Magnaporthe oryzae), 토마토 잿빛 곰팡이병균(Botrytis cinerea), 토마토 역병균(Phytophthora infestans), 그리고 보리 흰가루병균(Blumeria graminis f. sp. hordei)은 한국화학연구원에서 배양하여 실험에 사용하였다.
호장근 분획물(n-hexane, EtOAc, n-BuOH, H2O) 각 80 mg을 10 mL의 acetone이나 5 mL의 MeOH에 녹이고 Tween 20(250 μL/mL) 용액을 가하여 최종 부피가 40 mL이 되도록 시료를 제조하였다(물질 최종 농도: 2,000 ppm).
호장근은 서울 경동시장에서 구입하여 실험에 사용하였으며, 표본품은 충남대학교 농업생명과학대학 천연물 농약 화학연구실에 보관하고 있다. 항균 활성실험에 사용한 벼도열병균(Magnaporthe oryzae), 토마토 잿빛 곰팡이병균(Botrytis cinerea), 토마토 역병균(Phytophthora infestans), 그리고 보리 흰가루병균(Blumeria graminis f.
활성물질의 추출 및 용매분획에 사용한 n-hexane, chloroform, ethyl acetate(EtOAc), methanol(MeOH), n-butanol(n-BuOH)등의 용매는 국내 삼전순약(18 L, 공업용) 제품을 정제하지 않고 사용하였다. NMR용 용매는 CD₃OD(Merck, Germany)와 DMSO-d6(methyl sulfoxide, Aldrich, USA), HPLC 용매로 사용한 acetonitrile(ACN)은 Burdic & Jackson사의 HPLC grade를, MeOH은 공업용 MeOH를 정제하여 사용하였다.

성능/효과

4 Hz)과 meta coupling 하는 peak를 확인하였다. 12.1 ppm과 12.3 ppm에서 인접 carboxyl group의 산소원자와 수소결합을 이루고 있는 hydroxyl group의 proton peak를 확인 할 수 있었다.
13C-NMR spectrum 해석 결과, 22.2 ppm에서 methyl group의 carbon peak를 확인하였으며 183.0, 187.2 ppm에서 carboxyl group의 carbon peak를 확인 할 수 있었다.
13C-NMR spectrum을 해석한 결과 22.5 ppm에서 methyl group의 carbon peak 그리고 56.4 ppm에서 methoxy group의 carbon peak를 확인하였다. 182.
13C-NMR spectrum을 해석한 결과, 화합물 1의 ¹³C-NMR에서 관측되었던 56.4 ppm에서의 methoxy group의 carbon peak가 관측되지 않았으나, 22.3 ppm에서 methyl group의 carbon peak, 182.3 ppm과 190.3 ppm에서 carbonyl group의 carbon peak, 162.2 ppm과 166.9 ppm에서 oxygenated carbon의 peak를 확인하였다. 108.
4 ppm에서 methoxy group의 carbon peak를 확인하였다. 182.3 ppm과 191.1 ppm에서 carboxyl group의 carbon peak를 확인하였고 162.8 ppm과 166.9 ppm에서 oxygenated methine carbon의 peak를 확인하였다. 107.
1H-NMR spectrum을 해석한 결과, 2.46 ppm(3H, s)에서 aromatic ring에 결합되어 있는 methyl proton peak가 singlet으로 나타났고 3.95 ppm(3H, s)에서 methoxy group의 proton peak가 확인되었다. 6.
화합물 2의 NMR data는 화합물 1의 NMR data와 유사하여 anthraquinon계 화합물로 추정하였다. 1H-NMR spectrum을 해석한 결과, 화합물 1에서 관측되었던 methoxy group의 proton peak는 관측되지 않았고, 2.3 ppm에서 methyl group의 proton peak, 12.0 ppm에서 인접 carboxyl group의 산소 원자와 수소결합을 하고 있는 hydroxyl group의 proton peak를 확인하였다. 그리고 6.
95 ppm(3H, s)에서 methoxy group의 proton peak가 확인되었다. 6.69 ppm(1H, d, J=2.4 Hz) 과 7.37 ppm(1H, d, J=2.4 Hz)에서 meta coupling하는 aromatic proton peak를 확인하였으며 7.08 ppm(1H, d, J=1.4 Hz)과 7.63 ppm(1H, d, J=1.4 Hz)과 meta coupling 하는 peak를 확인하였다. 12.
C-NMR의 해석에 의하여 결정되었다. EI-MS spectrum 해석 결과, molecular ion peak가 m/z 271에서 나타나 이 화합물의 분자량이 270임을 확인 할 수 있었다. 그리고 221, 252, 265, 287 nm 그리고 440 nm에서 λ_max(MeOH)를 보였다.
C-NMR의 해석에 의하여 결정되었다. EI-MS 측정결과 m/z 284에서 M⁺ peak를 나타내어 분자량이 284 임을 확인하였고 269(M-CH₃), 253(M-OCH₃) fragment ion peak가 측정되어 methyl group과 methoxy group이 존재함을 확인 할 수 있었다. 그리고 UV 221, 253, 265, 285 nm 그리고 435 nm에서 λ_max(MeOH)를 나타내었다.
호장근의 분획별 in vitro 항균활성을 검정한 결과, n-hexane 분획은 토마토 역병에 95%와 보리 흰가루병에 대하여 96%의 강한 저해활성을 보였다. EtOAc 분획은 벼도열병에 96%, 토마토 역병에 95% 그리고 보리 흰가루병에 대하여 96%의 강한 항균활성을 보였다. 그러나 BuOH층과 물층은 모든 공시균주에 대하여 30%이하의 낮은 활성을 보였으며 토마토 잿빛곰팡이병균에는 모든 분획물이 활성을 보이지 않았다(Fig.
1 ppm에서 hydroxyl group의 proton peak를 확인하였다. 그리고 3.0～5.5 ppm에서 당분자로 예상되는 proton peak와 6.99, 7.14, 7.26 그리고 7.44 ppm에서 poly aromatic ring의 proton peak를 확인할 수 있었다. ¹³C-NMR spectrum 해석 결과, 22.
, 2007)등이 보고되어 있다. 본 연구에서는 호장근 추출물을 이용하여 우리나라에 발병 빈도가 높고 큰 피해를 주고 있는 벼 도열병균, 토마토 잿빛 곰팡이병균, 토마토 역병균, 그리고 보리 흰가루병균 등 4 가지 식물병원균을 대상으로 항균활성을 검정한 결과 n-hexane층과 EtOAc층에서 높은 항균활성을 보임을 확인 하였고 3종의 활성물질을 분리 정제하여 physcion, emodin, emodin-8-O-glucoside로 화학구조를 동정하였다. 따라서 호장근 추출물을 이용한 다양한 식물병 방제가 가능할 것으로 기대되며, 분리한 화합물들의 작용기작 또한 규명해야 할 것으로 사료된다.
추출물을 n-hexane, EtOAc, n-BuOH의 순으로 분획한 후 감압 농축하여 각각 8 g, 250 g, 55 g의 분획물을 얻었다. 이 분획물을 이용해 벼 도열병균, 토마토 잿빛곰팡이병, 토마토 역병 그리고 보리 흰가루병를 대상으로 항균활성을 확인한 결과 n-hexane 분획과 EtOAc 분획이 90% 이상의 활성을 보였다. 우선 n-hexane 분획으로부터 잔사를 여과하여 silica gel column chromatography(n-hexane → chloroform)를 수행하여 7개의 소분획(H1-H7)을 얻었으며 H1 분획의 잔사를 여과하여 노란색의 화합물 1(80 mg)을 분리하였다.
이상의 결과를 종합하여 문헌(Kato and Morita, 1987; Coskun et al., 1990)과 비교 검색한 결과 화합물 3은 분자식이 C₂₁H₂₀O₁₀이고 분자량이 432인 emodin-8-O-glucoside로 동정하였다.
이상의 결과를 종합하여 문헌(Kato and Morita, 1987; Coskun et al., 1990)과 비교한 결과, 화합물 1은 분자량이 284이고 분자식이 C₁₆H₁₂O₅인 anthraquinon계인 physcion으로 동정하였다.
이상의 결과를 종합하여 문헌(Kato and Morita,, 1987; Coskun et al., 1990)과 비교 검색한 결과 화합물 2는 분자량이 270이고 분자식이 C₁₅H₁₀O₅인 emodin으로 동정하였다.
호장근의 분획별 in vitro 항균활성을 검정한 결과, n-hexane 분획은 토마토 역병에 95%와 보리 흰가루병에 대하여 96%의 강한 저해활성을 보였다. EtOAc 분획은 벼도열병에 96%, 토마토 역병에 95% 그리고 보리 흰가루병에 대하여 96%의 강한 항균활성을 보였다.

후속연구

본 연구에서는 호장근 추출물을 이용하여 우리나라에 발병 빈도가 높고 큰 피해를 주고 있는 벼 도열병균, 토마토 잿빛 곰팡이병균, 토마토 역병균, 그리고 보리 흰가루병균 등 4 가지 식물병원균을 대상으로 항균활성을 검정한 결과 n-hexane층과 EtOAc층에서 높은 항균활성을 보임을 확인 하였고 3종의 활성물질을 분리 정제하여 physcion, emodin, emodin-8-O-glucoside로 화학구조를 동정하였다. 따라서 호장근 추출물을 이용한 다양한 식물병 방제가 가능할 것으로 기대되며, 분리한 화합물들의 작용기작 또한 규명해야 할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	식물을 통해 만들어진 2차 대사산물은 대부분 무엇을 통해서 생합성되는가?	지구상에는 다양한 종류의 식물이 서식하고 있고 이들은 다양한 2차 대사산물을 만든다. 2차 대사산물은 대부분 isoprenoid, phenylpropanoid, alkaloid, 또는 fatty acid/polyketide pathway를 통해서 생합성된다. 이러한 경로를 통해서 생산된 2차 대사산물중에는 미생물의 공격, 곤충 및 동물의 섭식에 대한 방어 수단으로서 생합성되는 것이 있는데 이를 phytoalexin이라고 한다(VanEtten et al.
	Phytoalexin는 어떻게 분류할 수 있는가?	, 2004). Phytoalexin을 몇가지 분류로 나누어 보면 indoles, alkaloids, isoflavonoids, flavonoids 그리고 isoprenoids로 나눌 수 있다. 옥수수에 존재하는 DIMBOA는 살아있는 식물체에서 glucosides로 존재하다가 세포가 상처 받으면 생합성된다(Hofman and Hofmanova, 1971).
	민간에서 호장은 어떻게 사용되는가?	호장(Reynoutria elliptica)은 마디풀과에 속하는 다년생 식물로 그 뿌리를 호장근이라고 한다. 민간에서는 완하, 이뇨, 통경, 진해진정약으로 쓰이고 류마티즘에 의한 근골동통, 습열황달, 임탁, 대하, 산후의 악로체류, 복부의 결괴, 치루출혈 그리고 악창선질의 치료약으로 사용되어 왔다(Chi et al., 1982).

참고문헌 (23)

Chaoyun W, Dalei Z, Hongmei M, Juntian L. 2007. Neuroprotective effects of emodin-8-O- $\beta$ -d-glucoside in vivo and in vitro. European Journal of Pharmacology 577:58-63.

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Chi HJ, Choi JR, Yu SC. 1982. Pharmacognostical studies on Ho-Jang. Korea Journal of Pharmacology 13(4):145-152. [in Korean]
Cho JY, Choi GJ, Lee SW, Lim H, Jang KS, Lim CH, Cho KY. Kim JC. 2006. In vivo antifungal activity against various plant pathogenic fungi of curcuminoids isolated from Curcuma longa L. rhizomes. Plant Pathology Journal 22:94-96.

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Chun G. 2010. Anti-tumor activity of emodin against human chronic myelocytic leukemia K562 cell lines in vitro and in vivo. European Journal of Pharmacology 627:33-40.

상세보기
Cooper RM. 1996. Detection and cellular localization of elemental sulphur in disease-resistant genotypes of Theobroma cacao. Nature 379:159-162.

상세보기
Coskun M, Satake T, Hori K, Saiki Y, Tanker M. 1990. A new anthraquinone glycoside, physcion 8-O- $\beta$ -rutinoside, was isolated from the bark of R. libanoticus together with emodin, its 6-O- $\alpha$ -L-rhamnoside and 8-O- $\beta$ -D-glucoside, and kaempferol. Phytochemistry 29(6):2018-2020.

상세보기
Feng Y, Huang SL, Dou W, Zhang S, Chen JH, Shen Y, Shen JH, Leng Y. 2010. Emodin, a natural product, selectively inhibits 11 $\beta$ -hydroxysteroid dehydrogenase type 1 and ameliorates metabolic disorder in diet-induced obese mice. British Journal of Pharmacology 161(1):113-126.

상세보기
Fukui H, Egawa H, Koshimizu K, Mitsui T. 1973. New isoflavone with antifungal activity from immature fruits of Lupinus luteus. Agricultural and Biological Chemistry 37(2): 417-421.
Hector RB, Waldo L 1996. Antialgal and antifungal activity of natural hydroxamic acids and related compounds. Journal of Agricultural and Food Chemistry 44:1569-1571.

상세보기
Hofman J, Hofmanova O. 1971. 1,4-Benzoxazine derivatives in plants absence of 2,4-dihydroxy-7-methoxy-2H-1,4-benxozazin- 3(4H)-one from uninjured Zea mays plants. Phytochemistry 10:1441-1444.

상세보기
Kato T, Morita Y. 1987. Anthraquinone components in Rumex acetosa L. Shoyakugaku Zasshi 41(1):67-74.
Kim DK, Choi SU. 1998. Cytotoxic constituents of Rumex japonicus. Yakhak Hoeji 42:233-237.
Kim JC, Choi G., Park JH, Kim HT, Cho KY. 2001. Activity against plant pathogenic fungi of phomalactone isolated from Nigrospora sphaerica. Pest Management Science 57:554-559.

상세보기
Ma X, Yang X, Zeng F, Yang L, Yu D, Ni H. 2010. Physcion, a natural anthraquinone derivative, enhances the gene expression of leaf-specific thionin of barley against Blumeria graminis. Pest Management Science 66(7):718-724.

상세보기
Reyes-Chilpa R, Gomez-Garibay F, Moreno-Torres G, Jimenez- Estrada M, Quiroz-Vasquez, RI. 1998. Flavonoids and isoflavonoids with antifungal properties from Platymiscium yucatanum heartwood. Holzforschung 52(5):459-462.

상세보기
Richard AD. 2001. Natural products and plant disease resistance. Nature 411:843-847.

상세보기
Sirat HM, Russell GB. 1989. The isolation and identification of two antifungal pterocarpans from Ulex europaeus L. Pertanika 12(3):395-398.
Srinivas G, Babykutty S, Sathiadevan PP, Srinivas P. 2007. Molecular mechanism of emodin action: transition from laxative ingredient to an antitumor agent. Medicinal Research Reviews 27(5):591-608.

상세보기
Soledade M, Pedras C, Jun L. 2004. Designer phytoalexin: probing calmalexin detoxification pathways in the phytopathogen Rhizoctonia solani. Organic Biomolecular Chemistry 2:1070-1076.

상세보기
Vanetten HD, Matthews DE, Matthews PS. 1989. Phytoalexin detoxification: importance for pathogenicity and practical implications. Annual Review of Phytopathology 27:143-164.

상세보기
Vollekova A, Kost'alova D, Kettmann V, Toth J. 2003. Antifungal activity of Mahonia aquifolium extract and its major protoberberine alkaloids. Phytotherapy Research 17(7):834-837.

상세보기
Xiang MX , Xu , Su HW, Hu J, Yan Y. 2011. Emodin-8-O- $\beta$ -D-glucoside from Polygonum Amplexicaule D. Don var. Sinense Forb. promotes proliferation and differentiation of osteoblastic MC3T3-E1 cells. Molecules 16(1):728-737.

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Ye M, Han J, Chen H, Zheng J, Guo D. 2007. Analysis of phenolic compounds in rhubarbs using liquid chromatography coupled with electrospray ionization mass spectrometry. Journal of the American Society for Mass Spectrometry 18(1):82-91.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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