선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물에 대한 세포의 독성 및 지방생성에 미치는 영향을 조사하였다. 세포 생존율 측정에서 늙은 호박 추출물이 0.
- 섭취한 영양소는 중성지방의 형태로 지방 조직에 축적되며, 비만은 지방세포의 비대(hypertrophy)와 과형성(hyperplasia)으로 초래된다(7). 본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포에 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물을 처리하여 세포의 분화 및 지방생성 억제에 미치는 영향을 관찰하여 저해활성을 확인 하였기에 보고하고자 한다.
제안 방법
- 3T3-L1 지방전구세포를 분화 유도하기 위하여 세포를 10% fetal bovine serum (FBS) 와 1% P/S가 첨가된 DMEM을 이용하여 6-well plate의 각 well에 1.25×105 cells/well로 분주 하고 2일후 배지를 교환하여 3-4일째에 세포가 완전히 융합상태가 되게 하였다.
- 각 시료는 일반성분, 무기질 성분, 추출 수율을 측정하였다. 수분은 상압가열건조법, 조단백질은 micro Kjeldahl 법, 조지방은 Soxhlet 추출법, 조회분은 건식회화법에 따라 각각 정량하였다.
- 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물의 세포독성 범위를 분화된 3T3-L1 지방세포를 이용하여 MTT assay에 의해 측정하였다. Fig.
- 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물의 지방세포 분화 저해 효과를 검증하기 위하여 분화된 3T3-L1 세포에 호박물 및 70% 에탄올 추출물을 1 mg/mL의 농도로 처리한 후 지방축적을 관찰한 결과는 Fig. 2와 같이 나타났다. 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물의 지방축적은 각각 101.
- 본 연구에 사용한 3T3-L1세포는 MDI를 첨가하면 지방세포로 분화하는 성질을 갖는 세포로 지방세포의 분화를 억제하고 지방생성을 저해하는 소재의 효능 및 기전을 연구하는데 유용하며(17), 지금까지 밝혀진 지방세포분화에 관여하는 전사인자는 PPARγ와 C/EBPα, ADD1, SREBP1c 등이 있다(18,19). 물 추출물과 에탄올 추출물의 지방축적이 유의적 차이를 보임에 따라 각각 0.5-5 mg/mL 농도 범위에서 지방축적을 관찰하였다. 물 추출물의 농도별 지방축적 측정 결과 Fig.
- 분화 유도 2일 후, 배지를 시료, 10% FBS, 1% P/S, 5 µg/mL insulin이 포함된 DMEM으로 교환 하였고 분화 유도 4일째부터는 2일에 한번씩 10% FBS와 1% P/S가 포함된 DMEM으로 교환하여 세포를 분화시켰다.
- 유용성분의 추출을 위해 2,450 MHz 주파수에 환류냉각관이 장치된 상압형 마이크로파 추출장치(MAP, Soxwave100, Prolabo, France)를 사용하였다. 시료의 마이크로웨이브 추출조건은 추출 용매로 water, 70% ethanol을 사용하였고, 마이크로 파워는 90 W, 추출시간은 5분으로 하였다. 이렇게 하여 얻어진 추출물을 Whatman filter paper No.
- 세척된 세포는 세포내 생성된 지방구와 특이적으로 반응하는 Oil Red O (Sigma Co, St Louis, MO, USA)로 1시간 동안 염색하였다. 염색 후, 염색액을 제거하고 증류수를 이용해 3번 세척한 다음 증류수를 well에 채우고 현미경으로 관찰하였다. 중성지방의 정량은 증류수를 제거하고 완전히 마른 well에 100% iso-propyl alcohol을 2 mL 첨가하여 Oil-Red O를 다시 용출시킨 후 ELISA reader로 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 융합상태에서 10% FBS와 MDI solution (0.5 mM 3-isoButyl-1-methylxanthine, 1 µM dexamethsone, 5 µg/mL insulin) 를 처리하여 분화를 유도 하였다.
- 5 mM 3-isoButyl-1-methylxanthine, 1 µM dexamethsone, 5 µg/mL insulin) 를 처리하여 분화를 유도 하였다. 이때, 시료가 지방 세포분화에 미치는 영향을 관찰하기 위해 시료를 농도별로 함께 처리하였다. 분화 유도 2일 후, 배지를 시료, 10% FBS, 1% P/S, 5 µg/mL insulin이 포함된 DMEM으로 교환 하였고 분화 유도 4일째부터는 2일에 한번씩 10% FBS와 1% P/S가 포함된 DMEM으로 교환하여 세포를 분화시켰다.
- 250 µL을 가하고 혼합한 후 암실에서 실온으로 30분 반응한 후 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 tannic acid (Sigma Co, St Louis, MO, USA)를 사용하였으며 시료와 동일한 방법으로 분석하여 얻은 검량선에 따라 계산하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 시료로 사용된 늙은 호박은 가락동 농수산물 시장에서 구입한 것을 분쇄기(M20, IKA®, Staufen, Germany)로 분쇄하였고, 0.2 mm PE film에 밀봉 포장하여 냉동고에 보관하면서 사용하였다.
- 유용성분의 추출을 위해 2,450 MHz 주파수에 환류냉각관이 장치된 상압형 마이크로파 추출장치(MAP, Soxwave100, Prolabo, France)를 사용하였다. 시료의 마이크로웨이브 추출조건은 추출 용매로 water, 70% ethanol을 사용하였고, 마이크로 파워는 90 W, 추출시간은 5분으로 하였다.
데이터처리
- Means with the same lettered superscripts in a column are not significantly different at the 0.05 level by Duncan's multiple range test.
- Means with the same lettered superscripts on bars are not significantly different at the 0.05 level by Duncan's multiple range test.
- 본 실험은 3반복 측정하여 얻어진 결과에 대해 Statistical Analysis System (SAS version 8.0, 2004)을 이용하여 평균, 표준편차의 값을 산출하였고 Duncan's multiple range test를 통해 유의성을 검정하였다.
이론/모형
- 각 시료는 일반성분, 무기질 성분, 추출 수율을 측정하였다. 수분은 상압가열건조법, 조단백질은 micro Kjeldahl 법, 조지방은 Soxhlet 추출법, 조회분은 건식회화법에 따라 각각 정량하였다.
- 시료에 대한 세포 생존율은 MTT {3-(4,5-methylthiazol2-yl)-2,5-diphenylte trazolium bromide} colorimetric assay(9) 방법으로 실험하였다. 세포는 1.
- 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법(8)에 따라 시행하였으며 각 추출물 20 µL에 Folin reagent 20 µL 및 2% Na2Co3 250 µL을 가하고 혼합한 후 암실에서 실온으로 30분 반응한 후 750 nm에서 흡광도를 측정하였다.
성능/효과
- 5-5 mg/mL의 농도일 때 물 및 에탄올 추출물 모두 세포의 생장에 영향을 미치지 않는 것으로 나타나 세포에 대한 독성이 없다고 판단되었다. 3T3-L1 지방세포의 지방축적에 미치는 영향을 1 mg/mL 농도로 조사하였을 때 에탄올 추출물은 지방축적을 저해하였으나 물 추출물은 저해력이 없는 것으로 나타났다. 따라서 0.
- 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물의 세포독성 범위를 분화된 3T3-L1 지방세포를 이용하여 MTT assay에 의해 측정하였다. Fig. 1은 0-5 mg/mL 농도범위에서 세포 생존율을 측정한 결과 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물 각각의 평균 cell viability는 83.3%, 89.6%로 세포의 생장에 영향을 미치지 못하였다. MTT assay는 살아있는 세포의 양을 측정하는 표준 비색분석법(standard colorimetric assay)이라고 할 수 있으며, 세포의 미토콘드리아 탈수소 효소작용(dehydrogenases)에 의하여 노란색의수용성 기질인 MTT 를 자주색을 띄는 비수용성의 MTT-formazan 결정으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용한 측정방법으로, 결과에서 물 추출물보다 에탄올 추출물에서 cell viability가 높게 나타난 것으로 보아 에탄올 추출물의 안전성이 높은 것으로 나타났다.
- 추출물의 미네랄 함량을 분석한 결과는 Table 2와 같다. Na함량은 에탄올 추출물에서 가장 높았고 K의 함량은 시료들 간에 거의 비슷한 수준 이었으나 Ca, Fe, Mg, P의 함량은 에탄올 추출물이 다른 두 시료에 비해 유의적으로 낮게 나타났다.
- 2와 같이 나타났다. 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물의 지방축적은 각각 101.67%, 64.97%로 측정되어 에탄올 추출물이 물 추출물보다 지방축적에 대한 억제력이 높았으며 물 추출물은 지방축적억제력을 보이지 않았다. 이러한 결과는 Hwang 등(15)의 연구결과에서 물 추출물의 생리활성이 에탄올 추출물보다 낮게 나타나 항비만 연구 소재로 에탄올 추출물을 선발한 것과 비슷한 결과라고 사료된다.
- 늙은 호박 분말과 물 및 70% 에탄올 추출물의 일반성분 함량을 측정한 결과 Table 1과 같다. 단백질의 함량은 분말이 10.80%로 높았고 회분은 물 추출물이 13.29%로 높았다. 수분과 탄수화물의 함량은 시료들 간에 거의 차이를 보이지 않았으나 지방의 함량은 에탄올 추출물에서 0.
- 3T3-L1 지방세포의 지방축적에 미치는 영향을 1 mg/mL 농도로 조사하였을 때 에탄올 추출물은 지방축적을 저해하였으나 물 추출물은 저해력이 없는 것으로 나타났다. 따라서 0.5-5 mg/mL로 농도를 달리하여 조사한 결과 두 추출물 모두 농도 의존적으로 지방축적을 저해하는 것으로 나타났으며 물 추출물과 에탄올 추출물 농도가 5 mg/mL 일 때 각가 85.22% 75.35%의 지방축적을 보였다. 따라서 본 실험에서는 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물이 3T3-L1 지방세포의 분화를 억제하였으나 다른 많은 천연물에 비해 다소 높은 농도에서 효과가 나타났다.
- 35%의 지방축적을 보였다. 따라서 본 실험에서는 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물이 3T3-L1 지방세포의 분화를 억제하였으나 다른 많은 천연물에 비해 다소 높은 농도에서 효과가 나타났다. 또한 총 폴리페놀 함량조사 결과, 물 추출물에서 최대 46.
- 따라서 본 실험에서는 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물이 3T3-L1 지방세포의 분화를 억제하였으나 다른 많은 천연물에 비해 다소 높은 농도에서 효과가 나타났다. 또한 총 폴리페놀 함량조사 결과, 물 추출물에서 최대 46.54±0.02 mg을 함유 한 것으로 나타나 늙은 호박은 제약 원료로는 제한점이 있으나 식품으로 꾸준히 섭취 할 경우 항비만 소재로서의 가능성이 있을 것으로 생각된다.
- 물 추출물에서 총 폴리페놀의 함량은 46.54±0.02 mg으로 에탄올 추출물과 분말 보다 유의적으로 높았다.
- 5-5 mg/mL 농도 범위에서 지방축적을 관찰하였다. 물 추출물의 농도별 지방축적 측정 결과 Fig. 4와 같이 지방축적이 농도 의존적으로 감소하여 5 mg/mL의 농도에서 85.22%로 나타났으며, 에탄올 추출물의 결과도 Fig. 5에서와 같이 농도 의존적으로 감소하였으며 5 mg/mL에서 75.35%로 물 추출물에 비해 유의적인 감소를 보였다. 고농도에서 나타난 세포 내 지방축적의 억제는 Oil-red O 염색에 대한 현미경적 관찰에서도 동일한 결과로 확인되었다.
- 늙은 호박의 물 및 70% 에탄올 추출물에 대한 세포의 독성 및 지방생성에 미치는 영향을 조사하였다. 세포 생존율 측정에서 늙은 호박 추출물이 0.5-5 mg/mL의 농도일 때 물 및 에탄올 추출물 모두 세포의 생장에 영향을 미치지 않는 것으로 나타나 세포에 대한 독성이 없다고 판단되었다. 3T3-L1 지방세포의 지방축적에 미치는 영향을 1 mg/mL 농도로 조사하였을 때 에탄올 추출물은 지방축적을 저해하였으나 물 추출물은 저해력이 없는 것으로 나타났다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.