선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 그러나 아직까지 lectin은 자연 동식물 등에서만 분리 되므로 추출 및 정제에서 수율을 높이는 획기적인 방법은 아직 없는 실정이므로 이에 대한 적절한 연구는 물론 인공적으로 합성하거나 또는 대량 생산이 가능한 방법으로의 연구가 적실하다고 생각된다. 또한 본 연구자는 lectin이 갖는 임상적 약리효과를 확인하고자 인슐린유사 활성을 조사한 바 있다. 이를 위해 streptozotocin으로 당뇨를 유발시킨 흰쥐에 겨우살이 추출물 및 정제된 lectin을 경구 및 복강 내에 투여하였다.
- 본 연구에서는 국내산 겨우살이가 동맥경화의 질병에서 한방, 민간요법의 치료제로 사용하는 바[14], 이를 규명하고자, carbon tetrachloride로 고지혈증을 유발시킨 후 lectin이 간의 지방형성에 미치는 영향을 알아보기 위해 혈청 내 지질 함량을 측정하였고, 이를 확인하고자 간조직의 지방형성 변화를 조사하였다.
제안 방법
- CCl4 투여로 인한 간 지방형성을 유도하기 위해 lectin의 영향을 검토하기 위하여 숫 흰쥐(Sprauge-Dawley rat)를 150 g 내외의 같은 조건 하 6 마리씩을 각 군별로 나누어 2 주간 적응화시켰다.
- Lectin의 정제를 위하여 sepharose를 이용한 affinity chromatography를 이용 실시하였고, sephrose 4B affinity chromatography에서 정제한 시료를 sephadex G-150 column (Pharmacia. 2.8×60 ㎝)에 주입하고, 이를 각각의 파장 280 nm에서 흡광도 및 lectin 활성능을 측정하였고 활성이 있는 분획을 모아 투석하고 냉동건조 하였다[15].
- Triglyceride는 LPL(Lipoprotein lipase)에 의해 가수 분해되어 생성되는 glycerol을 ATP(Adenosine triphos phate) 존재 하에서 GK(Glycerol kinase)에 의해 G-3-P(Glycerol-3- phosphate)를 생성하고 이를 GPO(Glycerolperoxidase)로 산화시켜 생성되는 H2O2에 POD를 작용시켜 phenol과 4-aminoantipyrine을 산화축합시켜 quinon색소를 비색하는 법으로 아산제약 kit를 사용하였다.
- 이들 각 군에서 간의 중엽을 떼어내 즉시 10% 포르말린에 고정시켰다. 간조직은 고정, 탈수, 투명, 파라핀침투, 포매 후 블록을 제작하였고 이를 미세한 두께로 절편하였고 헤마톡실린-에오신으로 염색하여 광학현미경으로 간세포내의 대소의 공포(vacuole) 지방변성 여부를 관찰 하였다.
- 간조직의 일반적인 형태학적 변화는, 대조군, CCl4 투여군, lectin 단독 투여군과 lectin 및 CCl4 병행 투여군으로 나누어 관찰하였다.
- 국내산 겨우살이가 동맥경화, 심장질환 등의 질병에서 한방 및 민간요법 치료제로 사용하고 있으므로, 이를 규명하고자, CCl4(Carbon tetrachloride)로 고지혈증을 유발시킨 후, lectin을 투여하여 이들의 영향을 알아보기 위해 혈청 내 지질 함량을 측정하였고, 확인하고자 간조직의 지방형성 변화를 조사하였다. 정상 흰쥐에 CCl4를 투여하면 간의 지방형성을 촉진시키며, 혈청 중 lipoprotein 및 cholesterol 치가 증가한다고 보고 되고 있다[24-26].
- 정상 흰쥐에 CCl4를 투여하면 간의 지방형성을 촉진시키며, 혈청 중 lipoprotein 및 cholesterol 치가 증가한다고 보고 되고 있다[24-26]. 그러므로 CCl4 투여로 고지혈증을 유도한 후에 lectin의 영향을 조사하고자 CCl4를 복강 내에 주사하여 72 시간 경과시킨 후 혈청 총cholesterol 및 triglyceride를 측정하였다[Table 1].
- 를 투여하지 않았으며, 대조군은 olive oil 투여하였다. 실험군은 다시 CCl4 투여군, lectin 투여군과 lectin과 CCl4 병행 투여군으로 나누었다.
- 2 ㎎을 동시에 2 회 투여하였고 대조군으로 olive oil, lectin 투여군도 같은 방법으로 실시하였다. 이들정상군과 대조군과 실험군은 마지막 주사한 다음 24 시간 절식시킨 후 처치하였다.
- 와 olive oil의 1:1(v/v)혼합액을 Lin 등[20]의 방법에 따라 체중 ㎏ 당 2 ㎖를 복강 내 주사하고 48 시간 후 반복하여 주사하였다. 이때 CCl4 투여 1시간 전 겨우살이 추출물 및 lectin을 각각 1 ㎎, 0.2 ㎎을 동시에 2 회 투여하였고 대조군으로 olive oil, lectin 투여군도 같은 방법으로 실시하였다. 이들정상군과 대조군과 실험군은 마지막 주사한 다음 24 시간 절식시킨 후 처치하였다.
- 또한 본 연구자는 lectin이 갖는 임상적 약리효과를 확인하고자 인슐린유사 활성을 조사한 바 있다. 이를 위해 streptozotocin으로 당뇨를 유발시킨 흰쥐에 겨우살이 추출물 및 정제된 lectin을 경구 및 복강 내에 투여하였다. Streptozotocin에 의한 췌장의 손상은 혈당 및 요당을 측정함으로써 알 수 있었으며, 겨우살이 추출물의 경구 투여시 항당뇨 효과는 투여 전에 비해 혈당치가 현저히 감소하였으므로 항당뇨 효과가 있음을 보고 하였다[18].
- 정상군은 CCl4를 투여하지 않았으며, 대조군은 olive oil 투여하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 겨우살이는 덕유산 백련사 부근에서 10~12월에 채취한 후, 동결 저장하었다가 사용하였다.
데이터처리
- 각 실험결과에 대한 통계처리는 Student's t-test[22]로 하였으며 실험치의 표현은 Mean±SD로 하였고, p-value가 최대치 0.05 이하인 경우를 유의한 것으로 판정하였다.
이론/모형
- 식물에서도 이미 800여종 이상의 lectin이 발견되었고 이중 100여 종이 이미 분리 정제되어 실용화되고 있으며 분리 정제 방법도 다양하다. Lectin의 분리는 염용액을 이용하여 추출하고 이렇게 얻은 crude lectin을 sepharose 4B affinity chromatography를 이용한 방법으로 정제 하였다[15]. 그러나 아직까지 lectin은 자연 동식물 등에서만 분리 되므로 추출 및 정제에서 수율을 높이는 획기적인 방법은 아직 없는 실정이므로 이에 대한 적절한 연구는 물론 인공적으로 합성하거나 또는 대량 생산이 가능한 방법으로의 연구가 적실하다고 생각된다.
- 간 지방형성을 유도하기 위해 CCl4와 olive oil의 1:1(v/v)혼합액을 Lin 등[20]의 방법에 따라 체중 ㎏ 당 2 ㎖를 복강 내 주사하고 48 시간 후 반복하여 주사하였다. 이때 CCl4 투여 1시간 전 겨우살이 추출물 및 lectin을 각각 1 ㎎, 0.
- 및 Δ4-cholestenon을 생성한다. 이때 H2O2는 POD(Peroxidase)에 의해 phenol과 4-aminoantipyrine을 산화축합시켜 quinon색소를 비색하는 cholesterol enzyme법을 이용하여 측정하였다.
- 8×60 ㎝)에 주입하고, 이를 각각의 파장 280 nm에서 흡광도 및 lectin 활성능을 측정하였고 활성이 있는 분획을 모아 투석하고 냉동건조 하였다[15]. 추출 및 정제된 lectin의 정제단계별 순도를 검정하고자 HPLC 및 PAGE를 이용한 전기영동법을 사용하였으며, 이때 전기영동은 7.5% polyacrylamide gel을 사용하였다[18].
성능/효과
-
간세포의 핵은 한쪽으로 치우쳐 있고 세포체는 종대되었으며, 지방은 헤마톡실린-에오신염색 표본에서 용해되어 cytoplasmic vacuole로 나타났다 [Fig. 1]-C.
CCl4와 lectin을 동시 투여시는 CCl4 투여군에 비해 cytoplasmic vacuole은 현저히 감소하였고, 이에 비례하여 혈청 cholesterol 및 triglyceride 측정치가 현저히 감소하는 결과를 나타내었다[Fig. 1]-D
. - Lectin과 CCl4를 동시 투여 하였을 때 총cholesterol 함량은 CCl4 단독 투여시 113±12.0 ㎎/100mL, 동시 투여시 74±5.0 ㎎/100mL, triglyceride 함량은 CCl4 단독 투여시 163±24.0 ㎎/100mL 동시 투여시 114±19.0 ㎎/100mL로 단독 투여시 보다 동시 투여시 총 cholesterol 함량 및 triglyceride 함량이 약 34%나 유의한 감소를 나타 내였으므로 이는 lectin이 혈액 고지혈증에 대해 지질 억제능력이 있음을 확인 할 수 있는 것으로 사료된다[Table 2].
- 조직학적으로 관찰한 결과, CCl4 투여군은 정상군 및 olive oil 투여군에 비해 지방변화로써 간소엽 중심대의 간세포 내에 많은 대소의 cytoplasmic vacuole가 보였다. 간세포의 핵은 한쪽으로 치우쳐 있고 세포체는 종대되었으며, 지방은 헤마톡실린-에오신염색 표본에서 용해되어 cytoplasmic vacuole로 나타났다 [Fig.
- 총cholesterol 함량은 대조군 66±6.1㎎/100mL, olive oil처리군 69±33.0 mg/100mL로 CCl4/olive oil 처리군에서 113±22.0 mg/100mL 증가하였고, triglyceride는 대조군 55±13.2㎎/100mL, olive oil처리군 53±9.1 mg/100mL로 CCl4/olive oil 처리군에서 63±24.0 mg/100mL로 증가로, CCl4 투여군은 정상군 및 olive oil 투여군에 비해 유의하게 증가하였다(p<0.05).
후속연구
- 이상의 결과를 볼때 lectin이 혈액 고지혈증에 대해 지질을 감소시키거나 또는 조직학적 관찰에서 간조직의 지질형성을 억제시키는 효과가 있는 것으로 확인되었으므로 지방간 치료제 또는 유사한 질병에 대한 치료제로서의 가능성을 확인하였으며, 앞으로 이와 관련된 정확한 기전은 물론 다른 치료제로서의 가능성을 위해 더욱 연구 진행되어야 할 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.