[논문]Type II Collagen으로 유도된 관절염에 대한 강활(羌活), 독활(獨活) 배합약물의 억제 효과

윤호석; 이영철; 이장천

doi:10.14374/hfs.2013.21.1.161

Type II Collagen으로 유도된 관절염에 대한 강활(羌活), 독활(獨活) 배합약물의 억제 효과
Inhibitory Effect of a Decoction Combined with Ostericum koreanum Maxim. and Aralia continentalis Kitagawa on Collagen II-induced Arthritis Mice 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.21 no.1, 2013년, pp.161 - 176

윤호석 (상지대학교 한의과대학) , 이영철 (상지대학교 한의과대학) , 이장천 (부산대학교 한의학전문대학원)

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Objectives : To clarify the anti-arthritic activity of Ostericum koreanum Maxim. (OS) plus Aralia continentalis Kitagawa (AC) in vivo. Methods : All mice were immunized with bovine type II collagen. After a second collagen immunization, mice were treated with OS plus AC once a day for 7 weeks. Oral administration of OS plus AC (200 or 50 mg/kg) significantly suppressed the progression of CIA, which extend is comparable to that of methotrexate (MTX, 0.3 mg/kg), a positive control. The severity of arthritis within the knee joints was evaluated by histological assessment of cartilage destruction and pannus formation. Results : Administration of OS plus AC significantly suppressed the progression of CIA and inhibited the production of TNF-${\alpha}$ and IL-6 in serum. The erosion of cartilage was dramatically reduced in mouse knees after treatment with OS plus AC. In conclusion, our results demonstrates that OS plus AC significantly suppressed the progression of CIA and that this action was characterized by the decreased production of IL-6, IFN-${\gamma}$ and collagen II specific antibody in serum, CD3+CD69+ T cells, MHC class II+/CD11c+ (in DLN), CD11b+Gr-1+ cells (in PBMC), CD11b +Gr-1+ cells, B220+/CD23+ (in paw joint). Conclusions : The the levels of IFN-${\gamma}$ in the culture supernatant of splenocytes stimulated with CD3/CD28 or collagen were dramatically decreased, while those of IL-4 was increased. In the serum of OS and AC-treated mice, the levels of IgM RA factor were decreased.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서 강활·독활 두 배합약물을 투여하여 관절염(Rheumatoid Arthritis : RA)을 심화 혹은 억제시키는 여러 요소들에 대해 아래와 같은 결과를 얻어냈다.
따라서 류마티스성 관절염의 진행을 억제하고, 부작용을 줄일 수 있는 효과적인 신물질로서 최근 한약재에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 본 연구에서는 전통 한약재 중 風濕으로 인한 다양한 腰膝의 疼痛과 無力을 다스리는 羌活과 獨活의 배합약재를 응용하여 유의한 결과를 얻었다.
이에 저자는 강활과 독활 배합의 관절염에 대한 효과를 알아보고자 DBA/1OlaHsd 생쥐에 Collagen Ⅱ를 감작시켜 관절염을 유도한 후 강활·독활을 배오한 전탕액을 투여하여 항관절염 효과를 관찰해본 결과, 강활과 독활의 배합약물이 관절염 치료효과에 미치는 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

4주간 index 값을 측정 후 ethyl ether로 마취하여 심장 천자법으로 혈액을 채혈한 후 혈청을 분리하였다. 분리된 혈청에서 IL-6와 TNF-α 그리고 RF인 총 IgM 농도 측정은 CIA 실험 종료 후에 enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA, Endogen, U.
Suppressive effect of OS plus AC on arthritis index of paw joint in CIA mice. Arthritis index were scored according to Mann-Whitney U test at every six day interval. Following boosterization of collagen mice were divided into four groups and each group was treated with DW (CIA-CT), MTX (CIA-MTX ; 0.
CIA 생쥐 모델에 4주간 MTX, 강활·독활 두 배합약물 (200 mg/kg, 50 mg/kg)를 투여하고, 실험 종료 후 생쥐의 관절을 적출하여 H&E 염색과 M-T 염색을 통하여 조직을 분석하였다.
CIA 생쥐에 4주간 약물을 처리하여 실험을 종료하고, 실험동물을 ethyl ether로 마취시킨 후 생쥐에서 thymus, draining lymph node (DLN), paw joint를 각각 적출하여 100 mesh로 세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 (1700 rpm)하여 2회 세척한 후 cell strainer (FALCON)에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거하였다. 그리고 관절은 잘게 chopping한 후 collagenase 1 mg/ml (in 2% FBS+RPMI1640)을 넣고 37℃ shaker (180rpm, 20min.
Collagen II 항체의 혈청 내 농도 측정은 CIA 실험 종료 후에 enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA, Endogen, U.S.A)로 생산량을 측정하였다 각 well에 CIA 생쥐의 혈청 100 ㎕ (1/200 dilution)씩 분주하고, 12 시간 동안 4℃ 냉장실에서 방치한 후 2회 washing 완충 용액으로 세척한 다음 antibody biotin-conjugated를 넣고 30분간 방치하였다. 다시 2회 수세 후 완충 용액으로 세척한 다음 antibody Avidin-HRP conjugeted 100 ㎕를 처리하고 1 시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다.
DBA/1OlaHsd 생쥐 5 마리씩을 한 군으로 하여 정상군 (Normal group), 치료제를 처리하지 않은 대조군(Control-CT), 그리고 methotrexate (0.3 mg/kg) 처리군(MTX), 강활·독활 두 배합약물 투여군으로 나누어 booster 후 약물 투여를 시작하였다.
DBA/1OlaHsd 생쥐에서 thymus, draining lymph node (DLN), paw joint를 각각 적출하여 100 mesh로 세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 (1700 rpm)하여 2회 세척한 후 cell strainer에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거하였다. 그리고 관절은 잘게 chopping한 후 collagenase 1mg/ml (in 2% FBS+ RPMI1640)을 넣고 37 ℃ shaker (180 rpm, 20 min.
Arthritis index were scored according to Mann-Whitney U test at every six day interval. Following boosterization of collagen mice were divided into four groups and each group was treated with DW (CIA-CT), MTX (CIA-MTX ; 0.3 mg/kg) or OS plus AC (CIA-OS+AC ; 200 or 50 mg/kg) or in a daily base. Normal mice without injection of collagen and Complete Freund's adjuvant were treated with DW.
CT：DBA/1OlaHsd mouse group boosted with collagen type II (1 ㎍/㎖). MTX : DBA/1OlaHsd mouse group boosted with collagen type II (1 ㎍/㎖) and treated with methotrexate (MTX, 0.3 ㎎/㎏) two times a week for 4 weeks. OS+AC 200： DBA/1OlaHsd mouse group boosted with collagen type II (1 ㎍/㎖) and treated with OS+AC (200 ㎎/㎏) once a day for 4 weeks.
Type II collagen으로 boosting 후 DBA/1OlaHsd 생쥐의 각 4개의 발에서 관절염 징후를 Mann- Whitney U test의 기준²⁶⁾에 따라 발병률 (incidence, %)을 결정하고, CIA 유발 정도(Table 1)를 1 주일에 1회씩 5주간 기록하였다.
Type Ⅱ Collagen으로 유도된 관절염에 대한 강활⋅독활 두 배합약물의 억제 효과를 실험적으로 검색하고자, DBA/1 생쥐에서의 콜라젠으로 관절염을 유발하여, 관절염 발생률, 관절 조직 변화, 관절 조직에서의 면역학적 변화, 혈청 내 rheumatoid factor 농도 및 spleen, draining lymph node (DLN), PBMC에서의 면역 세포 변화 등을 측정 하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
강활, 독활 각 50g으로 구성된 배합약물(OS+AC) 100g을 증류수 1,000 ㎖을 가하여 열탕 추출기에서 3시간 추출하여 얻은 액을 흡입 여과하고, 이를 감압 추출장치 (Rotary evaporator, BUCHI B-114, Switzerland)로 농축하였다. 이를 다시 동결 건조기 (Freeze dryer, EYELA FDU-540, Japan)를 이용하여 완전 건조 (20.
여기에 각각 PE-antiCD3e, FITC-anti-CD19, FITC-anti-CD4, FITC-anti-CD8, PE-anti-CD25, FITC-antiCD69, PE-anti-Gr-1, FITC-anti-CD11b, FITC-anti-CD11c, PE-anti-MHC class Ⅱ 를 넣고 30 분간 얼음에서 반응시켰다. 반응 후 3회 이상 인산완충 생리식염수로 수세한 후 flow cytometer의 cell quest 프로그램을 이용하여 백분율(%)로 분석한 후 총세포수를 적용하여 thymus, draining lymph node (DLN), paw joint에서의 절대세포 수 (absolute number)를 산출하였다. PBMC (peripheral blood mononeucleo cell)는 heparin이 들어있는 주사기로 심장 천자법으로 채혈하여 혈장을 분리한 후 혈액세포를 분리하였다.
분리된 혈청에서 IL-6와 TNF-α 그리고 RF인 총 IgM 농도 측정은 CIA 실험 종료 후에 enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA, Endogen, U.S.A)로 생성량을 측정하였다.
비장 내 IL-4와 IFN-γ는 ELISA kit (R&D system, U.S.A)를 이용하여 측정하였다.
동물 사육실의 조건은 conventional system으로 22±2℃, 1일중 12시간은 200~300 Lux로 조명하고, 12시간은 모든 빛을 차단하였다. 사료는 고형사료 (조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6%이상, 인 0.4% 이상, 삼양사, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하였다.
실험군은 크게 DBA/1OlaHsd 생쥐 5마리를 한 군으로 CIA를 유발시키지 않은 정상군과 CIA를 유발시킨 대조군, methotrexate (MTX, 0.3 mg/kg) 처리한 양성대조군과 강활·독활 두 배합약물 투여군으로 나누었다.
약물 투여 4주일 후에 각 군에서 관절을 분리하여 10% formaldehyde 용액에 고정한 후 세절하여 흐르는 물에 8 시간 수세한 다음, epoxy에 포맷하고, 이것을 microtome으로 절편을 만들어 표준 방법에 의하여 Hematoxylin & Eosin과 collagen deposition 염색인 Masson-Trichrome 염색을 수행하였다.
) 배양기에서 배양한 후 상층액을 회수하는 방법으로 4회 반복하였다. 여기에 각각 PE-antiCD3e, FITC-anti-CD19, FITC-anti-CD4, FITC-anti-CD8, PE-anti-CD25, FITC-antiCD69, PE-anti-Gr-1, FITC-anti-CD11b, FITC-anti-CD11c, PE-anti-MHC class Ⅱ 를 넣고 30 분간 얼음에서 반응시켰다. 반응 후 3회 이상 인산완충 생리식염수로 수세한 후 flow cytometer의 cell quest 프로그램을 이용하여 백분율(%)로 분석한 후 총세포수를 적용하여 thymus, draining lymph node (DLN), paw joint에서의 절대세포 수 (absolute number)를 산출하였다.
) 배양기에서 배양한 후 상층액을 회수하는 방법으로 4회 반복하였다. 이것을 flow cytometer의 Cell Quest 프로그램을 이용하여 백분율 (%)로 분석한 후 총세포수를 적용하여 각 조직에서의 절대 세포 수 (absolute number)를 산출하였다.
PBMC (peripheral blood mononeucleo cell)는 heparin이 들어있는 주사기로 심장 천자법으로 채혈하여 혈장을 분리한 후 혈액세포를 분리하였다. 이들 세포들을 ACK 용액 (8.3g NH₄Cl, 1g KHCO₃, in 1L of demineralized water + 0.1 mM EDTA)을 실온에서 5분 동안 처리하여 적혈구를 용해시키기고 다시 D- PBS로 2회 세척한 후 0.04% trypan blue로 염색한 후 세포수를 측정하였다. 측정한 PBMC 세포를 5 x 10⁵/ml 세포로 조정한 후 4℃에서 면역 형광염색 (immuno fluorescence staining)을 실시하여 flow cytometer의 cell Quest 프로그램을 이용하여 백분율(%)로 분석하였다.
정상군과 대조군은 생리식염수를 매일 1회 각각 매일 경구 투여하였고, 양성대조군은 MTX (0.3 mg/kg)를 매주 3회 각각 0.1 ml 씩 매일 복강에 주사하였으며, 강활·독활 두 배합약물 (200, 50 mg/kg) 투여군은 4주 동안 매일 오전 11시에 경구투여 하였다.
04% trypan blue로 염색한 후 세포수를 측정하였다. 측정한 PBMC 세포를 5 x 10⁵/ml 세포로 조정한 후 4℃에서 면역 형광염색 (immuno fluorescence staining)을 실시하여 flow cytometer의 cell Quest 프로그램을 이용하여 백분율(%)로 분석하였다.

대상 데이터

본 실험에 사용한 강활 (Ostericum koreanum Maxim.: OS), 독활 (Aralia continentalis Kitagawa: AC)는 상지대학교 한방병원에서 구입하여 기원의 진위와 품질의 상태를 상지대학교 본초학 교실에서 검정한 후 정선하여 사용하였다.
실험동물은 폴라스인터내셔날 (England)에서 분양받은 6주령의 암컷 DBA/1OlaHsd를 2주일 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 22±2℃, 1일중 12시간은 200~300 Lux로 조명하고, 12시간은 모든 빛을 차단하였다.

데이터처리

다양한 실험으로부터 얻은 결과는 mean ± standard error로 기록하였고, 유의성 검증은 unpaired Student's T-test 분석방법을 이용하여 결정하였다.

성능/효과

1. 강활⋅독활 두 배합약물은 200mg/kg 및 50mg /kg의 용량에서 콜라젠으로 유발된 관절염의 발생 (arthritis index)을 유의적으로 억제하였다.
2. 강활⋅독활 두 배합약물은 관절염이 발생한 조직에서 염증 세포의 유입과 연골의 파괴를 유의적으로 감소시켰다.
3. Paw joint, 및 DLN에서 총 세포 수를 현저하게 감소시켰다.
4. 강활⋅독활 두 배합약물은 PBMC에서는 B220+/ CD23+ , granulocytes 세포 수는 대조군에 비해 유의성 있게 감소시켰으며, DLN에서는 CD3+/CD69+세포 및 MHC class Ⅱ+/CD11c+ (Dendritic cell) 세포 수를 유의성 있게 감소시켰다.
5. 강활⋅독활 두 배합약물의 200 ㎎/㎏ 농도에서 염증성 사이토카인 IL-6, IFN-γ의 생성을 현저하게 감소시켰다.
6. 강활⋅독활 두 배합약물은 류마티스 관절염 요소의 일종인 IgM을 유의성 있게 감소시켰다.
B220+/CD23+ 세포 수는 정상군이 1.2±0.6％, 대조군이 20.6±0.95％, MTX 투여군이 15.8±2.41％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 8.9±0.85％, 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 투여군이 14.7±2.15％로 나타나 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 (*p<0.05, ***p<0.001) 있게 감소되었다(Fig. 4B).
CD25+세포들의 제거는 DBA/1 mice의 자연발생적인 관절염을 이끌어 내는 것으로 나타났다²⁵⁾. CD25+ cell 제거는 DBA/1 mice의 CIA의심한 정도를 높이고, 발생을 촉진하는 것으로 나타났다. CD25+ 세포가 제거되고 CII-면역된 DBA /1 mice의 비장세포에서 CII특이적인 침윤이 증가하는 것이 보인다²⁶⁾ .
CD3+/CD69+ 세포 수는 정상군이 2.6±0.6％, 대조군이 7.8± 0.11％, MTX 투여군이 4.4±0.61％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 4.8±0.55％, 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 투여군이 4.8±0.62％로 나타나 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 (***p<0.001) 있게 감소되었다(Fig. 5B).
CD3/CD28로 활성화된 비장세포의 IFN-γ& IL-4 생성량은 고농도 투여군에서 IFN-γ가 감소되었으며, 모든 농도에서 IL-4의 생성량이 증가되었다(Fig. 7A).
CD4+ 세포와 CD8+ 세포 수를 측정한 결과, 정상군이 각각 44.3±1.0％, 22.6±1.4％ 대조군이 각각 24.9±2.4％, 14.4±2.7％, MTX 투여군이 34.7±1.25％, 18.9±1.45％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 40.6±1.15％, 21.2±1.3％, 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 투여군이 39.0±0.95％, 17.9±3.05％로 나타나, 200, 50㎎/㎏에서 대조군에 비하여 CD4+는 모든 농도에서 유의성 있게 증가되었으며, CD8+ 세포는 고농도에서 유의성 있게 증가되었다(Fig. 5A).
4A). CD4⁺/CD25⁺ 및 B220⁺/CD23⁺ 세포의 수는 대조 군에 비해서 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig. 4B). Granulocytes 세포 변화를 측정한 결과, 강활·독활 두 배합약물 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig.
CD4+/CD25+ 및 CD3+/CD69+ 세포 수 변화를 측정한 결과, CD4+/CD25+ 세포 수는 정상군이 7.9±0.2%, 대조군이 5.8±0.5％, MTX 투여군이 2.1±1.68％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 4.6±0.29％, 강활·독활 두 배합 약물 50㎎/㎏ 투여군이 5.0±0.14％로 나타나 대조군에 비해 감소하였다.
CD4+/CD25+ 및 CD3+/CD69+ 세포의 수는 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군에서 CD4+/CD25+ 세포 비율은 큰 변화를 보이지 않았으나, CD3+/CD69+ 비율은 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig. 5B).
DBA/1OlaHsd mice에 4주간 강활·독활 두 배합약물을 경구 투여한 후 DLN 및 paw joint에서의 총 면역세포수를 관찰한 결과, DLN에서는 고농도에서 유의성 있게 감소되었으며 (Fig. 3A), Paw joint에서는 정상군이 7.63 ± 0.88 (x106), 대조군이 17.25 ± 0.25 (x106), MTX 투여군이 8.75±0.25 (x106), 강활·독활 두 배합약물 200 mg/kg 투여군이 9.3 ± 2.7 (x106), 강활·독활 두 배합약물 50 mg/kg 투여군이 9.9±0.9 (x106)로 나타나 배합약물 투여군에서 대조군에 비하여 유의성 (**p<0.01, ***p<0.001) 있게 감소되었다 (Fig. 3B).
2D, E). DLN 및 paw joint에서의 총 면역세포수를 관찰한 결과, DLN에서는 고농도에서 유의성 있게 감소하였으며, Paw joint에서는 배합약물 투여군 모두에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig. 3B). CIA 생쥐의 PBMC 내에서 CD4⁺ 및 CD8⁺ 세포의 수 변화를 측정한 결과, 강활· 독활 두 배합약물 고농도 투여군에서 대조군에 비해서 CD4⁺세포의 수는 유의성 있게 증가되었 으나, CD8⁺ 세포의 비율은 변화가 없었다(Fig.
DLN에서 MHC class Ⅱ+/CD11c+ (Dendritic cell) 세포 수를 측정한 결과, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도 투여군에서 대조군에 비해 유의성 있게 감소되었다 (Fig. 6C).
DLN에서 MHC class Ⅱ+/CD11c+ 세포 변화를 측정한 결과, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도 투여군에서 대조군에 비해 유의성 있게 감소되었다(Fig. 5C).
4C). Draining lymph node (DLN)에서 CD4⁺ 및 CD8⁺ 세포의 비율을 측정한결과, 200, 50㎎/㎏에서 대조군에 비하여 CD4⁺ 는 모든 농도에서 유의성 있게 증가되었으며, CD8⁺ 세포의 비율은 고농도에서 유의성 있게 증가되었다(Fig. 5A). CD4⁺/CD25⁺ 및 CD3⁺/CD69⁺ 세포의 수는 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군에서 CD4⁺/CD25⁺ 세포 비율은 큰 변화를 보이지 않았으나, CD3⁺/CD69⁺ 비율은 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig.
Granulocytes 세포 변화를 측정한 결과, 강활·독활 두 배합약물 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 감소되었다(Fig. 4C).
MHC class Ⅱ+/CD11c+ (Dendritic cell) 세포수를 측정한 결과, 정상군이 1.5±0.5％, 대조군이 2.7±0.08％, MTX 투여군이 2.0±0.08％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도 투여군이 1.3±0.58％, 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도 투여군이 2.2±1.43％로 나타나, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도 투여군에서 대조군에 비해 유의성 있게 감소되었다 (Fig. 5C).
PBMC 내 granulocytes 세포 수 변화를 측정한 결과, 정상군이 13.2±2.0％, 대조군이 36.9±0.7％, MTX 투여군이 13.3±0.1％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 20.6±2.0, 강활· 독활 두 배합약물 5㎎/㎏ 투여군이 28.9±0.4％로 나타나 강활·독활 두 배합약물 모든 농도군에서 대조군에 비하여 유의성 (***p<0.001) 있게 감소되었다 (Fig. 4C).
강활·독활 두 배합약물 200, 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군 모두에서 대조군에 비하여 CD11b+Gr-1+(과립구세포)세포의 총세포수가 유의성 있게 감소를 나타내었다(Data not shown).
강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도로 투여한 CIA 생쥐에서 혈청내 전염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IFN-γ의 분비가 감소되었으며, 특히 IL-6 및 IFN-γ가 유의성 있는 감소를 보였다(Fig. 6A).
강활·독활 두 배합약물을 투여했을 때, DLN 내에서 CD3+/ CD69+ 세포 수가 유의성 있게 감소되었으며, CD4+/ CD25+ 세포 수는 PBMC 와 DLN 내에서는 유의성 있게 감소되었다.
강활·독활 두 배합약물을 투여했을 때, PBMC 에서는 강활· 독활 두 배합약물 200 ㎎/㎏ 투여군에서 CD4+ 세포 수가 대조군에 비해 유의성 있게 증가되었고, DLN 내에서도 유의성 있게 증가되었다.
관절염 유발 후 arthritis index값을 매주 한 번씩 5주 동안 검사한 결과, 약물을 처리한 후 3주부터 MTX 투여군과 강활·독활 두 배합약물 투여군의 관절염 지수가 대조군에 비하여 유의성 있는 감소 효과를 나타내었다(Fig. 1).
관절염 유발 후 arthritis index값을 매주 한번씩 5주 동안 검사한 결과, 약물을 처리한 후 1주부터 MTX 투여군과 강활·독활 두 배합약물 투여군의 관절염 지수가 대조군에 비하여 유의성 있는 감소 효과를 나타내었다 (Fig. 1).
그 외에도 활막의 파괴, 혈관의 강활·독활 두 배합약물 투여군 (200 mg/kg) (Fig. 2. D), 그리고 강활·독활 두 배합약물(50 mg/kg) (Fig. 2. E) 투여군에서는 대조군에 현저하게 관찰된 synovial paw joint cavity (JC)에서의 염증을 관찰할 수 없었고, 또한 관절 주변에서도 역시 대조군에 비하여 면역세포의 침투나 연골의 침하, 그리고 활막세포의 손상이 상대적으로 감소하였다.
또한, 강활·독활 두 배합약물을 투여하였을 때 RA 인자인 IgM 생산이 감소하였으며(Fig. 6B), 혈청 내 collagen II 항체량도 감소하였다(Fig. 6C).
상군이 각각 46.5±1.1％, 14.6±0.7％ 대조군이 각각 29.0±1.75％, 9.6±0.9％, MTX 투여군이 32.0±0.45％, 11.1±0.6％, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 투여군이 43.2±2.2％, 11.8±0.65％, 강활·독활 두 배합약물 50 ㎎/㎏ 투여 군이 30.4±0.55％, 9.6±0.25％로 나타나, 200, 50㎎/㎏에서 대조군에 비하여 CD4+는 고농도에서 유의성 있게 증가되었으나, CD8+ 세포 비율은 변화가 없었다(Fig. 4A).
콜라젠으로 활성화된 비장세포의 IFN-γ & IL-4 생성량은 모든 농도에서 IFN -γ가 유의성 있게 감소되었으며, 50mg/kg 농도 투여군에서 IL-4 생성량이 유의성 있게 증가되었다(Fig. 7B).
혈청 내 IFN-γ 생성량을 분석한 결과, 정상군이 32.1±13.0 (pg/㎖), 대조군이 142.1±13.0 (pg/㎖), MTX 투여군이 42.1±7.0 (pg/㎖)이었으며, 강활·독활 두 배합약물 200 ㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 42.1±5.0 (pg/㎖), 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 86.1±45.0 (pg/㎖)이었다 (Fig. 6A).
혈청 내 IL-6 생성량을 분석한 결과, 정상군이 6.9±0.7 (pg/㎖), 대조군이 47.0±8.2 (pg/㎖), MTX 투여군이 18.5±0.9 (pg/㎖)이었으며, 강활· 독활 두 배합약물 200 ㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 18.6±10.8 (pg/㎖), 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 27.8±4.1 (pg/㎖)이었다.
혈청 내 IL-6 생성량을 분석한 결과, 정상군이 6.9±0.7 (pg/㎖), 대조군이 47.0±8.2 (pg/㎖), MTX 투여군이 18.5±0.9 (pg/㎖)이었으며, 강활· 독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 18.6±10.8 (pg/㎖), 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 27.8±4.1 (pg/㎖)이었다 (Fig. 6A).
혈청 내 IgM 농도를 분석한 결과, IgM 발현량이 대조군의 IgM 발현량에 비해 유의성 있게 감소되었다 (Fig. 6B). 혈청 내 collagen II 항체량을 측정 분석한 결과, 강활·독활 두 배합약물을 투여한 실험군이 대조군의 collagen II 항체 발현량에 비해 유의성 있게 감소되었다 (Fig.
혈청 내 IgM 농도를 분석한 결과, 정상군이 8.5±0.6 (U/㎖), 대조군이 17.6±1.3 (U/㎖), MTX 투여군이 10.5±0.6 (U/㎖), 강활·독활 두 배합 약물 200㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 10.7±1.5 (U/㎖), 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 12.5±1.7 (U/㎖)로 나타나 모든 실험군이 대조군에 비해 유의성 (*p<0.05, **p<0.01) 있게 감소되었다 (Fig. 6B).
혈청 내 TNF-α 생성량을 분석한 결과, 정상 군이 4.1±1.2 (pg/㎖), 대조군이 51.0±18.3 (pg/㎖), MTX 투여군이 16.8±2.2 (pg/㎖)이었으며, 강활·독활 두 배합약물 200 ㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 19.5±4.4 (pg/㎖), 강활· 독활 두 배합약물 50 ㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 31.0±17.3 (pg/㎖) 로 나타났다(Fig. 6A).
혈청 내 TNF-α 생성량을 분석한 결과, 정상군이 4.1±1.2 (pg/㎖), 대조군이 51.0±18.3 (pg/㎖), MTX 투여군이 16.8±2.2 (pg/㎖)이었으며, 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 19.5±4.4 (pg/㎖), 강활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 31.0±17.3 (pg/㎖) 로 나타났다(Fig. 6A).
혈청 내 collagen II 항체량을 측정 분석한 결과, 강활·독활 두 배합약물을 투여한 실험군이 대조군의 collagen II 항체 발현량에 비해 유의성 있게 감소되었다 (Fig. 6C).
혈청 내 collagen II 항체량을 측정 분석한 결과, 정상군의 collagen II 항체 발현량은 280.0±20.0 (mU/㎖), 대조군의 collagen II 항체 발현량은 9000.0±760.0 (mU/㎖), MTX 투여군의 collagen II 항체 발현량은 3920.0±200.0 (mU/㎖), 활·독활 두 배합약물 50㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 6420.0±980.0 (mU/㎖), 강활·독활 두 배합약물 200㎎/㎏ 농도로 투여한 실험군이 5280.0±780.0 (mU/㎖)로 나타나 두 실험군에서 대조군의 collagen II 항체 발현량에 비해 유의성 (*p<0.05, *p<0.01) 있게 감소되었다 (Fig. 6C).

후속연구

따라서 강활·독활 두 배합약물이 regulatory T 세포를 조절하여 관절염이 치료된다고 한다면 위와 같이 좀 더 추가적인 연구가 진행되어야 될 것이다.
이상의 결과로 보아 강활⋅독활 두 배합약물은 류마티스 관절염에서 효과가 기대되며, 임상에서 류마티스 관절염에 쓸 각 처방에 이 약물을 배합할 시에는 효과가 있을 것으로 기대된다.
이상의 결과로 보아, 강활·독활 두 배합약물이 항류마티스 효능을 가지는 면역조절물질 역할을 할 수 있을 것이라 생각된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	강활은 무엇인가?	강활은 미나리과에 속한 다년생본초로 강호리 Ostericum Koreanum Maximowicz의 뿌리, 중국강활 Notopterygium incisum Ting 혹은 寬葉羌活 Notopterygium forbesii Boissier의 근경 및 근을 기원으로 한다. 羌活의 性味는 雄烈하여 發汗解熱作用이 비교적 强하므로 解表에 적합하며 藥理作用으로는 袪風解表, 袪風濕, 止痛이며 外感風寒, 風濕, 痺痛治療에 사용한다6,7).
	류마티스 관절염의 원인은 어떠한가?	류마티스 관절염의 원인은 아직 완전히 알려지지 않은 상태이나, 자가면역 기전으로 인한 염증 반응으로 이해되고 있으며, 발병에는 유전적 소인과 환경적인 요인이 모두 영향을 미치는 것으로 추측되고 있다.
	독활의 약리작용은 어떠한가?	독활은 두릅나무과(五加科: Araliaceae)에 속하는 독활 Aralia continentalis Kitagawa의 근으로 性味는 비교적 淡하고 和緩하여 除濕의 作用이 强하다. 藥理作用으로는 袪風濕, 通經絡이며, 鎭痛, 鎭靜, 血管擴張作用이 있으며 風濕으로 인한 痺痛과 頭痛治療에 活用한다6,7) . 강활은 상초에 작용하여 거풍습에 강하고, 顚頂部로 直上하고 脂臂로 橫行하여 조산해표하는 효능으로 遊風頭痛, 풍습골절동통 등의 증상을 치료한다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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