[논문]에스트로겐 수용체 양성 MCF-7 유방암 세포주에 대한 costunolide의 항암효과

김운지; 최윤경; 우상미; 박남규; 정혜인; 김용국; 신용철; 고성규

에스트로겐 수용체 양성 MCF-7 유방암 세포주에 대한 costunolide의 항암효과
Anti-cancer Effects of Costunolide in Estrogen Receptor Positive MCF-7 Breast Cancer Cells 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.27 no.3, 2013년, pp.306 - 312

Abstract ▼ AI-Helper

Costunolide ($C_{15}H_{20}O_2$) is a sesquiterpene lactone that was isolated from many herbal medicines and it has diverse effects (anti-viral, anti-fungal, and anti-inflammatory) according to previous reports. However, the anti-cancer effects of Costunolide and its mechanism of actions are not well known in estrogen receptor positive breast cancer. In this study, we observed that costunolide suppresses cell growth in estrogen receptor positive MCF-7 breast cancer cells as shown by MTT assay and soft agar colony formation assay. To examine the mechanism by which costunolide inhibits MCF-7 cell growth, we performed FACS analysis. We found that costunolide induced G2/M and S cell cycle arrest, and regulated cycle-related protein expression. In addition, costunolide inhibited ERK signaling pathway and induced autophagy. Therefore, costunolide might be a good and useful chemotherapy agent for estrogen receptor positive breast cancer patients.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

다음으로는 Costunolide가 에스트로겐 양성 유방암 세포주의 증식을 억제시키는 기전을 확인하였다. 첫 번째 기전으로 세포주기를 확인했는데, 진핵세포는 증식을 하기 위해 G1기 → S기 → G2기 → M기를 통해 DNA를 복제하고 세포분열을 한다.
본 연구는 많은 식물 종에 포함되어 있는 Costunolide가 에스트로겐 양성 유방암 세포주에서 항암효과를 나타내는지에 대한 기전연구로써, 대조군과 Costunolide를 농도별로 처리한 실험군을 비교하여 다음과 같은 결론을 내렸다.
본 연구에서는 costunolide가 에스트로겐 수용체 양성 유방암 세포주의 증식을 억제하는 기전에 관한 내용을 보고하는 바이다.
마지막으로 Costunolide가 제 2형 세포계획사로 알려진 자가포식 (autophagy)을 유도함으로써 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포증식을 억제시킨다는 것을 확인하였다. 이러한 결과로부터 본 저자는 Costunolide에 의한 에스트로겐 양성 유방암 세포의 증식억제 기전을 확인함으로써 에스트로겐 양성 유방암의 항암효과에 대한 가능성을 발견하였다.
Costunolide는 세포사멸 (apoptosis)을 유도하고 혈관내피성장인자 (vascular endothelial growth factor, VEGF)의 발현을 억제하여 혈관신생을 조절하는 등 항암효과를 보인다고 기존에 보고되고 있다28-33). 이러한 사실을 바탕으로 본 실험에서는 에스트로겐 수용체 양성 MCF-7 유방암세포에서의 암세포 증식억제와 관련하여 Costunolide가 영향을 미치는 기전에 대해 검토하였다.
이미 기존 연구에서 몇몇 암세포에서 항암작용이 있다고 알려진 Costunolide가 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암세포의 증식 억제에도 효능이 있는지 확인하였다. Costunolide를 48시간 처리한 후 MTT 방법을 통해 확인해 본 결과, 10 μM 부터 농도 의존적으로 세포의 증식이 감소하였다.

가설 설정

Tubulin was used as loading control. (b) Protein level of ERK, phospho-ERK, p90RSK and phospho-p90RSK are normalized to Tubulin.
Tubulin was used as loading control. (b) Protein level of TSC2, Raptor and Atg13 are normalized to Tubulin. (C) MCF-7 cells were co-treated with costunolide and Chloroquine (CQ) for 48 hours.

제안 방법

2시간동안 어두운 상태를 유지한 채로 5% CO₂와 37℃ humidified incubator에서 반응 시켰다. 2시간 후 well 바닥에 형성된 결정을 확인 한 후, 이 결정을 DMSO로 녹여내고, 570 nm 파장에서 ELISA reader (Molecular Devices, Palo Alto, CA)를 사용하여 세포증식 정도를 측정하였다.
6% agar와 배지를 섞어 top agar를 만들고 세포와 costunolide를 처리한 후 섞어 굳힌 base agar위에 분주하였다. 3일에 한번 씩 costunolide를 처리하고 집락형성 정도를 14일 동안 관찰하였다. 세포를 가시화하기 위해 crystal violet 시약으로 염색 한 후, 현미경으로 형성된 집락을 확인하였다.
5% CO2와 37℃ humidified incubator에서 안정화 시킨 후 각각 0, 5, 10, 20, 40 μM의 농도가 되도록 Costunolide를 처리하였다.
Costunolide가 MCF-7 유방암세포주의 증식억제를 세포주기 조절을 통해 일어나는 현상인지 확인위해 Costunolide를 두 가지 농도 (20, 30 μM)로 12, 24시간 처리한 후, 유세포분석기를 이용하여 DNA contents histogram을 이용하여 측정하였다(Fig. 2a).
Costunolide에 의한 에스트로겐 수용체 양성 유방암 MCF-7 세포주의 세포독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 세포주를 96-well plate에, 4 × 10⁶cells/배지 100 ㎕의 초기세포 농도가 되도록 각각의 well에 분주하였다.
자가포식도 여러 분자들의 작용에 의해 조절되어 지는데 특히 TSC2, Raptor, Atg13은 자가포식 개시에 중요하다고 알려져 있다³⁸⁾. Costunolide와 자가포식과의 관련성을 확인하기 위하여 아무것도 처리하지 않은 대조군과 Costunolide를 처리한 실험군을 비교하여 자가포식 관련 단백질의 발현 정도를 확인하였다. 결과 Costunolide를 처리하였을 때, 농도의존적으로 자가포식 개시에 관련된 단백질의 발현이 증가하였다(Fig.
또한 이들은 암의 예후와도 관련되어 있으며 특히 유방암, 위암, 식도암, 신장암 등에서 과도하게 활성화 되어 있다고 알려져 있다^34,35). ERK의 활성화에 미치는 Costunolide의 영향을 확인하기 위해 Costunolide를 처리한 실험군과 대조군에서 인산화된 ERK의 단백질 발현 정도를 비교하였다. 결과 농도 의존적으로 ERK의 인산화 및 하위 신호전달인자인 p90RSK의 인산화도 억제되었다(Fig.
1X-PBST로 15분 동안 washing (15분X3회)하고, 2차 항체를 1시간 정도 상온에서 반응시켰다. 그 후 1X-PBST로 1시간 washing(10분X6회)을 하고 chemiluminescence detection system(Amersham-Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, England)을 사용하여 X-ray film으로 결과를 확인하였다.
2). 다음으로 세포주기와 관련된 단백질을 확인하였다. 각각의 세포주기(G1, S, G2, M)마다 그들을 조절하는 단백질 (Cyclin, CDK, CKI)의 종류는 다르다고 알려져 있는데 cyclin과 CDK의 결합으로 세포주기는 조절된다.
1b). 다음으로는 Costunolide가 MCF-7 세포주의 집락형성정도에 미치는 영향을 확인하기 위해 soft agar 실험을 수행하였다. 결과 Costunolide 20 μM를 처리한 실험군에서 대조군보다 집락형성이 억제됨을 확인 할 수 있었다(Fig.
5a, b). 다음으로는 Costunolide에 의해 유도되는 자가포식이 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 증식에 영향을 미치는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제를 Costunolide와 같이 처리하여 세포생존률을 비교하였다. 결과 Costunolide에 의해서 감소되었던 세포생존률이 자가포식을 억제함으로써 다시 회복되는 것을 확인할 수 있었다.
5a, b). 다음으로는 Costunolide에 일어난 자가포식에 의해 세포증식이 억제되는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제(Chloroquine)를 처리한 후 세포생존률을 MTT를 통해 확인하였다. 결과 Costunolide에 의해서 감소되었던 세포생존률이 자가포식을 억제함으로써 다시 회복되는 것을 확인할 수 있었다(Fig.
세포 내 신호전달체계에서 종양세포의 세포증식과 생존을 조절하는데 중심적인 역할을 하는 ERK의 과도한 활성화는 암 생성을 야기한다고 보고되어 있다. 다음으로는 ERK의 활성화에 미치는 Costunolide의 영향을 하기 위하여 Costunolide를 농도별로 처리한 후 ERK 신호전달과 관련된 단백질의 발현 변화를 western blot을 통해 확인하였다. 결과 대조군에 비해 Costunolide를 처리한 실험군에서 ERK의 활성화를 조절하는 인산화가 억제되는 것을 확인할 수 있었고, ERK의 하위 신호전달인자인 p90RSK의 인산화도 억제되었다.
다음으로는 종양형성 관련 신호에 미치는 Costunolide의 영향을 확인하였다. ERK는 포유류의 MAPK 중 가장 중요하다고 밝혀진 Ras와 Raf의 하위신호로 세포증식, 세포분화, 세포이동 및 종양세포의 침윤과 전이를 조절한다.
또한 이런 집락형성은 암세포가 전이된 후에 새로운 조직에서 전이성 암을 형성 할 수 있는 능력에 대한 판단도 가능하다. 때문에 costunolide에 의한 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 부착비의존성 집락형성 억제 정도를 확인하기 위해 두 종류의 agar (1.2%, 0.6%)를 멸균시킨 후 사용하였다. 6well을 준비 한 후, 1.
마지막으로 Costunolide가 제 2형 세포계획사 (Type Ⅱ programed cell death)라고 불리는 자가포식 (autophagy)에 미치는 영향을 확인하였다. 항암치료 (방사선치료 및 약물치료) 후에 자가포식이 활성화되어 있다는 몇몇 보고를 통해 자가포식 유도가 암세포의 증식을 억제시킨다는 가능성이 제기되었다^36,37).
3일에 한번 씩 costunolide를 처리하고 집락형성 정도를 14일 동안 관찰하였다. 세포를 가시화하기 위해 crystal violet 시약으로 염색 한 후, 현미경으로 형성된 집락을 확인하였다.
안정화 시킨 후에 costunolide를 농도별로 (20, 30 μM) 처리한 후, 시간별로 (12, 24 시간) 약 처리를 유지하였다.
에스트로겐 수용체 양성 유방암 세포주인 MCF-7은 RPMI-1640 배지를 사용하고 10% (v/v) 혈청(heat-inactivated fetal bovine serum (Gibco BRL))과 1% 항생제(antibiotic-antimycotic, (Gibco BRL))를 넣어 5% CO2가 든 37℃ humidified incubator에 키웠다. 혈청은 잔존하는 보체 성분을 불활성화 시키기 위해 실온에서 녹인 후 heat inactivation (56℃ water bath에 30분간 가열)하여 사용하였다.
에스트로겐 수용체 양성 유방암 세포주인 MCF-7은 RPMI-1640 배지에 혈청(FBS)과 항생제(antibiotic-antimycotic)를 넣어 5% CO₂가 든 37℃ humidified incubator에 키웠다.
우선 Costunolide가 실제로 MCF-7 세포주의 증식을 억제하는지 확인하기 위해 MTT 방법을 통한 세포독성, soft agar 실험을 통한 부착비의존성 집락형성 억제 능력 정도를 확인하였다(Fig. 1b, c). Costunolide를 처리한 실험군에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해 농도의존적으로 세포독성은 증가하였고, 집락형성 정도는 억제되었다.
50 ㎍/㎖ RNase A가 포함) 시약을 사용하여 염색시켰다. 유세포분석기(BD Biosciences)를 사용하여 측정하고 ModFit LT V2.0 프로그램을 사용하여 세포주기를 분석하였다.
제2형 세포계획사 (typeⅡ programed cell death)라고 알려진 자가포식에 Costunolide가 미치는 영향을 확인하였다. 자가포식체(autophagosome) 형성과 관련된 자가포식 개시 (initiation)를 조절하는 Atg13, TSC2와 Raptor의 발현정도를 확인하였다. 결과 Costunolide는 TSC2, Raptor, Atg 13의 단백질 발현을 증가시킴으로써 자가포식을 유도 할 수 있는 신호전달 경로를 활성화 시키는 것을 확인할 수 있었다(Fig.
자가포식 현상과 세포주기 조절과정은 신호전달 경로 측면에서 많은 부분이 서로 crosstalk한다고 알려져 있다. 제2형 세포계획사 (typeⅡ programed cell death)라고 알려진 자가포식에 Costunolide가 미치는 영향을 확인하였다. 자가포식체(autophagosome) 형성과 관련된 자가포식 개시 (initiation)를 조절하는 Atg13, TSC2와 Raptor의 발현정도를 확인하였다.
첫 번째 기전으로 세포주기를 확인했는데, 진핵세포는 증식을 하기 위해 G1기 → S기 → G2기 → M기를 통해 DNA를 복제하고 세포분열을 한다.

대상 데이터

Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Western blot 분석 실험에 사용된 Cdc2, Cyclin B1 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다.
본 실험에 사용한 Costunolide 시약은 Wako (Wako Pure Chemical Industries, Osaka,. Japan)에서 구입하여 DMSO(Dimethyl sulfoxide, (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)에 녹여 실험에 사용하였다. 세포 배양을 위해 사용된 RPMI-1640 배지와 혈청 (fetal bovine serum), 항생제 (antibiotic-antimycotic), PBS (phosphate-buffered Saline)는 Gibco-BRL (Rockville, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다.
세포 배양을 위해 사용된 RPMI-1640 배지와 혈청 (fetal bovine serum), 항생제 (antibiotic-antimycotic), PBS (phosphate-buffered Saline)는 Gibco-BRL (Rockville, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정 실험에 사용된 MTT 시약은 Sigma aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Western blot 분석 실험에 사용된 Cdc2, Cyclin B1 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다.
Louis, MO, USA)에 녹여 실험에 사용하였다. 세포 배양을 위해 사용된 RPMI-1640 배지와 혈청 (fetal bovine serum), 항생제 (antibiotic-antimycotic), PBS (phosphate-buffered Saline)는 Gibco-BRL (Rockville, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정 실험에 사용된 MTT 시약은 Sigma aldrich (St.

데이터처리

2a). 그리고 ModFit LT V2.0 프로그램을 사용하여 세포주기를 분석하였다. 결과 Costunolide가 G1 세포주기에는 영향을 미치지 않았다 (Control vs.
본 실험에서 얻은 결과의 측정값을 Mean(평균)±S.E(표준오차)로 처리하였으며, student t-testmethod(unpaired)로 분석하여 p값이 0.05 이하일 때 통계적 유의성을 인정하였다.

이론/모형

(b) MCF-7 cells were seeded and treated with costunolide for 48 hours. Cell viability was measured by MTT assay. Data are shown as the mean of three independent experiments [error bars are mean ± standard deviation (SD)] *,p<0.
다음으로는 Costunolide 처리 후, 세포주기와 관련된 단백질 발현의 변화를 확인하기 위하여 western blot을 수행하였다. 결과 G1 세포주기와 관련된 단백질인 CDK4, CDK6, Cyclin D의 발현은 대조군에 비해 Costunolide를 처리한 실험군에서 변화가 나타나지 않았다.

성능/효과

Tubulin was used as loading control. (b) Protein level of CDK4, CDK6, Cyclin D, CDC2, Cyclin B1, CDK2 and Cyclin E are normalized to Tubulin.
분열된 각각의 세포들은 다시 G1기를 거쳐 세포주기를 순환하게 되는데 세포들은 각각 G1, G2기의 checkpoint를 가짐으로써 중간 중간 이상이 있는지를 확인하게 되고, 만약 이상이 발견되면 세포주기를 정지시켜 다음 단계로의 이행을 막고 결과 세포 분열이 억제된다6,7). Costunolide가 세포주기에 미치는 영향을 유세포 분석기를 통해 확인한 결과 G2/M기 및 S기에 영향을 주어 세포증식을 억제시킨다는 것을 알 수 있었다(Fig. 2). 다음으로 세포주기와 관련된 단백질을 확인하였다.
Costunolide를 48시간 처리한 후 MTT 방법을 통해 확인해 본 결과, 10 μM 부터 농도 의존적으로 세포의 증식이 감소하였다.
1b, c). Costunolide를 처리한 실험군에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해 농도의존적으로 세포독성은 증가하였고, 집락형성 정도는 억제되었다. 형성된 집락의 개수를 세어 그래프한 결과 Costunolide를 처리했을 때 대조군에 비해 6배 감소하였다 (p<0.
G2/M기의 경우 모든 시간 (12, 24시간) 및 모든 농도 (20, 30μM)에서 Costunolide를 처리한 실험군에서 10% 이상 G2/M기에 머무르는 세포가 증가하였고, 이 결과 세포주기이행이 억제되어 세포증식이 억제된다는 것을 알 수 있었다 (Control vs. Costunolide 20 μM 12 h = 18.2% vs. 36.0%, P=0.08; Control vs. Costunolide 20 μM 24 h = 20.6% vs. 30.9%, P=0.0003; Control vs. Costunolide 30 μM 12 h = 18.2% vs. 32.6%, P=0.19; Control vs. Costunolide 30 μM 24 h = 20.57% vs. 34.105%, P=0.009).
결과 Costunolide 20 μM를 처리한 실험군에서 대조군보다 집락형성이 억제됨을 확인 할 수 있었다(Fig. 1d).
결과 Costunolide가 G1 세포주기에는 영향을 미치지 않았다 (Control vs. Costunolide 20 μM 12 h = 35.81% vs. 21.60%, P=0.01; Control vs. Costunolide 20 μM 24 h = 34.25% vs. 30.42%, P=0.29; Control vs. Costunolide 30 μM 12 h = 35.81% vs. 23.77%, P=0.04; Control vs. Costunolide 30 μM 24 h = 34.257% vs. 24.89%, P=0.03).
특히 이 중에서도 Cyclin D와 Cdk4/6 복합체 형성은 G1 세포주기의 이행을 조절하고, Cyclin E와 CDK2는 S 세포주기, 마지막으로 CDC2 (CDK1)와 Cyclin B1은 G2 세포주기의 이행을 조절한다고 알려져 있다8). 결과 Costunolide가 농도 의존적으로 G2기, S기에 관련된 단백질 중에서도 특히 Cyclin (Cyclin B1, Cyclin E)에 영향을 주어 세포주기의 이행을 조절한다는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3). 결과적으로 Costunolide는 G2/M기, S기의 세포주기 조절을 통하여 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 증식을 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.
자가포식체(autophagosome) 형성과 관련된 자가포식 개시 (initiation)를 조절하는 Atg13, TSC2와 Raptor의 발현정도를 확인하였다. 결과 Costunolide는 TSC2, Raptor, Atg 13의 단백질 발현을 증가시킴으로써 자가포식을 유도 할 수 있는 신호전달 경로를 활성화 시키는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 5a, b). 다음으로는 Costunolide에 일어난 자가포식에 의해 세포증식이 억제되는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제(Chloroquine)를 처리한 후 세포생존률을 MTT를 통해 확인하였다.
Costunolide와 자가포식과의 관련성을 확인하기 위하여 아무것도 처리하지 않은 대조군과 Costunolide를 처리한 실험군을 비교하여 자가포식 관련 단백질의 발현 정도를 확인하였다. 결과 Costunolide를 처리하였을 때, 농도의존적으로 자가포식 개시에 관련된 단백질의 발현이 증가하였다(Fig. 5a, b). 다음으로는 Costunolide에 의해 유도되는 자가포식이 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 증식에 영향을 미치는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제를 Costunolide와 같이 처리하여 세포생존률을 비교하였다.
다음으로는 Costunolide에 일어난 자가포식에 의해 세포증식이 억제되는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제(Chloroquine)를 처리한 후 세포생존률을 MTT를 통해 확인하였다. 결과 Costunolide에 의해서 감소되었던 세포생존률이 자가포식을 억제함으로써 다시 회복되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 5c).
다음으로는 Costunolide에 일어난 자가포식에 의해 세포증식이 억제되는 것인지 확인하기 위하여 자가포식 억제제(Chloroquine)를 처리한 후 세포생존률을 MTT를 통해 확인하였다. 결과 Costunolide에 의해서 감소되었던 세포생존률이 자가포식을 억제함으로써 다시 회복되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 5c).
다음으로는 Costunolide 처리 후, 세포주기와 관련된 단백질 발현의 변화를 확인하기 위하여 western blot을 수행하였다. 결과 G1 세포주기와 관련된 단백질인 CDK4, CDK6, Cyclin D의 발현은 대조군에 비해 Costunolide를 처리한 실험군에서 변화가 나타나지 않았다. 반면 G2/M기 및 S기 조절에 관련된 싸이클린 단백질 (Cyclin B1, Cyclin E)의 발현이 Costunolide 농도 의존적으로 감소하였다(Fig 3a, b).
ERK의 활성화에 미치는 Costunolide의 영향을 확인하기 위해 Costunolide를 처리한 실험군과 대조군에서 인산화된 ERK의 단백질 발현 정도를 비교하였다. 결과 농도 의존적으로 ERK의 인산화 및 하위 신호전달인자인 p90RSK의 인산화도 억제되었다(Fig. 4).
다음으로는 ERK의 활성화에 미치는 Costunolide의 영향을 하기 위하여 Costunolide를 농도별로 처리한 후 ERK 신호전달과 관련된 단백질의 발현 변화를 western blot을 통해 확인하였다. 결과 대조군에 비해 Costunolide를 처리한 실험군에서 ERK의 활성화를 조절하는 인산화가 억제되는 것을 확인할 수 있었고, ERK의 하위 신호전달인자인 p90RSK의 인산화도 억제되었다. 또한 이러한 결과는 Costunolide 농도 의존적으로 즉, 농도가 높아질수록 ERK 및 p90RSK의 인산화가 더 억제 되는 것을 확인할 수 있었다(Fig.
3). 결과적으로 Costunolide는 G2/M기, S기의 세포주기 조절을 통하여 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 증식을 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 Costunolide의 증식억제는 G1 세포주기에는 영향을 미치지 않고, S기 및 G2/M 세포주기에 영향을 미침으로써 다음 주기로의 이행을 막아 결국 세포의 증식을 억제 시킨다는 것을 확인할 수 있었다. 다음으로는 Costunolide가 종양세포의 증식에 중요하다고 알려진 ERK 경로의 활성화 즉, ERK의 인산화 정도를 감소시킴으로써 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암의 세포증식을 억제시키는 것을 확인하였다.
또한 S기 역시 30μM Costunolide를 처리한 경우 S기에 머무르는 세포가 증가하여 세포주기이행이 억제되었다 (Control vs. Costunolide 20 μM 12 h = 38.1% vs. 52.5%, P=0.0009; Control vs. Costunolide 20 μM 24 h = 45.6% vs. 44.6%, P=0.83; Control vs. Costunolide 30 μM 12 h = 38.1% vs. 53.4%, P=0.05; Control vs. Costunolide 30 μM 24 h = 45.6% vs. 55.03%, P=0.14).
결과 대조군에 비해 Costunolide를 처리한 실험군에서 ERK의 활성화를 조절하는 인산화가 억제되는 것을 확인할 수 있었고, ERK의 하위 신호전달인자인 p90RSK의 인산화도 억제되었다. 또한 이러한 결과는 Costunolide 농도 의존적으로 즉, 농도가 높아질수록 ERK 및 p90RSK의 인산화가 더 억제 되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 4a, b).
마지막으로 Costunolide가 제 2형 세포계획사로 알려진 자가포식 (autophagy)을 유도함으로써 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포증식을 억제시킨다는 것을 확인하였다. 이러한 결과로부터 본 저자는 Costunolide에 의한 에스트로겐 양성 유방암 세포의 증식억제 기전을 확인함으로써 에스트로겐 양성 유방암의 항암효과에 대한 가능성을 발견하였다.
Costunolide는 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암 세포주의 증식을 농도 의존적으로 억제시켰다. 이러한 Costunolide의 증식억제는 G1 세포주기에는 영향을 미치지 않고, S기 및 G2/M 세포주기에 영향을 미침으로써 다음 주기로의 이행을 막아 결국 세포의 증식을 억제 시킨다는 것을 확인할 수 있었다. 다음으로는 Costunolide가 종양세포의 증식에 중요하다고 알려진 ERK 경로의 활성화 즉, ERK의 인산화 정도를 감소시킴으로써 에스트로겐 양성 MCF-7 유방암의 세포증식을 억제시키는 것을 확인하였다.
003). 특히 집락형성 실험의 경우는 Costunolide를 15일 동안 처리한 실험한 결과로, Costunolide에 대한 장기간 효능(long-term effect)을 확인할 수 있고 세포 수준의 실험 중 가장 동물 모델과 비슷한 결과를 얻어낼 수 있는 실험방법으로 알려져 있어 Costunolide가 세포뿐만 아니라 암 유발 동물 모델에서도 효과를 나타낼 수 있을 것이라는 가능성을 제시하고 있다.
1d). 형성된 집락을 그래프화 하여 나타낸 결과 Costunolide를 처리하였을 때, 대조군에 비해 집락형성이 6배 억제되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 1d)
형성된 집락의 개수를 세어 그래프한 결과 Costunolide를 처리했을 때 대조군에 비해 6배 감소하였다 (p<0.003).

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	종양세포의 특징은?	종양의 형성은 수많은 과정에 의해 조절되는데 종양세포는 정상세포와는 다르게 무한 증식을 하고 혈관형성을 유도하고, 분자수준에서의 종양형성 관련신호가 활성화 되어 있으며 세포사멸 과정을 회피하는 특징을 나타낸다4). 특히 이 중에서도 암 세포의 증식억제는 세포주기를 조절 하거나 종양형성과 관련하여 활성화 되어 있는 신호를 조절함으로써 접근 할 수 있다5).
	세포주기를 구분하는 단계는?	특히 이 중에서도 암 세포의 증식억제는 세포주기를 조절 하거나 종양형성과 관련하여 활성화 되어 있는 신호를 조절함으로써 접근 할 수 있다5). 세포주기는 G1기 (휴지기1), S기 (합성), G2기 (휴지기2), M기 (유사분열기) 이 네 가지 단계로 구분될 수 있고, 이들의 계속된 순환에 의해 세포 증식이 가능하게 된다6,7). G1, S, G2, M기 세포주기는 분자적 수준에서 대표적으로 싸이클린 (Cyclin), 싸이클린-의존적 인산화 효소 (Cyclin-dependent kinase, CDK), 싸이클린-의존적 인산화효소 억제제 (Cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)에 의해 조절된다.
	Costunolide의 약리적인 효과는?	Costunolide (C15H20O2)는 sesquiterpene lactone계 화합물로 당목향20), 목련21), 태산목22), 함박꽃나무23), 월계수24) 등 많은 식물종에 포함되어 있다. 이에 대한 효능은 항염증25), 항바이러스26), 항균27), 등에 대해 알려져 있고 피부암28), 장암29), 혈액암30), 전립선암31), 유방암32)에 대한 항암효과가 보고되고 있다.

참고문헌 (38)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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