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제안 방법
- 35일간 절식시킨 멍게의 각 부위별 RNA/DNA 농도 및 단백질 함량 변화를 조사하였다(Fig. 5). RNA/DNA 농도비는 아가미와 간췌장에서 수온 8±0.
- 직학적 분석을 수행 하였다. RNA/DNA 농도 반응은 부위별로(간췌장, 아가미, 육질)분리하고 RNA농도, DNA농도를 분석하였다. RNA/DNA 분석은 -70℃에서 동결건조 시킨 후(18시간), 마쇄(TE-SDS용액 400 μL)하여, 원심분리(4℃, 1시간) 한 후 상등액을 이용 595 mm에서 형광광도계(Fluoroskan Ascent FL)로 DNA와 RNA양을 측정하였으며, 20 μL RNAse 를 첨가하여 RNA를 분해한 후 그 차이를 DNA양으로 계산하였다.
- RNA/DNA 분석은 -70℃에서 동결건조 시킨 후(18시간), 마쇄(TE-SDS용액 400 μL)하여, 원심분리(4℃, 1시간) 한 후 상등액을 이용 595 mm에서 형광광도계(Fluoroskan Ascent FL)로 DNA와 RNA양을 측정하였으며, 20 μL RNAse 를 첨가하여 RNA를 분해한 후 그 차이를 DNA양으로 계산하였다.
- 광학현미경 표본제작은 시료를 Bouin 용액에 24시간 동안 고정하여 파라핀절편법으로 5 μm 두께로 연속절편 후 Mayer's hematoxylin-eosin (H-E) 염색과 Alcian blue-periodic acid and Schiff's solution (AB-PAS, pH 2.5) 반응을 실시하였다.
- 다. 그리고 피낭, 수관부, 새낭, 육질부 및 소화선을 적출하여 조직학적 분석을 실시하였다. 광학현미경 표본제작은 시료를 Bouin 용액에 24시간 동안 고정하여 파라핀절편법으로 5 μm 두께로 연속절편 후 Mayer's hematoxylin-eosin (H-E) 염색과 Alcian blue-periodic acid and Schiff's solution (AB-PAS, pH 2.
- 실험은 지수식 및 순환여과식으로 행하였으며, 실험수온은 냉각기와 히터를 이용하여 조절하였다. 대조구는 매일 2회씩 시판중인 복합규조류를 먹이로 제공하였다. 절식은 여과해수(ø 1μm)에서 먹이를 공급하지 않고 35일간 사육하면서 물렁증 발생여부를 관찰하였다.
- 멍게의 건강도를 분석하기 위하여 RNA/DNA 반응 변화 및 조직학적 분석을 수행 하였다. RNA/DNA 농도 반응은 부위별로(간췌장, 아가미, 육질)분리하고 RNA농도, DNA농도를 분석하였다.
- 생존율은 12시간 간격으로 냄새를 맡거나 수관부의 수축반응 등을 통해 파악하였으며, 반응이 없을 시 죽은 것으로 간주하였다. 물렁증 발생 여부는 냄새, 수관부의 수축반응, 피낭의 연화상태, 피낭돌기의 탄력 및 피낭색을 관찰하여 물렁증 발생 여부를 분석하였다.
- 절식은 여과해수(ø 1μm)에서 먹이를 공급하지 않고 35일간 사육하면서 물렁증 발생여부를 관찰하였다. 생존율은 12시간 간격으로 냄새를 맡거나 수관부의 수축반응 등을 통해 파악하였으며, 반응이 없을 시 죽은 것으로 간주하였다. 물렁증 발생 여부는 냄새, 수관부의 수축반응, 피낭의 연화상태, 피낭돌기의 탄력 및 피낭색을 관찰하여 물렁증 발생 여부를 분석하였다.
- 1)에서 양성중인 멍게를 직접 채취한 후 즉시 실험실로 운반한 후, 유수식 5 m3 사육수조에 수용하여 일주일간 순치 시킨 후 실험에 사용하였다. 순치기간 중 먹이는 매일 2회씩 시판중인 복합규조류를 공급하였다. 수온은 순치기간 동안 실온을 유지하였으며, 염분 33.
- 5 mg/L에서 수행하였다. 실험은 지수식 및 순환여과식으로 행하였으며, 실험수온은 냉각기와 히터를 이용하여 조절하였다. 대조구는 매일 2회씩 시판중인 복합규조류를 먹이로 제공하였다.
- 절식에 따른 멍게의 물렁증 발생을 조사하기 위해 수온 8±0.5, 12±0.5℃, 15±0.5℃ 및 실온(대조구, 15±0.5℃), 염분 33.5±0.5 및 용존산소 농도는 7.7±0.5 mg/L에서 수행하였다.
- 절식은 여과해수(ø 1μm)에서 먹이를 공급하지 않고 35일간 사육하면서 물렁증 발생여부를 관찰하였다.
- 조직학적 분석을 위하여 각 환경요인에 노출시킨 후 채취한 시료는 vernier calipers와 전자저울로 측정형질을 계측한 후 해부하여 육안과 해부현미경을 통하여 해부학적 특징을 기재하였다. 그리고 피낭, 수관부, 새낭, 육질부 및 소화선을 적출하여 조직학적 분석을 실시하였다.
성능/효과
- 먹이를 공급한 대조구에서는 멍게의 피낭 및 피낭색의 뚜렷한 형태적인 변화가 관찰되지 않았다. 그러나 절식시킨 모든 시험구에서는 피낭이 수축되어 쪼그라들어 크기가 작아졌으며, 피낭색은 진한 붉은 색으로 변하는 것이 관찰되었다. 그러나 절식에도 불구하고 실험 기간 동안 구근이 계속 자라는 것이 관찰되었다.
- 물렁증 발생률이 높은 수온 8℃, 12℃ 및 15℃에서 먹이를 공급하지 않은 그룹과 실온(15℃)에서 먹이를 공급하며 사육한 대조구에서 멍게의 물렁증 발생을 관찰한 결과, 절식에 따른 물렁증 발생률은 수온 15℃에서 노출 35일째 15%를 나타내었으며, 수온 8℃와 12℃에서는 물렁증 발생이 관찰되지 않았으며, 절식기간이 길어질수록 피낭이 수축되며 색깔이 짙어지는 것이 관찰되었다. 또한 통영 주변 멍게 양식장의 식물성플랑크톤 발생 변동 조사결과 물렁증 발생이 심한 곳에 비해 물렁증 발생이 적은 양식장에서 플랑크톤의 발생이 낮았으며, 영양염의 농도도 낮았다(Hur, 2009)는 보고에 따라 먹이 부족에 의해 체내 보유물이 에너지원으로 이용되어 성장이 저하되면서 피낭의 수축이 발생하는 것으로 보인다.
- 본 연구에서 35일간 절식시킨 멍게의 각 부위별 RNA/DNA 농도 및 단백질 함량은 아가미와 간췌장에서는 뚜렷한 반응을 나타내지 않았다. 반면 근육부분에서는 RNA/DNA 농도와 단백질 함량은 먹이를 공급한 대조구에서 높게 나타났으며, 절식한 그룹에서 낮았다.
- 수온 8 ±0.5℃와 12℃±0.5℃에서 생존율은 100%였으며, 수온 15±0.5℃에서는 노출 10일째부터 폐사가 발생하기 시작하여 노출 35일째 생존율은 50%를 나타내었다(Fig. 2).
- 위의 결과를 종합하여보면, 먹이결핍은 멍게의 물렁증 유발에 직접적인 영향을 미치지 않는 것으로 여겨진다. 그러나 먹이결핍에 의한 영양부족으로 면역력 및 생리적 기능이 저하되어 물렁증 원인체에 감염되어 물렁증이 발생할 수 있을 것으로 여겨 지므로 물렁증이 주로 발생하는 시기의 지속적인 모니터링과 관리가 필요할 것으로 여겨진다.
- 절식에 따른 물렁증 발생률은 노출 35일째 대조구에서는 100%, 수온 15±0.5℃에서 15%를 나타내었으며, 수온 8±0.5℃와 12±0.5℃에서는 물렁증 발생이 관찰되지 않았다.
- 또한 통영 주변 멍게 양식장의 식물성플랑크톤 발생 변동 조사결과 물렁증 발생이 심한 곳에 비해 물렁증 발생이 적은 양식장에서 플랑크톤의 발생이 낮았으며, 영양염의 농도도 낮았다(Hur, 2009)는 보고에 따라 먹이 부족에 의해 체내 보유물이 에너지원으로 이용되어 성장이 저하되면서 피낭의 수축이 발생하는 것으로 보인다. 특히 멍게 물렁증 원인체가 양식장 주변해역 및 저질에서 유래하는 감염성 세균 및 기생충이므로 먹이가 풍부한 해역에서 증식할 수 있는 가능성이 크므로 빈 영양염 해역에 비해 물렁증 감염률이 높아 폐사율이 증가할 수 있을 것으로 여겨진다.
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