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문제 정의
- 그러므로 본 연구는 염화제2철이 유도하는 경동맥 손상 렛트 모델에서 상엽 추출물과 그 유래물질인 quercetin, kaempferol 및 resveratrol을 대상으로 혈행개선 효과를 알아보았다.
제안 방법
- 20일 간의 상엽추출물과 flavonoid 계열 물질 투여기간 종료후 doppler flow probe (MyLabTM 25, Esaote)를 이용하여 혈류 속도, 혈관직경, 혈관면적, 혈류량을 측정하여 각 그룹별 개선정도를 비교하였다. 혈전유발 부위 혈관의 조직학적 관찰을 위해 혈관 양쪽을 단단히 고정하고 경동맥을 3-4 mm 적출하여 인산완충액 (pH 7.
- 일반적으로 사용되는 약물은 FeCl3로 알려졌다9,19,23). 그러므로 본 연구에서는 강 등19)의 실험방법과 같이 렛트의 경동맥 주위를 깊게 해부하여 경동맥을 노출시킨 후 초음파 doppler를 확인한 후 실험을 수행하였다.
- 본 연구는 FeCl3를 이용한 경동맥 혈관 손상 후 상기와 같이 20일 동안 상엽추출물, 그 유래물질 또는 참고약물인 등을 경구 투여한 후 혈액을 채취하여 혈액의 응고 속도를 조사하였다. 그 결과 Table 1과 같이 대조군의 PT와 aPPT는 각각 21.
- 본 연구는 상엽추출물 및 그 유래물질들이 FeCl3에 의한 혈행장애로부터 개선시킨 효과를 혈관 조직학적 수준에서 알아보았다. 즉, FeCl3으로 경동맥 혈관 손상 후 상기와 같이 20일 동안 상엽추출물, 그 유래물질 또는 참고약물인 등을 투여한 후 경동맥을 적출한 후 파라핀 절편(5 μm)을 제작하여 H&E 로 염색하고 조직학적 변화를 관찰하였다.
- 본 연구는 상엽추출물과 그 유래 물질인 quercetin, kaempferol 및 resveratrol 등을 대상으로 FeCl3로 유도된 렛트 혈전모델에서 20일 동안 상엽추출물(400 mg/kg과 800 mg/kg), quercetin (5 mg/kg), kaempferol(5 mg/kg), resveratrol(5 mg/kg) 또는 참고약물인 aspirin(5 mg/kg) 등을 경구 투여한 후 초음파 장비를 이용하여 혈류속도, 혈관직경, 혈관면적, 혈류량 등을 측정하여 혈행과 관련된 지표의 변화를 알아보았다. 그 결과 Fig.
- 그 후 filter paper를 제거하고 초음파를 측정하여 혈전유발을 확인하고 수술부위를 봉합하였다. 혈전이 유발된 랫트에서 항혈전 효과를 관찰하기 위해서 정상군, 혈전유발 대조군, MFE 400 (혈전유발+상엽 추출 투여군), MFE 800 (혈전유발+상엽추출 투여군), QC(혈전유발+quercetin 투여군), KF(혈전유발+quercetin 투여군), RV(혈전유발+resveratrol 투여군) 및 참고약물인 aspirin (혈전유발+aspirin 투여군) 등으로 나누어 실험하였고, MFE는 체중 kg당 400 mg과 800 mg을, QC, KF 또는 RFC는 체중 kg 당 5 mg씩 매일 1회씩 20일 동안 경구투여 하였다.
대상 데이터
- ), quercetin (QC), kaempfero (KF), resveratrol (RV), hematoxylin & eosin(H&E) 및 기타 분석급식약은 Sigma-Aldrich사(MO, USA)로부터 구입하였다. Activated partial thromboplastin time (aPTT)와 prothrombin time (PT) 등 진단시약과 tryglyceride (TG), total cholesterol (TC) 그리고 혈액학적 진단 kit는 아산제약(경기도, 대한민국)으로 부터 구입하였다.
- Ferric chloride (FeCl3), quercetin (QC), kaempfero (KF), resveratrol (RV), hematoxylin & eosin(H&E) 및 기타 분석급식약은 Sigma-Aldrich사(MO, USA)로부터 구입하였다. Activated partial thromboplastin time (aPTT)와 prothrombin time (PT) 등 진단시약과 tryglyceride (TG), total cholesterol (TC) 그리고 혈액학적 진단 kit는 아산제약(경기도, 대한민국)으로 부터 구입하였다.
- 상엽(Mori Folium)은 전라북도 부안군에서 2013년 5월 20일에 채취하여 우석대학교 한의과대학 본초방제학교실 김홍준 교수로부터 동정하여 확인 하였고, 그 표본(#MF2013-05-20)은 전주대학교 보건관리학과 연구실에 보관하였다.
- 실험동물은 무균환경에서 사육된 8주령 수컷 Sprague Dawley (SD) rat (240~290 g)로 중앙실험동물(서울)로부터 구입하였다. 스트레스를 해소하기 위해서 1주일의 순화기간을 거친 후 실험에 사용하였다.
데이터처리
- 모든 실험값은 3반복 실험한 값을 평균±표준오차로 표시하였으며, 통계분석은 ANOVA와 Student's t-test로 처리하였으며, 유의성 한계는 P<0.05로 정하였다.
이론/모형
- , Seoul, Korea)를 사용하여 측정하였고 LDL-콜레스테롤은 Friedewald 방법에 따라 {총 콜레스테롤－(HDL-콜레스테롤+중성지방/5)}으로 계산하였다20). 더불어 동맥경화지수(AI, atherogenic index)와 TG/HDL-C는 Tan 등21)의 방법과 TC/HDL-C는 Grover 등22)의 방법에 따라 조사하였다. AI는 (TC-HDL-C)/HDL-C로 계산하였다.
- )로 -70°C에서 동결 건조하여 추출물을 약 190 g 얻은 후 –20°C에서 보관하면서 실험에 사용하였다. 또한 건조된 상엽(1.23 kg)으로부터 MeOH(10 L) 을 충분히 주입하여 10일간 방치하여 추출하였고, 추출물을 대상으로 n-hexane에 7일 동안 분획 추출한 후 Choi 등18)의 방법에 따라 high-performance liquid chromatography (HPLC Agilent 1200 series)을 활용하여 QC (34 mg) 및 KF (24.7 mg)를 분리하였으며, Song 등14)의 방법에 따라 RV (11 mg)을 분리하여, Choi 등18) 및 강 등19)의 방법에 따라 Sigma-Aldrich사로부터 구입한 표준 지표물질과 HPLC profiling을 비교(Fig. 1)한 후 분리된 각물질의 양이 소량으로 표준물질을 사용하여 렛트에 20일간 투여하는데 사용하였다.
- 혈액은 혈관 초음파 측정 후에 복대정맥에서 채취하여 실온에서 30분간 방치한 후 1,500×g에서 10분간 원심분리 하여 혈청을 얻었고 분석 시까지 -80°C에서 보관하였다. 혈청 내 중성지방, 총 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 농도는 표준 효소비색법에 의한 kit(Asan Co., Seoul, Korea)를 사용하여 측정하였고 LDL-콜레스테롤은 Friedewald 방법에 따라 {총 콜레스테롤－(HDL-콜레스테롤+중성지방/5)}으로 계산하였다20). 더불어 동맥경화지수(AI, atherogenic index)와 TG/HDL-C는 Tan 등21)의 방법과 TC/HDL-C는 Grover 등22)의 방법에 따라 조사하였다.
성능/효과
- 더욱이 관상동맥질환과 고지혈증의 혈청학적 위험요소인 동맥경화지수와 TG/HDL-C 그리고 TC/HDL-C의 지수가 개선된 결과는 상엽 추출물과 그 유래물질의 유용성을 증명해 주었다. 그러므로 상엽추출물과 그 유래물질은 혈행장애로 유발될 수 있는 혈관질환을 예방하거나 개선할 수 있는 물질이라는 것을 제시해주었다.
- 또한 상엽추출물과 quercetin, kaempferol 및 resveratrol 등 그 유래물질들은 혈액응고시간을 지연시키는 효과를 나타냈었고, 상엽추출물과 quercetin, kaempferol, resveratrol 등은 고밀도지단백 콜레스테롤을 높이는 반면, 저밀도지단백 콜레스테롤을 억제하는 효과가 있었다. 더욱이 관상동맥질환과 고지혈증의 혈청학적 위험요소인 동맥경화지수와 TG/HDL-C 그리고 TC/HDL-C의 지수가 개선된 결과는 상엽 추출물과 그 유래물질의 유용성을 증명해 주었다. 그러므로 상엽추출물과 그 유래물질은 혈행장애로 유발될 수 있는 혈관질환을 예방하거나 개선할 수 있는 물질이라는 것을 제시해주었다.
- 이상의 결과를 종합해볼 때, 상엽추출물과 quercetin, kaempferol, resveratrol 등 그 유래물질들은 FeCl3로 유도된 렛트경독맥 손상 및 혈전에 대해서 혈관손상 및 혈전을 억제시켜 혈행 속도, 혈관직경, 혈관면적 및 혈류량이 유의하게 개선되는 효과를 보였다. 특히 상엽추출물(800 mg/kg) 투여군은 참고약물로 사용한 aspirin과 유사한 혈행개선 효과가 있었다.
- 로 유도된 렛트경독맥 손상 및 혈전에 대해서 혈관손상 및 혈전을 억제시켜 혈행 속도, 혈관직경, 혈관면적 및 혈류량이 유의하게 개선되는 효과를 보였다. 특히 상엽추출물(800 mg/kg) 투여군은 참고약물로 사용한 aspirin과 유사한 혈행개선 효과가 있었다. 또한 상엽추출물과 quercetin, kaempferol 및 resveratrol 등 그 유래물질들은 혈액응고시간을 지연시키는 효과를 나타냈었고, 상엽추출물과 quercetin, kaempferol, resveratrol 등은 고밀도지단백 콜레스테롤을 높이는 반면, 저밀도지단백 콜레스테롤을 억제하는 효과가 있었다.
후속연구
- 이상의 결과를 종합해 보면 상엽추출물과 그 유래물질은 혈행 장애와 관련된 혈관 질환을 예방 및 개선할 수 있을 것으로 사료 된다.
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