선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 넙치의 주요 세균성 질병인 연쇄구균증과 에드워드병을 예방하기 위하여 연쇄구균증의 원인균인 S. iniae와 S. parauberis, 에드워드병 원인균인 E. tarda의 혼합농도별 효능 및 안전성을 조사하였다.
제안 방법
- 3종 혼합백신 적정 혼합농도를 조사하기 위하여 [Table 1]과 같은 농도로 혼합한 후 어체 당 0.1mL씩 복강주사하였다([Table 1]).
- Rotary형 microtome (Richert-Jung820, Leica)으로 4∼5 ㎛ 두께의 박편을 제작하여 Harris' hematoxyline-eosin(HE) 염색하여 광학현미경(BX50F4, Olympus)하에서 관찰하였다.
- 3%가 되도록 첨가하여 shaking incubator (Vision, Korea)에서 150rpm으로 회전시키면서 30℃에서 24시간동안 불활화하였다. 배양균의 불활화를 BHIA 배지에서 최종확인한 후 12,000rpm으로 원심분리하여 균체를 수거하고 혼합농도별 효능을 조사하였다.
- 백신 접종 4주째 예비실험에서 조사된 LD50 농도로 복강주사 후 상대생존율을 조사하였다. 즉 S.
- 백신 접종 후 1, 2, 3, 4주째 시험어의 미부정맥에서 채혈하여 혈청을 분리하였으며, 응집 항체가는 마이크로타이터(microtiter)법으로 조사하였다. 즉, 96 well microplate well (Corning, USA)에서 넙치로부터 분리한 혈청을 멸균생리식염수로 단계 희석한 후 시험 백신을 항원으로 사용하여 동량씩 반응시킨 후 24시간 후 응집괴 형성 유무를 관찰하였다.
- 백신 처리 1주일째부터 4주째까지 매주 시험 구의 간장, 신장, 심장 및 아가미 조직을 10% 중성 포르말린에 고정 후 상법에 따라 H&E염색을 실시 후 검경하였다.
- 백신 처리에 따른 병리조직학적 검사를 위하여 백신 처리 1, 2, 3 및 4주째에 각 장기에 대한 육안 검사를 실시하고 병리조직학적 검사에 필요한 장기를 적출하였다. Bouin's solution에 전고정하고 24 시간 후 각 장기를 세절한 다음 동일 고정액에 후고정하였다.
- 백신 처리의 안전성 조사를 위하여, 백신처리구 및 대조구의 병리조직학적 검사를 실시하였다. 백신 처리 1주일째부터 4주째까지 매주 시험 구의 간장, 신장, 심장 및 아가미 조직을 10% 중성 포르말린에 고정 후 상법에 따라 H&E염색을 실시 후 검경하였다.
- 백신접종이 시험어의 혈액성상에 미치는 영향을 조사하기 위하여 Glucose, AST (aspatateaminotransferase), Total protein 및 Total cholesterol의 농도는 자동혈액분석기(Fuji DriChem 3500i,Fuji Film, Japan)를 이용하여 측정하였다.
- 백신처리 후 1주부터 4주째까지 백신처리구 및 대조구의 혈구를 대상으로 SOD Assay kit-WST(Dojindo, Japan)을 이용하여 SOD 활성을 측정하여 상법에 따라 units/mL로 나타내었다.
- 즉 S. iniae는 1.49 × 104cfu/fish, S. parauberis는 1.20× 106cfu/fish, E. tarda는 3.9 × 105cfu/fish가 되도록 복강주사법으로 인위 감염 후 매일 육안으로 관찰한 후 폐사어에 대해서는 세균 배양하여 원인균을 동정하였다.
- 백신 접종 후 1, 2, 3, 4주째 시험어의 미부정맥에서 채혈하여 혈청을 분리하였으며, 응집 항체가는 마이크로타이터(microtiter)법으로 조사하였다. 즉, 96 well microplate well (Corning, USA)에서 넙치로부터 분리한 혈청을 멸균생리식염수로 단계 희석한 후 시험 백신을 항원으로 사용하여 동량씩 반응시킨 후 24시간 후 응집괴 형성 유무를 관찰하였다.
- 즉, Micrococcus lysodeikticus 0.2 mg/mL 현탁액 (pH 6.2) 950 ㎕와 혈청 50 μL를 혼합하여 25℃, 30초 및 4분 30초간 반응시킨 후 530 nm에서 흡광도를 측정하였다.
대상 데이터
- 넙치 병어에서 분리되어 병리연구과 균주은행에서 보관중인 E. tarda FP2018, S. iniae FP5024와 S. parauberis FPA 4164를 사용하였다.
- 시험어는 S. iniae 및 S. parauberis에 대한 항체가가 나타나지 않는 건강한 넙치(41.8±3.7g)를 선정하여 시험구당 25마리씩 수용하여 실험에 사용하였다.
- 7g)를 선정하여 시험구당 25마리씩 수용하여 실험에 사용하였다. 시험용 수조는 300L FRP 수조를 사용하였으며, 실험 종료 시까지 유수식으로 관리하였다.
- 포항 소재 넙치 양어장에서 구입한 넙치(체중 16.02±2.18 g, 전장 14.20±2.02 cm)를 1 ton 용량의 유수식 사육조에 2주간 순치시킨 후 300L 수조에서 수행하였으며, 수온은 24.2±0.9℃를 유지하였다.
데이터처리
- 결과의 통계 처리는 ANOVA-test를 실시하여 Duncan's multiple range test (Duncan, 1955)로 평균간의 유의성을 SPSS Version 10 (SPSS, Michigan Avenue, Chicago, IL, USA, 1997) program을 사용하여 95 %수준에서 검정하였다.
이론/모형
- 라이소자임 활성은 turbidimetric method를 이용하여 측정하였다. 즉, Micrococcus lysodeikticus 0.
성능/효과
- 넙치는 우리나라 양식어류 생산량의 50% 이상을 차지하는 품종이지만 질병에 의한 피해는 지속되고 있다. 2006년도에서 2008년도까지 양식넙치의 세균 검출률은 Streptococcus균과 Edwardsiella균이 각각 19%와 18%의 검출률로 높은 감염율을 나타내었다. 월별 세균 검출률 비교 결과, Edwardsiella균과 Streptococcus균은 고수온기에 검출률이 높은 것으로 나타나, 고수온기 넙치의 면역력 저하와 함께 질병 발현의 가능성을 높이고 있는 것으로 사료된다(Cho et al.
- 5%로 동일하게 나타났다. E. tarda에 대한 백신접종구의 상대생존율은 A 시험구가 77.8%로 가장 높게 나타났다. 따라서 S.
- E. tarda에 대한 응집항체가는 모든 백신처리구에서 백신처리 2주째부터 응집항체가의 증가가 나타나 조사 4주째까지 증가가 지속되었다. 백신농도구 간에 큰 차이는 보이지 않았으나 백신 처리 4주째 A 시험구와 C 시험구가 다소 높게 나타났으나 투여되는 백신량을 고려해볼 때 A 시험구가 가장 효과적인 것으로 판단되었다([Fig.
- S. iniae에 대한 백신접종구의 상대생존율은 A시험구가 75%로 가장 높게 나타났으며, S. parauberis에 대해서는 모든 백신시험구의 상대생존율이 62.5%로 동일하게 나타났다. E.
- S. parauberis에 대한 응집항체가는 S. iniae와유사한 경향으로 백신 처리 2주째에는 시험구중에서 A 시험구에서만 약간의 항체가가 나타났으며, 백신 처리 4주째 A 시험구에서 가장 높은 항체가를 나타내어 A 시험구가 가장 효과적인 것으로 판단되었다([Fig. 2]).
- SOD 활성은 시험구와 대조구간에 큰 차이는 보이지 않았지만, 모든 백신처리구가 대조구에 비하여 높은 활성을 나타내었다([Fig 4])
- 백신 처리 1주일째부터 4주째까지 매주 시험 구의 간장, 신장, 심장 및 아가미 조직을 10% 중성 포르말린에 고정 후 상법에 따라 H&E염색을 실시 후 검경하였다. 그 결과, 백신 처리구의 모든 장기에서 정상적인 조직 소견이 관찰되어 백신의 독성이 없음을 확인하였다([Fig. 5]).
- 8%로 가장 높게 나타났다. 따라서 S. iniae, S. parauberis및 E. tarda 모두에 대한 방어능은 A 시험구가 가장 효과적인 것으로 나타났다([Table 2]).
- 백신 처리 후 S. iniae에 대한 응집항체가는 A시험구에서 백신 처리 2주째부터 응집항체가의증가가 나타났으나 그 외의 시험구는 백신 처리 3주째부터 증가가 나타났다. 백신 처리 4주째에는 시험구중에서 A 시험구가 가장 높은 항체가를 나타내어 1mg(Si)+1mg(Sp)+1mg(Et)/fish의 농도구가 가장 효과적인 것으로 판단되었다([Fig.
- 백신구와 대조구를 비교하였을 때 모든 백신구는 대조구에 비하여 유의적인 차이는 보이지 않았으나(p>0.05) 높은 경향을 나타내어 백신 처리는 넙치의 라이소자임 활성을 높이는 것으로 판단되었다([Table 3])
- tarda에 대한 응집항체가는 모든 백신처리구에서 백신처리 2주째부터 응집항체가의 증가가 나타나 조사 4주째까지 증가가 지속되었다. 백신농도구 간에 큰 차이는 보이지 않았으나 백신 처리 4주째 A 시험구와 C 시험구가 다소 높게 나타났으나 투여되는 백신량을 고려해볼 때 A 시험구가 가장 효과적인 것으로 판단되었다([Fig. 3])
- 본 연구에서 glucose 농도가 백신 처리구와 대조구간에 유의적인 차이를 보이지 않아 백신 처리가 넙치에 스트레스로 작용하지 않는 것으로 판단되었다(p>0.05, [Table 4]).
- 본 연구에서 백신처리 후 AST 농도에서 유의적인 차이가 보이지 않아 본 연구에서 사용된 3 종류의 백신은 넙치의 간장에 영향을 미치지 않는 것으로 판단된다(p>0.05, [Table 4]).
- 본 연구에서 실험구 사이에 유의적인 차이가 보이지 않아 백신에 의해 total protein 농도는 영향을 받지 않는 것으로 나타났다(p>0.05, [Table 4]).
- 본 연구에서는 백신 처리 1주째 A 시험구가 다른 실험구에 비하여 비교적 높은 활성을 나타내었다. 백신구와 대조구를 비교하였을 때 모든 백신구는 대조구에 비하여 유의적인 차이는 보이지 않았으나(p>0.
후속연구
- 본 연구에서 넙치의 주요 세균성 질병인 에드워드병과 연쇄구균증의 원인균인 E. tarda, S. iniae및 S. parauberis의 혼합백신을 1mg 씩 혼합하였을 때 혈액생화학적 성상 및 조직병리학적으로 넙치에서 안전성이 확인되었으며, 높은 면역능 및 방어능을 나타내어 양식현장에서 질병예방에 크게 기여할 것으로 기대된다
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.