This study was carried out to establish the system of OPU derived embryo production, management of recipients as well as offspring production. OPU derived embryo production system was carried out of aspiration of immature oocytes 2 times per week, total 24 times for 3 months by an ultrasonographic g...
This study was carried out to establish the system of OPU derived embryo production, management of recipients as well as offspring production. OPU derived embryo production system was carried out of aspiration of immature oocytes 2 times per week, total 24 times for 3 months by an ultrasonographic guided follicular aspiration system and then produced in vitro-produced blastocysts by in vitro maturation, fertilization and culture system. This work was collected total 13,866 oocytes, average $8.2{\pm}4.5$ oocytes per session and 8,170 G1 + G2 grade oocytes, average 4.8 oocytes per session by 1,692 times session of total 71 donors for 4 years from 2010 to 2013. The rate of cleavage and blastocyst developmental competence were obtained 11,825 (85.3%) and 5,032 (36.3%) that was $7.0{\pm}3.8$ cleaved embryos and $3.0{\pm}2.5$ blastocysts per session. OPU derived embryo transfer were taken place in 2, 4, 6 and 7 local governments at 2010, 2011, 2012 and 2013 for 4 years and pregnancy rate were obtained 41.2, 43.9, 46.5 and 49.7% in each years. It means that pregnancy rate was continuously improved according of every year for 4 years. Pregnancy rate was significantly different according to individual local government in which was 62.7% in B, but 24.2% in F at 2012. Paternity identification was carried out total 26 offspring in C local government of 2012 and then confirmed 100% agreement of its analysis. In conclusion, the results obtained the possibility of mass production of elite cow embryos as well as offspring by OPU derived embryo production system, of which could be decreased the required time of genetic improvement.
This study was carried out to establish the system of OPU derived embryo production, management of recipients as well as offspring production. OPU derived embryo production system was carried out of aspiration of immature oocytes 2 times per week, total 24 times for 3 months by an ultrasonographic guided follicular aspiration system and then produced in vitro-produced blastocysts by in vitro maturation, fertilization and culture system. This work was collected total 13,866 oocytes, average $8.2{\pm}4.5$ oocytes per session and 8,170 G1 + G2 grade oocytes, average 4.8 oocytes per session by 1,692 times session of total 71 donors for 4 years from 2010 to 2013. The rate of cleavage and blastocyst developmental competence were obtained 11,825 (85.3%) and 5,032 (36.3%) that was $7.0{\pm}3.8$ cleaved embryos and $3.0{\pm}2.5$ blastocysts per session. OPU derived embryo transfer were taken place in 2, 4, 6 and 7 local governments at 2010, 2011, 2012 and 2013 for 4 years and pregnancy rate were obtained 41.2, 43.9, 46.5 and 49.7% in each years. It means that pregnancy rate was continuously improved according of every year for 4 years. Pregnancy rate was significantly different according to individual local government in which was 62.7% in B, but 24.2% in F at 2012. Paternity identification was carried out total 26 offspring in C local government of 2012 and then confirmed 100% agreement of its analysis. In conclusion, the results obtained the possibility of mass production of elite cow embryos as well as offspring by OPU derived embryo production system, of which could be decreased the required time of genetic improvement.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 OPU 유래 수정란 생산으로 우수한 후대의 대량 생산 가능성을 확인하고자 수년간 실시한 연구 결과를 분석하여 산업화 가능성을 확인해 보고자 한다.
제안 방법
후)이식하여">이식하여 송아지 26두가 생산되었다. C지역은 각 년도에 생산된 송아지 전두수 친자 검정을 실시하는 지역으로써 수정란 생산에 사용된 종모우의 정자(KPN-768), 난자를 제공한 공란우와 생산된 송아지의 모근을 채취하였고, 경상대학교 학교기업(GAST) 유전자분석연구소에 13개의 MS markers(BM1824, BM2113, ETH10, ETH225, ETH3, INRA23, SPS115, TGLA122, TGLA126, TGLA227, TGLA53, COW_ch_X, COW_Y) 를 이용하여 친자 검정을 실시하였다(Table 5).
Pellet 정자는 20 µg/ml Heparin을 넣어 배양기에서 15분간 수정능 획득을 유도하였고, 최종 농도가 1 × 106 sperms/ml로 5% CO2, 99% 습도, 38.5℃ CO2 배양기에서 24시간 동안 체외 수정을 유도하였다.
한우 공란우는 2010년부터 2013년까지 연도별 각 지역에서 선발된 공란우를 활용하였다. 공란우의 선발 조건은 3계대 이상 혈통 등록, 즉 외조모와 외조부가 등록된 개체, 한국종축개량협회 및 지역축협에 등록된 후대 및 친형매의 도체 성적에서 A1++을 받아본 경험이 있는 개체, 외모 심사 및 초음파 진단에 의한 육질 검사를 통해 유전적 형질이 우수한 개체, 직장 검사에 의한 생식 기관의 상태와 비만도(BSC : body score condition) 점검, 질병 감염 검사를 실시하여 공란우를 선발하였다. 각 년도 별로 6두에서 35두까지 총 71두를 최종 선발하여 본 연구에 활용하였다.
난소는 직장을 통해서 상태, 위치 등의 확인 및 견인하여 질 내에 있는 탐촉자 선단부에 밀착시켜 초음파의 Monitor 화면으로 검은 흑점으로 나타나는 난포의 상태가 뚜렷하게 보이도록 조정하여 난포의 개수를 확인하였으며, 채란 가능한 난포를 Monitor 상의 Biopsy Line이 난포를 횡 절단할 수 있도록 위치시켜 난포 외벽선이 뚜렷하도록 난소를 조작하였다. 일회용 주사침으로 Monitor Image의 난소에서 확인된 2∼6 mm 크기의 난포를
후)흡인 관">흡인관 내를 충전하여 채취하였다. 또한 공란우는 개조된 보정틀을 이용하여 움직임을 최소화하였으며, 채란의 원활한 진행을 위해 직장 내의 분변 제거와 미부를 고정하고, 흐르는 물을 이용하여 외음부의 오물을 세척한 다음, 20% 희석된 Povidone Iodine 및 70% alcohol로 외음부를 소독하였다. 복부 및 질벽의 긴장을 완화시키기 위해서 7 mg Xylazine HCl(Rompun, ㈜바이엘)과 2% Lidocaine(㈜대한)을
발정 동기화는 이식 일정에 따라 GnRH(0일, Gonadotropin releasing hormone, Gonadon, ㈜동방) → PGF2α(7일, Lutalyse, ㈜동방) → GnRH(9일, Gonadon, ㈜동방) → 발정 관찰(10일) → ET(17일) 의 방법으로 발정 및 수정란의 발달 단계와 동기화를 유도하여 동기화된 개체만을 대리모로 활용하였다.
복부 및 질벽의 긴장을 완화시키기 위해서 7 mg Xylazine HCl(Rompun, ㈜바이엘)과 2% Lidocaine(㈜대한)을 두당 0.3 ml와 3∼4 ml를 정맥 및 미추 1번과 2번 사이에 투여하였다.
생체 내 미성숙 난자 채란을 위한 난포의 확인은 MyLabTM30- VETGOLD(Esaote, Genova, Italy), 6.6 MHz convex scanner 탐 촉자(EC123; Micro-Convex 9∼3 MHz, Esaote, Genova, Italy), 미성숙 난자 흡인에는 일회용 주사침(18 G)을 사용하여 10 IU/ml Heparin이 첨가된 기본 배양액(HEPES + 10 IU Heparin)으로 주사침 및 실리콘 흡인관 내를 충전하여 채취하였다.
성숙 배양액(TCM-199)에 10%(vol/vol) fetal bovine serum (FBS, Gibco), 호르몬(10 μg/ml FSH, 1 μg/ml Estradiol-17β) 과 항생제 (100 U/ml penicillin, 100 µg/ml streptomycin)를 첨가하여 18시간 이상 전배양을 실시하여 평형을 유도하였다.
이러한 생산 효율은 고능력우 1두를 이용해 약 3개월 동안에 약 70∼80여 개의 수정란을 생산하여 이를 대리모에 이식할 수 있는 생산 체계를 구축하였다.
이때 진공 압력은 60∼70 mmHg(10∼15 ml/min) 음압을 유지하였다. 이와 같은 방법으로 연속하여 난포란을 흡입하며, 모니터 상에서 난포가 완전히 흡입되는 것을 확인하고, needle을 다음 난소로 이동시켜 반복적인 방법으로 채란하였다. 흡입된 난포란은 실체현미경으로 난자를 회수하였고, 난포란의
일회용 주사침으로 Monitor Image의 난소에서 확인된 2∼6 mm 크기의 난포를 흡입하였다(Fig. 1).
후)전 배양을">전배양을 실시하여 평형을 유도하였다. 채취된 난자는 99% 습도, 38℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양 후 체외 수정에 공시하였다.
체외 수정 18∼22시간 후에 3 mg/ml BSA가 첨가된 CR1aa 배양액으로 2∼3회 세척한 후, 3일간 체외 배양을 실시하여 분할이 일어난 수정란만을 선발하여 10% FBS가 첨가된 CR1aa 배양액으로 2차 체외 배양을 3일간 한후 배반포를 생산하였다.
후)체외수정">체외 수정 배양액에 6 mg/ml BSA를 첨가하며, 항생제(100 IU/ml penicillin, 0.1 mg/ml streptomycin)을 첨가한 배양액을 5 ml 분주하고, 배양기에서 18시간 전 배양을 실시하여 평형을 유도하였다.
후)체외수정을">체외 수정을 위한 정액 선정은 본 연구에 공시된 사단법인 한국종축개량협회 및 농촌진흥청 국립축산과학원 등에서 제공된 근친 여부 조회 및 한우 교배 계획 길라잡이 프로그램을 이용하여 공란우와 근친 여부, 혈통을 통한 자손의 능력 예측치 등을 분석하여 선정하였다.
최종 선발된 공란우에서 3∼4개월 동안 매주 2회 OPU 방법으로 미성숙 난자를 채란하여 체외 수정으로 이식 가능한 수정란을 생산하고, 수란우에 이식 후 송아지를 생산하였다.
호르몬에 의해 발정 동기화된 수란우는 정상적인 발정 증상이 보이는 개체를 관찰하고, 이식 시술은 수정란 이식 전일 또는 이식 당일, 즉 발정 6∼7일째에 직장 검사를 통하여 자궁 및 난소의 상태 확인, 황체의 유무 및 크기 (15∼25 mm)와 형태를 확인하고, 이식 가능한 수란우에 최소의 자궁 자극으로 자궁경관 경유법으로 실시하였다.
흡입된 난포란은 실체현미경으로 난자를 회수하였고, 난포란의 등급 분류는 세포질색의 분포도와 난구 세포 부착 정도에 따라 평가 기준을 Grade I∼IV까지 설정하여 분류하였으며, 회수된 모든 난자를 체외 성숙에 제공하였다.
대상 데이터
2012년 C지역의 공란우 2두를 이용하여 2012년 10월부터 2012년 12월까지 수정란을 생산하고, 53두의 수란우에 이식하여 송아지 26두가 생산되었다. C지역은 각 년도에 생산된 송아지 전두수
후)생식기관의">생식 기관의 상태와 비만도(BSC : body score condition) 점검, 질병 감염 검사를 실시하여 공란우를 선발하였다. 각 년도 별로 6두에서 35두까지 총 71두를 최종 선발하여 본 연구에 활용하였다. 살아있는 공란우의 체내에서 초음파 기구를 이용한 난자 채취는 2010년부터 2013년까지
대리모 선발 대상 농가의 사육규모, 환경 및 조사료 위주의 사양 조건 등을 점검하여 수란우가 정상적인 발정주기를 반복하는 개체, 건강하며 내병성이 있고 임신 장애의 질환이 없는 개체, 포유 능력이 우수한 개체로써 BCS가 2.5∼3.5이면서 수정 기록이 없는 개체를 대리모로 선발하였다.
후)수정란이식은">수정란 이식은 각 지역 및 연도별 3개월에서 4개월 단위로 수정란을 생산하여 2010년부터 2013년까지 실시하여 총 2,156두에 이식하였다. 호르몬에 의해
한우 공란우는 2010년부터 2013년까지 연도별 각 지역에서 선발된 공란우를 활용하였다. 공란우의 선발 조건은
데이터처리
본 실험에서 얻어진 결과들의 값은 Mean ± SD으로 표시하였고, 그룹 간의 통계학적 분석은 SPSS package(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하였으며, 유의 수준 5%에서 검증하였다.
회수된 난자의 등급, OPU 채란당 회수된 난자 수, 난자 등급, 연도별, 지역별 임신율, 생산된 산자의 성비 등은 t-test 를 이용하여 유의성을 분석하였다(p<0.05).
성능/효과
2010, 2011, 2012 및 2013년에 공란우 6, 8, 22 및 35두에서 106, 249, 607 및 730회 채란으로 회수된 난자는 800, 1,891, 5,827 및 5,348개, 총 13,866개를 회수하여 연도별 55.4, 47.7, 54.6 및 44.5%, 전체 평균 49.4%의 회수율을 보였고, 채란 회수당 7.5 ± 4.2, 7.6 ± 4.5, 9.6 ± 4.9 및 7.3± 3.7개가 회수되어 총 평균 8.2 ± 4.5개를 회수하였다.
2010년에서 2013년까지 분할율은 94.1, 87.6, 87.0 및 81.2%로 평균 85.3%, 2010년 공란우 6두에서 320개, 2011년 8두에서 560개, 2012년 22두에서 1,961개 및 2013년 35두에서 2,191개로서 총 71두의 공란우에서 1,692회 채란으로 평균 3.0개, 총 5,032개, 3∼4개월 동안 두당 평균 75.0개의 이식 가능한 수정란을 생산하였고, 총 회수 난자로부터 배반포 발달율은 평균 36.3%였다.
후)판단된다(Scheider등,">판단된다(Scheider 등, 1980). 따라서 OPU 방법으로 적은 두수의 공란우로부터 대량의 수정란 생산이 가능하고, 이들 수정란을 이식하여 대량의 자손이 단기간에 확보가 가능하므로 가축 개량에 적합한 수정란 생산 방법인 것으로 판단된다.
3%였다. 또한 G1 + G2 등급의 난자 수로부터는 61.6%의 배발달율을 보여 수정란의 질적 수준이 높은 것으로 판단된다. 이는 도축장
후)20∼30% 발달율과">20∼30% 발달율과 비교해서 월등히 높은 발달율을 보이고 있는데, 난자의 질적 수준이 높은 것을 의미하고, 체내에서 채란된 난자를 직접 활용함으로써 난자의 질적 저하를 방지할 수 있는 것으로 판단된다. 또한, 1회/두당 채란 시 이식 가능한 수정란의 생산은 평균 3.0개로 주2회/4주/3개월로 계산하면, 약 75.0여개의 이식 가능한 수정란을 생산할 수 있을 것이다. 이러한 생산 효율은
후)친자감별의">친자 감별의 한계점 등을 가지고 있다. 또한, 축산물품질평가원 축산유통종합정보센터 2013년도 한우에서 도축 출하 성적의 통계 자료(암소, 수소 및 거세우)에서 1++A(2.7%), 1++B(4.0%), 1++C(2.5%) 등급에서 총 1++는 9.2%의 성적을 보였고, 공란우의 유전적 가치를 보유한 우수한 암소는 16,486두로 전체 도축두수 대비 1.7%로서, 도축 공란우의 난소를 이용한 수정란 생산용으로 활용하는 것은 한계가 있다. 또한 과배란 처리 방법은 공란우와 종빈우의 유전적 가치를 동시에 활용함으로써 개량 효과는 매우 크지만, 생산할 수 있는 수정란의 수가 호르몬 처리 후 일정한
8%의 수태율을 보였다. 본 연구의 OPU 방법에 의해 생산된 수정란으로 연도별(2010, 2011, 2012 및 2013년) 이식한 결과, 평균 임신율은 41.2, 43.9, 46.5 및 49.7%로서 4년 동안 2,156두의 수란우에 1,027두가 임신 되어 평균 47.6%의 수태율을 보였다. 2010년 A 및 B지역에서 수태율이 52.
후)난자채란이">난자 채란이 가능한 것으로 사료된다. 이러한 보고는 본 연구에서 G1, G2등급 난자가 회수된 비율이 2010년에서 2013년 현재까지 77.8, 62.3, 68.3 및 44.7%, 전체 평균은 58.9%로 난자의 품질이 우수한 것으로 판단된다. 또한, 1회 채란으로
2012년도 C지역 공란우 2두를 이용하여 OPU 방법으로 생산된 수정란을 대리모 53두에 이식한 결과는 Table 4와 같다. 총 26두가 임신되어 평균 49.1%의 수태율을 보였고, 이들 모두가 분만하였다. 분만된 암송아지 및 수송아지 각각 13두가 태어나, 탄생된
후속연구
후)생산기반의">생산 기반의
총체적 난관에 봉착되고 있다. 따라서 축산업에서 수입 쇠고기에 대한 경쟁력 확보 및 낙농 분야에서는 원유 생산비 절감이 유일한 대안으로 각 품종의 경제 형질에 따라 유전적 가치가 우수한 고능력우를 이용하여 집중 개량으로 고급육과 고급원유를 대량 생산하여 경쟁력을 확보할 수 있을 것이다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
인공수정의 시간적 한계를 극복하기 위한 방법은 무엇이 있는가?
그러나 인공수정은 선발된 우수한 웅성의 유전 능력을 이용한 개량 기술로서 개량을 완성하는데 최소 5세대 이상, 즉 최소 15∼20년 이상이 소요되어 개량 속도가 상대적으로 느리다는 것과 수컷의 유전 능력만을 이용함으로써 개량의 효율적인 측면에서 한계점을 가지고 있다. 시간적 한계를 극복하기 위하여 웅성과 자성의 유전자원을 동시에 활용하는 수정란 이식 방법으로서 도축 난소의 난자를 이용하는 체외 수정란 생산 방법과 호르몬 처리에 의한 과배란 처리에 의한 체내 수정란 생산 방법(Seidel, 1981; 손 등, 2000; Andrade 등, 2003, 송 등, 2012)을 보고하였다. 도축 난소 유래 수정란 생산 방법은 개량 효율 한계, 근친 위험성, 친자 감별의 한계점 등을 가지고 있다.
도축 난소 유래 수정란 생산 방법의 한계점은 무엇인가?
시간적 한계를 극복하기 위하여 웅성과 자성의 유전자원을 동시에 활용하는 수정란 이식 방법으로서 도축 난소의 난자를 이용하는 체외 수정란 생산 방법과 호르몬 처리에 의한 과배란 처리에 의한 체내 수정란 생산 방법(Seidel, 1981; 손 등, 2000; Andrade 등, 2003, 송 등, 2012)을 보고하였다. 도축 난소 유래 수정란 생산 방법은 개량 효율 한계, 근친 위험성, 친자 감별의 한계점 등을 가지고 있다. 또한, 축산물품질평가원 축산유통종합정보센터 2013년도 한우에서 도축 출하 성적의 통계 자료(암소, 수소 및 거세우)에서 1++A(2.
가축의 개량에 크게 기여한 인공수정이 갖는 제한점은 무엇인가?
현재까지 가축의 개량에 기여한 기술은 인공수정 기술이 가장 크게 기여하였다. 그러나 인공수정은 선발된 우수한 웅성의 유전 능력을 이용한 개량 기술로서 개량을 완성하는데 최소 5세대 이상, 즉 최소 15∼20년 이상이 소요되어 개량 속도가 상대적으로 느리다는 것과 수컷의 유전 능력만을 이용함으로써 개량의 효율적인 측면에서 한계점을 가지고 있다. 시간적 한계를 극복하기 위하여 웅성과 자성의 유전자원을 동시에 활용하는 수정란 이식 방법으로서 도축 난소의 난자를 이용하는 체외 수정란 생산 방법과 호르몬 처리에 의한 과배란 처리에 의한 체내 수정란 생산 방법(Seidel, 1981; 손 등, 2000; Andrade 등, 2003, 송 등, 2012)을 보고하였다.
참고문헌 (33)
Abe H, Shiku H, Aoyagi S and Hoshi H. 2004. In vitro culture and evaluation of embryos for production of high quality bovine embryos. J. Mamm. Ova. Res. 21:22-30.
Andrade JC, Oliveira MA, Lima PF, Guido SI, Bartolomeu CC, Tenorio Filho F, Pina VM, Iunes-Souza TC, Pauld NR and Freitas JC. 2003. The use of steroid hormones in superovulation of Neiore donors at different stages of estrous cycle. Anim. Reprod. Sci. 77:117-125.
Chaubal SA, Molina JA, Ohlrichs CL, Ferre LB, Faber DC, Bols PEJ, Riesen JW and Tian X. 2006. Comparison of different transvaginal ovum pick-up protocols to optimise oocyte retrieval and embryo production over a 10-week period in cows. Theriogenology 65:1631-1648.
Deb GK, Jin JI, Kwon TH, Choi BH, Bang JI, Dey SR, Cho IR and Kong IK. 2011. Improved blastocyst development of single cow OPU-derived presumptive zygotes by group culture with agarose-embedded helper embryos. Biol. Reprod. 9:1-12.
Di Francesco S, Novoa MVS, Vecchio D, Neglia G, Boccia L, Campanile G, Zicarelli L and Gasparrini B. 2012. Ovum pick-up and embryo production (OPU-IVEP) in Mediterranean Italian buffalo performed in different seasons. Theriogenology 77:148-154.
Garcia A and Salaheddine M. 1998. Effects of repeated ultrasound- guided transvaginal follicular aspiration on bovine oocyte recovery and subsequent follicular development. Theriogenology 50:575-585.
Hasler JF, McCauley AD, Lathrop WF and Foote RH. 1987. Effect of donor-embryo-recipient interactions on pregnancy rate in a large-scale bovine embryo transfer program. Theriogenology 27:139-168.
Hasler JF, Henderson WB, Hurtgen PJ, McCauley AD, Hower SA, Shuey LS, Stokes JE and Trimmer SA. 1995. Production, freezing and transfer of bovine IVF embryos and subsequent calving results. Theriogenology 43:141-159.
Jo HT, Bang JI, Kim SS, Choi BH, Jin JI, Kim HL, Jung IS, Suh TK, Ghanem N, Wang Z and Kong IK. 2013. Production of female bovine embryos with sex-sorted sperm using intracytoplasmic sperm injection: Efficiency and developmental competence. Theriogenology 81:675-682.
Kruip ThAM, Boni R, Roelofsen MWM, Wurth YA and Pieterse MC. 1994. Application of OPU for embryo production and breeding in cattle. Theriogenology 39:251 (Abstr.).
Merton JS, de Roos APW, Mullaart E, de Ruigh L, Kaal L, Vos PL and Dieleman SJ. 2003. Factors affecting oocyte quality and quantity in commercial application of embryo technologies in the cattle breeding industry. Theriogenology 59:651-674.
Looney CR, Lindsey BR, Gonseth CL and Johnson DL. 1994. Commercial aspects of oocyte retrieval and in vitro fertilization (IVF) for embryo production in problem cow. Theriogenology 41:67-72.
Lopez AS, Larsen LH, Ramsing N, Lovendahl P, Raty M, Peippo J, Greve T and Callesen H. 2005. Respiration rates of individual bovine in vitro-produced embryos measured with a novel, non-invasive and highly sensitive microsensor system. Reproduction 130:669-679.
Pieterse MC, Kappen KA, Kruip TM and Taverne MA. 1988. Aspiration of bovine oocytes during transvaginal ultrasound scanning of the ovaries. Theriogenology 30:751-762.
Presicce GA, Jiang, S, Simken M, Zhang L, Looney CR, Godke RA and Yang X. 1997. Age and hormonal dependence of acquisition of oocyte competence for embryogenesis in prepubertal calves. Biol. Reprod. 56:386-392.
Reinders JMC and Van Wagtendonk-de Leeuw AM. 1996. Improvement of a moet program by addition of in vitro production of embryos after ovum pick up from pregnant donor heifers. Theriogenology 45:354.
Sakagami N, Yamamoto T, Akiyama K, Nakazawa Y, Kojima N, Nishida K, Yokomizo S, Takagi Y, Abe H, Suzuki C and Yoshioka K. 2010. Viability of porcine embryos after vitrification using water-soluble pullulan films. J. Reprod. Dev. 56:279-284.
Sreenan JM and Diskin MG. 1989. Effect of a unilateral or bilateral twin embryo distribution on twinning and embryo survival rate in the cow. Biol. Reprod. 87:657-664.
김용준, 송재웅, 서세현, 장구남, 김용수, 이해리, 신동수, 조성우, 김수희. 2004. 한우 및 젖소에서 과배란 처리를 이용한 체내 수정란 생산과 신선 및 동결 수정란 이식 결과. 한국수정란이식학회지 19:209-218.
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