[논문]황련-감초 추출물을 이용한 하태독법이 NC/Nga 생쥐에서 유발된 아토피 유사 피부염에 미치는 항염증 효과

차호열; 안상현; 정아람; 천진홍; 박선영; 최준용; 김기봉

황련-감초 추출물을 이용한 하태독법이 NC/Nga 생쥐에서 유발된 아토피 유사 피부염에 미치는 항염증 효과
Anti-inflammatory Effects of Hataedock Extracted from Coptidis Rhizoma and Glycyrrhiza Uralensis on Atopic Dermatitis-like Skin Lesions of NC/Nga Mouse 원문보기

대한한방내과학회지 = The journal of internal Korean medicine, v.36 no.4, 2015년, pp.486 - 497

차호열 (부산대학교 한방병원 한방소아과) , 안상현 (부산대학교 한의과학연구소) , 정아람 (부산대학교 한방병원 한방소아과) , 천진홍 (부산대학교 한방병원 한방소아과) , 박선영 (세명대학교 한의과대학 생리학교실) , 최준용 (부산대학교 한방병원 한방내과) , 김기봉 (부산대학교 한방병원 한방소아과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives Hataedock is an orally administered herbal extract treatment for newborn babies that dispels toxic heat and meconium gathered by the fetus. The purpose of this study was to evaluate whether Hataedock alleviates inflammatory skin damage in AD (Atopic Dermatitis)-induced NC/Nga mice through regulating and maintaining the skin barrier and anti-inflammation effects.Methods We established an AD model in three-week-old NC/Nga mice through the repeated application of DNFB (dinitrochlorobenzene) on days 28, 35, and 42 after Hataedock treatment was orally administered. We identified changes in the skin barrier and anti-inflammation effects through the histological and immunohistochemical changes of TNF- α, NF-κB p65, iNOS, COX-2, and apoptotic bodies.Results Skin damage and angiogenesis were mitigated in the HT (Hataedock) group. Damage to the intercellular space of the stratum corneum as well as hyperplasia, edema, the infiltration of lymphocytes, and the increase of capillaries decreased in the HT group. Our results suggest that Hataedock treatment significantly down-regulated levels of TNF- α by 38% (p<0.001) and of NF-κB p65 by 70% (p<0.001). But Hataedock up-regulated apoptosis by 183% in dermatitis-induced skin.Conclusions These results suggest that Hataedock alleviates AD through diminishing the various inflammatory cytokines in skin lesions that are involved in the initial steps of AD development. It might have potential applications for the prevention and treatment of atopic dermatitis.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

본 연구는 황련-감초 추출물을 이용한 하태독법이 NC/Nga 생쥐에서 유발된 아토피 유사 피부염에 미치는 항염증 효과의 확인을 통해 하태독법의 효능을 평가하고자 하였다. 기존 연구들은 아토피 유사 피부염을 먼저 유발시킨 후 실험약물 혹은 외용약물의 투약을 통하여 아토피 유사 피부염의 경감 정도를 파악하였다.
본 연구는 피부 국소부위에 반복 처리하면 면역세포 침윤을 통한 다양한 pro-inflammatory cytokines이나 mediators 즉, histamine, tumor necrosis factor(TNF)-α, vascular endothelial growth factor(VEGF)를 분비한다고 보고된 DNFB11로 아토피 유사 피부염을 Ng/Nga 생쥐에 유발하는 동물모델을 적용하였다. 황련과 감초 복합추출물을 이용한 하태독법 실시 후 아토피 유사 피부염에서 일어난 전염증효소, 염증전사인자, 염증효소, 염증세포의 apoptosis 변화를 면역조직학적 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

중앙실험동물(한국)에서 분양받은 태령 3주된 13~15 g Nc/Nga 암컷 생쥐를 선별하여 사용하였다. 대조군(Ctrl군), 피부염유발군(DE군), 하태독 처리 후 피부염유발군(HT군)으로 나누었으며, 각 군에 각 10마리씩 배정하였다. 피부염 유발은 생쥐 등쪽 부위 피부를 면도한 다음 5% sodium dodeecyl sulfate(SDS : Sigma, USA) 1 ml을 면봉으로 20회 문질러서 각질층의 lipid lamella를 제거하였다.
본 연구는 피부 국소부위에 반복 처리하면 면역세포 침윤을 통한 다양한 pro-inflammatory cytokines이나 mediators 즉, histamine, tumor necrosis factor(TNF)-α, vascular endothelial growth factor(VEGF)를 분비한다고 보고된 DNFB11로 아토피 유사 피부염을 Ng/Nga 생쥐에 유발하는 동물모델을 적용하였다. 황련과 감초 복합추출물을 이용한 하태독법 실시 후 아토피 유사 피부염에서 일어난 전염증효소, 염증전사인자, 염증효소, 염증세포의 apoptosis 변화를 면역조직학적 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
하태독법의 항염증작용을 통한 아토피 유사 피부염의 조절효과를 조사하기 위해 행해진 본 연구는, 태령 3주에 하태독을 전처리한 Nc/Nga 생쥐에 DNFB를 이용하여 피부염을 유발한 후 피부의 면역조직학적 변화를 관찰하였다. 하태독법 전처리로 피부 손상(상피 세포 과형성, 과립백혈구와 림프구의 침윤 증가, 모세혈관 분포 증가)은 완화되었다.
5%) 획득했다. 획득된 황련-감초 혼합 추출물을 3주령 Nc/Nga 생쥐 HTD군에 경구투여하는 하태독법을 실시하였다(20 mg/kg).

대상 데이터

중앙실험동물(한국)에서 분양받은 태령 3주된 13~15 g Nc/Nga 암컷 생쥐를 선별하여 사용하였다. 대조군(Ctrl군), 피부염유발군(DE군), 하태독 처리 후 피부염유발군(HT군)으로 나누었으며, 각 군에 각 10마리씩 배정하였다.
하태독법의 성분분석을 사용한 표준성분은 Coptidis rhizoma의 Palmitine, Berberin과 Glycyrrhiza uralensis의 Liquiritigenin, Liquiritin을 사용하였다. 분석결과 Palmitine, Berberin, Liquiritigenin, Liquiritin 이 검출되었다(Fig.

이론/모형

Apoptosis 변화를 조사하기 위해 in situ apoptosis detection kit(Apoptag, Intergen, USA)를 이용한 TUNEL(terminal deoxynucleotid transferase-mediated dUTP-biotin nick-end labelling) 방법을 실시하였다. 먼저 조직 절편을 proteinase K에 5분간 proteolysis 시킨 다음 equilibration buffer에서 20초간 처리하였다.
알레르기 반응에서 주요하게 작용하는 비만세포는 calcium signaling이 제대로 조절되지 못하면, activation-induced cell death-associated apoptosis가 일어나서 세포가 사멸된다36. 앞에서 확인한 염증 매개 물질들의 발현이 감소한 원인이 염증성 세포들의 사멸에 의한 것인지 확인하고자 실험 동물의 피부 조직을 이용하여 TUNEL assay를 실시했다. DNFB에 의해 피부염이 유도된 군에서는 apoptotic cell이 거의 관찰되지 않았으나, 황련-감초 혼합물로 하태독법을 실시하고 피부염을 유발시킨 군에서는 무처치군에 비해 약 2배 많은 apoptotic cell이 관찰되었다(Fig.
한의학에서는 태아기동안 쌓인 태독(胎毒)이 출산시 제대로 처리되지 못하고 계속 남아 태열(胎熱)의 형태로 소화기증상과 피부증상으로 발병되며, 아토피 피부염도 이 범주에 속하는 질환으로 구분한다9. 출산 후 이러한 태독(胎毒)을 효과적으로 제거하는 방법으로 하태독법(下胎毒法)을 사용하였다. 하태독법(下胎毒法)의 종류는 감초법(甘草法), 황련법(黃連法), 주밀법(朱蜜法), 우황법(牛黃法), 두시법(豆豉法), 구즙법(韭汁法), 홍분법(汞粉法) 등이 있으며, 각각의 약재를 물에 달여 신생아에게 소량을 먹이는 방법이다10.

성능/효과

앞에서 확인한 염증 매개 물질들의 발현이 감소한 원인이 염증성 세포들의 사멸에 의한 것인지 확인하고자 실험 동물의 피부 조직을 이용하여 TUNEL assay를 실시했다. DNFB에 의해 피부염이 유도된 군에서는 apoptotic cell이 거의 관찰되지 않았으나, 황련-감초 혼합물로 하태독법을 실시하고 피부염을 유발시킨 군에서는 무처치군에 비해 약 2배 많은 apoptotic cell이 관찰되었다(Fig. 8).
면역조직화학적 결과, 하태독법을 실시한 군에서 TNF-α, NF-κB p65, iNOS, COX-2 양성반응이 피부염을 유도한 군보다 현저히 낮았다. TUNEL assay 결과, 피부염만 유발한 군보다 하태독법을 실시한 후 피부염을 유발한 군에서 apoptosis가 유의적으로 증가했다. 이상의 결과로 하태독법의 실시는 과도한 염증 반응을 매개하는 다양한 염증성 세포의 사멸을 유도함으로써 염증 매개 물질 분비가 감소되어 알레르기 및 염증 반응에 의한 피부 손상이 경감된 것으로 사료된다.
8). 따라서 황련-감초 혼합물을 이용한 하태독법은 염증성 세포의 사멸을 유도함으로써 염증 매개 물질의 분비와 전사인자의 발현을 감소시켜 피부염의 증상을 경감시키는 것으로 사료된다.
3(C)). 따라서 황련-감초 혼합물을 이용한 하태독법은 피부 각질층을 보호하고, 피부 진피층의 신생혈관 형성을 억제하며, 상피층에서의 세포 과형성 및 기저층에서의 면역세포 침윤 정도를 억제하여 항염증 효과를 나타내는 것으로 사료된다.
하태독법 전처리로 피부 손상(상피 세포 과형성, 과립백혈구와 림프구의 침윤 증가, 모세혈관 분포 증가)은 완화되었다. 면역조직화학적 결과, 하태독법을 실시한 군에서 TNF-α, NF-κB p65, iNOS, COX-2 양성반응이 피부염을 유도한 군보다 현저히 낮았다. TUNEL assay 결과, 피부염만 유발한 군보다 하태독법을 실시한 후 피부염을 유발한 군에서 apoptosis가 유의적으로 증가했다.
염증 반응을 매개하는 다양한 물질 중에서 VEGF는 신생혈관 형성 조절에 주요한 cytokine으로 알려져 있다32. 본 연구에서 DNFB로 피부염을 유발한 후 피부 진피층의 혈관 분포 정도를 살펴본 결과, 매우 많은 혈관이 형성되어 있었으나, 황련-감초 혼합물로 하태독법을 실시하고 피부염을 유발시킨 군에서는 혈관이 비교적 적게 형성되어 있었다(Fig. 3(B)).
TUNEL assay 결과, 피부염만 유발한 군보다 하태독법을 실시한 후 피부염을 유발한 군에서 apoptosis가 유의적으로 증가했다. 이상의 결과로 하태독법의 실시는 과도한 염증 반응을 매개하는 다양한 염증성 세포의 사멸을 유도함으로써 염증 매개 물질 분비가 감소되어 알레르기 및 염증 반응에 의한 피부 손상이 경감된 것으로 사료된다. 향후 후속연구를 통해 하태독법의 염증조절과 관련된 기전과 안정성 및 유효성의 검증이 필요할 것으로 생각된다.
하태독법의 항염증작용을 통한 아토피 유사 피부염의 조절효과를 조사하기 위해 행해진 본 연구는, 태령 3주에 하태독을 전처리한 Nc/Nga 생쥐에 DNFB를 이용하여 피부염을 유발한 후 피부의 면역조직학적 변화를 관찰하였다. 하태독법 전처리로 피부 손상(상피 세포 과형성, 과립백혈구와 림프구의 침윤 증가, 모세혈관 분포 증가)은 완화되었다. 면역조직화학적 결과, 하태독법을 실시한 군에서 TNF-α, NF-κB p65, iNOS, COX-2 양성반응이 피부염을 유도한 군보다 현저히 낮았다.

후속연구

이상의 결과로 하태독법의 실시는 과도한 염증 반응을 매개하는 다양한 염증성 세포의 사멸을 유도함으로써 염증 매개 물질 분비가 감소되어 알레르기 및 염증 반응에 의한 피부 손상이 경감된 것으로 사료된다. 향후 후속연구를 통해 하태독법의 염증조절과 관련된 기전과 안정성 및 유효성의 검증이 필요할 것으로 생각된다.

참고문헌 (36)

Suh SH. Prevalence of allergic diseases in Korean children, 2010. Health Dis 2011;4:425-31.
Donald YM, Thomas B. Atopic dermatitis. Lancet 2003;361(9352):151-60.

상세보기
Schneider L, Tilles S, Lio P, Boguniewicz M, Beck L, LeBovidge J, et al. Atopic dermatitis: a practice parameter update 2012. J Allergy Clin Immunol 2013;131(2):295-9.

상세보기
Imokawa G, Abe A, Jin K, Higaki Y, Kawashima M, Hidano A. Decreased level of ceramides in stratum corneum of atopic dermatitis: An etiologic factor in atopic dry skin? J Invest Dermatol 1991;96(4):523-6.

상세보기
Park MC, Choi IH. The Efficacy of Sihocheonggan-san (Chaihuqinggan-san) Extract to Improve the Function of Stratum Corneum on Mice Model after Atopic Dermatitis Elicitation. J Kor Oriental Med 2004;25(3):137-48.
Baeuerle PA, Baltimore D. NF-kappa B: ten years after. Cell 1996;87(1):13-20.

상세보기
Bruch-Gerharz D, Fehsel K, Suschek C, Michel G, Ruzicka T, Kolb-Bachofen V. A proinflammatory activity of interleukin 8 in human skin: expression of the inducible nitric oxide synthase in psoriatic lesions and cultured keratinocytes. J Exp Med 1996;184(5):2007-12.

상세보기
Bruch-Gerharz D, Ruzicka T, Kolb-Bachofen V. Nitric oxide and its implications in skin homeostasis and disease - a review. Arch Dermatol Res 1998;290(12):643-51.

상세보기
Im GM, Jeong HW, Kim HS, Jeong WY. Oriental Medical Approach on the Allergic Disease. Kor J Oriental Physiology & Pathology 2002;16(5):831-9.
Kang MY, Jang GT, Kim JH. A study on fetal toxicosis removal therapy. J Pediatr Korean Med 2003;17(1):29-51.
Hopkins JE, Naisbitt DJ, Kitteringham NR, Dearman RJ, Kimber I, Park BK. Selective haptenation of cellular or extracellular protein by chemical allergens: association with cytokine polarization. Chem Res Toxicol 2005;18(2):375-81.

상세보기
Kim JW. Atopic dermatitis form allergy and immunological perspective. Kor J dermatology 2003;41(6):687-9.
Park YM. Advances In the Pathophysiology of Atopic Dermatitis. Allergy Asthma & Respiratory Disease 2006;16(3):189-96.
Ministry of Health and Welfare. Korea Health Statistics 2012 : Korea National Health and Nutrition Examination Survey[KNHANES V-3].
Halonen M, Lohman IC, Stern DA, Spangenberg A, Anderson D, Mobley S, et al. Th1/Th2 patterns and balance in cytokine production in the parents and infants of a large birth cohort. J Immunol 2009;182(5):3285-93.

상세보기
Jeong MJ. A Study Regarding Current Usage of Ha-Taedok Method in Korean Pediatrician. J Pediatr Korean Med 2014;28(2):88-102.
Heo J. DongUiBoGam. 2nd ed. Seoul: NamSanDang; 2004.
Korean Medical Pharmacology Text publication committee. Korean medical pharmacology. Seoul: Shinil Books; 2010, p. 116-249.
Tang J, Feng YB, Tsao S, Wang N, Curtain R, Wang YW. Berberine and Coptidis Rhizoma as novel antineoplastic agents: A review of traditional use and biomedical investigations. J Ethnopharmacol 2009;126(1):5-17.

상세보기
Jabbarzadeh Kaboli P, Rahmat A, Ismail P, Ling KH. Targets and mechanisms of berberine, a natural drug with potential to treat cancer with special focus on breast cancer. Eur J Pharmacol 2014;740:584-95.

상세보기
Ortiz LM, Lombardi P, Tillhon M, Scovassi AI. Berberine, an epiphany against cancer. Molecules 2014;19(8):12349-67.

상세보기
Yu M, Tong X, Qi B, Qu H, Dong S, Yu B. Berberine enhances chemosensitivity to irinotecan in colon cancer via inhibition of NFkappaB. Molecular medicine reports 2014;9(1):249-54.
Chin LW, Cheng YW, Lin SS, Lai YY, Lin LY, Chou MY, et al. Anti-herpes simplex virus effects of berberine from Coptidis rhizoma, a major component of a Chinese herbal medicine, Ching-Wei-San. Arch Virol 2010;155(12):1933-41.

상세보기
Yu YE, Park EY, Jung DH, Byun SH, Kim SC, Park SM. Antibacterial activity of oriental medicinal herb extracts against skin pathogens. Journal of Life Science 2010;20(7):1143-50.

원문보기 상세보기
Miao KL, Zhang JZ, Dong Y, Xi YF. Research progress on the chemical compounds and pharmacology of Sophora flavescens. Natural Product Research Development 2001;13:69-73.
Kusano G, Shibano M, Watanabe H. Pharmaceutical botanical studies on some Glycyrrhiza species. Yakugaku Zasshi 2003;123:619-31.

상세보기
Kim HJ, Bae JY, Jang HN, Park SN. Comparative study on antimicrobial activity of Glycyrrhiza uralensis and Glycyrrhiza glabra extracts in various country of origin as natural antiseptics. Kor J Microbiol Biotechnol 2013;41(3):358-66.

원문보기 상세보기
Kim HJ, Jang HN, Bae JY, Ha JH, Park SN. Antimicrobial activity, quantification and bactericidal activities of licorice active ingredients. Kor J Microbiol Biotechnol 2014;42(2):386-92.

원문보기 상세보기
Castells M. Mast cell mediators in allergic inflammation and mastosytosis. Immunol Allergy Clin North Am 2006;26(3):465-85.

상세보기
Galli SJ, Tsai M. Mast cells in allergy and infection: versatile effector and regulatory cells in innate and adaptive immunity. Eur J Immunol 2010;40(7):1843-51.

상세보기
Park DK, Lee YG, Park HJ. Extract of Rhus verniciflua Bark Suppresses 2,4-Dinitrofluorobenzene-Induced Allergic Contact Dermatitis. Evid Based Complement Alternat Med 2013:Article ID 879696.

상세보기
Ferrara N, Gerber HP, LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors. Nat Med 2003;9(6):669-76.

상세보기
Brennan FM, Maini RN, Feldmann M. Cytokine expression in chronic inflammatory disease. Br Med Bull 1995;51(2):368-84.

상세보기
Jung YJ, Isaacs, JS, Lee S, Trepel J, Neckers L. IL-1beta-mediated up-regulation of HIF-1alpha via an NFkappaB/COX-2 pathway identifies HIF-1 as a critical link between inflammation and oncogenesis. FASEB J 2003;17(14):2115-7.

상세보기
Kroncke KD, Fehsel K, Kolb-Bachofen V. Nitric oxide: cytotoxicity versus cytoprotection-how, why, when, and where? Nitric Oxide 1997;1(2):107-20.

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Dong Z, Saikumar P, Weinberg JM, Venkatachalam MA. Calcium in cell injury and death. Annu Rev Pathol 2006;1:405-34.

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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