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제안 방법
- S. cepivorum T11-2를 20oC의 PDA 배지에서 4일간 배양한 후, 균사 선단 부위에서 직경 5 mm의 균사 조각을 떼어내어 각 살균제를 농도별로 첨가한 새로운 PDA 배지에 접종하였다. 각각의 살균제는 멸균수에 용해시켜 PDA 배지에 최종농도가 prochloraz는 4, 0.
- 각각의 살균제는 멸균수에 용해시켜 PDA 배지에 최종농도가 prochloraz는 4, 0.8, 0.16, 0.032, 0.0064 µgmL−1, tebuconazole, flutolanil, isoprothiolane 그리고 iminoctadine은 500, 100, 20, 4, 0.8 µg mL−1이 되도록 희석하여첨가하였다.
- 각각의 살균제는 멸균수에 용해시켜 PDA 배지에 최종농도가 prochloraz와 tebuconazole은 0.01 µg mL−1,flutolanil은 1.0 µg mL−1, iminoctadine은 0.16 µg mL−1, isoprothiolane은 1.67 µg mL−1이 되도록 희석하여 첨가하였다.
- 살균제를 첨가하지 않은 배지 상에서 균핵이 정상적으로 발아한 것을 확인하고, 모든 처리구에서 균핵의 발아율을 조사하였다. 균핵 발아 억제율을 무처리구의 발아율에 대한 살균제 처리구의 발아율을 비교하여 구하였다. 모든 처리구는 3반복으로 실험하였으며, 각각의 반복에는 균핵을 4개씩 접종한 plate를 10개씩 두었다.
- 따라서 본 실험에서는 작용기작과 특성이 다른 5종의 살균제를 선발하여, 병원균의 균사생장, 균핵의 발아 및 생성 등에 미치는 효과를 배지 상에서 검정하였으며, 마늘 인편을 이용한 검정법을 확립하여 각 살균제의 병 방제 효과를 조사하였다.
- 살균제의 균핵 형성 억제효과는 무처리구에서 형성된 균핵 수에 대한 약제 처리구에서 형성된 균핵 수의 억제된 정도를 계산하여 억제율을 구하였다. 또한 균핵 발아 억제 효과를 조사하기 위하여각 살균제를 농도별로 첨가한 물한천배지(water agar medium, WA)에 균핵을 4개 치상하고, 20℃에서 7일간 배양하였다. 살균제를 첨가하지 않은 배지 상에서 균핵이 정상적으로 발아한 것을 확인하고, 모든 처리구에서 균핵의 발아율을 조사하였다.
- 흑색썩음균핵병균에 감염된 마늘 종구에서 단균핵 분리한 Sclerotium cepivorum T11-2를 선발하여 실험에 사용하였다. 또한 병원균의 생장과 병 발생에 대한 살균제의 억제 효과를 검정하기 위해서 에르고스테롤 생합성을 저해하는 prochloraz (a.i. 25%, EC)와 tebuconazole (a.i. 25%, WP), 병원균의 호흡작용에 필요한 에너지대사를 저해하는 flutolanil(a.i. 15%, EC), 지질 생합성을 저해하는 작용기작을 가지고 있는 것으로 알려진 iminoctadine tris-albesilate (a.i. 40%, WP), 병원균의 세포막 합성을 저해하는 isoprothiolane (a.i. 40%, EC)을 선발하여 실험에 사용하였다.
- 접종할 때 균사조각이 마늘 절단면에서 떨어지는 것을 방지하기 위해서 투명한 셀로판 테이프를 이용하여 부착하였으며, 접종한 인편은 키친 타올을 2장 깔고 100 mL의 증류수를 부어 포화습도를 유지하는 플라스틱 상자에 넣어 발병을 유도하였다. 마늘 인편에서 발병 정도는 병원균을 접종하고 14일 후에 Table 1과 같은 발병 지수를 가지고 조사하였다(Fig. 1).
- 로 농도를 조절하여 처리하였다. 마늘 인편은 병원균을 접종하기 1일 전에 뿌리원기 부분을 약 2 mm 정도 절단하고 준비한 살균제 용액에 30분간 침지처리 하였다. 준비한 병원균의 균총에서 균핵을 포함하여 직경 5 mm의 균사 조각을 떼어내어 마늘 인편의 절단면에 붙여서 접종하였다.
- 균핵 발아 억제율을 무처리구의 발아율에 대한 살균제 처리구의 발아율을 비교하여 구하였다. 모든 처리구는 3반복으로 실험하였으며, 각각의 반복에는 균핵을 4개씩 접종한 plate를 10개씩 두었다.
- 이때 PDA 배지에는 세균의 오염을 방지하기 위해서 앞에서와 동일하게 300 µg mL−1의 streptomycin을 첨가하였다. 병원균을 접종한 배지는 20℃에서 14일간 배양하였으며, 약제를 첨가하지 않은 배지 상에서 병원균의 균총에 균핵이 가득 형성되었을 때 약제 처리구에서 형성된 균핵의 수를 조사하였다. 살균제의 균핵 형성 억제효과는 무처리구에서 형성된 균핵 수에 대한 약제 처리구에서 형성된 균핵 수의 억제된 정도를 계산하여 억제율을 구하였다.
- 이때 PDA 배지에는 세균의 오염을 방지하기위해서 300 µg mL−1의 streptomycin을 첨가하였다. 병원균을 접종한 배지는 20℃에서 다시 4일간 배양한 후 균총의 직경을 측정하였으며, 약제를 첨가하지 않은 배지 상에서의 균총의 직경과 비교하여 균사 생장 억제율(%)을 계산하였다.
- 병원균의 균핵 형성에 대한 억제효과를 조사하기 위하여 병원균을 PDA 배지에 접종하고 20oC의 배양기에서 4일간 배양한 후 균사 선단 부위에서 직경 5 mm의 균사 조각을 떼어내어 각 약제를 농도별로 첨가한 새로운 PDA 배지에 접종하였다. 각각의 살균제는 멸균수에 용해시켜 PDA 배지에 최종농도가 prochloraz와 tebuconazole은 0.
- 또한 균핵 발아 억제 효과를 조사하기 위하여각 살균제를 농도별로 첨가한 물한천배지(water agar medium, WA)에 균핵을 4개 치상하고, 20℃에서 7일간 배양하였다. 살균제를 첨가하지 않은 배지 상에서 균핵이 정상적으로 발아한 것을 확인하고, 모든 처리구에서 균핵의 발아율을 조사하였다. 균핵 발아 억제율을 무처리구의 발아율에 대한 살균제 처리구의 발아율을 비교하여 구하였다.
- 병원균을 접종한 배지는 20℃에서 14일간 배양하였으며, 약제를 첨가하지 않은 배지 상에서 병원균의 균총에 균핵이 가득 형성되었을 때 약제 처리구에서 형성된 균핵의 수를 조사하였다. 살균제의 균핵 형성 억제효과는 무처리구에서 형성된 균핵 수에 대한 약제 처리구에서 형성된 균핵 수의 억제된 정도를 계산하여 억제율을 구하였다. 또한 균핵 발아 억제 효과를 조사하기 위하여각 살균제를 농도별로 첨가한 물한천배지(water agar medium, WA)에 균핵을 4개 치상하고, 20℃에서 7일간 배양하였다.
- 살균제의 방제효과를 조사하기 위하여, 모든 살균제는 10과 100 µg mL−1로 농도를 조절하여 처리하였다.
- 준비한 병원균의 균총에서 균핵을 포함하여 직경 5 mm의 균사 조각을 떼어내어 마늘 인편의 절단면에 붙여서 접종하였다. 접종할 때 균사조각이 마늘 절단면에서 떨어지는 것을 방지하기 위해서 투명한 셀로판 테이프를 이용하여 부착하였으며, 접종한 인편은 키친 타올을 2장 깔고 100 mL의 증류수를 부어 포화습도를 유지하는 플라스틱 상자에 넣어 발병을 유도하였다. 마늘 인편에서 발병 정도는 병원균을 접종하고 14일 후에 Table 1과 같은 발병 지수를 가지고 조사하였다(Fig.
대상 데이터
- 흑색썩음균핵병균에 감염된 마늘 종구에서 단균핵 분리한 Sclerotium cepivorum T11-2를 선발하여 실험에 사용하였다. 또한 병원균의 생장과 병 발생에 대한 살균제의 억제 효과를 검정하기 위해서 에르고스테롤 생합성을 저해하는 prochloraz (a.
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