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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 회향 열매 메탄올 추출물을 이용하여 그 분획을 제조한 후, 각질형성세포주(HaCaT cell)에 처리하여 피부장벽 조절인자에 미치는 영향을 규명하고, 향후 미용 소재 및 피부질환 치료소재로서의 이용가능성을 검토하였다.
- 최근에는 아토피피부염과 filaggrin유전자의 변이와의 관련성이 입증되고[46], 건선 등의 만성 피부질환 또한 항균 펩타이드의 발현 저하와 관련이 있는 것으로 보고[16, 20]됨에 따라 피부질환 치료제 개발에서도 피부장벽의 항상성 유지가 중요한 관건이 되고 있다. 본 연구에서는 피부장벽기능 개선을 위해 이용 가능한 소재를 확인하는 과정에서 회향이 연구가치가 있다고 판단하였다.
- 본 연구에서는 회향의 항염증, 항산화, 항암 및 피부노화방지 효능 등 기존 연구를 기반으로 FV가 피부장벽 및 보습에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.
제안 방법
- FV가 보습효과에 미치는 영향을 알아보기 위하여 HaCaT 세포에 각 시료를 50 μg/ml씩 처리하고, 24시간 배양한 후 회수한 배양액은 ELISA kit를 이용하여 hyaluronic acid (HA)의 생성량을 측정하였으며, 세포는 RT-PCR를 이용하여 hya- luronic acid synthase (HAS) mRNA 발현량을 조사하였다. HA의 생성량 측정 결과 대조군에서는 43.
- FV의 화학적 장벽 기능을 확인하기 위하여 항균 펩타이드인 human β-defensin (HBD)-1, 2, 3와 cathelicidin (LL-37)의 mRNA 발현을 RT-PCR을 이용하여 조사하였다. 그 결과 HBD-1의 mRNA 발현은 M과 H, MC, E, B 각 분획에서 105.
- HaCaT 세포에 각 시료를 0, 10, 50, 100 μg/ml의 농도로 처리하고, 24시간 경과 후 XTT assay를 이용하여 세포 생존율을 확인하였다. 그 결과 FV메탄올 추출물(M)과 모든 분획물 (H, MC, E, B)에서 50 μg/ml의 농도까지는 95%이상의 세포 생존율을 보였다.
- FV가 피부장벽기능에 미치는 영향을 살펴보기 위해 각질형성세포 분화 촉진 시에 분비되는 ivolucrin, loricrin, filaggrin의 발현을 RT-PCR과 Western blot을 이용하여 측정하였다. HaCaT 세포에 시료를 50 μg/ml씩 처리하여 24시간 동안 배양한 후 ivolucrin, lor- icrin, filaggrin의 mRNA와 protein 발현을 확인하였다. Cal- ciume 각질형성세포 분화의 촉진에 관여하는 생체 인자로서 피부장벽기능의 강화에 관련하는 인자들의 발현 관찰에서 양성대조군으로 사용하였다.
- cDNA는 RT-PCR 증폭을 위한 template로 사용되었으며, PCR pri- mer는 선택적인 primer를 Bioneer (Daejeon, Korea)에서 구입하여 사용하였다(Table 1). PCRe 95℃에서 10초(denaturation), 56℃에서 30초(annealing), 72℃에서 1분(extension)의 반응을 30회 반복하는 것을 조건으로 하였다. PCR에 의한 생성물은 1% agarose gel에서 전기영동을 실시한 후 digital capture system (DNR Bio-Imaging Systems, Jerusalem, Israel)을 이용하여 확인하였다.
- PCRe 95℃에서 10초(denaturation), 56℃에서 30초(annealing), 72℃에서 1분(extension)의 반응을 30회 반복하는 것을 조건으로 하였다. PCR에 의한 생성물은 1% agarose gel에서 전기영동을 실시한 후 digital capture system (DNR Bio-Imaging Systems, Jerusalem, Israel)을 이용하여 확인하였다. 유전자의 발현은 internal control gene인 glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)로 표준화한 후, Gelquant 2.
- 각 시료(50 μg/ml)와 양성대조군으로 Ca2+ (1.2 mM), reti- noic acid (1 μM)를 처리한 후 24시간을 배양한 HaCaT 세포를 TRI-reagent (Molecular Research Center, Cincinnati, USA)를이용하여 제조사의 방법에 따라 total RNA를 분리하고, UV- 1700 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량한 후 total RNA 1 μge first strand cDNA synthesis kit를 이용하여 역전사 시켰다. cDNA는 RT-PCR 증폭을 위한 template로 사용되었으며, PCR pri- mer는 선택적인 primer를 Bioneer (Daejeon, Korea)에서 구입하여 사용하였다(Table 1).
- 또한 filaggrin 유전자 돌연변이의 경우 피부의 주름과 갈라짐이 자주 발생한다는 임상연구 결과[52]들이 계속 보고되고 있다. 따라서 본 연구에서는 FV가 피부의 물리적 장벽에 미치는 영향을 확인하기 위해 메탄올추출물(M) 및 그 분획물(H, MC, E, B)을 24시간 동안 각질형성세포에 처리한 후, involucrin, loricrin, filaggrin의 mRNA 및 protein 발현량을 측정하였다. Fig.
- 5 g의 추출물(M)을 얻었다. 메탄올 추출물은 극성 차를 이용해 n-hexane (H), methylene chloride (MC), ethyl acetate (E), n-butanol (B) 용매를 첨가하여 각 단계별로 2회씩 분획하였다. 메탄올 추출물 중 90 g을 물에 현탁한 후 동일양의 n-hexane과 혼합하여 분획하고, 물 층은 다시 methylene chloride로 분획하고, 이를 다시 물 층은 ethyl acetate로 분획한 후, 남은 물층은 마지막으로 n-butanol로 분획한 다음 수득한 각 분획층을 여과, 농축, 동결건조 하여 H는 47.
- 1% tween 20) 로 5분씩 3회 세정하고, secondary antibody를 TBST에 처리하여 상온에서 1시간 동안 반응시킨 뒤 다시 세척하였다. 면역반응이 완료된 membranee enhanced chemiluminescence system (Bio Rad Laboratories, Hercules, USA)을 이용하여 발색한 후, X-ray 필름상에서 단백질 발현을 관찰하였다. 단백질 발현은 internal control protein인 β-actin으로 표준화한 후, Gelquant 2.
- 배양된 세포의 상등액을 회수한 후 제조사의 매뉴얼에 따라 ELISA assay를 수행하여 hyaluronic acid의 생성량을 측정하였다.
- 사용하여 실험을 수행하였다. 세포를 96 well plate에 1×104 cells/well의 농도로 100 μl씩 분주하고 24시간 동안 배양한 다음 FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시킨 후, 시료를 각각 0, 10, 50, 100 μg/ml 의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 시료처리 후, XTT 시약이 든 배지로 교체하여 4시간 동안 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였고, 대조군(control)에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
- 시료들의 각질형성세포에 대한 독성 측정을 위해 XTT kit를 사용하여 실험을 수행하였다. 세포를 96 well plate에 1×104 cells/well의 농도로 100 μl씩 분주하고 24시간 동안 배양한 다음 FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시킨 후, 시료를 각각 0, 10, 50, 100 μg/ml 의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다.
- 세포를 96 well plate에 1×104 cells/well의 농도로 100 μl씩 분주하고 24시간 동안 배양한 다음 FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시킨 후, 시료를 각각 0, 10, 50, 100 μg/ml 의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 시료처리 후, XTT 시약이 든 배지로 교체하여 4시간 동안 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였고, 대조군(control)에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 측정값은 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었으며, 독성을 유발하지 않은 농도 범위에서 실험을 진행하였다.
- PCR에 의한 생성물은 1% agarose gel에서 전기영동을 실시한 후 digital capture system (DNR Bio-Imaging Systems, Jerusalem, Israel)을 이용하여 확인하였다. 유전자의 발현은 internal control gene인 glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)로 표준화한 후, Gelquant 2.7 software (DNR Bio-Imaging Sys- tems)를 이용하여 상대 정량하였다.
- 따라서 항균 펩타이드의 감소는 선천 면역을 저하시키고, 외부 병원체에 대한 항균력이 감퇴되어 건선[20]이나 여드름 및 만성 염증성 피부 질환[16]을 유발한다. 이에 본 연구에서는 FV메탄올 추출물 및 분획물을 각질형성세포에 처리한 후 HBD-1, 2, 3와 LL-37 mRNA발현량을 측정하였다. 그 결과 HBD-1, 2, 3와 LL-37 모두 mRNA 발현량이 유의하게 증가하지 않은 것으로 나타났다(Fig.
- 시료처리 후, XTT 시약이 든 배지로 교체하여 4시간 동안 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였고, 대조군(control)에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 측정값은 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었으며, 독성을 유발하지 않은 농도 범위에서 실험을 진행하였다.
대상 데이터
- Island, USA)에서 구입하였다. 2, 3-bis-(2-methoxy-4- nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxani-lide는 Roche Applied Science (Mannheim, Germany)에서 구입하였고, hyaluronic acid (HA) enzyme linked immunosorbent as- say (ELISA) kit는 R&D Systems (Minneapolis, USA)에서 구입하였다. First strand cDNA synthesis kit는 Thermo Scientific (Rockford, USA)에서 구입하였으며, bradford pro- tein assay reagent는 Bio-Rad Laboratories (Hercules, USA)에서 구입하였다.
- 2, 3-bis-(2-methoxy-4- nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxani-lide는 Roche Applied Science (Mannheim, Germany)에서 구입하였고, hyaluronic acid (HA) enzyme linked immunosorbent as- say (ELISA) kit는 R&D Systems (Minneapolis, USA)에서 구입하였다. First strand cDNA synthesis kit는 Thermo Scientific (Rockford, USA)에서 구입하였으며, bradford pro- tein assay reagent는 Bio-Rad Laboratories (Hercules, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 antibody 중 anti-filaggrin, an- ti-loricrin, anti-involucrine Abcam (Cambridge, MA)에서, anti-rabbit IgG horseradish peroxidase-conjugated antibody는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, USA)에서 구입하였다.
- 2 mM), reti- noic acid (1 μM)를 처리한 후 24시간을 배양한 HaCaT 세포를 TRI-reagent (Molecular Research Center, Cincinnati, USA)를이용하여 제조사의 방법에 따라 total RNA를 분리하고, UV- 1700 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량한 후 total RNA 1 μge first strand cDNA synthesis kit를 이용하여 역전사 시켰다. cDNA는 RT-PCR 증폭을 위한 template로 사용되었으며, PCR pri- mer는 선택적인 primer를 Bioneer (Daejeon, Korea)에서 구입하여 사용하였다(Table 1). PCRe 95℃에서 10초(denaturation), 56℃에서 30초(annealing), 72℃에서 1분(extension)의 반응을 30회 반복하는 것을 조건으로 하였다.
- 본 실험에 사용한 FV는 경상북도 경주 소재 전문한약재상에서 구입하여 동국대학교 한의과대학에서 검정한 다음, 사용하였다. 건조된 FV의 분말 1.
- 사람의 각질형성세포주(human keratinocyte cell)인 HaCaT 세포는 독일 암연구소(DKFZ)의 Norbert E. Fusenig박사로부터 분양 받아 사용하였다. 세포는 10% FBS와 1% penicillin- streptomycin이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
- Fusenig박사로부터 분양 받아 사용하였다. 세포는 10% FBS와 1% penicillin- streptomycin이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
- 세포배양에 사용된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS)은 Welgene Inc (Daegu, Korea)에서 구입하였고, streptomycin-penicilline GIBCO (Grand Island, USA)에서 구입하였다. 2, 3-bis-(2-methoxy-4- nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxani-lide는 Roche Applied Science (Mannheim, Germany)에서 구입하였고, hyaluronic acid (HA) enzyme linked immunosorbent as- say (ELISA) kit는 R&D Systems (Minneapolis, USA)에서 구입하였다.
- First strand cDNA synthesis kit는 Thermo Scientific (Rockford, USA)에서 구입하였으며, bradford pro- tein assay reagent는 Bio-Rad Laboratories (Hercules, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 antibody 중 anti-filaggrin, an- ti-loricrin, anti-involucrine Abcam (Cambridge, MA)에서, anti-rabbit IgG horseradish peroxidase-conjugated antibody는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, USA)에서 구입하였다. 그 외에 실험에 사용한 모든 시약은 분석용 등급 이상으로 사용하였다.
데이터처리
- 본 실험에서 얻은 데이터는 마이크로 소프트 엑셀(EXCEL) 2007 프로그램을 이용하여 평균 ± 표준편차(mean ± standard deviation)로 나타내었다. 통계적 유의성은 일원분산(one-way ANOVA)으로 분석한 후, student΄s t-test검정을 실시하여 p 값이 0.
- 나타내었다. 통계적 유의성은 일원분산(one-way ANOVA)으로 분석한 후, student΄s t-test검정을 실시하여 p 값이 0.05미만일 때 유의한 것으로 간주하였다.
이론/모형
- 정상적인 기능을 유지하게 된다. FV가 피부장벽기능에 미치는 영향을 살펴보기 위해 각질형성세포 분화 촉진 시에 분비되는 ivolucrin, loricrin, filaggrin의 발현을 RT-PCR과 Western blot을 이용하여 측정하였다. HaCaT 세포에 시료를 50 μg/ml씩 처리하여 24시간 동안 배양한 후 ivolucrin, lor- icrin, filaggrin의 mRNA와 protein 발현을 확인하였다.
성능/효과
- 영향을 미칠 것으로 보인다. FV가 피부 보습에 미치는 영향을 확인하기 위해 HA의 생성량을 관찰한 결과 E와 B는 50 μg/ml 처리 농도에서 50.88±0.02 ng/ml, 48.18±0.96 ng/ml 로 측정되어 대조군에 비해 각각17%, 11%의 HA 생성 촉진 효과를 보였다(Fig. 3A). 이러한 HA의 합성은 각질형성세포 내 HAS에 의해 진행되는데, HAS는 염기서열의 유사성이 높은 순서로 HAS-1, HAS-2, HAS-3의 세가지 형태가 존재하는 것으로 보고되었다[26].
- 따라서 본 연구에서는 FV가 피부의 물리적 장벽에 미치는 영향을 확인하기 위해 메탄올추출물(M) 및 그 분획물(H, MC, E, B)을 24시간 동안 각질형성세포에 처리한 후, involucrin, loricrin, filaggrin의 mRNA 및 protein 발현량을 측정하였다. Fig. 2에 나타난 바와 같이 각질형성세포의 분화를 촉진시키는 것으로 알려진 칼슘(1.2mM)처리 양성대조군에서는 involucrin, loricrin, filaggrin mRNA 및 protein이 모두 증가함을 확인할 수 있었다. 이러한 각질세포막 형성 인자는 M과 분획물을 처리함에 따라 증가되는 양상을 보였는데, 특히 B 처리시 involucrine mRNA와 protein, filaggrin의 경우 protein의 발현율이 통계적으로 유의미한 수준에서 증가하는 것을 확인하였다.
- 3%로 M에서만 발현이 증가하였고, 유의한 증가 효과를 나타내지는 않은 것을 확인하였다. Filaggrin의 단백질 발현은 Ⅲ.1%, 127.3%, 127%, 118.4%, 127.9%로 모든 시료처리군에서 증가하였으며, B에서 유의한 효과를 나타내었다(Fig. 2B).
- HAS mRNA 발현을 조사한 결과 HAS-1은 M과 각 분획에서 162.9%, 201.1%, 187.2%, 216.8%, 297.8%로 모든 시료처리군에서 mRNA 발현이 현저하게 증가하였으며, B에서 가장 많은 증가 효과를 보였고, HAS-2의 경우 104.9%, 107.2%, 96%, 94.5%, 94%로 M과 H에서만 mRNA 발현이 증가하였고, H에서 유의성 있는 증가 효과를 나타냈다. HAS-3는 112.
- 5%, 94%로 M과 H에서만 mRNA 발현이 증가하였고, H에서 유의성 있는 증가 효과를 나타냈다. HAS-3는 112.2%, 105.1%, 100.3%, Ⅲ.1%, 102.3%로 모든 시료처리군에서 발현율이 증가하였으나 유의한 효과를 보이지 않았다(Fig. 3B).
- 조사하였다. HA의 생성량 측정 결과 대조군에서는 43.34±1.71 ng/ml, M 은 46.14±0.59 ng/ml, He47.8±0.06 ng/ml, MC는 47.8±1.22 ng/ml, E는 50.88±0.02 ng/ml, B는 48.18±0.96 ng/ml로 모든 시료처리군에서 대조군에 비해 HA의 생성량이 증가한 것으로 나타났으며, 특히 E와 B에서 유의한 증가 효과를 보였다 (Fig. 3A).
- 6%로 MC를 제외한 M, H, E, B 분획에서 발현율이 증가하였으며, 특히 B에서 유의하게 증가한 것으로 확인되었다. Loricrin의 경우 100.4%, 99%, 91.6%, 93.8%, 99.3%로 M에서만 발현이 증가하였고, 유의한 증가 효과를 나타내지는 않은 것을 확인하였다. Filaggrin의 단백질 발현은 Ⅲ.
- 8% 로 측정되어 모든 시료처리군이 대조군에 비해 증가한 것으로 나타났으며, M, H, E, B에서 유의한 증가 효과를 보였다. Loricrin의 발현은 각각 101.9%, 103.2%, 100.5%, 107.8, 110% 의 발현율을, filaggrine 103.1%, 103.6%, 105.03%, 103.2, 105.02%로 loricrin, filaggrin의 mRNA 발현에서도 모든 시료처리군이 대조군에 비해 증가한 발현율을 보였으나 유의한 효과를 나타내지는 않았다(Fig. 2A).
- Protein 발현에서 ivolucrine M과 각 분획이 100.6%, 101.5%, 96.2%, 113.2%, 124.6%로 MC를 제외한 M, H, E, B 분획에서 발현율이 증가하였으며, 특히 B에서 유의하게 증가한 것으로 확인되었다. Loricrin의 경우 100.
- 결론적으로 FV 분획물 중 B는 involucrin과 filaggrin의 발현에 뛰어난 증가 효과를 나타냈다. 또한, E와 B는 HAS-1의 합성을 증가시킴으로써 HA 생성량을 증가시켰다.
- 확인하였다. 그 결과 FV메탄올 추출물(M)과 모든 분획물 (H, MC, E, B)에서 50 μg/ml의 농도까지는 95%이상의 세포 생존율을 보였다. 그러나 100 μg/ml의 농도에서 Me 99%, H는87%, MC는 28%, E는 77%, B는 84%의 세포 생존율을 보이며 H, MC, E, B 처리군에서 독성을 나타냈고, 특히 MC 처리 군에서 강한 독성을 보였음을 확인하였다(Fig.
- 이에 본 연구에서는 FV메탄올 추출물 및 분획물을 각질형성세포에 처리한 후 HBD-1, 2, 3와 LL-37 mRNA발현량을 측정하였다. 그 결과 HBD-1, 2, 3와 LL-37 모두 mRNA 발현량이 유의하게 증가하지 않은 것으로 나타났다(Fig. 4). 따라서 FV는 피부의 화학적 장벽에 관여하지 않는 것으로 보인다.
- human β-defensin (HBD)-1, 2, 3와 cathelicidin (LL-37)의 mRNA 발현을 RT-PCR을 이용하여 조사하였다. 그 결과 HBD-1의 mRNA 발현은 M과 H, MC, E, B 각 분획에서 105.8%, 112.2%, 116.1%, 121.2%, 121.1%로 측정되어 모든 시료처리군에서 대조군에 비해 발현이 증가하였으며, HBD-2는 103.26%, 99.9%, 98.5%, 96.8%, 92.1%로 M에서만 발현이 증가하였다. 또 HBD-3는 100.
- 그 결과 ivolucrin의 경우 M과 H, MC, E, B의 분획에서 mRNA 발현율이 각각 Ⅲ.7%, 119.1%, 117.7%, 116%, 122.8% 로 측정되어 모든 시료처리군이 대조군에 비해 증가한 것으로 나타났으며, M, H, E, B에서 유의한 증가 효과를 보였다. Loricrin의 발현은 각각 101.
- 그 결과 FV메탄올 추출물(M)과 모든 분획물 (H, MC, E, B)에서 50 μg/ml의 농도까지는 95%이상의 세포 생존율을 보였다. 그러나 100 μg/ml의 농도에서 Me 99%, H는87%, MC는 28%, E는 77%, B는 84%의 세포 생존율을 보이며 H, MC, E, B 처리군에서 독성을 나타냈고, 특히 MC 처리 군에서 강한 독성을 보였음을 확인하였다(Fig. 1). 따라서 모든 시료처리군에서 독성을 나타내지 않은 50 μg/ml의 농도에서 실험을 진행하였다.
- 9%로 모든 시료처리군에서 발현이 증가한 것으로 나타났다. 그러나 M과 분획물들 모두 항균 펩타이드 발현을 유의하게 증가시키지 않은 것으로 나타났다(Fig. 4).
- 이러한 각질세포막 형성 인자는 M과 분획물을 처리함에 따라 증가되는 양상을 보였는데, 특히 B 처리시 involucrine mRNA와 protein, filaggrin의 경우 protein의 발현율이 통계적으로 유의미한 수준에서 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 본 결과는 분획물 중 B가 각질형성세포의 분화를 촉진시켜 피부의 물리적 장벽을 개선 및 강화시킬 수 있음을 제시하고 있다.
- 이들은 HA합성에 결정적인 역할을 하는 효소로서 HA 생성 증가에 관여하므로[32] HAS의 발현을 촉진함으로써 HA의 합성을 증가시키고자 하는 연구[31, 37]가 이루어지고 있다. 따라서 본 실험에서는 HAS-1, -2, -3 발현 촉진효과를 조사하고자 하였으며, 그 결과50 μg/ml 의E 와 B를 24시간 동안 처리시 HAS-1 유전자를 유의미하게 증가시킴을 확인하였다(Fig. 3B). 이를 통해 E와 B가 HAS-1 유전자 발현을 촉진하여 최종적으로 HA의 생성을 촉진하는 것으로 사료된다.
- 1%로 M에서만 발현이 증가하였다. 또 HBD-3는 100.9%, 99.6%, 103.7%, 106.2%, 102.9%로 H를 제외한 시료처리군에서 mRNA의 발현이 증가하였으며, LL-37은 102.9%, 109.1%, 100.7%, 105.2%, 109.9%로 모든 시료처리군에서 발현이 증가한 것으로 나타났다. 그러나 M과 분획물들 모두 항균 펩타이드 발현을 유의하게 증가시키지 않은 것으로 나타났다(Fig.
- 2mM)처리 양성대조군에서는 involucrin, loricrin, filaggrin mRNA 및 protein이 모두 증가함을 확인할 수 있었다. 이러한 각질세포막 형성 인자는 M과 분획물을 처리함에 따라 증가되는 양상을 보였는데, 특히 B 처리시 involucrine mRNA와 protein, filaggrin의 경우 protein의 발현율이 통계적으로 유의미한 수준에서 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 본 결과는 분획물 중 B가 각질형성세포의 분화를 촉진시켜 피부의 물리적 장벽을 개선 및 강화시킬 수 있음을 제시하고 있다.
후속연구
- 한편 FV는 모든 항균 펩타이드의 mRNA발현에서 유의미한 변화를 일으키지 않았으므로, 피부의 화학장벽에는 영향을 미치지 않을 것으로 판단된다. 따라서 FV 분획물 중 B는 각질형성세포의 분화를 촉진하여 피부의 물리적 장벽기능을 향상시키고, 피부 보습인자의 생성을 통해 피부건조증을 개선함으로써 피부질환 치료제 및 미용 기능성 소재로 활용이 가능하리라 사료된다. 활성이 우수한 E 분획물에는 cardiac glycoside류, tannin 류, phenol류가 그리고 B 분획물에서는 alkaloid류, steroid류, cardiac glycoside류, tannin류, phenol류 및 triterpenoid류 등이 함유되어 있음이 보고되어 있다[2].
- 활성이 우수한 E 분획물에는 cardiac glycoside류, tannin 류, phenol류가 그리고 B 분획물에서는 alkaloid류, steroid류, cardiac glycoside류, tannin류, phenol류 및 triterpenoid류 등이 함유되어 있음이 보고되어 있다[2]. 향후 FV의 B 분획물이나 B분획물에 함유된 성분들의 분리 및 분석을 실시하고 나아가 생리활성 기전을 규명한다면, 피부장벽 기능개선 소재로 개발될 가치가 매우 높을 것으로 생각된다.
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