[논문]참조팝나무 추출물의 항산화 활성 및 항염증 효과

최은영; 허성일; 권용수; 김명조

doi:10.7783/kjmcs.2016.24.1.31

참조팝나무 추출물의 항산화 활성 및 항염증 효과
Anti-Oxidant Activity and Anti-Inflammatory Effects of Spiraea fritschiana Schneid Extract 원문보기

韓國藥用作物學會誌 = Korean journal of medicinal crop science, v.24 no.1, 2016년, pp.31 - 37

최은영 (강원대학교 식물자원응용과학전공) , 허성일 ((재)홍천메디칼허브연구소) , 권용수 (강원대학교 약학과) , 김명조 (강원대학교 식물자원응용과학전공)

Abstract ▼ AI-Helper

Background : We studied the anti-oxidant activity and anti-inflammatory effects of Spiraea fritschiana Schneid extract (SFSE). Methods and Results : The SFSE was prepared using methanol and was evaluated for its total phenol and flavonoid content, DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) free-radical scavenging activity, reducing power, and effect on nitric oxide (NO) production, and cell viability by using real-time polymerase chain reaction (PCR). The total phenol content was $212.78{\mu}g{\cdot}galli$c acid equivalent (GAE)/mg and the total flavonoid content was $66.84{\mu}g{\cdot}quercetin$ equivalent (QE)/mg. The extract showed antioxidant activity (DPPH free-radical scavenging activity) with $RC_{50}$ value of $76.61{\mu}g/m{\ell}$. The reducing power of the extract was Abs 0.58 at $250{\mu}g/m{\ell}$. Cell viability was determined using the MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. To evaluate anti-inflammatory activity, we examined the inhibitory effects on lipopolysaccharide-(LPS)-induced NO production in RAW 264.7 cells. The NO inhibition rate was 90% at $200{\mu}g/m{\ell}$ SFSE. At the same concentration, the expression of pro-inflammatory genes such as inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase (COX)-2 also decreased. Conclusions : Our results suggest that SFSE is a novel resource for the development of foods and drugs that possess anti-oxidant and anti-inflammatory activity.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

즉, iNOS와 COX-2의 발현증가를 억제하는 것은 염증발생을 억제하는 것을 의미한다. 이에 본 연구에서는 LPS에 의해 유도된 iNOS와 COX-2 발현에 있어 참조팝나무 추출물의 발현 억제능을 확인하고자 RT-PCR을 이용하여 그 발현정도를 확인하였다. 실험은 앞서 수행한 세포 생존률을 기준으로 1 - 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 실험결과 iNOS와 COX-2 모두 일정농도 이상에서 발현도가 감소함을 확인하였다 (Fig.
이에 본 연구에서는 참조팝나무 추출물의 총 페놀, 총 플라보노이드 함량 및 항산화 활성을 확인하였으며, RAW 264.7세포에서 LPS로 유도된 염증반응을 억제할 수 있는지 여부를 확인하기 위하여 NO 생성저해 활성 및 iNOS, COX-2 발현도를 조사하였다.

제안 방법

RAW 264.7세포를 6 well plate에 1 × 106 cell/㎖의 밀도로 분주하여 시료를 농도별로 처리하고 24시간 처리 후 Total RNA Extraction Kit (Intron Biotechnology Co., Ltd, Seongnam, Korea)를 이용하여 RNA를 분리하였다.
Reducing power (환원력) 측정은 Oyaizu가 사용한 방법 (1986)을 변형하여 사용하였다. 본 실험에 사용된 모든 시약은 Sigma Chemical Co.
mRNA 수준에서의 염증 관련 bio-marker인 iNOS, COX-2의 발현정도를 확인하기 위하여 RT-PCR을 수행하였다. RAW 264.
Glyceraldehyde 3-phospate dehydrogenase (GAPDH) 유전자를 internal control로 사용하였다. 각 PCR 산물들은 1% agarosegel (USB Co., Cleveland, OH, USA)을 이용하여 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr)를 이용하여 UV하에서 image analyse system (FireReader, UVITec Cambridge Co., Cambridge, England)을 이용하여 발현정도를 확인하였다. RT-PCR에 사용한 primer의 염기서열은 Table 1과 같다.
7 세포에 LPS를 이용하여 NO 생성을 유도하였으며, 참조팝나무 추출물을 농도별로 처리하여 NO 생성저해율을 확인하였다. 또한, NO 생성 저해가 세포독성에 기안하는 것인지 확인하기 위하여 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 동일 농도로 측정하였다. 우선 세포독성측정결과 (Fig.
일정량 이상으로 배양된 세포를 1 × 10⁶ cell/㎖의 밀도로 96 well-plate에 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 배양시 사용된 배지를 깨끗이 제거한 후 배지 90 ㎕와 농도별로 희석된 시료를 10 ㎕ 씩 첨가하여 5% CO₂ incubator (NU-5510G, NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA)에서 24시간 배양하였다. 이후 기존의 배지를 모두 제거한 후 5 ㎎/㎖의 농도 용해시켜 제조한 MTT (Sigma, St.
, Ltd, Seongnam, Korea)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA의 농도를 측정하여 정량하였으며, 이를 이용하여 cDNA를 합성한 후 template로 사용하여 iNOS, COX-2 유전자를 polymerase chain reaction (PCR, SC200, Kyratec, Queensland, Australia)방법으로 증폭하였다.
0 ㎍/㎖의 농도가 되도록 LPS로 동시처리 또는 LPS를 단독 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess 시약 (1% sulfanilamide, 0.1% naphthylethylendiamine in 25% phosphoric acid) 100 ㎕를 혼합하여 96 well plate에서 10분간 반응시킨 후 microplate reader (Model-680, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도 (Abs)를 측정하여 NO 생성저해율을 LPS 무처리구와 비교하여 백분율로 표시하였다.
Louis, MO, USA)을 이용하여 Singleton 등 (1999)의 방법을 일부 수정하여 측정하였다. 시료 100 ㎕ 에 Folin-Ciocalteau 시약 50 ㎕을 넣어 5분간 안정화 시킨 뒤 20% sodium carbonate (Junsei chemical, Tokyo, Japan)을 300 ㎕ 첨가하여 다시 15분간 안정화 시킨 뒤 1.0 ㎖ 의 증류수를 첨가하여 UV/Vis spectrophotometer (V530, JASCO Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 725 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하고 gallic acid (Sigma, St. Louis, MO, USA)를 이용하여 표준곡선의 검량선을 작성하였다. 총페놀 함량은 ㎍ • gallic acid equivalent (GAE)/㎎으로 나타내었다.
또한, NO 생성 저해가 세포독성에 기안하는 것인지 확인하기 위하여 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 동일 농도로 측정하였다. 우선 세포독성측정결과 (Fig. 2A) 시료를 10 - 200 ㎍/㎖의 농도로 RAW 264.7 세포에 처리하였을 때 모든 농도에서 세포의 생존율에 영향을 미치지 않음을 확인하였으며 해당 농도를 기준으로 후차적인 실험에 적용하였다. 참조팝나무 추출물을 10 - 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였을 때 NO 생성저해 활성은 Fig.
이 혼합물에 10% trichloroacetic acid 100 ㎕ 넣어 다시 10분간 실온에서 반응시켰다. 이 반응액에 증류수 400 ㎕를 첨가한 후 0.1% ferric chloride 50 ㎕를 첨가하는 즉시 UV/Vis spectrophotometer (V530, JASCO Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 700 ㎚에서 흡광도 (Abs)를 측정하여 이를 결과값으로 사용하였다.
측정한 값은 다음과 같은 식을 이용하여 EDA (electron donating ability, %)로 산출한 후 RC₅₀ (㎍/㎖)값을 확인하였다. 이때 RC₅₀값은 화합물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도를 나타냈으며, 기존의 항산화제인 ascorbic acid와 butylated hydroxytoluene (BHT)를 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입 후 측정하여 활성을 비교하였다.
Nitric oxide (NO)는 활성질소종 (reactive nitrogen species)의 하나로 최근 염증반응의 중요한 작용인자로 알려져 있다. 이러한 NO의 생성저해 효과를 검증하기 위하여 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 LPS를 이용하여 NO 생성을 유도하였으며, 참조팝나무 추출물을 농도별로 처리하여 NO 생성저해율을 확인하였다. 또한, NO 생성 저해가 세포독성에 기안하는 것인지 확인하기 위하여 MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 동일 농도로 측정하였다.
Lee 등 (2015)은 폴리페놀 성분은 수소원자를 자유라디칼에 제공하고 비활성 라디칼로 변화시킴으로서 항산화효과를 나타내며, 이러한 폴리페놀에 속하는 플라보노이드는 활성산소종을 효과적으로 제거함으로서 항염증 및 항암 효과가 있다고 언급한 바 있다. 이에 본 연구에서는 앞서 확인된 총 페놀 및 플라보노이드 함량을 기초로 항산화 측정에 대표적으로 쓰이는 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)을 기질로 이용하여 참조팝나무 추출물의 항산화 활성을 측정하였다. 시료에 대한 항산화 활성은 DPPH free radical을 50% 억제하는데 필요한 시료의 농도 (RC₅₀)로 표기하였다.
, Plymouth, MN, USA)에서 24시간 배양하였다. 이후 기존의 배지를 모두 제거한 후 5 ㎎/㎖의 농도 용해시켜 제조한 MTT (Sigma, St. Louis, MO, USA) 10 ㎕를 새로운 배지 90 ㎕와 함께 첨가하여 3시간 동안 배양한 후 제거하고 dimethyl sulfoxide (DMSO, Daejung chemical and metal Co., Ltd, Siheung, Korea) 100 ㎕ 를 첨가하여 microplate reader (Model-680, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도 (Abs)를 측정하여 세포의 생존율을 대조구와 비교하여 백분율로 표시하였다.
총 플라보노이드 함량은 Moreno 등 (2000)이 사용한 방법을 응용하여 수행하였다. 일정농도로 희석된 시료 100 ㎕에 10% aluminum nitrate (Yakuri Pure Chemical, Kyoto, Japan) 30 ㎕와 1 M potassium acetate (Junsei chemical, Tokyo, Japan) 30 ㎕를 혼합한 후 80% ethyl alcohol (EtOH) 1.24 ㎖를 넣어 실온에서 약 40분간 안정화 시킨 후 UV/Vis spectrophotometer (V530, JASCO Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 415 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하고 quercetin (Sigma, St. Louis, MO, USA)을 이용하여 표준곡선의 검량선을 작성하였다. 총 플라보노이드 함량은 함량 ㎍ • quercetin equivalent (QE)/㎎으로 나타내었다.
총 페놀 함량은 Folin-Ciocalteau 시약 (Sigma, St. Louis, MO, USA)을 이용하여 Singleton 등 (1999)의 방법을 일부 수정하여 측정하였다. 시료 100 ㎕ 에 Folin-Ciocalteau 시약 50 ㎕을 넣어 5분간 안정화 시킨 뒤 20% sodium carbonate (Junsei chemical, Tokyo, Japan)을 300 ㎕ 첨가하여 다시 15분간 안정화 시킨 뒤 1.
총 플라보노이드 함량은 Moreno 등 (2000)이 사용한 방법을 응용하여 수행하였다. 일정농도로 희석된 시료 100 ㎕에 10% aluminum nitrate (Yakuri Pure Chemical, Kyoto, Japan) 30 ㎕와 1 M potassium acetate (Junsei chemical, Tokyo, Japan) 30 ㎕를 혼합한 후 80% ethyl alcohol (EtOH) 1.
추출물의 NO 생성 저해효과를 측정하기 위하여 마우스 대식세포 (RAW 264.7 cell)를 사용하였으며, LPS (Sigma, St. Louis, MO, USA) 처리에 의해 유도된 NO 생성량을 확인 하기 위하여 일정기간 배양된 세포를 96 well-plate에 1 × 106 cell/㎖의 밀도로 분주하고 24시간 배양하였다.
반응이 종료된 plate는 microplate reader (Model-680, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 515 ㎚에서 흡광도 (absorbance, Abs)를 측정하였다. 측정한 값은 다음과 같은 식을 이용하여 EDA (electron donating ability, %)로 산출한 후 RC₅₀ (㎍/㎖)값을 확인하였다. 이때 RC₅₀값은 화합물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도를 나타냈으며, 기존의 항산화제인 ascorbic acid와 butylated hydroxytoluene (BHT)를 Sigma Chemical Co.
항산화 활성은 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical 소거법 (Xiong et al., 1996)을 변형하여 측정하였다. 96 well-plate에 일정농도로 희석한 시료 100 ㎕씩을 넣은 후 빛을 차단한 시약병에 희석한 0.

대상 데이터

Glyceraldehyde 3-phospate dehydrogenase (GAPDH) 유전자를 internal control로 사용하였다. 각 PCR 산물들은 1% agarosegel (USB Co.
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포는 한국세포주은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였으며, 10% fetal bovine serum (FBS, HyClone Laboratories, Logan, UT, USA)와 1% antibiotic mixture (Penicillin-Streptomycin Solution, HyClone Laboratories, Logan, UT, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM, HyClone Laboratories, Logan, UT, USA)에서 5% CO2, 37℃ 조건으로 CO2 humidified incubator (NU-5510G, NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA)에서 배양하였다.
Reducing power (환원력) 측정은 Oyaizu가 사용한 방법 (1986)을 변형하여 사용하였다. 본 실험에 사용된 모든 시약은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. 농도별로 희석한 시료 100 ㎕에 0.
본 연구에서 사용된 재료는 ㈜아모레퍼시픽 약초원에 식재된 참조팝나무 (Spiraea fritschiana Schneid)의 뿌리를 제외한 지상부를 채취하여 실험에 사용하였다. 채집한 식물은 이물질을 제거한 후 3일간 실온에서 음건하여 시료대비 10배 volume의 methanol (MeOH)로 2회 반복 추출한 후 감압농축기 (N-1110, Eyela, Tokyo, Japan)를 이용하여 농축한 후 농축물을 동결건조 (FD8508, ilShinBioBase, Dongducheon, Korea) 한 후 실험에 사용하였다.
, Plymouth, MN, USA)에서 배양하였다. 세포는 일정 주기로 계대배양을 실시한 후 실험에 사용하였다.
본 연구에서 사용된 재료는 ㈜아모레퍼시픽 약초원에 식재된 참조팝나무 (Spiraea fritschiana Schneid)의 뿌리를 제외한 지상부를 채취하여 실험에 사용하였다. 채집한 식물은 이물질을 제거한 후 3일간 실온에서 음건하여 시료대비 10배 volume의 methanol (MeOH)로 2회 반복 추출한 후 감압농축기 (N-1110, Eyela, Tokyo, Japan)를 이용하여 농축한 후 농축물을 동결건조 (FD8508, ilShinBioBase, Dongducheon, Korea) 한 후 실험에 사용하였다. 농축된 시료는 각 실험의 특성에 따라 일정 농도로 희석 한 후 실험에 적용하였다.

데이터처리

모든 실험은 3회 반복 측정하여 평균값 ± S.D. (n = 3)으로 나타내었으며, 통계처리는 Statistical Package for Social Sciences (SPSS, version 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 one-way ANOVA 분석을 실시한 후 Tukey (1949)의 다중비교검정법을 사용하여 유의성을 p<0.05 수준에서 검증하였다.

이론/모형

추출물의 세포독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)를 이용한 방법에 의해 측정하였다. 일정량 이상으로 배양된 세포를 1 × 10⁶ cell/㎖의 밀도로 96 well-plate에 분주하여 24시간 동안 배양하였다.

성능/효과

³⁾DPPH; 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical. ⁴⁾RC₅₀; Extract concentrations, which show 50% activity of DPPH radical scavenging, were determined by interpolation.
3). RAW 264.7 세포에 염증 유도를 위하여 LPS를 처리하였으며, 처리 후 LPS 무처리구와 비교하였을 때 iNOS와 COX-2 모두 높은 발현을 확인하였다. 그러나, 염증을 유도한 세포에 참조팝나무 추출물 처리시 발현억제능을 확인하였으며 COX-2의 발현억제능에 비하여 iNOS의 발현억제능이 높은 것을 확인하였다.
7 세포에 염증 유도를 위하여 LPS를 처리하였으며, 처리 후 LPS 무처리구와 비교하였을 때 iNOS와 COX-2 모두 높은 발현을 확인하였다. 그러나, 염증을 유도한 세포에 참조팝나무 추출물 처리시 발현억제능을 확인하였으며 COX-2의 발현억제능에 비하여 iNOS의 발현억제능이 높은 것을 확인하였다. iNOS의 경우 시료를 10 ㎍/㎖ 농도로 처리한 후 시료 무처리구와 비교하였을 때약 20%정도 발현 억제능을 보였다.
상기 결과를 Oh 등 (2014)이 연구한 동규자오일의 항염증 활성을 확인한 결과와 비교하였을 때 동규자 오일을 250 ㎍/㎖ 농도로 처리시 약 90%의 NO 억제 활성을 확인하였으며, iNOS의 발현은 약 32%가 억제되었으나 COX-2의 경우 발현 억제를 확인할 수 없었다. 따라서, 동규자오일은 염증을 유발하는 다양한 사이토카인중 NO와 iNOS을 조절하는 메커니즘으로 항염증효과를 갖는다는 것을 확인하였다. 본 연구에서도 상기 연구의 경우와 마찬가지로 참조팝나무 추출물 NO 생성 억제 효과는 COX-2발현 보다는 iNOS 발현에 기인하는 하는 것으로 사료된다.
Kang 등 (1996) 에 따르면 phenolic acid 및 phenol성 물질에 의하여 나타나는 항산화 작용의 지표가 되는 것이 전자공여능이며 이러한 물질을 환원력이 큰 것일수록 전자공여능이 높다는 연구결과를 발표한 바 있다. 따라서, 상기 결과는 참조팝나무 추출물에 함유된 총 페놀 함량과 항산화 활성간에 높은 연계성을 가지는 결과로 사료된다.
Jung 등 (2013)이 연구한 소태나무잎 추출물의 LPS에 의해 생성된 nitric oxide 생성저해 활성에도 농도 의존적으로 생성량이 감소하는 것을 확인 하였으며, 100 ㎍/㎖의 농도에서는 약 80%, 50 ㎍/㎖의 농도에서는 약 60%의 억제능을 확인하여 본 실험결과와 유사한 활성을 나타냄을 확인하였다. 따라서, 참조팝나무 추출물의 농도가 증가함에 따라 NO 생성저해율 증가가 확인됨으로서 이를 이용한 천연물 유래 항염증 물질로 이용가능성을 확인하였다.
따라서, 동규자오일은 염증을 유발하는 다양한 사이토카인중 NO와 iNOS을 조절하는 메커니즘으로 항염증효과를 갖는다는 것을 확인하였다. 본 연구에서도 상기 연구의 경우와 마찬가지로 참조팝나무 추출물 NO 생성 억제 효과는 COX-2발현 보다는 iNOS 발현에 기인하는 하는 것으로 사료된다.
최종농도 처리시 iNOS와 COX-2를 발현억제능을 비교하였을때 2배정도의 억제능 차이를 나타내었다. 상기 결과를 Oh 등 (2014)이 연구한 동규자오일의 항염증 활성을 확인한 결과와 비교하였을 때 동규자 오일을 250 ㎍/㎖ 농도로 처리시 약 90%의 NO 억제 활성을 확인하였으며, iNOS의 발현은 약 32%가 억제되었으나 COX-2의 경우 발현 억제를 확인할 수 없었다. 따라서, 동규자오일은 염증을 유발하는 다양한 사이토카인중 NO와 iNOS을 조절하는 메커니즘으로 항염증효과를 갖는다는 것을 확인하였다.
이에 본 연구에서는 LPS에 의해 유도된 iNOS와 COX-2 발현에 있어 참조팝나무 추출물의 발현 억제능을 확인하고자 RT-PCR을 이용하여 그 발현정도를 확인하였다. 실험은 앞서 수행한 세포 생존률을 기준으로 1 - 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 실험결과 iNOS와 COX-2 모두 일정농도 이상에서 발현도가 감소함을 확인하였다 (Fig. 3). RAW 264.
iNOS의 경우 시료를 10 ㎍/㎖ 농도로 처리한 후 시료 무처리구와 비교하였을 때약 20%정도 발현 억제능을 보였다. 이후 시료 농도가 증가함에 따라 뚜렷한 iNOS 발현 억제능을 확인하였으며 최종농도 200 ㎍/㎖의 농도에서 시료 무처리구 대비 약 45%정도의 발현 억제능을 확인하였다. 이는 앞서 연구한 NO 생성 조절에 미치는 영향과 매우 유사한 패턴으로서 참조팝나무 추출물은 iNOS-NO 조절 경로를 거친다는 것을 확인하였다.
시료에 대한 항산화 활성은 DPPH free radical을 50% 억제하는데 필요한 시료의 농도 (RC₅₀)로 표기하였다. 참조팝나무 추출물은 76.61 ㎍/㎖의 농도에서 RC₅₀값을 나타내었으며, 대조군으로 사용된 ascorbic acid에서는 5.37 ㎍/㎖, BHT 15.66 ㎍/㎖의 농도에서 RC₅₀값을 확인하였다 (Table 2). 참조팝나무 추출물을 대조군과 비교하였을 때 약 3배정도의 RC₅₀값 차이를 보이나 특정물질을 단리하지 않은 조 추출물임을 감안하였을 때 높은 항산화 활성을 가지고 있다고 판단된다.
, 2008). 참조팝나무 추출물을 25- 500 ㎍/㎖ 농도로 설정하여 환원력을 측정한 결과 시료 농도가 높아짐에 따라 Abs 0.13 - 1.8로 흡광도 값이 농도 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다 (Fig. 1). 이는 100 ㎍/㎖ 농도에서 대조군으로 사용된 BHT (Abs 0.
66 ㎍/㎖의 농도에서 RC₅₀값을 확인하였다 (Table 2). 참조팝나무 추출물을 대조군과 비교하였을 때 약 3배정도의 RC₅₀값 차이를 보이나 특정물질을 단리하지 않은 조 추출물임을 감안하였을 때 높은 항산화 활성을 가지고 있다고 판단된다. Kim 등 (2012)이 연구한 감나무를 포함하는 40여종의 자생식물과 생약자원 추출물에서 항산화 활성이 일반적으로 1,000 ppm에서 10 - 80%의 radical 소거능을 가지고 있다고 보고되었으며, 본 연구 결과를 ppm으로 계상하였을 경우 약 70 ppm의 농도에서 50%의 radical 소거능을 나타내어 기타 자생식물과의 항산화 활성을 비교하였을 때 높은 활성을 가지고 있음을 확인하였다.
참조팝나무 추출물의 총 페놀함량은 212.78 ㎍ • GAE/㎎의 함량을 나타내었으며, 플라보노이드 함량의 경우 66.84 ㎍ • QE/㎎의 함량을 나타내었다.
COX-2의 경우 참조팝나무 추출물을 1 - 100 ㎍/㎖로 처리하였을 때 뚜렷한 발현억제능을 나타내지 않았으나 최종농도 200 ㎍/㎖로 처리시 무처리구 대비 약 20%의 발현 억제능을 확인하였다. 최종농도 처리시 iNOS와 COX-2를 발현억제능을 비교하였을때 2배정도의 억제능 차이를 나타내었다. 상기 결과를 Oh 등 (2014)이 연구한 동규자오일의 항염증 활성을 확인한 결과와 비교하였을 때 동규자 오일을 250 ㎍/㎖ 농도로 처리시 약 90%의 NO 억제 활성을 확인하였으며, iNOS의 발현은 약 32%가 억제되었으나 COX-2의 경우 발현 억제를 확인할 수 없었다.
2B와 같이 확인되었다. 추출물 10 ㎍/㎖ 농도에서 약 60%의 NO 생성저해율을 확인하였으며, 최종 농도 200 ㎍/㎖에서 90%의 높은 NO 생성저해율을 나타내었다. Jung 등 (2013)이 연구한 소태나무잎 추출물의 LPS에 의해 생성된 nitric oxide 생성저해 활성에도 농도 의존적으로 생성량이 감소하는 것을 확인 하였으며, 100 ㎍/㎖의 농도에서는 약 80%, 50 ㎍/㎖의 농도에서는 약 60%의 억제능을 확인하여 본 실험결과와 유사한 활성을 나타냄을 확인하였다.

후속연구

Jeoung 등 (2009)의 논문에서 평소 iNOS는 세포 내에 존재하지 않지만 발행할 경우 오랜 시간 동안 많은 양의 NO를 생성하게 되고 염증매개체의 생합성을 촉진함으로서 염증을 유발시키는데, NO와 iNOS의 발현 증가가 염증반응을 유발한다는 보고가 있음을 언급함으로서 참조팝나무의 iNOS 발현억제능이 NO 생성을 저해하며 결과적으로 항염증 활성을 가지고 있음을 확인하였다. 따라서, 본 결과를 바탕으로 참조팝나무 추출물을 이용하여 염증질환 및 관련 분야에 대한 지속적인 연구의 필요성이 요구되는 바이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	참조팝나무는 무엇인가?	참조팝나무 (Spiraea fritschiana Schneid)는 장미과에 속하며 우리나라 중부 이북의 산중턱 이상이나 산골짜기에서 나는 낙엽 관목으로 반그늘 혹은 양지의 토양 비옥도가 높은 곳에서 성장한다. Byeon 등 (2014)이 발표한 바에 따르면 백두대간 갈전곡봉 등에서 생육이 확인되었으며, 국내 관속식물상 연구 및 삽목시기 등의 생장연구 등이 보고되었으나 1967년도에 참조팝나무의 alkaloid에 관한보고 이외에 그 기능성이 명확히 보고된바 없다 (Oh et al.
	활성산소종은 무엇이며 어떤 위험성을 지니고 있는가?	인체의 노화와 질병 발생 원인은 매우 다양하지만 가장 많이 논거되는 것이 활성산소종 (Reactive oxygen species, ROS) 이다. 이는 과산화수소, superoxide anion, hydroxyl radical과 같은 정상적인 대사과정 중에서 발생되는 free radical들로 인체내 지질, 단백질, DNA 효소를 파괴하여 염증, 피부 노화, 암 등의 세포조직의 심각한 손상을 야기한다고 알려져 있다. 과도한 활성산소의 생성은 NO의 축적을 야기하면서 대식세포의지나친 활성 및 염증의 과활성화를 유발하게 된다 (Song and Lee, 2015).
	조팝나무의 효능은 무엇인가?	, 2011; Jin, 1967). 동일한 Spiraea 속인 조팝나무 (Spiraea prunifolia)의경우 예부터 중국 등지에서 어린잎이나 과실, 뿌리를 이뇨제, 해독제, 염증 치료제 및 진통제로서 사용되었다는 보고가 된바 있으나, 참조팝나무에 경우 식용 및 약리적 이용이 명확히 보고된바 없다 (Park, 2013).

참고문헌 (34)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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