Objectives: The purpose of this study was to identify the inhibitory effects of Hwangheuk-san (HHS), a Korean multi-herb formula comprising four medicinal herbs, on cell migration and invasion, two critical cellular processes that are often deregulated during metastasis, using the human bladder canc...
Objectives: The purpose of this study was to identify the inhibitory effects of Hwangheuk-san (HHS), a Korean multi-herb formula comprising four medicinal herbs, on cell migration and invasion, two critical cellular processes that are often deregulated during metastasis, using the human bladder cancer 5637 cell line.Methods: Cell viability, motility, and invasion were assessed by 3-(4,5-dimethyl-2 thiazolyl)-2,5-diphnyl-2H-tetrazolium bromide (MTT), wound healing migration, and Transwell assays, respectively. Gene expression was detected by Western blot analysis. In addition, the activities of matrix metalloproteinases (MMPs) and the values for transepithelial electrical resistance (TER) were analyzed using a Gelatinase Activity Assay Kit and an Epithelial Tissue Voltohmmeter, respectively.Results: Our data indicated that within the concentration range that was not cytotoxic, HHS effectively inhibited the cell motility and invasiveness of 5637 cells. HHS markedly decreased the expression and activity of MMP-2 and MMP-9, which was associated with unregulation of tissue inhibitors of metalloproteinase (TIMP)-1 and TIMP-2. Further investigation revealed that phosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and AKT was decreased in HHS-treated 5637 cells, and a PI3K/AKT inhibitor synergistically reduced the inhibition of migration and invasion and also inactivated MMP-2 and MMP-9. Moreover, HHS increased the tightening of tight junctions (TJs), which was demonstrated by an increase in the TER, and reduced the expression the levels of claudin family members (claudin-3 and -4), which are major components involved in the tightening of TJs.Conclusions: The present findings demonstrated that HHS attenuated the migration and invasion of bladder cancer 5637 cells by modulating the activity of the PI3K/Akt signaling pathway and also through TJ tightening.
Objectives: The purpose of this study was to identify the inhibitory effects of Hwangheuk-san (HHS), a Korean multi-herb formula comprising four medicinal herbs, on cell migration and invasion, two critical cellular processes that are often deregulated during metastasis, using the human bladder cancer 5637 cell line.Methods: Cell viability, motility, and invasion were assessed by 3-(4,5-dimethyl-2 thiazolyl)-2,5-diphnyl-2H-tetrazolium bromide (MTT), wound healing migration, and Transwell assays, respectively. Gene expression was detected by Western blot analysis. In addition, the activities of matrix metalloproteinases (MMPs) and the values for transepithelial electrical resistance (TER) were analyzed using a Gelatinase Activity Assay Kit and an Epithelial Tissue Voltohmmeter, respectively.Results: Our data indicated that within the concentration range that was not cytotoxic, HHS effectively inhibited the cell motility and invasiveness of 5637 cells. HHS markedly decreased the expression and activity of MMP-2 and MMP-9, which was associated with unregulation of tissue inhibitors of metalloproteinase (TIMP)-1 and TIMP-2. Further investigation revealed that phosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and AKT was decreased in HHS-treated 5637 cells, and a PI3K/AKT inhibitor synergistically reduced the inhibition of migration and invasion and also inactivated MMP-2 and MMP-9. Moreover, HHS increased the tightening of tight junctions (TJs), which was demonstrated by an increase in the TER, and reduced the expression the levels of claudin family members (claudin-3 and -4), which are major components involved in the tightening of TJs.Conclusions: The present findings demonstrated that HHS attenuated the migration and invasion of bladder cancer 5637 cells by modulating the activity of the PI3K/Akt signaling pathway and also through TJ tightening.
본 연구에서는 5637 방광암세포를 이용하여 암전이의 주요 과정인 암세포의 이동성 및 침윤성에 미치는 황흑산 추출물의 효능에 관하여 조사하였다. 황흑산 추출물은 세포독성이 없는 범위에서 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성을 효과적으로 억제하였다.
본 연구에서는 암세포의 전이 억제를 위한 한약 처방전 발굴 및 효능 검증을 위하여 황흑산 추출물에 의한 인체 방광암세포(5637)의 전이 억제 효과와 관련된 기전 해석을 시도하였다. 이를 위하여 황흑산 추출물이 암세포의 전이 억제 여부를 평가하는 중요한 기준인 암세포의 이동성과 침윤성에 미치는 영향을 먼저 조사하였고, 암세포의 전이를 위한 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)의 분해에 결정적인 역할을 하는 금속단백분해효소(matrix metalloproteinases, MMPs)의 활성에 미치는 영향, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt 신호계에 미치는 영향과 세포 간 다양한 junction 중에서 세포와 세포 사이의 결합력 유지에 관여하는 tight junction (TJ)의 견고성에 미치는 영향을 조사하였다.
제안 방법
5637 방광암세포의 증식에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 조사하기 위하여 적정 농도의 황흑산 추출물이 처리된 배지에서 5637 방광암세포를 24시간 배양 후 MTT assay를 실시하였다. 그 결과 황흑산 추출물이 첨가된 배지에서 24시간 배양된 5637 방광암세포의 생존율이 500 μg/ml 처리군까지는 유의한 변화가 나타나지 않았으나, 800 μg/ml 이상의 처리군에서는 대조군에 비하여 다소 유의한 세포독성 효과가 관찰되었다(Fig.
PI3K/Akt 신호계와 황흑산 추출물에 의한 이동성 및 침윤성 억제 사이의 연관성을 조사하기 위하여 먼저 PI3K 및 PI3K의 하위 조절 단백질에 해당되는 Akt의 활성에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 각각 두 단백질의 인산화 정도로 평가하였다. PI3K와 Akt의 총 단백질의 발현 변화에는 황흑산 추출물이 큰 변화를 주지 못하였지만, 황흑산 추출물 처리 농도의 증가에 따라 두 단백질의 인산화 수준은 매우 감소되었다(Fig.
특히 최근 몇몇 연구들에서 방광암세포의 이동성과 침윤성의 억제는 PI3K/Akt 신호계와 MMPs 활성의 억제가 관련이 있음을 보여 주었는데19,20, 이는 PI3K/Akt 신호계의 억제제는 특정 항암활성을 가지는 물질들의 항전이 효능을 증대시킬 수 있음을 의미한다. 따라서 PI3K/Akt 신호계의 활성 차단이 황흑산 추출물 처리에 따른 MMP-2와 -9 활성의 감소뿐만 아니라, 이동성과 침윤성의 억제에 영향을 미치는지를 조사하였다. 이를 위하여 PI3K/Akt 신호계의 활성에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 먼저 조사한 결과, 이들 신호계의 활성 정도를 의미하는 PI3K 및 Akt 단백질의 인산화형 발현이 황흑산 추출물 처리 농도에 따라 억제되었으나, 이들의 총 단백질 발현은 큰 변화가 없었다(Fig.
1). 따라서 세포독성을 나타내지 않았던 농도 중, 500 μg/ml 이하의 조건에서 이동성 및 침윤성에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 조사하였다.
본 연구에서는 암세포의 전이 억제를 위한 한약 처방전 발굴 및 효능 검증을 위하여 황흑산 추출물에 의한 인체 방광암세포(5637)의 전이 억제 효과와 관련된 기전 해석을 시도하였다. 이를 위하여 황흑산 추출물이 암세포의 전이 억제 여부를 평가하는 중요한 기준인 암세포의 이동성과 침윤성에 미치는 영향을 먼저 조사하였고, 암세포의 전이를 위한 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)의 분해에 결정적인 역할을 하는 금속단백분해효소(matrix metalloproteinases, MMPs)의 활성에 미치는 영향, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt 신호계에 미치는 영향과 세포 간 다양한 junction 중에서 세포와 세포 사이의 결합력 유지에 관여하는 tight junction (TJ)의 견고성에 미치는 영향을 조사하였다.
이에 본 연구에서는 황흑산에 대한 기존의 문헌, 연구 등에서 밝혀진 항암, 항산화, 항염증, 항균 효과 등을 바탕으로 하여, 황흑산 추출물의 효능을 5637 방광암 세포를 대상으로 조사하였다. 세포독성을 보이지 않는 범위의 황흑산 추출물 처리 농도 범위를 설정하였고, 황흑산 추출물이 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성을 현저하게 억제하였음을 먼저 확인할 수 있었다(Fig.
황흑산 추출물 처리에 따른 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성 억제가 TJ의 기능 강화와 관련이 있는지를 조사하기 위하여 TJ의 견고성의 측도로 사용되는 TER 값과 TJ의 주된 구성 단백질인 claudin family 인자들의 변화를 조사하였다. 황흑산 추출물 처리 농도의 증가에 따라 TER 값이 유의하게 증가하였으며(Fig.
황흑산 추출물 처리에 따른 PI3K/Akt 신호계의 비활성화가 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성 억제와 관련이 있는지를 조사하기 위하여 황흑산 추출물(200 μg/ml)과 PI3K 활성의 선택적 저해제인 LY294002(20 mM)를 동시에 처리한 후, 이동성 및 침윤성의 정도를 비교하였다. Fig.
대상 데이터
본 실험에서 사용한 황흑산(Hwangheuk-san, HHS; Table 1)의 4가지 구성 한약재는 대한생약(주) (부산, 한국)에서 건조된 상태로 구입하였다. 각 한약재를 세절한 후 약재 무게의 10배에 해당하는 증류수로 100 ℃에서 3시간 동안 추출하여 사용하였다.
본 연구에 사용된 5637 방광암세포는 American Type Culture Collection(Rockville, MD, USA)에서 구입하였으며, 10% fetal bovine serum(FBS, Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA) 및 1% penicillin-streptomycin이 함유된 RPMI 1640 배지를 사용하여 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 세포수의 과도한 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위하여 성장배지의 교환을 매 48시간마다 실시하여 적정수의 세포를 유지하였다.
이론/모형
황흑산 추출물 처리에 따른 TJ의 견고성을 의미하는 상피세포 전기 저항성(transepithelial electrical resistance, TER) 값의 변화를 조사하기 위하여 STX-2 chopstick electrode가 짝으로 형성된 EVOM Epithelial Tissue Voltohmmeter(World Precision Instruments, FL, USA)를 이용하였다. 이를 위하여 5637 방광암세포를 Transwell®(Corning Costar Corp.
황흑산 추출물 처리에 의한 5637 방광암세포의 증식억제 정도를 확인하기 위하여 3-(4,5-dimethyl-2 thiazolyl)-2,5-diphnyl-2H-tetrazolium bromide(MTT) assay를 이용하였다. 이를 위하여 6 well plate에 5637 세포를 2×105개/ml 씩 분주한 다음 24시간 배양한 후 적정 농도의 황흑산 추출물을 24시간 동안 처리하였다.
성능/효과
또한 황흑산 추출물은 처리 농도에 따라 조사된 2종류의 claudin family(-3및 -4)의 단백질 발현을 억제하여(Fig. 8) 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성의 억제는 TJ의 견고성 강화와 밀접한 관련이 있음을 보여주었다.
Wound healing migration에 의한 5637 방광암세포의 이동성에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 조사한 결과, 정상배지에 배양된 세포에 비하여 황흑산 추출물이 처리된 배지에서 배양된 5637 방광암세포에서 wounded 영역으로의 이동성은 억제되었다(Fig. 2A).
황흑산 추출물은 또한 MMP-2 및 MMP-9의 발현과 활성을 저해함과 동시에 TIMP-1과 TIMP-2의 발현을 증가시켰으며, 이는 PI3K/Akt 신호계의 활성 억제와 연관이 있었다. 그리고 황흑산 추출물은 PI3K 활성 억제제로써 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성 억제뿐만 아니라 MMP-2 및 -9의 활성을 더 감소시켰다. 또한 황흑산 추출물은 TJs의 주요 구성인자인 claudin family 단백질(claudin-3 및 -4)의 발현을 억제하였으며, 이는 TJ의 전기적 저항성의 증대와 연관이 있었다.
기존의 황흑산 추출물에 대한 연구들은 항암활성, 항산화, 항염증, 항균활성 등의 효과8,9를 밝힌 것에 더 나아가, 본 연구에서는 이상의 결과를 토대로 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성의 억제는 TJ의 견고성 유지와 TIMPs의 발현 증가에 의한 MMPs의 발현과 활성의 억제에 의한 것임을 보여주었다. 또한 claudin family 단백질의 발현을 억제시킴으로써 방광암뿐만 아니라, 더 나아가 다른 각종 암세포 전이 억제에 황흑산 추출물이 효과가 있을 것으로 추정할 수 있다.
6). 따라서 이러한 결과는 황흑산 추출물 처리에 의한 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성의 억제가 MMPs 저해 효능과 PI3K/Akt 신호계 활성의 동시 차단에 의한 것임을 의미한다.
이러한 결과는 황흑산 추출물이 TJ의 견고성과 함께 claudin 단백질들이 암세포의 전이성 획득의 검출과 진단을 위한 biomarker로서의 활용 가능성을 보여주는 것이다. 따라서 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성 저해 효과가 TJ의 기능 변화와 관련이 있는지를 조사하기 위하여 TJ의 견고성을 나타내는 TER의 값30에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 먼저 조사한 결과, TER 값은 황흑산 추출물 처리 농도에 따라 유의하게 증가되어 5637 방광암세포의 TJ의 견고성을 증가시켰음을 보여주었다(Fig. 7).
또한 황흑산 추출물은 TJs의 주요 구성인자인 claudin family 단백질(claudin-3 및 -4)의 발현을 억제하였으며, 이는 TJ의 전기적 저항성의 증대와 연관이 있었다. 따라서 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 전이능 억제는 PI3K/Akt 신호계의 활성 저하와 TJ의 견고성 증대와 관련이 있음을 알 수 있었다.
그리고 황흑산 추출물은 PI3K 활성 억제제로써 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성 억제뿐만 아니라 MMP-2 및 -9의 활성을 더 감소시켰다. 또한 황흑산 추출물은 TJs의 주요 구성인자인 claudin family 단백질(claudin-3 및 -4)의 발현을 억제하였으며, 이는 TJ의 전기적 저항성의 증대와 연관이 있었다. 따라서 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 전이능 억제는 PI3K/Akt 신호계의 활성 저하와 TJ의 견고성 증대와 관련이 있음을 알 수 있었다.
특히 gelatinase type에 속하는 MMP-2와 -9는 효소로서 암세포의 침윤과 전이에 가장 중요한 요소로 인식되어 있으며16, MMPs는 TIMPs와의 복합체 형성을 통하여 이들 활성이 억제된다17. 본 연구의 결과에 의하면 황흑산 추출물 처리 농도의 증가에 따라 TIMP-1와 TIMP-2의 발현은 증가하였으며, MMP-2 및 MMP-9의 발현이 모두 감소하였고 그들의 효소적 활성도 유의하게 억제되었다(Fig. 3).
이에 본 연구에서는 황흑산에 대한 기존의 문헌, 연구 등에서 밝혀진 항암, 항산화, 항염증, 항균 효과 등을 바탕으로 하여, 황흑산 추출물의 효능을 5637 방광암 세포를 대상으로 조사하였다. 세포독성을 보이지 않는 범위의 황흑산 추출물 처리 농도 범위를 설정하였고, 황흑산 추출물이 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성을 현저하게 억제하였음을 먼저 확인할 수 있었다(Fig. 1 및 2).
4). 아울러 PI3K/Akt 신호계 억제제(LY294002)와 황흑산 추출물이 동시 처리된 5637 방광암세포에서 이동성과 침윤성이 더욱 억제되었으며(Fig. 5), 이는 MMP-2 및 MMP-9 활성의 효과적인 차단과 관련이 있었다(Fig.
따라서 PI3K/Akt 신호계의 활성 차단이 황흑산 추출물 처리에 따른 MMP-2와 -9 활성의 감소뿐만 아니라, 이동성과 침윤성의 억제에 영향을 미치는지를 조사하였다. 이를 위하여 PI3K/Akt 신호계의 활성에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 먼저 조사한 결과, 이들 신호계의 활성 정도를 의미하는 PI3K 및 Akt 단백질의 인산화형 발현이 황흑산 추출물 처리 농도에 따라 억제되었으나, 이들의 총 단백질 발현은 큰 변화가 없었다(Fig. 4).
3). 즉 황흑산 추출물 처리에 따른 MMP-2와 MMP-9의 효소 활성 저하는 TIMPs의 발현 증가와 동반된 MMP-2 및 MMP-9의 발현 억제에 의한 것임을 의미하는 결과이며, 황흑산 추출물의 TIMPs 발현 증가와 동반된 MMPs의 생성 및 활성 억제는 ECM의 분해를 차단함으로써 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성을 억제하였을 것으로 추정된다.
황흑산 추출물은 세포독성이 없는 범위에서 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성을 효과적으로 억제하였다. 황흑산 추출물은 또한 MMP-2 및 MMP-9의 발현과 활성을 저해함과 동시에 TIMP-1과 TIMP-2의 발현을 증가시켰으며, 이는 PI3K/Akt 신호계의 활성 억제와 연관이 있었다. 그리고 황흑산 추출물은 PI3K 활성 억제제로써 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성 억제뿐만 아니라 MMP-2 및 -9의 활성을 더 감소시켰다.
본 연구에서는 5637 방광암세포를 이용하여 암전이의 주요 과정인 암세포의 이동성 및 침윤성에 미치는 황흑산 추출물의 효능에 관하여 조사하였다. 황흑산 추출물은 세포독성이 없는 범위에서 5637 방광암세포의 이동성과 침윤성을 효과적으로 억제하였다. 황흑산 추출물은 또한 MMP-2 및 MMP-9의 발현과 활성을 저해함과 동시에 TIMP-1과 TIMP-2의 발현을 증가시켰으며, 이는 PI3K/Akt 신호계의 활성 억제와 연관이 있었다.
후속연구
또한 claudin family 단백질의 발현을 억제시킴으로써 방광암뿐만 아니라, 더 나아가 다른 각종 암세포 전이 억제에 황흑산 추출물이 효과가 있을 것으로 추정할 수 있다. 이는 방광암세포만의 특이한 현상이라고는 할 수 없으므로, 향후 암세포 전이 억제에 핵심적인 역할을 하는 황흑산 추출물의 생리활성 성분 규명과 동물 실험을 포함한 추가 연구가 필요할 것이다.
선행 연구들에 의하면, 비록 어떤 claudin 단백질들이 일부 전이성 암세포에서는 발현이 저해되어 있지만25,26, 방광암을 포함한 다른 많은 암 조직에서 특히 claudin-3과 -4 발현은 현저히 증가되어 있으며27,28, 특히 난소암의 경우에 claudin-3과 -4가 발현이 증가 되어있었고, 이들 단백질을 차단하였을 경우 암세포의 침윤성이 억제되었다는 것이 보고된 바 있다29. 이러한 결과는 황흑산 추출물이 TJ의 견고성과 함께 claudin 단백질들이 암세포의 전이성 획득의 검출과 진단을 위한 biomarker로서의 활용 가능성을 보여주는 것이다. 따라서 황흑산 추출물에 의한 5637 방광암세포의 이동성 및 침윤성 저해 효과가 TJ의 기능 변화와 관련이 있는지를 조사하기 위하여 TJ의 견고성을 나타내는 TER의 값30에 미치는 황흑산 추출물의 영향을 먼저 조사한 결과, TER 값은 황흑산 추출물 처리 농도에 따라 유의하게 증가되어 5637 방광암세포의 TJ의 견고성을 증가시켰음을 보여주었다(Fig.
참고문헌 (30)
김형진, 윤상민, 서성일. 방광암의 역학, 원인 및 병인. Korean J Uro-Oncol 2005;3(1):1-11.
Kirkali Z, Cahn T, Manoharan M, Algaba F, Busch C, Cheng L, et al. Bladder Cancer: Epidemiology, staging and grading, and diagnosis. Urology 2005;66(6 suppl 1):4-34.
Jung KW, Won YJ, Kong HJ, Oh CM, Cho H, Lee DH, et al. Cancer statstics in Korea: Incidence, Mortality, Survival, and Prevalence in 2012. Cancer Res Treat 2015;47(2):127-41.
Peter S. Bladder cancer: Atezolizumab effective against advanced-stage disease. Nat Rev Urol 2016(published online). http://dx.doi.org/10.1038/nrurol.2016.60.
Lee DH, Kim SS, Seong S, Woo CR, Han JB. A case of metastatic bladder cancer in both lungs treated with korean medicine therapy alone. Case Rep Oncol 2014;7(2):534-40.
Hong SH, Park C, Kim KM, Choi YH. Induction of apoptosis by Hwangheuk-san in AGS human gastric carcinoma cells through the generation of reactive oxygen species and activation of caspases. Journal of Life Science 2015;25(11):1235-43.
Lee MH, Lee JW, Park C, Han MH, Hong SH, Choi YH. Antioxidant, antimicrobial and anticancer properties of seven traditional herb-combined remedies. Journal of Life Science 2015;25(4): 406-15.
Ma YS, Hsiao YP, Lin JH, Hsu SC, Chueh FS, Weng SW, et al. Crude extract of Rheum palmatum L inhibits migration and invasion of LS1034 human colon cancer cells acts through the inhibition of matrix metalloproteinase-2/-9 by MAPK signaling. Environ Toxicol 2015; 30(7):852-63.
Mohammadparast B, Rustaiee AR, Rasouli M, Zardari S, Agrawal V. In vitro enhancement of psoralen as an important anticancer compound in Psoralea corylifolia through precursor feeding. Pharm Biol 2015;53(5):735-8.
Sohn HY, Shin YK, Kim JS. Anti-Proliferative activities of solid-state fermented medicinal herbs using Phellinus baumii against Human Colorectal HCT116 Cell. Journal of Life Science 2010;20(8):1268-75.
Sun Q, Liu K, Shen X, Jin W, Jiang L, Sheikh MS, et al. Lappaol F, a novel anticancer agent isolated from plant Arctium Lappa L. Mol Cancer Ther 2014;13(1):49-59.
Mook OR, Frederiks WM, Van Noorden CJ. The role of gelatinases in colorectal cancer progression and metastasis. Biochim Biophys Acta 2004;1705(2):69-89.
Lambert E, Dasse E, Haye B, Petitfrere E. TIMPs as multifacial proteins. Crit Rev Oncol Hematol 2004;49(3):187-98.
Ferretti C, Bruni L, Dangles-Marie V, Pecking AP, Bellet D. Molecular circuits shared by placental and cancer cells, and their implications in the proliferative, invasive and migratory capacities of trophoblasts. Hum Reprod Update 2007;13(2):121-41.
Jayasooriya RG, Choi YH, Moon SK, Kim WJ, Kim GY. Methanol extract of Hydroclathrus clathratus suppresses matrix metalloproteinase-9 in T24 bladder carcinoma cells by suppressing the NF-κB and MAPK pathways. Oncol Rep 2012;27(2):541-6.
Cho TM, Kim WJ, Moon SK. AKT signaling is involved in fucoidan-induced inhibition of growth and migration of human bladder cancer cells. Food Chem Toxicol 2014;64:344-52.
Soler AP, Miller RD, Laughlin KV, Carp NZ, Klurfeld DM, Mullin JM. Increased tight junctional permeability is associated with the development of colon cancer. Carcinogenesis 1999;20(8):1425-31.
Kominsky SL, Argani P, Korz D, Evron E, Raman V, Garrett E, et al. Loss of the tight junction protein claudin-7 correlates with histological grade in both ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma of the breast. Oncogene 2003;22(13):2021-33.
Boireau S, Buchert M, Samuel MS, Pannequin J, Ryan JL, Choquet A, et al. DNA-methylation-dependent alterations of claudin-4 expression in human bladder carcinoma. Carcinogenesis 2007; 28(2):246-58.
Agarwal R, D’Souza T, Morin PJ. Claudin-3 and claudin-4 expression in ovarian epithelial cells enhances invasion and is associated with increased matrix metalloproteinase-2 activity. Cancer Res 2005;65(16):7378-85.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.