[논문]청아지황탕(靑蛾地黃湯)의 RAW264.7 Cell에서 항산화 및 항염증 효능 연구

윤정원; 김순중; 박동수

doi:10.18325/jkmr.2016.26.3.51

[국내논문] 청아지황탕(靑蛾地黃湯)의 RAW264.7 Cell에서 항산화 및 항염증 효능 연구
Anti-Oxidative and Anti-Inflammatory Effects of Cheongajihwang-Tang Extract on RAW264.7 Cells 원문보기

Journal of Korean Medicine Rehabilitation : JKMR = 한방재활의학과학회지, v.26 no.3, 2016년, pp.51 - 58

윤정원 (세명대학교 한의과대학 한방재활의학과교실) , 김순중 (세명대학교 한의과대학 한방재활의학과교실) , 박동수 (세명대학교 한의과대학 한방재활의학과교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives This study was designed to investigate whether the Cheongajihwang-Tang (CT) has an inhibitory effect association with oxidation or inflammation in RAW264.7 cells. Methods Cytotoxic activity of CT extract on RAW264.7 cells was evaluated by using 3-[4, 5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution. Nitric oxide production was measured using Griess reagent system. The total phenolic contents and 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was measured to evaluate the anti-oxidative effects of CT. Dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) has been used as a substrate for measuring intracellular oxidant production. Results Cheongajihwang-Tang does not impair the cell viability in tested concentration. CT showed anti-oxidative effects in vitro by decreasing electron donating ability, and also showed anti-inflammatory effects suppressing NO and ROS expression in LPS induced RAW264.7 activation. CT inhibited the generation of intracellular ROS production as dose dependant manner. Conclusions CT has anti-oxidative effects and anti-inflammatory activities. These results indicate that CT extract has an anti-inflammatory activities via anti-oxidative effects.

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AI 본문요약
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문제 정의

이에 저자는 靑蛾地黃湯도 靑蛾丸과 六味地黃湯 같이 항산화 및 항염 효과가 있을 것이라고 기대하여 이를 밝히고자 LPS로 염증이 유도된 RAW264.7 mouse macrophage cell line을 이용하여 靑蛾地黃湯 추출물이 나타내는 염증 억제반응을 관찰하였으며, 유효한 결과가 있었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

본 연구에서는 靑蛾地黃湯의 항산화 및 항염증 효능에 미치는 영향을 알아보기 위하여 총 polyphenol 함량, DPPH free radical 소거능, NO 생성 억제 효과, ROS 생성 억제 효과를 평가하였다.

대상 데이터

본 실험에 사용한 靑蛾地黃湯(이하 CT라 한다)은 에이치맥스(제천, 대한민국)으로부터 구입하여 사용하였다. 처방의 구성과 용량은 다음과 같다(Table I).
실험에 사용된 세포는 mouse macrophage RAW 264.7 cell line으로 한국 세포주 은행(KLCB, Korea)에서 구입하였다.

데이터처리

)로 표현하였다. 대조군 및 실험군 간의 통계적 유의성은 일원 분산 분석(one-way ANOVA with Dunnett's post hoc test)을 통해 확인하였다. 모든 그래프에서 p 값은 0.

이론/모형

조건의 incubator에서 18시간 배양하였다. 이후 부착된 각 세포들에 추출물을 농도별로 처리하고, 1시간 뒤 5μg/ml의 농도인 LPS를 처리하여 24시간 처리 하였고 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay 방법으로 분석하였다. 이는 Carmichaeal 등의 방법²⁰⁾을 응용하였다.

성능/효과

NO 생성 억제 효능을 측정한 결과 본 연구에서 LPS 단독으로 처리한 경우 NO 생성이 상승함을 확인하였고 CT을 농도별로 처리한 결과 농도의존적 경향으로 NO 생성을 억제하였다. 또한 대조군 CT0군의 NO 생성량과 비교하였을 때 통계적으로 유의한 NO 생성 억제 효과를 나타내었다.
세포내 생성된 ROS는 비형광을 나타내는 DCF-DA를 산화 시켜 형광물질인 DCF로 전환시키는데 이렇게 전환된 형광물질의 양이 ROS의 양을 나타낸다⁴²⁾. 본 실험에서 역시 LPS에 의해 유도된 ROS 생성 억제 효능을 측정하기 위해 CT을 농도별로 처리한 결과 대조군(CT0)과 비교하여 통계적으로 유의한 그리고 농도 의존적으로 ROS 생성을 억제하였다.
이상의 실험결과 靑蛾地黃湯은 항산화 과정에 의한 항염증 효능이 있음을 관찰할 수 있었다.

후속연구

다만, 靑蛾丸과 六味地黃湯을 연구한 논문에서는 쥐의 신장과 뇌조직에서 peroxynitrite (ONOO^- )의 제거능, superoxide dismutase (SOD) 및 glutathione peroxidase (GSH)와 같은 항산화 효소의 활성 등을 측정하여^12-16) 본 실험에서의 항산화 및 항염 효과 측정 방법과 달라 靑蛾地黃湯과 비교분석을 할 수 없는 한계점을 보인다. 향후 연구에서 실험 방법을 통일한다면 합방하기 전과 후의 처방 효과를 비교해 볼 수 있는 좋은 연구가 될 것이다.
이상의 연구 결과를 종합하면, 靑蛾地黃湯은 항산화 효과가 있으며 이로 인한 유효한 항염증 효과를 나타내, 염증을 동반하여 나타나는 다양한 만성 퇴행성 질병의 연구에 응용될 수 있으리라 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	염증성 반응은 어떻게 나눌 수 있는가?	염증은 병원균 침입이나 조직 손상에 의해 일어나는 선천적 면역 반응으로 다양한 면역 세포에 의해 진행되는 복합적인 과정이다1). 염증성 반응은 크게 급성 반응과 만성 반응으로 나눌 수 있는데, 장기간 지속되는 만성 염증의 경우 노화로 인한 파킨슨질환, 노인성 치매, 류마티스 관절염, 동맥경화와 같은 다양한 질환들의 원인이 된다2) .
	염증이란?	염증은 병원균 침입이나 조직 손상에 의해 일어나는 선천적 면역 반응으로 다양한 면역 세포에 의해 진행되는 복합적인 과정이다1). 염증성 반응은 크게 급성 반응과 만성 반응으로 나눌 수 있는데, 장기간 지속되는 만성 염증의 경우 노화로 인한 파킨슨질환, 노인성 치매, 류마티스 관절염, 동맥경화와 같은 다양한 질환들의 원인이 된다2) .
	靑蛾地黃湯 추출물의 항산화 활성이 마우스 대식세포에서의 항염증, 세포 내 활성 산소를 억제하는 연구를 수행하여 어떠한 결과를 얻었는가?	1. 靑蛾地黃湯 추출물의 폴리페놀 함량은 39.76±1.63 mg/g이다. 2. 靑蛾地黃湯 추출물의 DPPH radical 소거능은 일부 양성대조군 보다 통계적으로 유의하게 뛰어난 항산화 효과를 관찰할 수 있었다. 3. 靑蛾地黃湯 추출물은 실험농도에서 세포 생존율에 영향을 미치지 않았다. 4. 靑蛾地黃湯 추출물의 대식세포 내 NO 생성을 억제 하는 것을 확인한 결과, 농도의존적으로 유의하게 NO 생성을 억제하였다. 5. 靑蛾地黃湯 추출물은 대식세포 내 ROS 생성을 농도의존적으로 유의하게 억제하였다. 이상의 실험결과 靑蛾地黃湯은 항산화 과정에 의한 항염증 효능이 있음을 관찰할 수 있었다.

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