[논문]적송제제(PineXol®)로 부터 Taxifolin과 (+)-Catechin, Procyanidin B1의 함량분석

황윤정; 윤성혜; 안혜신; 권석형; 민복기; 윤성호; 안영은; 이민원

적송제제(PineXol®)로 부터 Taxifolin과 (+)-Catechin, Procyanidin B1의 함량분석
Quantitative Analysis of Taxifolin, (+)-Catechin and Procyanidin B1 from the Preparation of Pinus densiflora (PineXol®) 원문보기

생약학회지, v.47 no.3, 2016년, pp.246 - 250

황윤정 (중앙대학교 약학대학) , (중앙대학교 약학대학) , (중앙대학교 약학대학) , 윤성혜 (중앙대학교 약학대학) , 안혜신 (중앙대학교 약학대학) , 권석형 (노바렉스) , 민복기 (노바렉스) , 윤성호 (노바렉스) , 안영은 (노바렉스) , 이민원 (중앙대학교 약학대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Pinus densiflora contained diverse phenol compounds like flavonoid, phenylpropanoid and tannin. PineXol$^{(R)}$ is nutraceutical preparation which was treated from bark of Pinus densiflora. Validation and contents determination of taxifolin, (+)-catechin and procyanidion B1 for the preparation of Pinus densiflora (PineXol$^{(R)}$) were confirmed using High-Performance Liquid Chromatography (HPLC). As a result, content of taxifolin, (+)-catechin and procyanidin B1 were, respectively 4.90%, 2.35% and 8.19%. These analysis method and results could be used as important basic data for the preparation of Pinus densiflora.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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제안 방법

12-18)국내에서도 적송 껍질을 가공한 기능성 소재(파인엑솔, PineXol®)를 개발하였으며 본 연구에서는 파인엑솔에 함유되어 있는 taxifolin과 (+)catechin, procyanidin B1에 대한 밸리데이션과 함량평가를 시행하였다.
HPLC 조건 − 표준품인 taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1의 분석조건을 Table I과 같이 설정한 다음, 이 분석조건에 따라 각각의 시료의 validation과 정량분석 실시하였다.
검량선, 직선성(Linearity) − 직선성 평가를 위한 검량선을 얻기 위해 taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1을 혼합한 표준용액을 methanol로 희석하여 4개의 농도(1000, 500, 250, 125 μg/mL)가 되도록 용액을 만들어 실험 실시하였다. Linear regression equation(y=ax+b y: peak 면적, x: 시료 농도 a: 직선의 기울기, b: y절편)을 구하였으며 R²의 값을 통하여 직선성을 확인하였다. R²의 값이 0.
NutraPharm(주)으로부터 공급받은 파인엑솔을 column chromatography 방법으로 분리, 정제하여 얻은 taxifolin과 (+)-catechin과 본 연구실에서 보유하고 있는 procyanidin B1 표준품을 지표성분으로 설정하여 분석법을 확립하였다.
Taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1의 혼합 표준용액을 4개 농도(1000, 500, 250, 125 μg/mL)의 범위에서, 각 시료 농도당 3일간 반복성 시험, 일내 3회 반복 반복성 시험을 하였다.
검량선, 직선성(Linearity) − 직선성 평가를 위한 검량선을 얻기 위해 taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1을 혼합한 표준용액을 methanol로 희석하여 4개의 농도(1000, 500, 250, 125 μg/mL)가 되도록 용액을 만들어 실험 실시하였다.
분석 방법의 검증(Validation) − HPLC 분석방법의 정확성 및 재현성을 검증하기 위하여 KFDA(식품의약품안전처)의 「의약품등 분석법의 밸리데이션에 대한 가이드라인」에 따라서 특이성, 직선성, 정량한계, 정확성 및 정밀성 평가를 시행하였다.
이 stock solution을 희석하여 1000, 500, 250, 125 μg/mL 농도의 표준용액을 조제하였다.
정량한계(LOQ) − 분석물질의 정량이 가능한 최저농도를 확인하기 위하여 정량한계(LOQ)를 측정하였다.
정확성(Accuracy) 및 정밀성(Precision) − 동일 시료에 대하여 실험 환경 변동에 따른 결과의 변화 정도를 확인하기 위하여 정밀성 및 정확성 평가를 하였다.
Taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1의 혼합 표준용액을 4개 농도(1000, 500, 250, 125 μg/mL)의 범위에서, 각 시료 농도당 3일간 반복성 시험, 일내 3회 반복 반복성 시험을 하였다. 정확성은 표준값과 측정값 간의 일치되는 정도로 확인하였으며, 정밀성은 반복 분석하였을 때 분석물질에 대한 측정값들 사이의 근접성으로 측정하였다.
지표물질 분리 − Column chromatography이용하여 지표물질을 분리하였으며 1H 300 MHz 및 13C 150 MHz핵자기 공명 분광기를 이용하여 taxifolin과 (+)-catechin의 구조를 동정하였다.
지표성분 분리 및 정제 − 파인엑솔(130 g)을 물에 현탁해 celite로 여과한 후 Sephadex LH-20 column chromatography를 이용하여 H2O/MeOH(gradient)로 용출시켜 세부 분획으로 나누고 fraction 14를 MCI-gel CHP20P(0% MeOH→100% MeOH, gradient)를 통하여 taxifolin(2.9 g)을 분리하였으며 ODS-B gel(0% MeOH→100% MeOH, gradient)을 통하여 (+)-catechin(72 mg)을 분리하였다.
특이성(Specificity) − 지표성분이 파인엑솔 내의 다른 물질과 분리가 되는지 UV detector를 이용하여 피크의 retention time(RT)을 검토하여 확인하였다.
함량분석(Content) − Validation 과정을 통하여 확립한 HPLC 분석법으로 파인엑솔 내의 지표성분의 정량에 이용될 수 있는 충분한 감도, 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성 등을 갖고 있음을 확인하고, 검증된 분석법으로 파인엑솔의 함량을 측정하였다.

대상 데이터

19,20) Procyanidin B1은 중앙대학교 약학대학 생약학/천연물 의약품 연구실에 보유하고 있는 표준 화합물을 이용하였다.¹⁹⁾
83분에 검출되었다. 두 지표성분의 UV 흡수 파장은 280 nm로 설정하여 피크의 면적을 측정하였다.
분석에 사용된 용매는 Whatman® Membrane filters(0.45 μm, diam. 47 mm)를 이용하여 여과된 용매를 사용하였다.
재료 − 본 실험에 사용된 파인엑솔(적송 수피 추출물)은 NutraPharm(주)으로부터 공급 받아 사용하였다.

데이터처리

기울기 S는 분석물질의 검량선으로부터 구하여 회귀직선에서 y절편의 표준편차를 표준편차 σ로서 이용하였다.
정량한계(LOQ)는 QL=10×σ/S(σ: 반응의 표준편차, S: 검량선의 기울기)를 통하여 계산하였다.

이론/모형

정량한계(LOQ) − 정량한계(LOQ)공식을 이용하여 정량한계를 구하였다.

성능/효과

89%로 양호한 값을 나타내었다(Table III). (+)-Catechin의 정확성은 99.44~101.62% 이내로 확인하였으며, 정밀성은 변동계수(c.v., coefficient variation)로서 0.26~1.89%로 양호한 값을 나타내었다(Table III). Procyanidin B1의 정확성은 99.
89%로 양호한 값을 나타내었다(Table III). Procyanidin B1의 정확성은 99.54~100.89%이내로 확인하였으며, 정밀성은 변동계수(c.v., coefficient variation)로서 0.09~1.08%로 양호한 값을 나타내었다(Table III).
Taxifolin은 48.92 μg/mL, (+)-catechin은 0.43 μg/mL, procyanidin B1은 62.14 μg/mL으로 확인하였으며 소량인 성분도 정량이 가능함을 확인하였다(Table II).
분석조건 확립 − 지표성분인 taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1의 분석법을 확립하기 위한 최적의 분석법이 확립되었다.
정확성(Accuracy) 및 정밀성(Precision) − Taxifolin의 정확성은 99.00~101.29% 이내로 확인하였으며, 정밀성은 변동계수(c.v., coefficient variation)로서 0.15~1.89%로 양호한 값을 나타내었다(Table III).
특이성(Specificity) − HPLC를 이용해 파인엑솔의 chromatography를 비교하여 taxifolin, (+)-catechin의 retention time을 확인한 결과, 다른 물질과 간섭 없이 성분의 peak를 확인하였다.
특이성, 직선성, 정량한계, 정확성 및 정밀성을 통하여 충분히 유의성이 있음을 확인하였으며 이상의 분석법을 이용하여 지표물질에 대한 함량분석을 시행한 결과 파인엑솔에는 4.90%의 taxifolin, 8.19%의 (+)-catechin, 2.35%의 procyanidin B1이 함유되어 있음을 확인하였다. 본 연구의 결과로 확립된 분석법은 추후 적송제제의 함량분석에 있어서 중요한 기초자료로 이용할 수 있을 것으로 사료된다.
특이성(Specificity) − HPLC를 이용해 파인엑솔의 chromatography를 비교하여 taxifolin, (+)-catechin의 retention time을 확인한 결과, 다른 물질과 간섭 없이 성분의 peak를 확인하였다. 표준용액의 RT는 taxifolin 31.29분, (+)-catechin 14.70분, procyanidin B1은 8.83분으로 확인되었으며, 파인엑솔 내의 taxifolin과 (+)-catechin, procyanidin B1의 RT는 각각 31.23분, 14.59분, 8.67분으로 표준용액의 피크 유지시간과 파인엑솔의 피크 유지시간이 거의 일치한 것을 확인함으로써 특이성을 검증하였다(Fig. 1).
함량분석(Content) − 확립된 분석법을 이용하여 지표물질의 함량을 측정한 결과 파인엑솔 내 taxifolin의 함량은 4.90%로 확인하였으며, (+)-catechin의 함량은 8.19%, Procyanidin B1의 함량은 2.35%로 확인하였다(Table IV).

후속연구

35%의 procyanidin B1이 함유되어 있음을 확인하였다. 본 연구의 결과로 확립된 분석법은 추후 적송제제의 함량분석에 있어서 중요한 기초자료로 이용할 수 있을 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	소나무 수피에는 무엇이 함유되어 있는가?	소나무 수피는 새살을 돋고 지혈시키며 어혈을 풀어준다 하여 한방 및 민간에서는 관절염, 타박상, 화상에 응용되었으며,3-6) flavonoid인 (+)-catechin, taxifolin을 비롯한 condensed tannin인 procyanidins 등이 함유되어 있다.7-10)
	소나무의 근연식물에는 무엇이 있는가?	8m 정도이며 수피는 붉은빛을 띤 갈색이나 밑부분은 검은 갈색이다. 소나무의 근연식물로는 백송(Pinus dungeana), 금송(Pinus densiflora for. aurescens), 잣나무(Pinus koraiensis) 및 해송(Pinus thunbergii) 등이 있으며 북아프리카, 서인도, 및 말레이시아 이북, 북반구 지방에 250여종이 분포하며 우리나라에 약 25종이 분포한다.1-2)

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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