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문제 정의
- 초오는 임상적으로 많이 사용되고 있지만, 아직까지 초오 독성에 대한 계속적인 연구와 노력이 필요한 실정이며 실제 부작용으로 인해 환자 치료에 이용하기가 아주 조심스럽다. 이에 초오의 임상 활용 방법 중 하나인 초오약침을 부작용 없이 사용하기 위해 독성연구를 진행하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 독성물질의 독성여부를 조사하기 위해서는 우선적으로 독성물질의 반복적 투여를 통해 체중과 장기 중량의 변화, 혈액학적, 조직병리학적 결과 등을 검사한 후 종합하여 독성물질의 독성여부를 판정하고 있다 20). 본 연구는 임상적으로 다양하게 활용 가능한 초오약침의 신체에 미치는 독성을 밝히려는 목적으로 BALB/c mouse에 약침을 단회 그리고 4주 동안 반복적으로 주입하고 체중변화, 각종 장기의 형태 및 무게변화, 혈액학적, 조직병리학적 변화를 살펴보았다.
- 따라서 본 연구에서는 4주 동안 반복적인 초오약침 투여로 간에서 발생할 수 있는 변화를 알아보기 위해 실험한 BALB/c mouse의 혈액으로부터 생화학적 지표인 Total protein, ALB, Total bilirubin, ALP, AST, ALT를 측정하여 대조군과 비교하였다. 이러한 지표들의 변화를 측정한 결과, 4주 동안의 초오약침의 투여는 정상 대조군과 비교하여 암수 모두에서 유의성 있는 변화를 일으키지 못했다.
제안 방법
- BALB/c mouse는 온도 23∼24℃, 습도 40∼60%, 조명 12시간 명/암이 자동적으로 유지되는 사육실에서 무균 음수와 사료를 자유롭게 공급하여 사육하고 실험실 환경에 1주 이상 적응시킨 후 사용하였다.
- 선발한 BALB/c mouse를 각 군 평균체중이 균등하도록 무작위로 암·수 각 4군, 군당 5마리로 군을 분리하였다.
- 00 g의 추출물을 얻었다. 얻어진 추출물을 clean bench에서 대한약침제형연구회의 Osmonics E4 water purification machine(General electric, Minnetonka, MN, USA)을 이용하여 제조한 주사용수(Water for injection)에 적정비율로 희석하고 pH와 염도를 보정한 후 clean room에서 실험에 사용할 초오약침을 충진하여 조제하였다.
- 반수치사량(Lethal dose for 50 percent kill, LD50) 측정실험을 진행한 후 그 결과를 바탕으로 단회 및 4주 반복독성 실험을 진행하였는데, 각 독성 실험에서 실험군을 저농도군, 중농도군, 고농도군으로 나누고 대조군과 비교하였다.
- LD50 측정실험에서는 BALB/c mouse를 암, 수 각각 8마리로 총 16마리를 준비하였다. 한 군을 2마리씩(각각 암/수 1마리)로 하여 300, 600, 1,200, 2,400, 3,600, 4,800, 6,000, 7,200 mg/kg의 농도로 오른쪽 다리 ST36(Zusanli)혈 부근에 0.2 ml씩 주입하여 실험 BALB/c mouse의 사망 여부를 관찰하였다. 골도분촌법에 준하여 인체의 ST36(Zusanli)혈에 상응하는 부위를 실험 BALB/c mouse의 우측 후지에 취하였다.
- 시술당일(0일)에는 시술 후 30분까지는 빈번하게, 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태(독성징후의 종류, 발현시기, 회복시기 등) 및 사망유무를 관찰하였다. 시술 후 1일부터 1주일까지는 매일 1회 쥐의 사망유무를 관찰하였다.
- 시술당일(0일)에는 시술 후 30분까지는 빈번하게, 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태(독성징후의 종류, 발현시기, 회복시기 등) 및 사망유무를 관찰하였다. 시술 후 1일부터 1주일까지는 매일 1회 쥐의 사망유무를 관찰하였다.
- 단회 독성은 평균체중에 가까운 BALB/c mouse를 암ㆍ수 각 20마리를 선발하였다. 선발한 BALB/c mouse를 각 군 평균체중이 균등하도록 무작위로 암·수 각 4군, 군당 5마리로 군을 분리하였다.
- LD50 실험에서의 결과를 바탕으로 단회 독성 실험의 투여량은 각각 저농도군(Group II)에서는 300 mg/kg/day, 중농도군(Group III)에는 600 mg/kg/day, 고농도군(Group IV)은 1,200 mg/kg/day 를 우측 ST36(Zusanli)혈 부근에 0.2 ml씩을 투여하였다. 대조군 (Group I)에는 초오약침과 동일한 양의 생리식염수를 투여하였다.
- 2 ml씩을 투여하였다. 대조군 (Group I)에는 초오약침과 동일한 양의 생리식염수를 투여하였다.
- 시술당일(0일)에는 시술 후 30분까지는 빈번하게, 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태(독성징후의 종류, 발현시기, 회복시기 등) 및 사망유무를 관찰하였다. 시술 후 1일부터 2주까지는 매일 1회 일반 증상을 관찰하였다.
- 4) 혈액생화학적 검사: 채혈한 전혈 일부를 15분간 원심분리 (3,000 rpm, Eppendorf, Hamburg, Germany) 한 후 혈청을 취하여 혈청자동분석기(Hitachi7060, Hitachi, Tokyo, Japan)를 이용하여 Total protein, Albumin, Total bilirubin, Alkaline phosphatase(ALP), Aspartate aminotransferase(AST), Alanine aminotransferase(ALT), Creatinine, Blood urea nitrogen(BUN), Total cholesterol, Triglycerides, Glucose를 측정하였다.
- 6) 조직병리학적 검사: 고정한 간조직과 신장조직은 삭정, 탈수 및 파라핀 포매 등의 일반적인 조직처리과정을 거쳐 조직절편을 제작하여 박절한 후 Hematoxylin & Eosin(H&E) 염색을 실시하였다.
- LD50 실험에서의 결과를 바탕으로 실험군(Group VI, VII, VIII) 의 1회 투여량은 각각 저 농도군(Group VI)에서는 150 mg/kg/day, 중농도군(Group VII)에는 300 mg/kg/day, 고농도군(Group VIII) 은 600 mg/kg/day를 우측 ST36(Zusanli)혈 부근에 0.2 ml씩을 투여하였다. 대조군(Group V)에는 초오약침과 같이 우측 ST36 (Zusanli)혈 부근에 0.
- 2 ml씩을 투여하였다. 대조군(Group V)에는 초오약침과 같이 우측 ST36 (Zusanli)혈 부근에 0.2 ml씩의 생리식염수를 시술하였다.
- 1) 일반증상 관찰: 시술당일(0일)에는 시술 후 30분까지는 빈번하게, 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태(독성징후의 종류, 발현시기, 회복시기 등) 및 사망유무를 관찰하였다. 이후 4주 반복 실험에서 시술 후 1일부터 각각의 실험 종료일까지 매일 1회 일반증상을 관찰하였다.
- 1) 일반증상 관찰: 시술당일(0일)에는 시술 후 30분까지는 빈번하게, 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태(독성징후의 종류, 발현시기, 회복시기 등) 및 사망유무를 관찰하였다. 이후 4주 반복 실험에서 시술 후 1일부터 각각의 실험 종료일까지 매일 1회 일반증상을 관찰하였다.
- 2) 체중측정: 시술당일(시술 전), 시술 후 1주 및 2주, 3주, 그리고 4주(부검일)에 측정하였다.
- 3) 혈액학적 검사: 부검 전 12시간 절식시킨 BALB/c mouse를 에틸에테르로 마취시킨 후 혈액을 채취하고 안락사시켰다. 채혈하여 얻은 혈액의 일부를 EDTA로 항응고 처리하여 혈구자동측정기 (Hemavet, Drew Scientific Co, Oxford, CT, USA)로 White blood cell(WBC), Red blood cell(RBC), Hemoglobin, Hematocrit(HCT), Platelet, Mean cell volume(MCV), Mean cell hemoglobin (MCH), Mean cell hemoglobin concentration(MCHC)를 측정하였다.
- 부검을 실시하는 대조군 및 실험군의 모든 BALB/c mouse에 대하여 심장(Heart), 간(Liver), 신장(Kidney), 뇌(Brain), 폐(Lung), 비장(Spleen), 흉선(Thymus), 정소(Testis) 또는 난소(Ovary), 비복 근(Gastrocnemius) 등의 장기를 적출하고, 육안조직검사 지침에 따라 각 장기 조직의 부위별로 병변을 조사하고. 조직의 크기, 중량 (g), 색, 모양, 경도 그리고 병변 부위의 크기, 모양, 색, 특징 등을 검사하였다.
- 부검을 실시하는 대조군 및 실험군의 모든 BALB/c mouse에 대하여 심장(Heart), 간(Liver), 신장(Kidney), 뇌(Brain), 폐(Lung), 비장(Spleen), 흉선(Thymus), 정소(Testis) 또는 난소(Ovary), 비복 근(Gastrocnemius) 등의 장기를 적출하고, 육안조직검사 지침에 따라 각 장기 조직의 부위별로 병변을 조사하고. 조직의 크기, 중량 (g), 색, 모양, 경도 그리고 병변 부위의 크기, 모양, 색, 특징 등을 검사하였다.
- 4) 주요 장기의 중량변화: 초오약침을 시술 4주 후에 각 실험군 (Group VI, VII, VIII)의 장기를 적출하여 육안적 소견을 관찰하고 중량을 측정하였다. 그 결과, 3종류 농도의 초오약침 투여군의 모든 장기에서 육안적 소견상 특이할 만한 병적소견은 발견되지 않았다.
- 5) 혈액학적 검사: 4주간의 반복 투여 독성 실험에서 28일간 초오약침을 투여한 후 실험군(Group VI, VII, VIII)을 에틸에테르로 마취하고 복부대동맥으로부터 채혈하여 혈액학적 지표인 WBC, RBC, Hemoglobin, HCT, Platelet, MCV, MCH, MCHC를 혈구자 동측정기로 측정하였다.
- 6) 혈액생화학적 검사: 4주간 초오약침을 투여한 후 실험군 (Group VI, VII, VIII)로부터 혈액을 채취하여 Total protein, Albumin, Total bilirubin, ALP, AST, ALT, Creatinine, BUN, Total cholesterol, Triglyceride, Glucose의 수치를 측정하였다.
- 위와 같은 결과를 바탕으로 단회 독성 실험의 경우 300 mg/kg 을 저용량군으로, 600 mg/kg을 중용량군으로, 1,200 mg/kg을 고용량군으로 설정하였으며, 4주 반복 실험의 경우에는 150 mg/kg 을 저용량군으로, 300 mg/kg을 중용량군으로, 600 mg/kg을 고용량군으로 설정하였다. 모든 대조군에는 초오약침 투여군과 동일한 양의 생리식염수를 시술하였다.
- 위와 같은 결과를 바탕으로 단회 독성 실험의 경우 300 mg/kg 을 저용량군으로, 600 mg/kg을 중용량군으로, 1,200 mg/kg을 고용량군으로 설정하였으며, 4주 반복 실험의 경우에는 150 mg/kg 을 저용량군으로, 300 mg/kg을 중용량군으로, 600 mg/kg을 고용량군으로 설정하였다. 모든 대조군에는 초오약침 투여군과 동일한 양의 생리식염수를 시술하였다. 그 결과 단회, 4주의 실험기간 동안 모든 농도의 초오약침 투여군에서 암ㆍ수 모두 사망 및 독성증상은 관찰되지 않았다.
- 본 연구에서 4주의 초오 반복 투여가 끝난 후 실험한 BALB/c mouse로부터 WBC, RBC, Hemoglobin, HCT, Platelet, MCV, MCH, MCHC, Total cholesterol, Triglyceride, Glucose 등 각종 혈액학 및 생화학적 지표들을 측정하였다. 이러한 수치들의 변화는 4주 동안 초오약침을 반복투여한 후 대조군과 비교하여 미세한 변화들이 나타났으나 모두 유의성 있는 변화는 아니었으며 암/수컷에서 모두 동일하게 나타났다.
- 본 연구에서도 4주 동안 반복적인 초오약침 투여로 인해 신장의 손상이 발생하는지를 검증하기 위하여 실험한 BALB/c mouse의 혈액으로부터 신장과 관련된 생화학적 지표들인 BUN, Creatinine을 측정하여 대조군과 비교하였다. 본 연구에서 4주간의 초오약침 투여 후 BUN과 Creatinine 수치를 측정한 결과, 암ㆍ수 모두에서 대조군과 비교하여 유의성 있는 변화가 나타나지 않았다.
- 본 연구는 초오약침의 독성 실험을 통해 안전성을 연구하고자 BALB/c mouse에서 LD 50, 단회투여 독성 실험과 4주에 걸쳐 반복투여 독성 실험을 실시하여 일반증상, 체중측정, 혈액학적 검사, 혈액생화학적 검사, 주요 장기의 육안 검사 및 중량 측정, 조직병리학적 검사를 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
대상 데이터
- 본 연구에서는 (주)샘타코(경기도, 대한민국)에서 구입한 약 30 g 전후의 수컷과 암컷 BALB/c mouse(10주령 약 30 g)을 사용하였다. BALB/c mouse는 온도 23∼24℃, 습도 40∼60%, 조명 12시간 명/암이 자동적으로 유지되는 사육실에서 무균 음수와 사료를 자유롭게 공급하여 사육하고 실험실 환경에 1주 이상 적응시킨 후 사용하였다.
- LD50 측정실험에서는 BALB/c mouse를 암, 수 각각 8마리로 총 16마리를 준비하였다. 한 군을 2마리씩(각각 암/수 1마리)로 하여 300, 600, 1,200, 2,400, 3,600, 4,800, 6,000, 7,200 mg/kg의 농도로 오른쪽 다리 ST36(Zusanli)혈 부근에 0.
- 단회 독성은 평균체중에 가까운 BALB/c mouse를 암ㆍ수 각 20마리를 선발하였다. 선발한 BALB/c mouse를 각 군 평균체중이 균등하도록 무작위로 암·수 각 4군, 군당 5마리로 군을 분리하였다.
- 4주 반복 독성은 평균체중에 가까운 BALB/c mouse 암ㆍ수 각 20마리를 선발하였다. 선발한 BALB/c mouse를 각 군 평균체중이 균등하도록 무작위로 암ㆍ수 각 4군, 군당 5마리로 군을 분리하였다.
데이터처리
- 실험에서 얻어진 결과들은 SPSS(version 22, Chicago, IL, USA) 와 SAS(version 9.1.3, SAS Institute Inc., U.S.A.)를 사용하여 Kolmogorov-Smirnov test와 Shapiro-Wilk test 방법으로 정규성 검정을 시행하였으며, Bartlett test를 실시하여 등분산성을 검정하였다. 등분산의 경우 One-way analysis of variance(ANOVA)를 실시하였으며, 또한 각 항목별로 일대일 Student T-test를 시행하여 유의성을 검정하였다.
- )를 사용하여 Kolmogorov-Smirnov test와 Shapiro-Wilk test 방법으로 정규성 검정을 시행하였으며, Bartlett test를 실시하여 등분산성을 검정하였다. 등분산의 경우 One-way analysis of variance(ANOVA)를 실시하였으며, 또한 각 항목별로 일대일 Student T-test를 시행하여 유의성을 검정하였다. 모든 측정값은 평균±표준편차(mean±S.
이론/모형
- 2 ml씩 주입하여 실험 BALB/c mouse의 사망 여부를 관찰하였다. 골도분촌법에 준하여 인체의 ST36(Zusanli)혈에 상응하는 부위를 실험 BALB/c mouse의 우측 후지에 취하였다.
성능/효과
- 초오약침을 300, 600, 1,200, 2,400, 3,600, 4,800 mg/kg을 우측 ST36(Zusanli)혈 부근에 0.2 ml씩을 투여한 경우에 100% 생존하였으나 6,000 mg/kg을 투여의 경우 50% 생존, 7,200 mg/kg 에는 모두 사망하였다(Table 1). 따라서 초오약침의 LD50은 6,000mg/kg로 측정되었다.
- 초오약침을 1회 시술 후 1, 2, 4 및 6시간째에 일반상태를 관찰한 결과, 모든 실험군에서 어떠한 독성 징후도 발견되지 않았다. 시술 후 2주까지는 사망한 BALB/c mouse는 없었다(Table 2).
- 1) 사망률: 초오약침을 투여한 후 4주간 사망유무를 관찰한 결과, 모든 실험군(Group VI, VII, VIII)에서 초오약침의 투여에 의해 기인된 사망은 관찰되지 않았다(Table 3).
- 2) 일반증상: 4주의 실험기간 중 독성물질로 발생할 수 있는 털빠짐(loss of fur), 설사(diarrhea), 다뇨(polyuria), 연변(soft stool), 운동성감소(decreased motor activity), 떨림(tremor), 부종 (edema) 등의 증상발현 유무를 관찰한 결과, 암ㆍ수 모든 실험군 (Group VI, VII, VIII)에서 초오약침 투여로 인한 독성 증상은 관찰되지 않았다(Table 4).
- 3) 체중변화: 실험 개시 때의 BALB/c mouse의 체중은 수컷의 경우 대조군(Group V)은 30.7±1.3 g이었고 저농도군(Group VI) 은 28.7±1.3 g, 중농도군(Group VII)은 28.0±2.0 g, 고농도군 (Group VIII)은 31.1±1.9 g이었으며, 4주 후 실험 종료 시에는 대조군(Group V)은 37.1±2.1 g이었고 저농도군(Group VI)은 38.7±3.1 g, 중농도군(Group VII)은 36.4±1.9 g, 고농도군 (Group VIII)은 37.2±3.5 g이었다(Fig. 1).
- 결과적으로 4주간의 실험군(Group VI, VII, VIII)의 체중을 측정한 결과, 암ㆍ수 BALB/c mouse 모두 초오 약침 투여에 의한 체중 변화는 모든 농도에서 대조군(Group V)과 비교하여 유의성 있는 변화가 관찰되지 않았다.
- 4) 주요 장기의 중량변화: 초오약침을 시술 4주 후에 각 실험군 (Group VI, VII, VIII)의 장기를 적출하여 육안적 소견을 관찰하고 중량을 측정하였다. 그 결과, 3종류 농도의 초오약침 투여군의 모든 장기에서 육안적 소견상 특이할 만한 병적소견은 발견되지 않았다. 적출된 장기들 중에서 간의 무게는 대조군(Group V)에 비해 초오약침의 농도가 증가됨에 따라 수컷에서 다소 증가되는 경향이 있었으나 유의성 있는 차이는 없었으며 다른 장기들에서는 초오약침 시술에 따른 특이적인 변화는 관찰되지 않았다(Table 5).
- 그 결과, 3종류 농도의 초오약침 투여군의 모든 장기에서 육안적 소견상 특이할 만한 병적소견은 발견되지 않았다. 적출된 장기들 중에서 간의 무게는 대조군(Group V)에 비해 초오약침의 농도가 증가됨에 따라 수컷에서 다소 증가되는 경향이 있었으나 유의성 있는 차이는 없었으며 다른 장기들에서는 초오약침 시술에 따른 특이적인 변화는 관찰되지 않았다(Table 5).
- 그 결과, 혈액학적 지표들은 초오약침을 투여한 실험군(Group VI, VII, VIII)에서 대조군(Group V)과의 통계적으로 유의성 있는 차이를 보이지 않았다(Table 6).
- 7) 간과 신장의 조직병리학적 변화: 간을 적출한 후 H&E 염색을 통하여 간조직을 관찰한 결과, 생리식염수를 투여한 대조군(Group V)의 간조직에서 간문맥과 실질이 정상적인 구조를 유지하고 있었으며 조직병리학적으로 정상적인 소견을 보여주었다.
- 7) 간과 신장의 조직병리학적 변화: 간을 적출한 후 H&E 염색을 통하여 간조직을 관찰한 결과, 생리식염수를 투여한 대조군(Group V)의 간조직에서 간문맥과 실질이 정상적인 구조를 유지하고 있었으며 조직병리학적으로 정상적인 소견을 보여주었다. 초오약침을 4주간 투여한 저농도(Group VI), 중농도(Group VII), 고농도(Group VIII)군의 경우에는 간조직에서 간세포의 괴사, 염증세포 침윤, 혹은 지방변성 등의 변화를 발견할 수 없었으며 대조군(Group V)과 비교하여 유의성 있는 변화는 나타나지 않았다(Fig. 3).
- 신장조직의 변화를 관찰한 결과에서는 대조군(Group V)과 저농도(Group VI), 중농도(Group VII), 고농도(Group VIII)의 초오약침을 투여한 군 모두에서 조밀한 세포질과 함께 정상적인 사구체 (glomerulus), 곡세뇨관(convoluted tubule) 및 상피세포가 관찰되었으며 각 군 간에 유의성 있는 차이점은 발견되지 않았다. 초오약침을 투여한 실험군(Group VI, VII, VIII)에서 세뇨관의 팽창, 표피박리, 혹은 세포사멸 등의 변화는 발견되지 않았다.
- 나아가, 실제 실험한 BALB/c mouse의 간조직을 H&E염색을 통해 관찰한 결과, 4주의 반복투여 실험 모두에서 정상 대조군과 비교하여 유의성 있는 변화가 나타나지 않았으며 간세포의 괴사, 염증세포 침윤, 혹은 지방변성 등의 변화를 발견할 수 없었다.
- 실험을 계획할 때 용량을 설정하는 수단으로 사용되며 가장 빠른 시간 내에 실험 물질의 독성을 평가하는 parameter로 흔히 활용된다 21) . 본 연구에서는 LD50을 측정하는 실험에서 300, 600, 1,200, 2,400, 3,600 및 4,800 mg/kg을 1회 근육 시술한 결과 사망례가 관찰되지 않았다. 6,000 mg/kg의 농도에서 50%의 사망률을 나타내었다.
- 모든 대조군에는 초오약침 투여군과 동일한 양의 생리식염수를 시술하였다. 그 결과 단회, 4주의 실험기간 동안 모든 농도의 초오약침 투여군에서 암ㆍ수 모두 사망 및 독성증상은 관찰되지 않았다.
- 초오약침 투여로 인한 체중의 변화를 살펴보면, 4주 반복 실험에서 암ㆍ수 모두 체중의 증가는 모든 농도에서 대조군(Group V)과 비교하여 유의성 있는 변화가 관찰되지 않았다. 이런 결과는 초오약침의 반복적인 투여는 체중변화에 유의성 있는 변화를 미치지 않는 것으로 확인되었다.
- 초오약침 투여로 인한 체중의 변화를 살펴보면, 4주 반복 실험에서 암ㆍ수 모두 체중의 증가는 모든 농도에서 대조군(Group V)과 비교하여 유의성 있는 변화가 관찰되지 않았다. 이런 결과는 초오약침의 반복적인 투여는 체중변화에 유의성 있는 변화를 미치지 않는 것으로 확인되었다.
- 본 연구에서 4주의 초오 반복 투여가 끝난 후 실험한 BALB/c mouse로부터 WBC, RBC, Hemoglobin, HCT, Platelet, MCV, MCH, MCHC, Total cholesterol, Triglyceride, Glucose 등 각종 혈액학 및 생화학적 지표들을 측정하였다. 이러한 수치들의 변화는 4주 동안 초오약침을 반복투여한 후 대조군과 비교하여 미세한 변화들이 나타났으나 모두 유의성 있는 변화는 아니었으며 암/수컷에서 모두 동일하게 나타났다. 이러한 결과들은 반복적인 초오약침의 투여는 혈액학 및 생화학적 지표들의 유의성 있는 변화를 일으키지 않음을 나타내고 있는 것이다.
- 또한, 심장, 간, 폐, 신장, 뇌, 비장, 흉선, 정소 또는 난소 및 비복근에서의 병변발생 및 무게변화에도 영향을 미치지 않았으며, 혈액학적 검사 및 혈액생화학적 검사에서도 유해한 효과가 없었으며 간과 신장조직을 H&E염색을 통해 조직병리학적으로 관찰한 결과에서도 정상적인 세포 구조를 보였다.
- 또한 혈액학적 검사 및 혈액생화학적 검사에서도 유해한 효과가 없었으며 간과 신장조직을 H&E염색을 통해 조직병리학적으로 관찰한 결과에서도 정상적인 세포 구조를 보였다.
- 본 연구에서도 4주 동안 반복적인 초오약침 투여로 인해 신장의 손상이 발생하는지를 검증하기 위하여 실험한 BALB/c mouse의 혈액으로부터 신장과 관련된 생화학적 지표들인 BUN, Creatinine을 측정하여 대조군과 비교하였다. 본 연구에서 4주간의 초오약침 투여 후 BUN과 Creatinine 수치를 측정한 결과, 암ㆍ수 모두에서 대조군과 비교하여 유의성 있는 변화가 나타나지 않았다. 신장의 무게를 측정하여 비교한 결과에서도 초오약침의 투여는 무게변화에 영향을 미치지 않았다.
- 신장조직을 H&E염색을 통해 관찰한 결과에서도 정상적인 신장조직 구성요소들이 발견되었으며 세뇨관 손상, 세포사멸 등의 변화는 발견되지 않았다. 이러한 결과들은 4주 동안 반복적인 초오약침 투여는 신장에 유해한 영향을 미치지 않는 것을 보여주는 것이라 할 수 있다.
- 그 외에도 심장, 폐, 뇌, 비장, 흉선, 암컷의 난소 혹은 수컷의 정소, 그리고 약침을 주입한 지점에 가깝게 위치한 비복근의 변화를 육안으로 관찰한 결과, 정상 대조군과 비교하여 초오약침을 농도별로 투여한 실험군에서 뚜렷한 이상병변은 관찰되지 않았으며, 무게를 측정하여 비교한 결과에서도 각 군간에 유의성 있는 변화는 관찰되지 않았다.
- 결과적으로 본 연구는 초오약침의 독성 실험을 통해 안전성을 연구하고자 BALB/c mouse에서 LD50, 단회 투여 독성 실험과 4주에 걸쳐 반복투여 독성 실험을 실시하여 일반증상, 체중측정, 혈액학적 검사, 혈액생화학적 검사, 주요 장기의 육안 검사 및 중량 측정, 조직병리학적 검사를 관찰한 결과, 모든 농도에서 사망한 경우가 발생하지 않았으며, 일반증상과 체중에서 유의성 있는 변화를 일으키지 않았다. 또한, 심장, 간, 폐, 신장, 뇌, 비장, 흉선, 정소 또는 난소 및 비복근에서의 병변발생 및 무게변화에도 영향을 미치지 않았으며, 혈액학적 검사 및 혈액생화학적 검사에서도 유해한 효과가 없었으며 간과 신장조직을 H&E염색을 통해 조직병리학적으로 관찰한 결과에서도 정상적인 세포 구조를 보였다.
- 1. 초오약침의 LD50은 BALB/c mouse에서 6,000 mg/kg로 측정되었다.
- 2. 초오약침을 300, 600, 1,200 mg/kg의 농도로 BALB/c mouse에 단회 투여 후 사망 여부를 관찰한 결과, 모든 농도에서 사망한 경우가 발생하지 않았다.
- 3. 초오약침을 150, 300, 600 mg/kg의 농도로 BALB/c mouse 에 4주간 매일 반복 투여 후 일반증상과 체중변화를 관찰한 결과 유의한 변화를 일으키지 않았으며 심장, 간, 폐, 신장, 뇌, 비장, 흉선, 정소 또는 난소 및 비복근에서의 병변발생 및 무게변화에도 영향을 미치지 않았다. 또한 혈액학적 검사 및 혈액생화학적 검사에서도 유해한 효과가 없었으며 간과 신장조직을 H&E염색을 통해 조직병리학적으로 관찰한 결과에서도 정상적인 세포 구조를 보였다.
후속연구
- 또한, 심장, 간, 폐, 신장, 뇌, 비장, 흉선, 정소 또는 난소 및 비복근에서의 병변발생 및 무게변화에도 영향을 미치지 않았으며, 혈액학적 검사 및 혈액생화학적 검사에서도 유해한 효과가 없었으며 간과 신장조직을 H&E염색을 통해 조직병리학적으로 관찰한 결과에서도 정상적인 세포 구조를 보였다. 다만, 본 연구는 초오약침의 4주 반복 투여 독성을 확인하였으나, 임상적으로 더 장기간 치료가 이루어질 수 있으므로 3개월 이상의 반복 투여 독성에 대한 연구가 필요하며, BALB/c mouse라는 특정 실험동물에서의 독성여부를 관찰한 실험으로써 실제 인체를 대상으로 한 좀 더 안전한 초오약침의 임상적용을 위해서는 앞으로 추가적인 연구가 필요하다고 사료된다.
- 본 연구 결과를 종합해보면, 초오약침의 600 mg/kg이하의 농도에서 반복투여로 인한 유해함은 없을 것으로 사료되며 향후 더 장기적인 실험 연구가 필요할 것으로 사료된다.
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