[국내논문]산사(山楂)의 규격 기준 모니터링 및 HPLC 표준크로마토그램 연구 Quality Monitoring of Specification of Crataegi Fructus in the Korean Pharmacopoeia and Studies HPLC Standard Chromatogram원문보기
Objectives : Crataegi Fructus has been used as traditional medicines for more digestion action, amenorrhea due to blood stasis, and hyperlipemia. The aim of this study was to compare of Crataegi Fructus in South Korea collected during three years according to the standards in monographs of the Korea...
Objectives : Crataegi Fructus has been used as traditional medicines for more digestion action, amenorrhea due to blood stasis, and hyperlipemia. The aim of this study was to compare of Crataegi Fructus in South Korea collected during three years according to the standards in monographs of the Korean Pharmacopoeia Eleventh edition (KP 11). Methods : Crataegi Fructus was carried out identification test (Qualitative reaction, Thin layer chromatography), heavy metal test, and total ash registered at KP. Add to we tested loss on dry, contents of ethanol-soluble extracts, and HPLC profiling. Results : Identification test (TLC) was on comparing with ursolic acid standard solution in $R_f$ value, all samples showed red purple spot ($R_f$ value 0.9). Ursolic acid spot in $R_f$ value 0.35 showed by changing mobile phase condition. Heavy metals showed contents for Pb, Cd, As, and Hg range of 0.0 ~ 0.5 ppm, 0.0 ~ 0.2 ppm, 0.0 ~ 0.3 ppm, and 0.0 ~ 0.1 ppm. Loss on drying was ranged from 5.5 to 11.9 %, total ash was between the range 2.7 ~ 4.0 %. Contents of ethanol-soluble extracts was ranged from 17.8 to 44.9 %. The content of chlorogenic acid was ranged from 0.0 to 0.1 % based on the chlorogenic acid standard curve. Conclusion : We have verified the current specification standard of Crataegi Fructus and standard that is not set. We hope that it will help the standardization of Crataegi Fructus.
Objectives : Crataegi Fructus has been used as traditional medicines for more digestion action, amenorrhea due to blood stasis, and hyperlipemia. The aim of this study was to compare of Crataegi Fructus in South Korea collected during three years according to the standards in monographs of the Korean Pharmacopoeia Eleventh edition (KP 11). Methods : Crataegi Fructus was carried out identification test (Qualitative reaction, Thin layer chromatography), heavy metal test, and total ash registered at KP. Add to we tested loss on dry, contents of ethanol-soluble extracts, and HPLC profiling. Results : Identification test (TLC) was on comparing with ursolic acid standard solution in $R_f$ value, all samples showed red purple spot ($R_f$ value 0.9). Ursolic acid spot in $R_f$ value 0.35 showed by changing mobile phase condition. Heavy metals showed contents for Pb, Cd, As, and Hg range of 0.0 ~ 0.5 ppm, 0.0 ~ 0.2 ppm, 0.0 ~ 0.3 ppm, and 0.0 ~ 0.1 ppm. Loss on drying was ranged from 5.5 to 11.9 %, total ash was between the range 2.7 ~ 4.0 %. Contents of ethanol-soluble extracts was ranged from 17.8 to 44.9 %. The content of chlorogenic acid was ranged from 0.0 to 0.1 % based on the chlorogenic acid standard curve. Conclusion : We have verified the current specification standard of Crataegi Fructus and standard that is not set. We hope that it will help the standardization of Crataegi Fructus.
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문제 정의
26 mg 함유하고, 주요성분은 Cyanogenic glycoside인 amygdalin과 flavonoid인 quercetin, pinnatifinoside A ∼ D, hyperoside, rutin, vitexin 그리고 Triterpenoid계인 crataegolic acid, ursolic acid 및 chlorogenic acid, tartaric acid, gallic acid 등이 있으며 이중 Ursolic acids는 대한민국약전의 확인시험의 지표성분이다13-14). 이 연구에서는 山楂의 KP 설정규격과 미설정 규격을 검토 평가함으로서 국내산 산사의 품질의 적합성 결과와 HPLC 표준크로마토그램 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
국내산 山楂 15개에 대해 KP 설정규격인 확인시험, 중금속, 회분항목과 미설정 규격인 건조감량, 엑스함량 및 HPLC 표준크로마토그램 검토하여 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다.
중금속시험에 사용된 Microwave는 MARS-5 (CEM사)이며 ICP-OES 기기는 Optima 7300DV(Perkin Elmer사)이고 자동수은분석기는 MA-2 (NIC사)를 사용하였다. 그리고 HPLC는 Agilent사의 1100 시리즈의 Diode Array Detector로 구성된 HPLC system을 사용하였으며 Chemstation software를 통해 크로마토그램 data를 처리하였다.
KP 생약시험법의 중금속항에 따라 실시하였다. 납, 비소, 카드뮴은 분석용 검체 0.5 g을 정확하게 달아 극초단파분해법으로 분해하여 ICP-OES를 사용하여 측정하였고 수은은 분석용 검체 100 ㎎을 정확하게 달아 자동수은분석기로 측정하였다.
대상 데이터
국내에 유통되고 있는 국내산 山楂를 2012년부터 2014년까지 5개씩 수집하여 국내공정서에 설정되어 있는 규격을 모니터링하여 적합성을 검토하였다. KP에 수재된 山楂의 확인 시험중 정성반응결과 모든 액은 적자색으로 나타났고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한 결과 Rf 0.
본 연구는 서울, 대구 등 약령시장에서 유통되는 제품을 모니터링하기 위한 것으로, 같은 제품의 중복을 피하기 위해 2012년부터 2014년까지 3년에 걸쳐 5개씩 총 15개 시료를 수집하였다 (Table 2.). 기원은 국내에서 주로 자생 또는 재배하는 산사나무Crataegus pinnatifida Bunge를 중심으로 하기 위해 중국산 山里紅Crataegus pinnatifida Bunge var.
또한 준비된 시료는 씨를 제거하지 않고, 잘 섞어 가루로 하여 분석용 검체를 조제하였다. 지표성분 표준품은 ursolic acid (Sigma, 96.4 %), rutin (Sigma, 96.4 %), quercetin (Wako사, 99.9 %), chlorogenic acid (Sigma, 95 %), hyperoside (식약처분양, 98.4 %), kaempferol (Sigma, 96.4 %)과 중금속 표준액인 납, 비소, 카드뮴, 수은(Kanto사)을 구입하여 사용하였다. 확인시험에 사용된 시약은 국내・외 특급 및 일급시약을 사용하였고 크로마토그래피용 실리카겔은 Silica gel 60 F254 (0.
이론/모형
KP 생약시험법의 중금속항에 따라 실시하였다. 납, 비소, 카드뮴은 분석용 검체 0.
분석용 검체 약 3 g을 정밀하게 달아 KP 생약시험법의 건조감량항에 따라 시험하였다
분석용 검체 약 3 g을 정밀하게 달아 KP 생약시험법의 회분항에 따라 시험하였다
생약제제의 성분 프로파일 설정 가이드라인15), KP 일반시험법 액체크로마토그래프법을 참고하였다. 분석용 검체 약 0.
성능/효과
산사의 HPLC 표준크로마토그램 작성을 위해 활성성분인 chlorogenic acid, rutin, hyperoside 및 quercetin 표준 피크를 포함한 피크들이 서로 간섭을 받지 않고 분리되었음을 확인하였다. 15개 시료의 크로마토그램을 중첩한 결과 모두 유사한 패턴을 나타냄에 따라 山楂의 HPLC 표준크로마토그램으로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
6. 산사의 HPLC 표준크로마토그램은 chlorogenic acid, rutin, hyperoside 및 quercetin 성분에 해당하는 peak가 각각 7.9 min, 22.9 min, 23.8 min과 44.0 min에서 서로 간섭없이 관측되었으며 15개의 크로마토그램을 중첩한 결과 유사하게 나타남을 확인하였다.
山楂의 활성성분인 chlorogenic acid, rutin, hyperoside, quercetin 및 kaempferol 표준 피크를 포함한 피크들이 서로 간섭을 받지 않고 분리되었음을 확인하였으며 크로마토그램에서 7.9 min, 22.9 min, 23.8 min과 44.0 min에서 관측되었다.
35 %로 편차가 크게 나타났다. 국내 유통중인 국내산 산사는 KP 규격에 모두 만족함을 알 수 있었다. 규격기준은 현행을 유지함이 바람직할 것으로 사료된다.
규격기준은 현행을 유지함이 바람직할 것으로 사료된다. 산사의 HPLC 표준크로마토그램 작성을 위해 활성성분인 chlorogenic acid, rutin, hyperoside 및 quercetin 표준 피크를 포함한 피크들이 서로 간섭을 받지 않고 분리되었음을 확인하였다. 15개 시료의 크로마토그램을 중첩한 결과 모두 유사한 패턴을 나타냄에 따라 山楂의 HPLC 표준크로마토그램으로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
후속연구
위의 결과는 국내에서 유통되고 있는 국내산 山楂 15개에 대하여 현행 공정서인 KP의 규격 및 미설정 규격에 대해 모니터링하고 JP, ChP의 규격 기준과 비교 검토한 자료를 제시함으로써 山楂의 품질관리의 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
山楂의 일반 성분과 주요 성분에는 어떠한 것들이 있는가?
산사추출물의 단백분해능을 측정한 결과 pancreatin보다 우수한 활성을 확인하였다12). 일반성분은 탄수화물 85.6 %, 조단백질 2.4 %, 조지방 1.9 %와 필수아미노산이 852.26 mg 함유하고, 주요성분은 Cyanogenic glycoside인 amygdalin과 flavonoid인 quercetin, pinnatifinoside A ∼ D, hyperoside, rutin, vitexin 그리고 Triterpenoid계인 crataegolic acid, ursolic acid 및 chlorogenic acid, tartaric acid, gallic acid 등이 있으며 이중 Ursolic acids는 대한민국약전의 확인시험의 지표성분이다13-14). 이 연구에서는 山楂의 KP 설정규격과 미설정 규격을 검토 평가함으로서 국내산 산사의 품질의 적합성 결과와 HPLC 표준크로마토그램 결과를 보고하고자 한다.
山楂란 무엇인가?
山楂는 산사나무 Crataegus pinnatifida Bunge 및 그 변종(장미과 Rosaceae)의 잘 익은 열매이다1). 꽃사과와 열매가 흡사하지만 열매표면에 작은 흰점들이 점점이 박혀있고 꼭지쪽에 꽃받침이 남아 있는게 다르다2).
산사와 꽃사과의 외형상 차이점은 무엇인가?
山楂는 산사나무 Crataegus pinnatifida Bunge 및 그 변종(장미과 Rosaceae)의 잘 익은 열매이다1). 꽃사과와 열매가 흡사하지만 열매표면에 작은 흰점들이 점점이 박혀있고 꼭지쪽에 꽃받침이 남아 있는게 다르다2). 山楂는 대한민국약전(KP 11), 중화인민공화국약전 (ChP 2015)3), 일본약국방 (JP 17)4)에 수재되어 있다.
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