선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구는 유통 한약재에 대한 식중독균의 분포와 식중독에 대한 항생제 감수성 유무를 알아봄으로서 안전한 한약재의 유통을 위한 역학적인 기초자료를 제공하고자 수행하였다.
제안 방법
- 시료원액 1 ㎖를 9 ㎖ fraser broth에 넣어 37 ± 0.5℃에서48 시간 배양하여 증균하였고, 증균된 배지에서 1 백금 이를 취하여 oxford listeria selective agar에 도말하여 37 ± 0.5℃에서 18 - 24 시간 배양하였으며, 의심되는 집락을 선별하여tryptic soy agar에서 순수 분리하고 그람 염색을 실시, 확인하여 API listeria kit를 이용하여 균을 동정하였다 (Shim etal., 2013).
- 시료원액 1 ㎖를 9 ㎖ lactose broth에 넣어 37 ± 0.5℃에서24 시간 배양하여 증균하고 durham tube에 가스발생을 확인 한 후 1 백금 이를 취하여 EMB agar에 도말 접종하여 37 ±0.5℃에서 18 - 24 시간 배양하였으며, 대장균군으로 의심되는 모든 형태의 집락을 골라 tryptic soy agar에서 순수 분리하고gram staining을 실시하여 그람음성 무아포성 간균을 확인한 후API 20E kit를 이용하여 균을 동정하였다 (Shim et al., 2013).
- 시료원액 1 ㎖를 9 ㎖ tryptic soy broth에 넣어 37 ± 0.5℃에서 24 시간 배양하여 증균하였고, 증균된 배지에서 1 백금 이를 취하여 egg yolk 5 - 10%를 첨가한 baird parker agar에 도말하여 37 ± 0.5℃에서 18 - 24 시간 배양하였으며, 의심되는 집락을 선별하여 tryptic soy agar에서 순수 분리하고 그람 염색을 실시, 확인하여 API staph kit를 이용하여 균을 동정하였다 (Kim et al., 2016).
- 시료원액 1 ㎖를 9 ㎖ tryptic soy broth에 넣어 37 ± 0.5℃에서 24 시간 배양하여 증균하였고, 증균된 배지에서 1 백금 이를 취하여 egg yolk 5 - 10%와 Bacillus cereus selectivesupplement를 첨가한 MYP agar에 도말하여 37 ± 0.5℃에서18 - 24 시간 배양하였으며, 바실러스균으로 의심되는 집락을 선별하여 tryptic soy agar에서 순수 분리하고 그램 염색을 실시하여 그람양성 간균을 확인한 후 API CHB kit와 API20E kit를 함께 이용하여 균을 동정하였다 (Shim et al.,2013; Song et al., 2014).
- 시료원액 1 ㎖를 9 ㎖ tryptic soy broth에 넣어 37 ± 0.5℃에서 48 시간 배양하여 증균하였고, 증균된 배지에서 1 백금 이를 취하여 enterococcus agar에 도말하여 37 ± 0.5℃에서18 - 24 시간 배양하였으며, 의심되는 집락을 선별하여 trypticsoy agar에서 순수 분리하고 그람 염색을 실시, 확인하여 APIstrep kit를 이용하여 균을 동정하였다 (Han et al., 2011).
- 시료원액을 6부 튜브에서 계대희석한 후 petridishes에 희석배수별로 1 ㎖ 씩 넣고 미리 준비한 멸균된 desoxycholateagar를 20 ㎖씩 부어 pouring method에 의한 대장균군수 정량시험을 수행하였다 (Shim et al., 2013).
대상 데이터
- 2015년 11월부터 2016년 8월까지 유통 규격품 한약재 106건을 수집하여 식중독균 분포조사를 위한 시험재료로 사용하였다.
- Y약초도매시장 ㈜, ㈜ KS PHARM, ㈜N생약, ㈜ D한방제약, ㈜ D허브, ㈜ Y풀잎제약, ㈜ JY세상, ㈜ JH제약, ㈜ GO허브, ㈜ P무약, ㈜ HS제약, ㈜ H팜, ㈜H제약, C제약, W제약 ㈜ 등 21개의 업체들이었다.
- 일반적으로 유통한약재에 발생하는 유해세균은 생산, 가공, 저장 단계 등 다양한 유입경로로 발생할 수 있다. 본 연구에 사용한 시료는 서울특별시 동대문구 약령시에서 유통되는 규격품 한약재만을 검사하였으며, 시료는 국내산 37건, 수입산 69건 (중국산 55건,베트남산 6건, 인도네시아산 5건, 인도산 3건) 등 106건이었고, 제조업체는 G명품제약, N제약 ㈜, D제약 ㈜, M생약 ㈜,S생약 ㈜, SK ㈜. Y약초도매시장 ㈜, ㈜ KS PHARM, ㈜N생약, ㈜ D한방제약, ㈜ D허브, ㈜ Y풀잎제약, ㈜ JY세상, ㈜ JH제약, ㈜ GO허브, ㈜ P무약, ㈜ HS제약, ㈜ H팜, ㈜H제약, C제약, W제약 ㈜ 등 21개의 업체들이었다.
- 세균 배양에 사용된 standard plate count agar, 대장균 배양에 사용된 desoxycholate agar, lactose broth, EMB agar,바실러스 균 배양에 사용된 tryptic soy broth, 포도알균 배양에 사용된 baird parker agar는 Oxoid (Hampshire, England)에서 구입하여 사용하였고, 바실러스 균 배양에 사용된 MYPagar, 리스테리아 분리 동정에 사용된 fraser broth, oxford listeria selective agar는 Oxoid (Hampshire, England)에서 구입하여 사용하였으며, API 20E kit, API CHB kit, APIstrep kit, API staph kit, API listeria kit는 Biomerieux(Marcy l'Etole, France), 장구균 배양에 사용된 enterococcusagar는 Becton, Dickionson and Company (Franklin Lakes,NJ, USA)에서 각각 구입하여 사용하였다.
- 항생제 디스크 diffusion법 (antibiotics disc diffusionmethod)에 의해 BD (Becton, Dickinson and Company,Franklin Lakes, NJ, USA) 제품으로 실시하였고 감수성은clinical and laboratory standards institute에 방법에 의하여 판명하였다 (CLSI, 2007). 항생제 감수성 시험은 분리한Bacillus cereus 균주 9 주에 대해 각각 실시하였고 사용한antimicrobial drugs discs는 amikacin (AK30), amoxicillin/clavulanic acid (AMC), ampicillin (AMP10), ampicillin/sulbactam (SAM20), bacitracin(B10), carbenicillin (CAR100),cefamandole (MA30), cefoxcitin (FOX30), ceftriazone(CRO30), cephaloxin (KF30), chloramphenicol (C30),ciprofloxacin (CIP5), clindamycin (DA2), colistin sulphate(CT10), compound sulphonamide (S3-300), doxycycline(DO30), erythromycin (E15), gentamicin (CN10), kanamycin(K30), levofloxacin (LEV5), nalidixic acid (NA30),neomycin (N10), nitrofurantoin (F300), novobiocin (NV30),oleandomycin (OL15), oxolinic acid (OA2), penicillin G(P10), polymyxin B (PB300), rifampicin (RD5), streptomycin(S10), sulphomethoxazole/trimethoprim (SXT25), tetracycline(TE30), ticarcillin (TIC75), tobramycin (TOB10), trimethoprim(W5), 그리고 vancomycin (VA30) 등 36종류를 사용하였다(Song et al., 2014; Han et al., 2011, Choi et al., 2013;Ryu et al., 2011).
이론/모형
- 시료원액을 6부 튜브에서 계대희석한 후 petridishes에 희석 배수별로 1 ㎖씩 넣고 미리 준비한 멸균된 standard platecount agar를 20 ㎖씩 부어 pouring method에 의한 총세균수정량시험을 수행하였다 (Lee and Yoon, 2010).
- 항생제 디스크 diffusion법 (antibiotics disc diffusionmethod)에 의해 BD (Becton, Dickinson and Company,Franklin Lakes, NJ, USA) 제품으로 실시하였고 감수성은clinical and laboratory standards institute에 방법에 의하여 판명하였다 (CLSI, 2007). 항생제 감수성 시험은 분리한Bacillus cereus 균주 9 주에 대해 각각 실시하였고 사용한antimicrobial drugs discs는 amikacin (AK30), amoxicillin/clavulanic acid (AMC), ampicillin (AMP10), ampicillin/sulbactam (SAM20), bacitracin(B10), carbenicillin (CAR100),cefamandole (MA30), cefoxcitin (FOX30), ceftriazone(CRO30), cephaloxin (KF30), chloramphenicol (C30),ciprofloxacin (CIP5), clindamycin (DA2), colistin sulphate(CT10), compound sulphonamide (S3-300), doxycycline(DO30), erythromycin (E15), gentamicin (CN10), kanamycin(K30), levofloxacin (LEV5), nalidixic acid (NA30),neomycin (N10), nitrofurantoin (F300), novobiocin (NV30),oleandomycin (OL15), oxolinic acid (OA2), penicillin G(P10), polymyxin B (PB300), rifampicin (RD5), streptomycin(S10), sulphomethoxazole/trimethoprim (SXT25), tetracycline(TE30), ticarcillin (TIC75), tobramycin (TOB10), trimethoprim(W5), 그리고 vancomycin (VA30) 등 36종류를 사용하였다(Song et al.
성능/효과
- Escherichia coli는 대장균군 98건 가운데 1건으로 나타나 전체 대장균군의 1.0% (1/98)에 불과하였고, Enterococcusfaecalis는 1건으로 장알균 29건 가운데 3.5% (1/29),Enterococcus faecium도 1건으로 장알균 29건 가운데 3.5%(1/29)로 각각 나타났으며, Bacillus cereus는 바실러스속균 45건 가운데 9건으로 무려 20.0% (9/45)를 차지하여 한약재에 흔히 발견되는 식중독균임을 알 수 있었다 (Table 2). 이는2010년 한약재에서 검출된 호기성 세균 가운데 Bacilluscereus가 전체 50.
- 균 분리 시험 결과, 리스테리아속균 2 주, 바실러스속균 45주, 장알균속균 29 주, 그리고 대장균군 속균 98 주 등 총 174주의 균을 분리하였다 (Table 2). 174 주의 세균 분리 결과를 살펴보면, 대장균군 56.
- 또한, 총 106건에 대해 총세균수와 대장균군수의 검출 범위를 조사한 결과 우슬은 4.1 × 10 - 8.1 × 10와 0 - 8.0 × 103로, 석창포는 3.9 × 103 - 3.2 × 106와 3.0 × 10 - 9.1 × 103로, 맥문동은0 - 9.6 × 103와 0-0으로 각각 나타났고, 황기는 0 - 8.4 × 104와0 - 7.8 × 104로, 두충은 0-0과 0-0으로, 산조인도 0-0과 0-0으로 각각 나타나 2010년 한약재에서 조사한 결과 (Lee andYoon, 2010)인 황기, 두충, 산조인에서는 총세균수가 적게 나온 반면, 상대적으로 총세균수가 많은 한약재는 석창포, 우슬,맥문동 등이었다는 보고와 대체로 일치하였으나 황기의 경우에는 본 연구 결과와 다소 차이를 보였다.
- 분리한 9 주의 Bacillus cereus에 대해 항생제 감수성 검사를 실시한 결과 amoxicillin/clavulanic acid (AMC), ampicillin(AMP10), ampicillin/sulbactam (SAM20), bacitracin (B10),carbenicillin (CAR100), cefamandole (MA30), cephalothin(KF30), colistine sulfates (CT10), novobiocin (NV30),penicillin G (P10), rifampicin (RD5), ticarcillin (TIC75),trimethoprim (W5) 등 13류에 대하여는 내성 (resistance)을 나타내었고, cefoxcitin (FOX30), ceftriazone (CRO30), nitrofrantoir(F300), polymyxin B (PB300), sulphomethoxazole/trimethoprim(SXT25), tetracycline (TE30) 등 6류에 대하여는 중등도의 내성 (semi-resistance)을 나타내었으며 (Table 3), amikacin(AK30), gentamicin (CN10), levofloxacin (LEV5), oxolinic acid (OA2), vancomycin (VA30) 등 5류에 대하여는 감수성(susceptibility)을 나타내었고, ciprofloxacin (CIP5), clindamycin(DA2), compound sulfonamides (S3-300), doxycycline (DO30),erythromycin(E15), oleandomycin (OL15), streptomycin (S10),tobramycin (TOB10) 등 8류에 대하여는 중등도 감수성(semi-susceptibility)을 나타내었다 (Table 3).
- 4% (11/117)로 보고하여 이번 연구결과검출되지 않은 결과와는 대조를 이루어 이에 대한 추가 연구가 필요할 것으로 사료되는데 이는 고초균 (Bacillus subtilis)의 경우 건조된 한약재에서 나올 가능성이 있기 때문인데 이는 대부분의 유통한약재가 토양유래라는 점 때문이다. 속균별세균 분리 결과를 통해, 실험을 수행한 여러 병원성 미생물중에서 Bacillus cereus가 국내 유통 한약재의 위생지표에 대한 지표세균으로 가장 적합함을 알 수 있다. 일반적으로 유통한약재에 발생하는 유해세균은 생산, 가공, 저장 단계 등 다양한 유입경로로 발생할 수 있다.
- 유통 한약재 총 106건에 대해 총세균수와 대장균군수를 조사한 결과 홍화, 두충 그리고 산조인에서는 일반 세균과 대장균군이 오염되어 있지 않았고, 택사, 당귀, 국화, 진피, 산사,치자, 맥문동, 연자육, 작약, 길경, 정향 그리고 건강에서는 일반 세균은 오염되었으나 대장균군은 오염되지 않았으며, 오가피, 우슬, 석창포, 행인, 황기, 마인, 결명자, 육계, 천궁, 토사자, 박하 그리고 갈근 등에서는 일반세균과 대장균군이 모두 오염되어 있는 것으로 나타났다 (Table 1).
후속연구
- 19종류의 항생제들에 대한 내성결과에 대해서는 한약재들에서 분리된 바실러스 세레우스 균주들이 인체 혹은 분변 유래일 가능성을 배제할 수 없음을 나타내고 있어 이들에 대한 추가 연구가 필요할 것으로 생각된다.
- , 2011)에 관한 연구 결과 각각 항균활성을 나타내었다는 결과들과 일치하였다. 또한, 일반세균과 대장균군의 오염이 없었던 홍화, 두충 그리고 산조인에 대한 항균활성 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- , Aerococcus viridans, Globicatellasanguinis 등이 많이 나타났다 (Table 2). 이는 2010년 한약재에서 검출된 호기성 세균 가운데 Bacillus megaterium 이10.2% (12/117)라고 보고 (Lee and Yoon, 2010)한 것과 비교할 때 6.7% (3/45)를 나타낸 이번 결과와 유사하였고,Bacillus subtilis 는 9.4% (11/117)로 보고하여 이번 연구결과검출되지 않은 결과와는 대조를 이루어 이에 대한 추가 연구가 필요할 것으로 사료되는데 이는 고초균 (Bacillus subtilis)의 경우 건조된 한약재에서 나올 가능성이 있기 때문인데 이는 대부분의 유통한약재가 토양유래라는 점 때문이다. 속균별세균 분리 결과를 통해, 실험을 수행한 여러 병원성 미생물중에서 Bacillus cereus가 국내 유통 한약재의 위생지표에 대한 지표세균으로 가장 적합함을 알 수 있다.
- 8 × 104로, 두충은 0-0과 0-0으로, 산조인도 0-0과 0-0으로 각각 나타나 2010년 한약재에서 조사한 결과 (Lee andYoon, 2010)인 황기, 두충, 산조인에서는 총세균수가 적게 나온 반면, 상대적으로 총세균수가 많은 한약재는 석창포, 우슬,맥문동 등이었다는 보고와 대체로 일치하였으나 황기의 경우에는 본 연구 결과와 다소 차이를 보였다. 한편, 총세균수와 대장균군수의 검출빈도를 보았을 때 품목별 세균이 검출되지 않은 시료가 많은 것으로 나타나 한약재의 미생물 오염은 한약재가 오염될 수 있는 여러 환경, 즉 제조공정 중 CCP (criticalcontrol point, 중점관리지점) 에서의 관리문제가 가장 크므로,한약재가 어떤 것인지 보다는 개별 한약재를 더욱 집중 관리 하여 필요가 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.