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문제 정의
- 우리나라의 대표적인 국화과 산채인 쑥부쟁이는 그 자원이 풍부하나 지금까지의 과학적 검증을 통하여 암 예방5), 항균활성6) 등이 보고된 정도이며 그 밖의 생리활성 및 성분에 관한 연구는 미비한 실정이다. 따라서 이번 연구에서는 쑥부쟁이를 비만증 개선에 활용하기 위해 항비만 효과를 실험하였다. 세포실험 및 동물실험을 통하여 쑥부쟁이 에탄올 추출물(AY)이 지방 축적과 지방세포의 분화를 촉진시키는 전사인자 mRNA 발현량, 장기조직 및 혈중 콜레스테롤 수치에 미치는 영향 등을 확인하였으며 그 결과를 보고하는 바이다.
- 본 연구에서는 쑥부쟁이 에탄올 추출물이 체지방 축적에 미치는 영향을 확인하기 위하여 지방전구세포인 3T3-L1 cell과 고지방 식이로 비만을 유도한 C57/BL6 마우스를 통해 실험을 진행하였으며 이에 대한 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 따라서 이번 연구에서는 쑥부쟁이를 비만증 개선에 활용하기 위해 항비만 효과를 실험하였다. 세포실험 및 동물실험을 통하여 쑥부쟁이 에탄올 추출물(AY)이 지방 축적과 지방세포의 분화를 촉진시키는 전사인자 mRNA 발현량, 장기조직 및 혈중 콜레스테롤 수치에 미치는 영향 등을 확인하였으며 그 결과를 보고하는 바이다.
제안 방법
- 12시간 간격(08:00∼ 20:00)의 광주기로 일정한 조건을 유지하고 동물들은 폴리카보네이트 사육 상자에 5 마리씩 분리하여 사육하였다12).
- 24시간 동안 배양한 후 추출물을 각각의 농도별로(0, 100, 200, 300, 400, 500 μg/ml) 처리하여 48시간 동안 배양하였다.
- 쑥부쟁이를 건조한 후 건조된 쑥부쟁이 1kg당 20 L용량의 70% 발효주정을 첨가하여 80℃ 3시간 동안 3회 추출한 후 여과하여 불순물을 제거하였다. 3회 추출로 얻어진 추출물 47L를 감압농축 하였으며 농축한 시료는 Freeze dry(PVTFD20R, Ilshin, Korea)를 사용하여 동결건조를 수행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 파우더 227.
- AY가 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제시키는지 확인하기 위해 지방세포로의 분화를 유도시킨 후 분화가 유도되는 동안 세포에 AY를 50 ,100, 250 그리고 500 ㎍/㎖을 처리하고 Oil Red O 시약을 이용하여 염색을 실시하였다. 현미경 사진 관찰 결과 붉은색으로 염색된 지방구가 AY농도 의존적으로 감소된 것을 확인 할 수 있었다(Fig.
- AY에 의한 지방축적 감소가 어떤 분자생물학적 메카니즘에 의해 유도되는지 확인하기 위해 qRT-PCR에서는 Adipogenesis 의 핵심조절인자 PPAR-γ와 adipocyte expressed genes인 FAS의 발현량을 확인하였다.
- AY의 섭취가 mouse의 지질대사 조절 기관에 어떠한 영향을 미치는지 확인하기 위하여 간 조직의 H&E (Hematoxylin and Eosin) staining을 진행하였다(Fig. 6).
- 일반식이군, HF군, AY100, AY250, AY500으로 군을 나누고 각 군당 5마리씩 실험에 사용하였다. AY의 투여는 매일 1회 경구투여로 4주간 진행하였으며 마지막투여 이후 12시간 절식시킨 뒤혈액과 장기를 채취하였다. 간과 부고환지방 조직에 H&E stain을 수행하여 관찰한 결과 HF군에 비해 AY를 투여한 군의 간조직은 lipiddroplet이 확연히 줄어든 것을 확인하였다.
- C57/BL6 마우스를 고지방식이를 5주간 투여해 비만을 유도하였고. 일반식이군, HF군, AY100, AY250, AY500으로 군을 나누고 각 군당 5마리씩 실험에 사용하였다.
- PPAR-γ, Fatty acid synthase (FAS)의 유전자 발현을 확인하였다.
- 고지방식로 비만을 유도한 마우스 모델은 일반식이군 (Normal), 고지방식이군(HF), AY 100 μg/mL 투여군(AY100), AY 250 μg/mL 투여군(AY250), AY 500 μg/mL 투여군(AY500)으로 나누어 각각 5마리씩 사육하여 실험에 사용하였다.
- 마우스는 1주간 고형식이로 적응시킨 후 난괴법에 의하여 일반식이군(Normal)과 고지방식이군으로 나누어서 5주간 사육하였다. 그 뒤, 고지방군은 다시 난괴법에 의하여 고지방대조군(HF), 고지방-쑥부쟁이(100 mg/kg, 250mg/kg, 500 mg/kg)군으로 나누어 4주간 사육하였다. 동물사육실의 환경은 항온(22 ± 2℃), 항습(50 ± 5%).
- 25 mM dexametha -sone, 10 μg/ml insulin 이 첨가된 배지를 처리하여 분화를 48시간 유도한 뒤 다시 48시간 10% FBS-DMEM에 10 μg/ml insulin이 첨가된 배지로 교체해주었다. 그 후 2일마다 10% FBS-DMEM 배지로 교체하였다. 시료의 처리는 분화유도 배지 첨가 시점부터 매회 같이 처리하였다7).
- 완전히 건조시킨 후 Oil red O 염색액(Oil red O staining kit, sciencell, CA, USA)을 처리하여 15분간 상온에서 염색하고, 염색액을 제거한 후 물로 5회 세척한 다음 Microscope(Nikon TS100, Tokyo, Japan)로 관찰하였다.또한, 흡광도 측정을 위하여 100% isopropyl alcohol로 염색된 지방구를 용출시켜 ELISA microplate reader(Infinite 200 pro, TECAN, Austria)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다9).
- 실험동물은 6주령 된 C57BL/6 마우스를 샘타코(SAMTAKO, Korea, Osan)로부터 구입하였다. 마우스는 1주간 고형식이로 적응시킨 후 난괴법에 의하여 일반식이군(Normal)과 고지방식이군으로 나누어서 5주간 사육하였다. 그 뒤, 고지방군은 다시 난괴법에 의하여 고지방대조군(HF), 고지방-쑥부쟁이(100 mg/kg, 250mg/kg, 500 mg/kg)군으로 나누어 4주간 사육하였다.
- 본 실험에 사용한 쑥부쟁이 70% 에탄올 추출물이 지방세포의 세포증식억제를 나타내는지 확인하기 위하여 MTS assay를 수행하였다. MTS solution은 Promega(USA)사에서 판매하는 CellTiter96® AQueous one solution을 사용하였다.
- 세포가 confluence 상태가 되면 preadipocyte를 제외한 모든 well에 10% FBS-DMEM에 0.5 mM 3-isobutyle-1-methylxanthine(IBMX), 0.25 mM dexametha -sone, 10 μg/ml insulin 이 첨가된 배지를 처리하여 분화를 48시간 유도한 뒤 다시 48시간 10% FBS-DMEM에 10 μg/ml insulin이 첨가된 배지로 교체해주었다.
- 쑥부쟁이가 3T3-L1 preadipocyte의 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여 100, 200, 300, 400 그리고 500 μg/mL 농도의 쑥부쟁이 70% 에탄올 추출물(AY)을 48시간 동안 처리한 다음 MTS assay를 실시한 결과는 Fig. 1.
- 4 PBS로 세척하고 10% formalin 용액으로 2시간 동안 고정한 이후, 고정액 제거 후 다시 PBS로 5회 세척하였다. 완전히 건조시킨 후 Oil red O 염색액(Oil red O staining kit, sciencell, CA, USA)을 처리하여 15분간 상온에서 염색하고, 염색액을 제거한 후 물로 5회 세척한 다음 Microscope(Nikon TS100, Tokyo, Japan)로 관찰하였다.또한, 흡광도 측정을 위하여 100% isopropyl alcohol로 염색된 지방구를 용출시켜 ELISA microplate reader(Infinite 200 pro, TECAN, Austria)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다9).
- 용액에 넣어 보관한 장기들은 H&E(Hematoxylin and Eosin) stain을 하였고 H&E stain한 장기 조직은 Microscope(Nikon Coolscope2, Tokyo, Japan)로 관찰 하였다.
- 이에 근거하여 농도를 50, 100, 250 그리고 500 μg/mL로 설정하고 실험을 진행하였다.
- 지방분화를 유도하여 농도별로 AY를 처리한 뒤 Oil-Red O staining을 하여 염색 시킨뒤 다시 염색을 제거해 그 용액의 흡광도를 측정하였다. 측정결과 AY를 처리하지 않은 adipocyte에 비해 AY를 50 μg/mL로 처리한 군에서는 85.
- 채혈 후 바로 개복하여 간 및 부고환지방 조직을 채취하였으며 H&E staining을 통해 조직을 관찰하였다.
- 합성한 cDNA 1 μL에 Primer 1 μL, DEPC-treated water 8 μL, TaqMan® Universal Master Mix II(Thermo, USA) 10 μL를 첨가한 뒤 ABI 7300 Real-Time PCR을 이용해 qRT-PCR을 수행하였다10.
- 용액에 넣어 보관한 장기들은 H&E(Hematoxylin and Eosin) stain을 하였고 H&E stain한 장기 조직은 Microscope(Nikon Coolscope2, Tokyo, Japan)로 관찰 하였다. 혈액검사는 혈청 중의 total cholesterol(TC), high density lipoprotein cholesterol(HDL-C), triacylglycerol(TG)은 kit(Asan Pharm, korea)를 이용하여 분석을 하였다.
- 부고환지방 조직 또한 AY를 처리한 경우 지방구의 크기가 줄어든 것을 확인하였다.혈액을 이용하여 TG, TC, HDL-C의 수치를 검사하였다. 검사결과 HF군에 비하여 AY를 투여한 군은 TG, TC의 농도가 확연히 감소하였으며 HDL-C의 밀도가 증가한 것을 확인하였다.
대상 데이터
- MTS solution은 Promega(USA)사에서 판매하는 CellTiter96® AQueous one solution을 사용하였다.
- Primer는 Thermo Fisher(USA)사의 Hprt (TaqMan® Mm 03024075_m1 4331182), Ppar-γ (TaqMan® Mm00440940_m1 4331182), FAS (TaqMan® Mm012049774_m1 4331182)를 사용하였다11).
- 3회 추출로 얻어진 추출물 47L를 감압농축 하였으며 농축한 시료는 Freeze dry(PVTFD20R, Ilshin, Korea)를 사용하여 동결건조를 수행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 파우더 227.46g (수득률 : 22.746%)를 실험 시료로 사용하였다.
- 12시간 간격(08:00∼ 20:00)의 광주기로 일정한 조건을 유지하고 동물들은 폴리카보네이트 사육 상자에 5 마리씩 분리하여 사육하였다12). 본 실험에 사용한 45 Kcal% fat whit 1.25% cholesterol 고지방 식이는 RESEARCH DIETS (RESEARCH DIETS, New Jersey. USA)로부터 구입하여서 제공하였으며 물과 식이는 제한 없이 섭취하도록 하였고 체중은 매주 1회 일정시각에 측정하였으며, 식이섭취량은 매일 일정시각에 공급량에서 잔량을 감하였다.
- 실험동물은 6주령 된 C57BL/6 마우스를 샘타코(SAMTAKO, Korea, Osan)로부터 구입하였다. 마우스는 1주간 고형식이로 적응시킨 후 난괴법에 의하여 일반식이군(Normal)과 고지방식이군으로 나누어서 5주간 사육하였다.
- 실험에 사용한 3T3-L1 세포는 마우스 지방전구세포로 American Type Culture Collection(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 구입하였고, 10% new born calf serum(NBCS, Invitrogen, Grand Island, NY, USA)과 100 unit/ml penicillin, 100μg/ml streptomycin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA)이 함유된 DMEM(Invitrogen,. Carlsbad, CA, USA ) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다.
- 실험에 사용한 쑥부쟁이는 구례삼촌(Guryesamchon, Gurye, Korea)에서 구입하였다. 쑥부쟁이를 건조한 후 건조된 쑥부쟁이 1kg당 20 L용량의 70% 발효주정을 첨가하여 80℃ 3시간 동안 3회 추출한 후 여과하여 불순물을 제거하였다.
- C57/BL6 마우스를 고지방식이를 5주간 투여해 비만을 유도하였고. 일반식이군, HF군, AY100, AY250, AY500으로 군을 나누고 각 군당 5마리씩 실험에 사용하였다. AY의 투여는 매일 1회 경구투여로 4주간 진행하였으며 마지막투여 이후 12시간 절식시킨 뒤혈액과 장기를 채취하였다.
데이터처리
- a-cMeans not sharing a common letter are significantly different between groups based on one-way ANOVA with Duncan’s multiple-range post hoc test at P < 0.05.
- 본 실험에서 얻은 결과에 대해서는 평균치 ± 표준편차(mean ± S.D.)로 나타내었으며, 실험군 간의 유의성을 검정하기 위하여 SPSS(18.0, Statistical Package for Social Science Inc., Chicago, IL, USA) 통계 패키지 프로그램을 활용하여 동물실험은 일원변량분석(One way ANOVA)을 실시하였다.
- 유의성이 있는 경우, p<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test를 실시하였다.
성능/효과
- 3T3-L1 cell에 AY를 다양한 농도로 처리한 뒤 MTS assay를 수행한 결과 500 μg/mL의 농도로 처리한 군에서 96.1%의 높은 생존율을 보였다.
- 3T3-L1 cell을 이용한 지방분화유도 실험에서 Oil-Red O staining을 한 결과 육안으로 확인 가능할 정도로 지방 축적이 감소되었으며 isopropanol을 이용해 염색을 제거한 후 흡광도를 측정한 결과에서도 adipocyte를 100% 기준으로 잡았을 때 preadipocyte는 49.3%, AY-E70을 50 μg/mL로 처리한 군에서는 85.6%, 100 μg/mL로 처리한 군에서는 65.1%, 250 μ g/mL로 처리한 군에서는 58.3%, 500 μg/mL로 처리한 군에서는 57.9%까지 감소하여 농도 의존적으로 지방축적이 확연히 감소한 것을 확인할 수 있다.
- 간과 부고환지방 조직에 H&E stain을 수행하여 관찰한 결과 HF군에 비해 AY를 투여한 군의 간조직은 lipiddroplet이 확연히 줄어든 것을 확인하였다.
- 이들은 비만으로 인하여 간에 축적된 droplet으로, HF군과 비교하여 AY을 투여한 군의 간에서 감소하였고 특히 AY500에서는 droplet이 현저하게 감소한 것을 확인했다. 간의 조직학적 변화로 포화지방산을 대량 포함하고 있는 콜레스테롤의 함량이 높은 고지방사료를 섭취시킨 HF군의 간은 지방의 축적이 광범위하고 명확하게 관찰되었으나, AY의 투여에 의해 지방축적의 감소를 보여 AY이 간조직의 재생과 지방의 배출효과가 있음을 확인하였다. 부고환지방 조직에서도 HF군의 지방세포 크기가 일반식이군의 지방세포 크기보다 큰 것을 확인할 수 있다.
- 혈액을 이용하여 TG, TC, HDL-C의 수치를 검사하였다. 검사결과 HF군에 비하여 AY를 투여한 군은 TG, TC의 농도가 확연히 감소하였으며 HDL-C의 밀도가 증가한 것을 확인하였다. 이로 인해 고지방식이로 유도된 체중을 감소시키고 더불어 이상지질혈증에도 긍정적인 영향을 미치는 것으로 판단된다.
- 에 나타내었다. 결과에서 볼 수 있듯이 모든 농도에서 세포 증식 억제 효과가 나타나지 않았다.
- 본 연구에서는, HDL-C의 함량은 HF군과 시료 섭취군에서는 유의적인 차이를 보이지는 않았지만 AY섭취가 전체 콜레스테롤 중 HDL-C의 비율을 증가시킴으로써 혈중 콜레스테롤 농도 개선에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다. 결과적으로 AY의 섭취는 전체 콜레스테롤 중 HDL-C의 비율을 증가시키고 TG함량을 낮춤으로써 고지방식이로 유도된 고지혈증에 개선에 효능이 있는 것으로 판단된다.
- 채취한 혈액을 이용해 혈청을 분리하여 TG, TC, HDL-C의 농도을 확인한 결과 고지방식이군의 중성지방, 총콜레스테롤, 고밀도 콜레스테롤양이 일반식이군에 비하여 유의성 있게 늘어난 것을 볼 수 있으며 이는 비만이 정상적으로 유도되었음을 보여준다. 고지방식이군과 약물처리군의 총콜레스테롤 및 고밀도콜레스테롤 수치 확인결과 총콜레스 테롤의 양은 농도 의존적으로 줄었지만 고밀도 콜레스테롤의 양은 미약하게 줄어든 것을 확인 할 수 있는데 이는 결과적으로 체내에 고밀도 콜레스테롤이 많이 남아 HDL-C의 비율을 증가시키고 TG 함량을 낮춤을 나타낸다. HDL 콜레스테롤은 혈액 중의 동맥경화를 일으키는 저분자 콜레스테롤을 제거하여 간으로 이동시키는 역할을 하는 좋은 콜레스테롤로 알려져 있어 AY의 섭취가 혈중 콜레스테롤 농도 개선에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다.
- 에 나타내었다. 고지방식이를 섭취한 군은 정상 식이군에 비해 유의적으로 체중 증가가 유도되었으며, AY를 섭취한 군에서 체중이 감소하는 경향을 나타냈다. AY의 섭취는 고지방식이로 유도된 비만 모델에서 체중을 감소함으로써 비만에긍정적인 영향을 미칠 것으로 사료된다.
- 비만과 내장지방의 축적은 혈중 지질함량을 변화시키고 지방조직에서의 adipokine의 분비에 영향을 주게 되며 이는 인슐린 저항성 및 비알코올성 지방 간 등에 영향을 줄 수 있다26). 관찰결과 일반식이군의 간 조직에 비해 고지방식이군의 간조직에 더 크고 많은 lipid droplet의 흔적을 발견했으며 이는 지방간이 정상적으로 유도되었음을 보여준다. 약물을 처리한 군들의 경우 고지방식이군에 비하여 lipid droplet이 농도 의존적으로 감소하였으며 특히 AY500군 에서는 상당부분이 감소된 것을 확인 할 수 있다.
- 따라서 쑥부쟁이 에탄올 추출물은 지방축적 및 그에 관여하는 Cytokine을 억제하여 비만치료 및 예방에 도움을 줄 것으로 보여지며 나아가 고지혈증 및 콜레스테롤 개선에도 효과가 있을 것으로 판단된다. 따라서 이러한 결과는 추후 비만연구에 쑥부쟁이가 가지는 항비만 반응의 메커니즘 분석에도 매우 중요한 기초자료가 될 것이다.
- 2). 또한 Oil Red O 시약으로 염색된 cell 의 염색약을 추출한 값 역시 모든 농도에서 통계적으로 유의적인 차이를 나타냈으며, 이를 바탕으로 AY가 지방전구세포의 분화를 억제하는 것을 확인 할 수 있었다.
- AY50에서는 발현이 억제되지 않았지만 AY100, AY250, AY500에서는 눈에 띄게 감소한 것을 확인할 수 있다. 또한 adipocyte expressed genes인 FAS 경우에도 Fig. 3에서와 같이 adipocyte에서 FAS가 발현된 것을 확인 하였고 AY50에서는 발현량 감소가 거의 보여지지 않았지만 AY100, AY250 그리고 AY500에서는 AY처리에 의하여 현저하게 감소하였음을 확인하였다.
- 먼저 adipogenic transcription factors의 발현 정도를 확인한 결과 Fig. 3에 나타난 바와 같이 분화를 유발하였을 경우 PPAR-γ의 발현이 현저하게 증가하였지만 AY의 처리에 의하여 농도 의존적인 감소가 유발되었다.
- . 본 실험 결과에서 간 무게는 고지방 식이의 영향으로 HF군이 Normal군에 비하여 유의적으로 증가하였으며, 이는 고지방식이에 의해 간 내에 콜레스테롤 및 중성 지질 등이 축적 된 것으로 사료된다. 간 무게가 AY 섭취군들에서 유의적으로 감소하였다.
- 간과 부고환지방 조직에 H&E stain을 수행하여 관찰한 결과 HF군에 비해 AY를 투여한 군의 간조직은 lipiddroplet이 확연히 줄어든 것을 확인하였다. 부고환지방 조직 또한 AY를 처리한 경우 지방구의 크기가 줄어든 것을 확인하였다.혈액을 이용하여 TG, TC, HDL-C의 수치를 검사하였다.
- 약물을 처리한 군들의 경우 고지방식이군에 비하여 lipid droplet이 농도 의존적으로 감소하였으며 특히 AY500군 에서는 상당부분이 감소된 것을 확인 할 수 있다. 부고환지방조직 또한 고지방식이 군에 비하여 약물처리군 지방구의 크기가 현저히 감소된것을 확인하였다.
- 6). 실험 결과 정상식이군 의 간조직에 비해 고지방식이군 (HF)의 간 조직에서 더 크고 많은 lipid droplet의 흔적들을 확인할 수 있었다. 이들은 비만으로 인하여 간에 축적된 droplet으로, HF군과 비교하여 AY을 투여한 군의 간에서 감소하였고 특히 AY500에서는 droplet이 현저하게 감소한 것을 확인했다.
- 실험 결과 정상식이군 의 간조직에 비해 고지방식이군 (HF)의 간 조직에서 더 크고 많은 lipid droplet의 흔적들을 확인할 수 있었다. 이들은 비만으로 인하여 간에 축적된 droplet으로, HF군과 비교하여 AY을 투여한 군의 간에서 감소하였고 특히 AY500에서는 droplet이 현저하게 감소한 것을 확인했다. 간의 조직학적 변화로 포화지방산을 대량 포함하고 있는 콜레스테롤의 함량이 높은 고지방사료를 섭취시킨 HF군의 간은 지방의 축적이 광범위하고 명확하게 관찰되었으나, AY의 투여에 의해 지방축적의 감소를 보여 AY이 간조직의 재생과 지방의 배출효과가 있음을 확인하였다.
- 2). 또한 Oil Red O 시약으로 염색된 cell 의 염색약을 추출한 값 역시 모든 농도에서 통계적으로 유의적인 차이를 나타냈으며, 이를 바탕으로 AY가 지방전구세포의 분화를 억제하는 것을 확인 할 수 있었다.
- 고지방식이의 섭취로 인한 지방조직의 중량 증가는 지방조직에 중성지방이 축적되어 발생하며 복부지방 함량이 증가할수록 대사성 질환 위험 역시 증가된다고 알려져 있다14). 중성지방의 저장고인 부고환 지방조직의 무게를 살펴보면 정상 군에 비하여 HF군이 유의적으로 증가하였으며, AY 섭취군들에서는 유의적으로 감소하였다.
- 지방전구세포인 3T3-L1cell을 이용하여 MTS assay를 수행한 결과 쑥부쟁이 에탄올 추출 물을 500 μg/mL을 처리한 군에서 96.1%의 높은 생존율을 보였다.
- . 채취한 혈액을 이용해 혈청을 분리하여 TG, TC, HDL-C의 농도을 확인한 결과 고지방식이군의 중성지방, 총콜레스테롤, 고밀도 콜레스테롤양이 일반식이군에 비하여 유의성 있게 늘어난 것을 볼 수 있으며 이는 비만이 정상적으로 유도되었음을 보여준다. 고지방식이군과 약물처리군의 총콜레스테롤 및 고밀도콜레스테롤 수치 확인결과 총콜레스 테롤의 양은 농도 의존적으로 줄었지만 고밀도 콜레스테롤의 양은 미약하게 줄어든 것을 확인 할 수 있는데 이는 결과적으로 체내에 고밀도 콜레스테롤이 많이 남아 HDL-C의 비율을 증가시키고 TG 함량을 낮춤을 나타낸다.
- 측정결과 AY를 처리하지 않은 adipocyte에 비해 AY를 50 μg/mL로 처리한 군에서는 85.6%, 100μg/mL로 처리한 군에서는 65.1%, 250 μg/mL로 처리한 군에서는 58.3%, 500 μ g/mL로 처리한 군에서는 57.9%까지 농도 의존적으로 지방축적을 감소시키는 것을 확인하였다.
- AY가 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제시키는지 확인하기 위해 지방세포로의 분화를 유도시킨 후 분화가 유도되는 동안 세포에 AY를 50 ,100, 250 그리고 500 ㎍/㎖을 처리하고 Oil Red O 시약을 이용하여 염색을 실시하였다. 현미경 사진 관찰 결과 붉은색으로 염색된 지방구가 AY농도 의존적으로 감소된 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 2). 또한 Oil Red O 시약으로 염색된 cell 의 염색약을 추출한 값 역시 모든 농도에서 통계적으로 유의적인 차이를 나타냈으며, 이를 바탕으로 AY가 지방전구세포의 분화를 억제하는 것을 확인 할 수 있었다.
- 혈액내의 지질 농도 분석 결과는 Table 1에 나타내었다. 혈청내 TG 함량은 고지방식이에 의해 가장 큰 영향을 받는데 고지방식 이만을 섭취한 HF군에 비해 AY500에서 혈청 TG 함량이 유의적으로 감소하였다. HDL 콜레스테롤은 혈액 중의 동맥경화를 일으키는 저분자 콜레스테롤을 제거하여 간으로 이동시키는 역할을 하는 좋은 콜레스테롤로 알려져 있다17).
- 확인 결과 50 μg/mL로 처리한 군에서는 PPAR-γ와 FAS 모두 발현량이 감소하지 않았으나 100, 250, 500μg/mL의 농도에서는 유의적으로 발현량이 감소하는 것을 확인하였다.
후속연구
- 따라서 쑥부쟁이 에탄올 추출물은 지방축적 및 그에 관여하는 Cytokine을 억제하여 비만치료 및 예방에 도움을 줄 것으로 보여지며 나아가 고지혈증 및 콜레스테롤 개선에도 효과가 있을 것으로 판단된다. 따라서 이러한 결과는 추후 비만연구에 쑥부쟁이가 가지는 항비만 반응의 메커니즘 분석에도 매우 중요한 기초자료가 될 것이다.
- HDL 콜레스테롤은 혈액 중의 동맥경화를 일으키는 저분자 콜레스테롤을 제거하여 간으로 이동시키는 역할을 하는 좋은 콜레스테롤로 알려져 있다17). 본 연구에서는, HDL-C의 함량은 HF군과 시료 섭취군에서는 유의적인 차이를 보이지는 않았지만 AY섭취가 전체 콜레스테롤 중 HDL-C의 비율을 증가시킴으로써 혈중 콜레스테롤 농도 개선에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다. 결과적으로 AY의 섭취는 전체 콜레스테롤 중 HDL-C의 비율을 증가시키고 TG함량을 낮춤으로써 고지방식이로 유도된 고지혈증에 개선에 효능이 있는 것으로 판단된다.
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