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문제 정의
- 본 연구에서는 고 콜레스테롤 식이도 유도된 고지혈증 흰쥐 모델에 기존의 경옥고 및 신공법으로 제조된 경옥고 4종을 경구투여하여 지질대사 개선효능을 평가하였고 그 결과는 다음과 같다.
- 이에 저자는 히팅 맨틀 (Heating-mentle)을 사용한 손쉬운 瓊玉膏 제조방법 고안하였고 이에 의해 제조된 瓊玉膏의 효능을 검증하기 위하여, 고지혈증 흰쥐에 대한 지질대사 개선 효과를 살펴보고자 흰쥐에 고지방식이를 수행한 후 간, 신장, 비장 등의 무게 분석, 혈청 내 총콜레스테롤, 중성 지방, 고밀도지단백콜레스테롤, 저밀도지단백콜레스테롤 등의 지질농도 분석, aspartate aminotransferase (AST), alanine amino transferase (ALT) 등의 간 기능 효소 측정을 통한 신기능 평가, 콜레스테롤 관련 유전자 발현 분석 등의 실험을 수행한 결과 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 이 20 ㎖의 반응혼합액을 잘 섞은 뒤 2,000 rpm에서 5초간 원심침강하여 37 ℃ heating block에서 45분 동안 반응시켜 first-strand cDNA를 합성한 다음, 95 ℃에서 5분 동안 방치하여 M-MLV RT를 불활성화 시킨 후 합성이 완료된 cDNA를 polymerase chain reaction (PCR)에 주형으로 사용하였다. Real time quantitative PCR은 Applied Biosystems 7,500 Real-Time PCR system (Applied Biosystems)를 이용하여 수행하였다. Rat Probe & Oligonucleotide의 염기배열은 Table 2과 같다.
- ⑦ BKF 1 g/㎏ 투여군 (BKF) : 고콜레스테롤이 함유된 사료를 섭취하고 人蔘대신 발효黑蔘으로 대체한 瓊玉膏를 신공법으로 만들어 1 g/㎏으로 투여한 군.
- , NJ, USA)를 2주간 공급하여 고지혈증을 유발하였다. 그 후 실험 약물을 6주간 경구 투여하였으며 약물 투여 기간 중에도 고 콜레스테롤 식이를 유지하였다.
- 적출한 간과 지방조직들의 유전자 발현 양상을 real time PCR 증폭법을 사용하여 알아보았다. 복부지방조직, 간 조직 등은 RNAsolB (Tel-Test) 용액을 사용하여 각 조직으로부터 RNA를 추출한 뒤 One-step SYBR Green PCR kit (ABI science)를 사용하여 cDNA 및 real-time PCR 분석을 하였다. 간 조직과 지방조직에 RNAzolB 500 mL를 넣고 homogenizer로 조직을 분쇄하여 여기에 chloroform (CHCl3) 50 mL를 첨가한 후 15초간 다시 혼합하였다.
- 본 논문에서는 고콜레스테롤 식이를 통하여 고지혈증을 유발한 흰쥐 모델에 제조방법을 달리한 경옥고 5종을 경구 투여하여 체중변화, 식이효율 및 혈청내 지질농도를 분석하였다. 실험결과 고콜레스테롤식이를 섭취하여 고지혈증이 유발된 대조군에서 체중증가와 더불어 고지혈증 병태를 보였으며, 체중변화와 식이효율은 대조군과 실험군 사이에 큰 차이가 나타나지 않았다.
- 실험동물의 체중은 매주 1회 동일 시간 동일 조건에서 측정하였고, 실험종료일 체중에서 실험 개시 전 체중을 빼서 체중증가량 (body weight gain (g))을 산출하였다. 식이섭취량은 제공된 사료에서 1주일간 섭취하고 남은 사료량을 제하고 각 실험군의 하루 사료섭취량을 산출하였다. 한편, 각 쥐의 체중증가량을 동일 사육기간의 사료섭취량으로 나누어 사료효율(food efficiency ratio, FER)을 구하였다.
- 실험 종료 후 실험동물로부터 분리한 간 조직에서 HMGCoA Reductase를 Assay Kit (CS1090, Sigma)를 이용하여 확인하였고, 혈중 ACAT (Acetyl-CoA Acetyltransferase 1 ELISA Kit, ABIN826870), CYP7A1 (Cholesterol 7-AlphaHydroxylase, BIN1114126)를 분석하였다. 적출한 간과 지방조직들의 유전자 발현 양상을 real time PCR 증폭법을 사용하여 알아보았다.
- 15 분, 45 ℃에서 1분간 수행하였다. 실험군과 대조군은 internal standard로 GAPDH를 사용하여 target group의 Quantitative PCR로 계산하여 RQ (relative quantitative)를 측정하였다.
- 4% 이상, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하고 실온 24±2 ℃를 계속 유지하였으며 1주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 고지혈증 유발 실험군은 2주간 고 콜레스테롤 함유 사료를 섭취하게 하여 고지혈증을 유발하였다. 실험군은 각 군별로 난괴법에 의해 5마리씩 6군으로 나누었다.
- 실험동물을 희생시킨 후 간 조직과 지방조직은 적출하여 생리 식염수로 헹구고 여과지를 이용하여 표면의 물기를 제거한 후 각각 무게를 측정하였으며, RNA 실험용은 RNA 안정액 (RNAsolB)에 보관하여 일주일 안에 RNA를 추출하고, 나머지 부분은 액체질소로 급랭시켜 –70 ℃ 냉동고에 보관하였다. 실험동물로부터 분리한 혈청에서 간 기능의 지표인 ALT 및 AST를, 혈장 및 간의 지질함량의 지표인 TC, HDL cholesterol, TG, 혈당, 아포지 단백 (apo B-48, apo B-100, apo E), LCAT, 그리고 Lipoprotein Lipase의 함량을 생화학자동 분석기를 이용하여 측정한 다음 식 (a)에 의하여 LDL cholesterol을 산출하였다.
- 실험동물을 희생시킨 후 간 조직과 지방조직은 적출하여 생리 식염수로 헹구고 여과지를 이용하여 표면의 물기를 제거한 후 각각 무게를 측정하였으며, RNA 실험용은 RNA 안정액 (RNAsolB)에 보관하여 일주일 안에 RNA를 추출하고, 나머지 부분은 액체질소로 급랭시켜 –70 ℃ 냉동고에 보관하였다.
- 실험동물의 체중은 매주 1회 동일 시간 동일 조건에서 측정하였고, 실험종료일 체중에서 실험 개시 전 체중을 빼서 체중증가량 (body weight gain (g))을 산출하였다. 식이섭취량은 제공된 사료에서 1주일간 섭취하고 남은 사료량을 제하고 각 실험군의 하루 사료섭취량을 산출하였다.
- 역전사 (reverse transcription) 반응은 준비된 total RNA 3 mg을 DNase I (10U/㎖) 2U/tube를 37 ℃ heating block에서 30분간 반응한 후 75 ℃에서 10분 동안 변성시키고, 이에 2.5 ㎖ 10 mM dNTPs mix, 1 ㎖ random sequence hexanucleotides (25 pmole/ 25 ㎖), RNA inhibitor로서 1 mL RNase inhibitor (20 U/㎖), 1 ㎖ 100 mM DTT, 4.5 ㎖ 5×RT buffer (250 mM Tris-HCl, pH 8.3, 375 mM KCl, 15 mM MgCl2)를 가한 후, 1 ㎖의 M-MLV RT (200 U/㎖)를 다시 가하고 DEPC 처리된 증류수로서 최종 부피가 20 ㎖가 되도록 하였다.
- 유전자 발현은 TaqMan probe (FAM dye-labeled, ABi)를, internal standard를 Rat GAPDH probe set; Endogenous Control (VIC / MGB Probe, Probe limited) from Applied Biosystems (4352339E)를 사용하였고, primer의 최종 농도가 200 nM이 되게 반응시켰다. Real time quantitative PCR의 조건은 : pre-denaturation은 50 ℃에서 2분, 94 ℃에서 10분 , 그리고 40 cycles을 95 ℃에서 0.
- 정상군은 일반사료를 공급하였고, 대조군과 약물처치군은 1.25% 콜레스테롤이 함유된 고 콜레스테롤식이 (D12336, Research Diets, Inc., NJ, USA)를 2주간 공급하여 고지혈증을 유발하였다. 그 후 실험 약물을 6주간 경구 투여하였으며 약물 투여 기간 중에도 고 콜레스테롤 식이를 유지하였다.
- 주요 장기들에 대한 조직병리학적 관찰을 수행하기 위해 간 조직을 10% neutral buffered formalin에 24시간 동안 고정시킨 다음 graded alcohol로 탈수시키고 파라핀으로 포매하여 block을 제작한 다음 microtome으로 4 mm 두께의 조직절편을 제작하여 hematoxylin & eosin (H&E) 염색 및 Oil red O 염색을 시행한 뒤 xylene clearing을 거쳐 permount로 처리한 후 광학현미경위에서 조직 또는 장기별 특이 병변의 유무를 관찰하였다.
- 식이섭취량은 제공된 사료에서 1주일간 섭취하고 남은 사료량을 제하고 각 실험군의 하루 사료섭취량을 산출하였다. 한편, 각 쥐의 체중증가량을 동일 사육기간의 사료섭취량으로 나누어 사료효율(food efficiency ratio, FER)을 구하였다.
- 혼합된 시료는 히팅 맨틀에 스테인레스 용기하부와 반응조 상부뚜껑을 부착하고 중앙에 냉각기 및 에에캡을 설치하여 전탕과 농축이 편리하도록 하였다. 瓊玉膏 제조는 히팅 맨틀의 외부온도를 90 ℃로 설정하여 끓어 넘치지 않는 정도로 약 18-22시간 가열하였고, 농축은 동일한 온도에서 반응조 상부캡을 모두 제거하여 약 1시간 40분 내외로 농축하였다.
대상 데이터
- 실험에 사용된 人蔘, 白茯苓, 生地黃, 蜂蜜은 한약규격품을 대전대대학교 본초학교실에서 감정한 후 분쇄하여 시료 제조에 사용하였다. 人蔘 및 黑蔘은 금산 지역에서 재배된 4년생 수삼을 생산자증명이 확인된 금산인삼농협에서 구입하였고, 黑蔘은 김 등10)의 제조 방법을 참고하여 90 ℃에서 2시간 증숙하는 과정을 9회 반복하여 제조한 뒤 이를 분쇄하여 시료로 사용하였다. 地黃은 금산지역에서 생산된 生地黃을 구입하였고 녹즙기 (Angelia 7700, Angel co.
- 人蔘 및 黑蔘은 금산 지역에서 재배된 4년생 수삼을 생산자증명이 확인된 금산인삼농협에서 구입하였고, 黑蔘은 김 등10)의 제조 방법을 참고하여 90 ℃에서 2시간 증숙하는 과정을 9회 반복하여 제조한 뒤 이를 분쇄하여 시료로 사용하였다. 地黃은 금산지역에서 생산된 生地黃을 구입하였고 녹즙기 (Angelia 7700, Angel co., Busan, Korea)를 이용하여 汁을 취하여 시료 제조에 사용하였다.
- 1). 발효과정은 올리고당 30 g과 Saccharomyces cerevisiae 3 g을 투입한 후 2시간 40분 발효시킨 후 瓊玉膏 제조 과정에 사용되었다.
- 본 실험을 위하여 사용된 7주령 수컷 Sprague-Dawley (SD) 흰쥐는 대한바이오링크 (주)에서 분양받아 실험당일까지 고형사료 (Samyang corporation, Seoul, Korea)(조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6% 이상, 인 0.4% 이상, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하고 실온 24±2 ℃를 계속 유지하였으며 1주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 고지혈증 유발 실험군은 2주간 고 콜레스테롤 함유 사료를 섭취하게 하여 고지혈증을 유발하였다.
- 실험에 사용된 人蔘, 白茯苓, 生地黃, 蜂蜜은 한약규격품을 대전대대학교 본초학교실에서 감정한 후 분쇄하여 시료 제조에 사용하였다. 人蔘 및 黑蔘은 금산 지역에서 재배된 4년생 수삼을 생산자증명이 확인된 금산인삼농협에서 구입하였고, 黑蔘은 김 등10)의 제조 방법을 참고하여 90 ℃에서 2시간 증숙하는 과정을 9회 반복하여 제조한 뒤 이를 분쇄하여 시료로 사용하였다.
- 실험에 사용될 瓊玉膏는 人蔘 50 g, 白茯苓 100 g, 地黃 600 g, 꿀 300 g 의 비율로 혼합하여 제조하였고, 실험시료에 따라 黑蔘으로 제조하는 경우, 발효과정을 거친 경우 등으로 구분하였으며, 실험 대조를 위하여 시중에서 중탕방식으로 생산되어 유통중인 瓊玉膏 (Barunhanyak, Seoul ,Korea)를 구입하여 사용하였다 (Table. 1). 발효과정은 올리고당 30 g과 Saccharomyces cerevisiae 3 g을 투입한 후 2시간 40분 발효시킨 후 瓊玉膏 제조 과정에 사용되었다.
데이터처리
- 모든 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 분석하였으며 그 결과는 평균±표준오차 (mean±SE) 로 표시하였다.
- 정상군과 대조군간의 유의성은 정상군과 비교하였고, 그리고 각 실험군 간의 유의성은 대조군과 비교하여 통계적 유의성을 Student t-test를 이용하여 p < 0.05 수준으로 검증하였다.
이론/모형
- 실험 종료 후 실험동물로부터 분리한 간 조직에서 HMGCoA Reductase를 Assay Kit (CS1090, Sigma)를 이용하여 확인하였고, 혈중 ACAT (Acetyl-CoA Acetyltransferase 1 ELISA Kit, ABIN826870), CYP7A1 (Cholesterol 7-AlphaHydroxylase, BIN1114126)를 분석하였다. 적출한 간과 지방조직들의 유전자 발현 양상을 real time PCR 증폭법을 사용하여 알아보았다. 복부지방조직, 간 조직 등은 RNAsolB (Tel-Test) 용액을 사용하여 각 조직으로부터 RNA를 추출한 뒤 One-step SYBR Green PCR kit (ABI science)를 사용하여 cDNA 및 real-time PCR 분석을 하였다.
성능/효과
- 1. 체중변화 및 식이효율은 모든 실험군에서 유의성 있는 변화가 나타나지 않았다.
- 2. 장기 무게를 살펴본 결과, 정상군에 비해 증가된 대조군의 간, 신장 무게를 양성대조군에서 유의적으로 감소시켰으나 경옥고 투여군에서는 유의한 결과를 얻지 못하였다.
- 3. 혈청 내 지질농도 분석에서 총 콜레스테롤 함량은 KF, BK 투여군에서 양성대조군과 유사한 감소효과를 나타냈으며 중성지방 함량은 대조군에 비교하여 K1 투여군에서 크게 감소하였다. HDL 콜레스테롤은 유의한 변화가 없었으며 LDL 콜레스테롤은 KF, BK 투여군에서 양성 대조군보다 뛰어난 효과를 나타내었다.
- 4. 간 기능의 지표인 AST와 ALT를 분석한 결과, 경옥고로 인한 간 손상은 나타나지 않았다.
- 5. 콜레스테롤 합성에 중요한 ACAT2, HMG-CoA, SREBPs를 분석한 결과 모든 약물 투여군에서 감소 효과를 나타내었지만 BK, BKF 투여군에서 뛰어난 감소를 나타내었다.
- 6. 간 조직을 염색하여 분석한 결과 모든 경옥고 투여군에서 회식지방축적세포들과 거대소포성 지방증의 감소를 보였으며, 복부 지방 조직을 염색하여 분석한 결과 지방세포 크기가 줄어듬을 확인하였다.
- AST와 ALT를 측정한 결과에서는 고 콜레스테롤식이로 유도된 고지혈증 흰쥐 모델에서 경옥고의 경구 투여로 인한 간 독성은 없는 것으로 판단된다.
- 혈청 내 지질농도 분석에서 총 콜레스테롤 함량은 KF, BK 투여군에서 양성대조군과 유사한 감소효과를 나타냈으며 중성지방 함량은 대조군에 비교하여 K1 투여군에서 크게 감소하였다. HDL 콜레스테롤은 유의한 변화가 없었으며 LDL 콜레스테롤은 KF, BK 투여군에서 양성 대조군보다 뛰어난 효과를 나타내었다.
- HDL-cholesterol과 LDL-cholesterol을 측정한 결과 HDL-cholesterol은 SP60, K1, KF, BK, BKF, K0 모두 대조군과 비교하여 유의성 있는 차이는 나타나지 않았으며, LDL-cholesterol은 K1, KF, BK, BKF 투여군이 대조군과 비교하여 50%이상의 감소를 보임에 따라 고지혈증의 핵심이 되는 LDL-cholesterol 감소에 유의성 있는 결과를 보여주었다.
- HMG-CoA mRNA 유전자 발현은 대조군에서 1.12±0.14로 정상군 (0.63±0.12)에 비하여 약 2배의 증가를 나타내었고, 약물 투여군은 K0 투여군을 제외한 모든 투여군에서 유의한 감소를 나타내었다.
- HMG-CoA 유전자 발현을 분석한 결과 K1 (p<0.01), KF (p<0.05)군에서 유의한 감소를 나타냈고, 이는 혈중 콜레스테롤 농도 저하 효과가 있는 것으로 볼 수 있다.
- 37 ㎎/㎗으로 나타났다. K1, KF, BK, BKF 투여군은 대조군과 비교하여 50 % 이상의 유의성 있는 감소를 보여주었다 (Table 5).
- Real Time PCR을 이용하여 ACAT2 유전자 발현을 측정한 결과, BK와 BKF 투여군이 유의성 있게 감소하여 콜레스테롤 흡수 및 저장이 감소하여 지질대사 개선 효능이 있는 것으로 판단할 수 있다. HMG-CoA 유전자 발현을 분석한 결과 K1 (p<0.
- SP60 투여군과 K1, KF 투여군은 정상군 수준으로 감소하였으며, BK, BKF, K0 투여군은 각각 70.67±8.10 ㎎/㎗, 63.75±8.58보다는 높은 수치이지만, 대조군보다 유의성 있게 감소하였다.
- 간 조직에서 ACAT2 mRNA 유전자 발현은 정상군 (0.27±0.06)에 비하여 대조군(1.10±0.27)에서 4배 이상 증가를 나타내었고, 모든 약물 투여군이 대조군에 비하여 감소하였으며, 특히 BK와 BKF 투여군은 통계학적으로 유의성 있는 감소를 나타내었다 (Fig.
- 고콜레스테롤혈증 병태모델에서 시험물질에 따른 복부 지방 조직검사를 나타낸 조직사진이다. 대조군은 정상군에 비하여 지방세포 크기가 증가한 반면, 양성대조군인 Spirulina 투여군과 K1 , KF, BK, BKF, K0 투여군 등에서 감소를 나타내었다 (Fig. 5).
- 대조군의 SREBP-2 mRNA 유전자 발현 수치는 1.05±0.18로 정상군 (0.46±0.06) 에 비하여 약 2.28배 이상 증가를 나타내었고, 약물 투여군 중에서는 KF, BKF 투여군이 유의한 감소를 나타내었다 (Fig.
- 간 조직의 손상은 세포 내부에 존재하는 효소가 혈액으로 유출되어 혈청 중 AST와 ALT를 측정함으로서 확인할 수 있는데 이는 간세포가 파괴되면서 아미노기 전이효소가 혈중으로 나타나 높게 나타나는 것으로 AST, ALT의 손상은 간세포의 손상을 의미한다. 대조군의 혈청 내 AST, ALT 수준은 정상군과 비교하여 증가하였고, 약물 투여군에서는 감소하였으나 유의성은 없었다 (Fig. 1).
- 대조군의 혈청 내 총콜레스테롤 (Total cholesterol) 수준은 정상군에 비하여 약 5배의 증가를 나타내었고, SP60 투여군은 198.40±8.91 ㎎/㎗로 유의성 있게 감소되었다.
- 대조군의 혈청내 저밀도 콜레스테롤(LDL cholesterol) 수준은 정상대조군에 비하여 3배 이상의 유의하게 증가하였고 SP60 투여군은 12.80±2.37 ㎎/㎗으로 나타났다.
- 이상의 실험 결과를 통하여 신공법을 이용한 瓊玉膏의 효능을 분석한 결과, 신공법을 이용한 瓊玉膏 투여군은 Total cholesterol, Triacylglycerol, LDL-cholesterol의 감소 효과를 보여주었으며, 간 독성을 나타내지 않았으며, 조직검사에서는 지방 조직이 감소하였다. 또한 ACAT2, HMG-CoA, SREBP2를 분석한 결과 K0와 신공법 경옥고 모두에서 혈중 콜레스테롤 농도 저하를 통한 지질대사 개선효과가 확인되었다. 이러한 결과를 종합하면, 신공법을 이용한 瓊玉膏는 전통방식으로 만든 瓊玉膏와 유사하게 고지혈증을 개선시키는 효과를 가지는 것으로 판단된다.
- 또한 간 조직을 H&E, ORO 염색법을 이용하여 분석한 결과 모든 경옥고 투여군에서 회식지방축적세포들과 거대소포성 지방증의 감소 효과를 나타냈으며, 복부 지방 조직 역시 경옥고 투여로 인하여 지방세포 크기가 줄어듬을 확인하였다.
- 식이효율은 대조군에서 27.29±2.17%의 수치를 나타내었으며, 양성대조군인 SP60 투여군은 27.19±1.67%, K1 투여군은 27.75±1.89%, KF 투여군에서는 30.12±1.96%, BK 투여군에서는 26.45±2.34%, BKF 투여군에서는 26.47±0.94%를 나타내었고, K0 투여군에서는 28.09±2.27%의 효율을 보였으므로, 효율측면에서는 대조군이 유의성 있는 증가를 보였다 (Table 3.).
- 본 논문에서는 고콜레스테롤 식이를 통하여 고지혈증을 유발한 흰쥐 모델에 제조방법을 달리한 경옥고 5종을 경구 투여하여 체중변화, 식이효율 및 혈청내 지질농도를 분석하였다. 실험결과 고콜레스테롤식이를 섭취하여 고지혈증이 유발된 대조군에서 체중증가와 더불어 고지혈증 병태를 보였으며, 체중변화와 식이효율은 대조군과 실험군 사이에 큰 차이가 나타나지 않았다. 혈청 분석 결과, 총 콜레스테롤 함량은 정상군(76.
- 즉, 정상군과 비교하여, 고 콜레스테롤식이 섭취에 의해 고지혈증이 유발된 대조군에서 강하게 회식지방축적세포들이 전체에 존재하고, 거대소포성 지방증도 많이 존재함을 관찰하였다. 양성대조군인 Spirulina 투여군과 유사한 수준 또는 그 이상이며, K1, KF, BK, BKF, K0 투여군은 대조군에 비하여 회식지방축적세포들과 거대소포성 지방증의 감소가 현저하게 개선되었다 (Fig. 3, 4).
- 또한 ACAT2, HMG-CoA, SREBP2를 분석한 결과 K0와 신공법 경옥고 모두에서 혈중 콜레스테롤 농도 저하를 통한 지질대사 개선효과가 확인되었다. 이러한 결과를 종합하면, 신공법을 이용한 瓊玉膏는 전통방식으로 만든 瓊玉膏와 유사하게 고지혈증을 개선시키는 효과를 가지는 것으로 판단된다.
- 이상의 실험 결과를 통하여 신공법을 이용하여 제조한 瓊玉膏의 효능을 기존의 瓊玉膏와 비교하여 분석한 결과 유사한 지질대사 개선 효능을 보였고, 흑삼을 가미하거나 발효하였을 때 콜레스테롤 합성 관련 인자를 감소시키는 효과를 나타내었다. 따라서 신공법으로 제조한 瓊玉膏 및 흑삼가미瓊玉膏는 瓊玉膏제조를 보다 편리하게 할 뿐 아니라 고지혈증에 비교적 쉽게 적용할 수 있는 지질대사 개선 소재로 활용되기를 기대한다.
- 이상의 실험 결과를 통하여 신공법을 이용한 瓊玉膏의 효능을 분석한 결과, 신공법을 이용한 瓊玉膏 투여군은 Total cholesterol, Triacylglycerol, LDL-cholesterol의 감소 효과를 보여주었으며, 간 독성을 나타내지 않았으며, 조직검사에서는 지방 조직이 감소하였다. 또한 ACAT2, HMG-CoA, SREBP2를 분석한 결과 K0와 신공법 경옥고 모두에서 혈중 콜레스테롤 농도 저하를 통한 지질대사 개선효과가 확인되었다.
- 장기 무게를 측정한 결과를 보면 간과 비장의 무게는 대조군에 비하여 약물 투여군은 별다른 차이를 보이지 않았으며, 신장무게는 대조군에 비하여 양성대조군인 SP60 투여군에서는 17.2% 감소하였고, 약물 투여군들은 정상군과 차이를 나타내지 않았다.
- 5% 이상 증가 하였고, SP60 투여군은 2% 감소하였지만 K1, KF, BK, BKF, K0 투여군 등은 유의성 있는 차이를 나타내지 않았다. 정상군에 비하여 대조군의 신장무게는 13.5% 이상 증가를 하였고, SP60 투여군은 17.2% 감소하였지만 간 무게와 일치하게 K1, KF, BK, BKF, K0 투여군 등은 유의성 있는 차이를 나타내지 않았다. 정상군의 비장 무게는 평균 0.
- 정상군의 비장 무게는 평균 0.98±0.11 g이었고, 대조군은 1.37±0.11 g으로 증가하였지만, 대조군을 포함한 모든 실험군에서 유의한 변화는 나타나지 않았다 (Table 4).
- 정상군이 평균 5.74±0.30 g/day의 체중증가를 보이는 것에 비하여 대조군은 평균적으로 5.86±0.47 g/day의 증가를 나타내었으며, 양성대조군인 SP60 투여군은 평균 5.23±0.32 g/day의 증가 경향을 나타냈다.
- 대조군에서 보듯이 지방간이 유발된 간 조직에서는 마이크로지방구가 간세포질에 축적되어 마이크로 지방구들이 거대소포성 지방층으로 진행되어 조직상에 큰 지방구들이 나타나며, 또한 hematoxylin & eosin (H&E)과 Oil red O (ORO) 염색으로 염색 시 지방의 축적으로 회색지방축적세포들이 넓게 분포하는 지방간이 나타난다. 즉, 정상군과 비교하여, 고 콜레스테롤식이 섭취에 의해 고지혈증이 유발된 대조군에서 강하게 회식지방축적세포들이 전체에 존재하고, 거대소포성 지방증도 많이 존재함을 관찰하였다. 양성대조군인 Spirulina 투여군과 유사한 수준 또는 그 이상이며, K1, KF, BK, BKF, K0 투여군은 대조군에 비하여 회식지방축적세포들과 거대소포성 지방증의 감소가 현저하게 개선되었다 (Fig.
- 특히 BKF 투여군은 0.48±0.15의 수치를 나타내 가장 큰 감소를 확인하였다 (Fig.
- 혈청 내 고밀도 콜레스테롤 (HDL cholesterol)의 수준은 대조군이 정상대조군에 비하여 약 72.5% 감소를 나타내었고, 대조군에 비하여 SP60, K1, KF, BK, BKF, K0 투여군 모두 유의한 변화가 없었다. 대조군의 혈청내 저밀도 콜레스테롤(LDL cholesterol) 수준은 정상대조군에 비하여 3배 이상의 유의하게 증가하였고 SP60 투여군은 12.
- 혈청 내 중성지방 수준 (Triacrylglycerol)은 정상군에 비하여 대조군이 약 2배 증가하였음을 확인하였다. SP60 투여군과 K1, KF 투여군은 정상군 수준으로 감소하였으며, BK, BKF, K0 투여군은 각각 70.
- 혈청 분석 결과, 총 콜레스테롤 함량은 정상군(76.33±7.13)에 비하여 대조군 (359.50±29.32)에서 크게 증가하였고 양성대조군인 SP60 투여군에서 198.40±8.91만큼 감소하였고, BK (207.00±15.20) 및 KF (207.00±15.20) 투여군에서 양성대조군과 유사한 효과를 나타내었다.
후속연구
- 이상의 실험 결과를 통하여 신공법을 이용하여 제조한 瓊玉膏의 효능을 기존의 瓊玉膏와 비교하여 분석한 결과 유사한 지질대사 개선 효능을 보였고, 흑삼을 가미하거나 발효하였을 때 콜레스테롤 합성 관련 인자를 감소시키는 효과를 나타내었다. 따라서 신공법으로 제조한 瓊玉膏 및 흑삼가미瓊玉膏는 瓊玉膏제조를 보다 편리하게 할 뿐 아니라 고지혈증에 비교적 쉽게 적용할 수 있는 지질대사 개선 소재로 활용되기를 기대한다.
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