[논문]돌외(Gynostemma pentaphyllum Makino) 추출물의 산화적 스트레스에 대한 항산화 및 세포보호효과

김경미; 김아랑; 김아영; 하지훈; 현송화; 정윤주; 박영민; 정효진; 홍인기; 박수남

돌외(Gynostemma pentaphyllum Makino) 추출물의 산화적 스트레스에 대한 항산화 및 세포보호효과
Antioxidative and Cellular Protective Effects of Dolwoe (Gynostemma pentaphyllum Makino) Extracts against Oxidative Stress 원문보기

생약학회지, v.48 no.2, 2017년, pp.125 - 133

Abstract ▼ AI-Helper

In this study, we investigated the total phenolic and flavonoid contents, component analysis, antioxidative activity and cellular protective effects against oxidative stress on human skin cells in 50% ethanol extract, ethyl acetate fraction and aglycone fraction obtained from Gynostemma pentaphyllum (G. pentaphyllum) Makino. The DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) scavenging activites ($FSC_{50}$) of the 50% ethanol extracts, ethyl acetate fraction and aglycone fraction were 246.8, 147.2, $128.9{\mu}g/mL$, respectively. Reactive oxygen species (ROS) scavenging activities ($OSC_{50}$) of the 50% ethanol extract, ethyl acetate fraction and aglycone fraction on ROS generated in $Fe^{3+}-EDTA/H_2O_2$ system using the luminol-dependent chemiluminescence assay were 37.15, 10.74, $7.19{\mu}g/mL$, respectively. We investigated the cellular protective activity and the results showed that treatment of aglycone fraction ($0.05-0.39{\mu}g/mL$) protect human skin cells in a concentration-dependent manner when the skin cell damages were induced by treating them with $H_2O_2$. These results suggest that extract/fractions of G. pentaphyllum Makino may be applicable as natural antioxidants in cosmetics.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

계에서의 총항산화능이나 사람 피부세포에서의 자외선 또는 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에 대한 보호효과에 관한 연구는 아직 보고된 바가 없다. 본 연구에서는 돌외 추출물, 추출물의 에틸아세테이트 및 아글리콘 분획을 제조하고 이들의 항산화능 및 세포보호효과 그리고 활성분획의 성분 분석을 통해 화장품의 기능성 항산화 소재로서 가능성이 있는지를 확인하고자 하였다.
본 연구에서는 항산화 활성 평가를 통해 돌외 분획물의항산화 활성을 확인하였다. 특히 아글리콘 분획물은 50%에탄올 추출물에 비해 가장 큰 항산화능을 갖는 것으로 평가되었다.

가설 설정

05 compared with untreated control in aglycone fraction dosetreated groups. (B) Rate of increace in proliferation of ell protective effects. -●-: 50% EtOH extract, -■-: EtOAc fraction, -▲-: aglycone fraction.

제안 방법

세척 후, 1% PBS를 함유한 DMEM 배지에 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물을 농도별로 희석하여 처리한 후, 37o C, 5% CO₂ 조건으로 incubator에서 24 hr 배양하였다. 24 hr incubation후, MTT assay로 세포생존율을 확인하여 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물들의 세포보호효과를 확인하였다.
5 min 동안 항온시킨 후 Fenton 반응을 일으키기 위해 150 mM H2O2 40 μL를 넣고 25 min 동안 화학발광 정도를 측정하였다.
Gallic acid를 표준물질로 하여 농도별(0-50 μg/mL) 표준곡선을 작성한 후 총 페놀성 화합물 함량을 구하였다.
HPLC 및 LC/ESI-MS/MS를 이용한 돌외 추출물의 성분 분석 − LC 분석은 autosampler와 PDA-UV detector가 장착된 Thermo-Finnigan Surveyor instrument(Thermo Scientific, USA)를 사용하였다.
성분 분리를 위한 thin layer chromatography(TLC, aluminum sheet silica gel 60 F254)는 Merck(USA)에서 구입하였고, HPLC는 Shimadzu(Japan) 제품을 사용하였다. LC/ESI-MS/ MS(Applied Biosystems, USA)는 서울대학교 농생명과학 공동기기원에 분석 의뢰하였다. MTT 실험에서 사용되는 ELISA reader는 Tecan(Austria)사의 제품을, pH 미터는 Mettler-Toledo(Switzerland)를 사용하였다.
1% formic acid(in acetonitrile)(solvent B)로 하였으며, 유속은 200 μL/min이며, injection volume은5 μL로 하였다. MS/MS 분석은 Thermo-Finnigan LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer, with ESI interface를 사용하였다. Negative ion model로 capillary voltage는-3500 V, nebulizer gas(N₂) 10(arbitrary units), collision gas (N₂) 그리고 ion source temperature는 400^oC에서 행하였다.
농도에따라 각각 세 번씩 측정하였으며, 자유 라디칼 소거 활성은 DPPH의 농도가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도(free radical scavenging concentration, FSC50, μg/mL)를 구하여 비교하였다.
대조군(control)은 시료 용액 대신 증류수를 첨가하였고, 공시험(blank)는 시료군과 조건이 동일하나 H2O2와 FeCl3·6H2O를 첨가하지 않았다.
돌외 분획물의 성분분석 − 돌외의 에틸아세테이트 및 아글리콘 분획의 성분을 확인하기 위해, TLC 크로마토그램에서 극성도가 다른 다음의 2개의 용매조건을 이용하였다(A 조건; ethyl acetate:chloroform:formic acid:DW = 8:1:0.5:0.4 (v/v), B조건; ethyl acetate:chloroform:formic acid:DW = 10:5:0.5:0.4(v/v)).
돌외 추출물 및 분획물 제조 − 건조된 돌외 전초 150 g을 50% 에탄올 3 L 침적시키고 24 hr 동안 교반하여 추출 후 Fig. 1과 같은 방법으로 분획하였다.
돌외 추출물 및 분획물의 HaCaT 세포 독성 평가 − MTT 방법으로 돌외 추출물 및 분획물이 사람각질형성세포에 대한 세포독성을 확인함으로써 실험에 사용될 시료의 농도범위를 결정하였다.
돌외 추출물 및 분획물의 HaCaT 세포 독성 평가 − 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물이 세포생존율에 미치는 영향을 MTT 방법으로 확인하여 실험에 사용될 시료의 농도 범위를 결정하였다.
2 mM DPPH 용액 1 mL에 에탄올 1 mL를 첨가하고 여러 농도의 추출물1 mL을 첨가하여 섞은 다음 25^oC에서 10 min동안 방치 후 자유 라디칼의 양을 분광광도계로 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 돌외 추출물 및 분획물의 자유 라디칼 저해율은식 (1)에 따라 DPPH 시약을 넣지 않은 것을 blank, 추출물 또는 분획물을 넣지 않은 것을 대조군(control)으로 하여 계산하였다.
돌외 추출물과 분획물의 수율, 총 페놀성 화합물 및 플라보노이드 함량 측정 − 침적하여 얻은 돌외 50% 에탄올 추출물을 여과하고 감압증발기를 이용하여 여과된 추출물을 건조시켜 50% 에탄올 추출물을 얻었다.
돌외 추출물의 성분 분석을 위해 TLC로부터 각각의 띠를 긁어 100% 에탄올로 추출한 후 여과·농축하여 파우더를 얻었다.
돌외 추출물의 성분분석 − 돌외 추출물의 플라보노이드 성분을 동정하기 위하여 TLC, HPLC, LC/ESI-MS/MS을 이용하여 분석하였다.
DPPH법을 이용한 자유 라디칼 소거 활성 − 자유 라디칼은 피부노화의 주된 원인으로 알려져 있다. 따라서 돌외 추출물에 대한 자유라디칼 소거활성 측정은 DPPH를 이용 하였다. 실험방법은 메탄올에 용해시킨 0.
시료의 항산화능은 전자를 제공함으로써 라디칼을 소거하는 능력인 환원력을 통하여 측정할수 있다. 따라서 본 실험에서는 비교적 안정한 라디칼로 존재하는 DPPH를 이용하여 돌외 추출물의 라디칼 소거활성을 측정하였다. 돌외 50% 추출물과 분획물 및 대조군으로 기존에 강력한 지용성 항산화제로 알려진 (+)-α-tocopherol 의 자유라디칼 소거활성 측정 결과를 Fig.
따라서 본 실험에서는 이를 바탕으로 돌외 50% 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획 및 아글리콘 분획의 최고 농도를 3.13 μg/mL으로 설정하였다.
본 연구에서는 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물들의 총 페놀성 화합물과 플라보노이드 함량, 항산화 및 세포보호효과를 평가하고 추출물의 성분분석을 진행하였다.
MTT 용액을 제거하고 생성된 formazan 결정을 DMSO에 용해하여 570 nm 파장에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다. 비 처리군(untreated group)에 의한 흡광도를 음성 대조군(100%)으로 하여 식 (3)에 따라 처리군 (treated group)에 대한 상대적인 세포생존율을 구하였다.
6B, 7B). 성분 분석을 위해, 돌외의 에틸아세테이트 분획의 TLC로 분리된 GPME1-7띠들을 추출하여, LC/ESIMS를 이용하였다(Table III).
과산화수소를 모두 제거 후, PBS 100 μL로 2회 세척하였다. 세척 후, 1% PBS를 함유한 DMEM 배지에 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물을 농도별로 희석하여 처리한 후, 37o C, 5% CO₂ 조건으로 incubator에서 24 hr 배양하였다. 24 hr incubation후, MTT assay로 세포생존율을 확인하여 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물들의 세포보호효과를 확인하였다.
실험방법은 화학발광 측정용 튜브에 증류수 1.78 mL를 넣고 다양한 농도의 돌외 추출물과 2.5 mM EDTA 40 μL 및 5 mM FeCl3·6H2O 10 μL를 가한후 35 mM 루미놀 80 μL를 넣고 흔들어 섞어 화학발광기의 cell holder에 튜브를 꽂는다.
에 의해 산화되어 들뜬 상태의 아미노프탈산이 된 후 발광(420-450 nm)하는 것으로 알려져 있다. 이 실험에서는 luminol과 Fe³⁺-EDTA/H₂O₂계에서 생성된 각종 ROS간의 반응을 통한 화학발광을 측정함으로써 총 항산화능을 측정할 수 있다. 실험방법은 화학발광 측정용 튜브에 증류수 1.
표준물질로 quercetin 을 이용하여 농도별(0-100 μg/mL) 표준곡선을 작성한 후 총플라보노이드 함량을 구하였다.
대조군(control)은 시료 용액 대신 증류수를 첨가하였고, 공시험(blank)는 시료군과 조건이 동일하나 H₂O₂와 FeCl₃·6H₂O를 첨가하지 않았다. 화학발광기 6-channel LB9505 LT의 각 채널은 실험 전에보정하여 채널간의 차이가 거의 없도록 하였다. 활성산소 소거활성은 다음 식에 의해 계산되었고 활성산소 소거활성의 크기는 식 (2)에 따라 화학 발광의 세기가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도(reactive oxygen species scavenging activity, OSC₅₀, μg/mL)로 표기하였다.

대상 데이터

기기 및 시약 −실험에사용한 UV-visible spectrophotometer 는 Varian(Astralia)사의 Cary 50, 화학발광기는 Berthold (Germany)사의 6-channel LB9505 LT 제품을 사용하였다.
에탄올(EtOH), 메탄올(MeOH), 에틸아세테이트(EtOAc) 등 각종 용매는 시판특급 시약을 사용하였다. 본 실험에 사용한 돌외는 국내 재생으로 ㈜지에프씨에서 제공받았으며 교신 저자인 서울과학기술대학교 박수남 교수가 검증한 후 실험에 사용하였다.
기기 및 시약 −실험에사용한 UV-visible spectrophotometer 는 Varian(Astralia)사의 Cary 50, 화학발광기는 Berthold (Germany)사의 6-channel LB9505 LT 제품을 사용하였다. 성분 분리를 위한 thin layer chromatography(TLC, aluminum sheet silica gel 60 F254)는 Merck(USA)에서 구입하였고, HPLC는 Shimadzu(Japan) 제품을 사용하였다. LC/ESI-MS/ MS(Applied Biosystems, USA)는 서울대학교 농생명과학 공동기기원에 분석 의뢰하였다.
(USA)에서 구입하였다. 에탄올(EtOH), 메탄올(MeOH), 에틸아세테이트(EtOAc) 등 각종 용매는 시판특급 시약을 사용하였다. 본 실험에 사용한 돌외는 국내 재생으로 ㈜지에프씨에서 제공받았으며 교신 저자인 서울과학기술대학교 박수남 교수가 검증한 후 실험에 사용하였다.
에틸아세테이트 분획 중 일부를 H2SO4 및 아세톤 용액을 이용하여 산가수분해 반응을 통해 당을 제거시키고 5% KOH-MeOH로 중화 적정 후 증류수로 산, 염기 및 당 등을 제거 한 후 에틸아세테이트로 추출하고 감압·농축하여 아글리콘 파우더를 제조하여 사용하였다(Fig. 1).
컬럼은 U-VDSpher Pur C18-E(2.0×50 mm, 1.8 μm)을 사용하였다.
남은 50% 추출물은 감압증류 한 후 n-헥산을 처리하여 클로로필 등의 비극성 성분을 제거하였다. 항산화능이 큰 플라보노이드 및 그 배당체들은 에텔아세테이트 용매로 추출하고 감압 농축하여 파우더를 얻어 실험에 사용하였다. 에틸아세테이트 분획 중 일부를 H₂SO₄ 및 아세톤 용액을 이용하여 산가수분해 반응을 통해 당을 제거시키고 5% KOH-MeOH로 중화 적정 후 증류수로 산, 염기 및 당 등을 제거 한 후 에틸아세테이트로 추출하고 감압·농축하여 아글리콘 파우더를 제조하여 사용하였다(Fig.

데이터처리

통계적 유의성 검증은 Graphpad Prism 5.0(San Diego, CA)프로그램을 이용하였으며, one-way ANOVA 검정을 적용하여 p<0.05유의수준에서 유의성 검정을 실시하였다.

이론/모형

4(v/v)를 사용하였다. TLC에서 성분 동정을 위해 표준물질의 Rf 값, 자외선 그리고 2- aminoethyl diphenylbroinate-polyethylene glycol(NP-PEG) 발색법을 이용하였고 이미 보고된 분광학적 자료를 참고하였다.
돌외 추출물의 총 플라보노이드 함량은 Zhishen 등의 방법을 이용하였다.²⁹⁾ 2 mg/mL 농도의 추출물 30 μL에 증류수 120 μL를 가한 다음, NaNO₂(25% w/v) 9 μL를 넣고 25ºC에서 5 min 반응시켰다.
총 페놀성 화합물 및 플라보노이드 함량 측정 − 돌외 추출물 중의 총 페놀성 화합물 함량 측정은 Alves 등의 방법 이용하였다.

성능/효과

특히, 피부가 노화하는 데 가장 큰 영향을 미치는 외인성 요인으로 자외선을 꼽을 수 있다.^1,2) 피부가 자외선에 노출되면 피부에서는 자외선의 작용으로 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 생성된다. 이들 ROS는 피부에 광산화적 손상을 증가시키는 노화의 원인 물질로 알려져 있다.
3,4) ROS의 종류에는 superoxide anion radical(O2·− ), hydroxyl radical(·OH) 과 같은 산소중심의 라디칼과 singlet oxygen(1 O2), hydrogen peroxide(H2O2)와 같은 비라디칼종, 그리고 이들 ROS와 생체분자와의 반응으로 생성된 2차 라디칼 활성종들(ROO·, RO· 및 ·ROOH)이 포함된다.
1%이었다. 50% 에탄올 추출물로부터 얻어진 에틸아세테이트 분획물의 수율은 1.3%였으며, 에틸아세테이트 분획물로부터 얻어진 아글리콘 분획물의 수율은 0.7%였다(Table II).
TLC 크로마토그램에서 분리한 성분들 (GPME1-7)과 HPLC의 피크들을 비교한 결과는 GPME1은 peak 3(kaempferol 3-O-β-rutinoside), GPME2은 peak 5 (quercetin 3-β-O-glucoside), GPME은 peak 4(astragalin), GPME4은 peak 1(caffeic acid), GPME5은 peak 6(quercetin) GPME6은 peak 2(ferulic acid), GPME7은 peak 7(kaempferol)로 나타났다. HPLC에서 에틸아세테이트 분획 및 아글 리콘 분획(Fig. 8B)의 성분 변화를 확인하였으며, 플라보노이드의 배당체인 peak 3-5번이 두드러지게 감소하거나 사라졌고, peak 6(quercetin)및 peak 7(kaeampferol)의 함량이 증가함을 보였다.
TLC 및 HPLC 크로마토그램 분석을 통해 활성분획인 에틸아세테이트 및 아글리콘 분획에서 quercetin 3-β-Oglucoside, kaempferol 3-O-β-rutinoside, astragalin, caffeic acid, quercetin, ferulic acid, kaempferol 성분들이 있음을 확인하였다.
TLC 크로마토그램에서 분리한 성분들 (GPME1-7)과 HPLC의 피크들을 비교한 결과는 GPME1은 peak 3(kaempferol 3-O-β-rutinoside), GPME2은 peak 5 (quercetin 3-β-O-glucoside), GPME은 peak 4(astragalin), GPME4은 peak 1(caffeic acid), GPME5은 peak 6(quercetin) GPME6은 peak 2(ferulic acid), GPME7은 peak 7(kaempferol)로 나타났다.
결론적으로 돌외 에틸아세테이트 분획보다 아글리콘 분 획에서 당이 제거된 아글리콘 구조의 플라보노이드가 증가 함을 확인할 수 있으며, 이러한 성분 변화가 그들의 활성에 차이를 나타냈을 것으로 사료된다.
이상의 결과들을 볼 때, 돌외의 아글리콘 분획물이 플라보노이드 및 페놀성 화합물에 기인하여 항산화 활성 및 세포보호효과를 나타냄을 확인하였다. 결론적으로, 돌외 분획물은 활성산소(H₂O₂)로 유도된 사람피부세포 손상에서 세포보호효과를 나타냈으며, 이는 항산화 화장품 원료로써 활용 가능성이 있음을 시사한다.
돌외 50% 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획 및 아글리콘 분획의 활성산소 소거활성은 각각 37.15, 10.74 및 7.19 μg/ mL로 나타났다.
돌외 1 g 50% 에탄올 추출물 파우더, 에틸아세 테이트 분획물 파우더 또는 아글리콘 분획물 파우더 각각에 포함되어 있는 총 페놀성 및 플라보노이드 함량을 Table II에 나타내었다. 돌외 50% 에탄올 추출물과 분획물에 함유된 페놀성 화합물의 함량을 gallic acid의 양으로 환산하여 표시한 결과, 추출물 또는 분획물 중 아글리콘 분획물 (517.2 mg/g)이 에틸아세테이트 분획물(409.8 mg/g), 50% 에탄올 추출물(197.8 mg/g)보다 높게 나타났다. 총 플라보노이드 화합물의 함량은 quercetin의 양으로 환산하여 나타내었으며 추출물 또는 분획물 중 아글리콘 분획물(103.
돌외 에틸아세테이트 분획으로부터 아글리콘 분획물을 제조했을 때, 플라보노이드 배당체들(quercetin 3-βO-glucoside, kaempferol 3-O-β-rutinoside, astragalin)은 감소하고, 아글리콘인 qercetin 및 kaemperol은 증가하였다.
돌외 에틸아세테이트 분획의 GPME1은 kaempferol 3-Oβ-rutinoside, GPME2는 quercetin 3-β-O-glucoside, GPME3는 astragalin, GPME4는 caffeic acid, GPME5는 quercetin, GPME6는 ferulic acid, GPME7은 kaempferol로 확인되었으며, 표준물질을 이용하여 TLC, HPLC 및 UV-Visible 흡수 스펙트럼 결과와 참고논문을 통해 최종적으로 확인하였다 (Fig. 6-8, Table III).
돌외 추출물과 분획물들의 총 페놀성 화합물 함량 분석결과, 아글리콘 분획물(517.2 mg/g) > 에틸아세테이트 분획물 (409.8 mg/g) > 50% 에탄올 추출물(197.8 mg/g) 순서로 나타났다.
돌외 추출물의 자유라디칼 소거활성(FSC50) 측정 결과, (+)-α-tocopherol(8.98 μg/mL) > 아글 리콘 분획(128.9 μg/mL) > 에틸아세테이트 분획(147.2 μg/ mL) > 50% 에탄올 추출물(246.8 μg/mL) 순서로 나타났다.
19 μg/ mL로 나타났다. 라디칼 소거 활성과 마찬가지로 에틸아세 테이트 분획 및 아글리콘 분획의 총 항산화능이 50% 에탄올 추출물의 활성보다 크게 나타났으며, 특히 아글리콘 분 획의 총 항산화능이 가장 높게 나타났다. 에틸아세테이트 분획과 아글리콘 분획에서 총 항산화능이 크게 나타난 것은 함유된 플라보노이드의 함량이 크기 때문인 것으로 추정된다.
비교물질로 사용된 수용성 항산화제로 잘 알려진 L-ascorbic acid(OSC50, 50 μg/mL)보다 낮은 활성을 보였지만, 아글리콘 분획은 50% 에탄올 추출물 보다 약 5배 높은 활성으로 가장 높은 총 항산화 활성을 나타내었다.
비교물질로 사용한 지용성 항산화제인 (+)-α-tocopherol (FSC50, 8.98 μg/mL)보다는 낮은 활성을 보였지만, 아글리콘분획은 50% 에탄올 추출물보다 약 2배 높은 활성으로 가장 높은 DPPH 자유 라디칼 소거활성을 나타내었다.
사람피부세포인 HaCaT을 이용한 세포보호효과 실험에서 과산화수소 처리 후 돌외 에틸아세테이트 분획과 아글리콘분획을 처리한 경우 50% 에탄올 추출물을 처리한 것 보다 과산화수소로 감소되었던 세포 생존율이 더욱 증가하였으며, 아글리콘 분획은 최대 55% 증가함을 확인 하였다. TLC 및 HPLC 크로마토그램 분석을 통해 활성분획인 에틸아세테이트 및 아글리콘 분획에서 quercetin 3-β-Oglucoside, kaempferol 3-O-β-rutinoside, astragalin, caffeic acid, quercetin, ferulic acid, kaempferol 성분들이 있음을 확인하였다.
15 μg/mL) 순서로 나타났다. 수용성 항산화제로 잘 알려진 L-ascorbic acid 보다 낮은 활성을 보였지만, 아글리콘 분획은 50% 에탄올 추출물 보다 약 5배 높은 총 항산화능을 나타내었다.
실험 결과, 과산화수소를 처리한 실험군은 처리하지 않은 군에 비하여 약 50%의 생존율을 나타내었다. 50% 에탄올 추출물 처리 군의 세포생존율은 모든 농도에서 미미한 수준으로 증가하지 않았다.
89 μg/mL으로 나타났다. 에틸아세테이트 분획 및 아글리콘 분획의 라디칼 소거 활성이 50% 에탄올 추출물의 활성보다 크게 나타났으며, 특히 아글리콘 분획의라디칼 소거 활성이 가장 높게 나타났다. 에틸아세테이트 분획과 아글리콘 분획에서 라디칼 소거활성이 크게 나타난 것은 함유된 플라보노이드의 함량이 크기 때문인 것으로 추정 된다.
특히 아글리콘 분획물은 50%에탄올 추출물에 비해 가장 큰 항산화능을 갖는 것으로 평가되었다. 이상의 결과들을 볼 때, 돌외의 아글리콘 분획물이 플라보노이드 및 페놀성 화합물에 기인하여 항산화 활성 및 세포보호효과를 나타냄을 확인하였다. 결론적으로, 돌외 분획물은 활성산소(H₂O₂)로 유도된 사람피부세포 손상에서 세포보호효과를 나타냈으며, 이는 항산화 화장품 원료로써 활용 가능성이 있음을 시사한다.
8으로 최대 55% 증가하였다. 즉, 아글리콘 분획물이 과산화수소로 유도된 세포손상에 대한 보호효과를 나타냈다.
지용성 항산화제인 (+)-α-tocopherol 보다는 낮은 활성을 보였지만, 아글리콘 분획은 50% 에탄올 추출물보다 약 2배 높은 라디칼 소거활성을 나타내었다.
총 플라보노이드 함량은 아글리콘 분획물(103.4 mg/ g) > 에틸아세테이트 분획물(99.6 mg/g) > 50% 에탄올 추출물(47.8 mg/g) 이었다.
8 mg/g)보다 높게 나타났다. 총 플라보노이드 화합물의 함량은 quercetin의 양으로 환산하여 나타내었으며 추출물 또는 분획물 중 아글리콘 분획물(103.4 mg/g) 이 에틸아세테이트 분획물(99.6 mg/g), 50% 에탄올 추출물 (47.8 mg/g)보다 높게 나타났다.
본 연구에서는 항산화 활성 평가를 통해 돌외 분획물의항산화 활성을 확인하였다. 특히 아글리콘 분획물은 50%에탄올 추출물에 비해 가장 큰 항산화능을 갖는 것으로 평가되었다. 이상의 결과들을 볼 때, 돌외의 아글리콘 분획물이 플라보노이드 및 페놀성 화합물에 기인하여 항산화 활성 및 세포보호효과를 나타냄을 확인하였다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	돌외는 무엇인가?	박과(Cucurbitaceae)에속하는돌외(G. pentaphyllum Makino) 는 다년생 덩굴성 초본류로써, 예로부터 칠엽담(七葉膽) 또는 덩굴차 및 덩굴감차라고도 불린다. 우리나라 남부와 일본, 중국 등 아시아 지역에서 분포되어있다.
	비타민 E 및 C 또는 그 유도체들을 항산화제로 쓸 때에 생기는 단점은 무엇인가?	이를 위해 비타민 E 및 C 또는 그 유도체들을 항산화제로서 화장품에 널리 이용하고 있다. 하지만 이들 항산화제들은 제품내에서의 불안정성이나 유도체의 경우 활성 저하 등의 문제로 화장품에의 사용에 제한성이 종종 나타나고 있다. 따라서 최근에는 이러한 문제점을 개선하고자 비교적 안정하고 피부에 도포했을 때 피부 흡수 및 효능이 증대될 수 있는 안전한 천연 항산화제를 발굴하여 화장품에 응용하려는 시도들이 활발히 이루어지고 있다.
	항산화 방어망은 무엇으로 구성되어 있는가?	5-11) 하지만 피부에는 ROS의 산화적 손상으로부터 피부를 보호하기 위한 항산화 방어망이 구축되어 있다. 항산화 방어망은 superoxide dismutase(SOD), catalase 및 glutathione peroxidase 등의 항산화 효소와 vitamin E, vitamin C, glutathione 등과 같은 비효소적 항산화제들로 구성되어 있다. 하지만 피부가 자외선에 지속적으로 노출되거나 염증을 수반하는 피부질환 상태에서 발생하는 산화적 스트레스는 피부 항산화 방어망의 붕괴를 가져오고 결국 ROS와 같은 산화제와 피부 항산화제 사이의 불균형을 초래하여 피부노화가 촉진되게 된다.

참고문헌 (36)

Lee, D. S., Lim, M. S., Kwan, S. S., Kim, S. Y. and Park, S. N. (2012) Antioxidative activity and componential analysis of Chamaecyparis obtusa leaf extract. Appl. Chem. Eng. 23: 93-99.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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