[논문]타액내 구강질환 원인 균의 세균배양법, SYBR green qPCR법, MRT-PCR법 간의 정량분석

박용덕; 오혜영; 박복리; 조아라; 김동기; 장종화

doi:10.13065/jksdh.2017.17.02.319

타액내 구강질환 원인 균의 세균배양법, SYBR green qPCR법, MRT-PCR법 간의 정량분석
Quantitative analysis of oral disease-causing bacteria in saliva among bacterial culture, SYBRgreen qPCR and MRT-PCR method 원문보기

JKSDH : Journal of Korean Society of Dental Hygiene = 한국치위생학회지, v.17 no.2, 2017년, pp.319 - 330

박용덕 (조선대학교 치과대학 예방치과교실) , 오혜영 (조선대학교 치과대학 예방치과교실) , 박복리 (조선대학교 치과대학 예방치과교실) , 조아라 (조선대학교 치과대학 예방치과교실) , 김동기 (조선대학교 치과대학 예방치과교실) , 장종화 (한서대학교 치위생학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: The purpose of this study was to compare SYBR Green qPCR, TaqMan, and bacterial selective medium cultures for accurate quantitative analysis of oral microorganisms. Methods: The SYBR Green method is widely used to analyze the total amount of oral microorganisms in oral saliva. However, in this study, MTR-PCR method based on TaqMan method was performed using newly developed primers and probes. In addition, it was designed to confirm the detection agreement of bacteria among bacteria detection method. Results: As a result of MRT-PCR and SYBR Green qPCR analysis, more than 40 times (0.9-362.9 times) bacterium was detected by MRT-PCR. In addition, more bacteria were detected in saliva in the order of MRT-PCR, SYBR Green qPCR, and bacterium culture, and the results of MRB-PCR and SYBR Green qPCR showed the highest agreement. The agreement between the three methods for detecting P. intermedia was similar between 71.4 and 88.6%, but the agreement between MRT-PCR and SYBR Green qPCR was 80% for S. mutans. Among them, the number of total bacteria, P. intermedia and S. mutans bacteria in saliva was higher than that of SYBR Green qPCR method, and bacterium culture method by MRT-PCR method. P. intermedia and S. mutans in saliva were detected by MRT-PCR and MRT-PCR in 88.6% of cases, followed by the SYBR Green qPCR method (80.0%). Conclusions: The SYBR Green qPCR method is the same molecular biology method, but it can not analyze the germs at the same time. Bacterial culturing takes a lot of time if there is no selective culture medium. Therefore, the MRT-PCR method using newly developed primers and probes is considered to be the best method.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 새로이 개발된 TaqMan법 응용인 MTR-PCR법을 기존의 선택 배지를 구강 미생물 배양법, SYBR Green qPCR 등과 정량적 비교분석연구를 통하여 정확성 일치성등 유효성을 확인하고자 했다. SYBR Green 방법은 경구 용 타액 내 구강 미생물의 총량을 분석하는데 널리 사용되지만, 본 연구에서는 새로 개발 된 프라이머와 프로브를 이용하여 TaqMan 방법에 기반한 MTR-PCR법의 정확성을 목표로 연구설계되었다. 연구결과, MRT-PCR법과 SYBR Green qPCR법의 세균 검출 비율을 분석한 결과, MRT-PCR법에 의해 약 40배(0.

제안 방법

본 연구는 새로이 개발된 TaqMan법 응용인 MTR-PCR법을 기존의 선택 배지를 구강 미생물 배양법, SYBR Green qPCR 등과 정량적 비교분석연구를 통하여 정확성 일치성등 유효성을 확인하고자 했다. SYBR Green 방법은 경구 용 타액 내 구강 미생물의 총량을 분석하는데 널리 사용되지만, 본 연구에서는 새로 개발 된 프라이머와 프로브를 이용하여 TaqMan 방법에 기반한 MTR-PCR법의 정확성을 목표로 연구설계되었다.

대상 데이터

본 임상 연구를 위해 C대학교 치과병원에서 IRB을 승인 받아(No. CUDHIRB-1609-040) C대학교 치과병원에 내원한 18세에서 70세 사이의 전신건강이 양호한 70명을 선발하였고, 환자로부터 연구에 대한 설명과 동의를 받은 후 일련의 연구윤리의 규정에 따라 타액을 채취하였다. 이 때, 환자의 나이, 성별, 과거력 및 현력, 흡연 유무 및 진단명 등을 제외한 어떠한 개인 식별 정보를 받지 않았다.

이론/모형

TaqMan법을 기반으로 하는 MTR-PCR법은 새로이 PCR 과정 중 중합에서 사용되는 프라이머(primer) 및 프로브(이지페리오, YD Life Science, Gyeonggi, Korea)를 이용하여 시행하였다. 즉, 앞에서 채취한 타액 중 1 ml를 멸균된 에펜도르프 튜브(eppendorf tube, e-tube)에 옮긴 후 상온에서 소형 원심분리기를 이용하여 12,000 rpm에서 10 분간 원심분리한 뒤, 침전된 세균(pellet)을 분리하였다.

성능/효과

1. MRT-PCR법에 의해 타액 내 총 세균, P. intermedia 및 S. mutans 세균 수가 SYBR Green qPCR법 및 세균 배양법보다 더 높게 측정되었다.
2. MRT-PCR법 > SYBR Green qPCR법 > 세균배양법 순으로 타액 내 세균을 더많이 검출 되었으며, 이는 MRT-PCR법이 가장 정밀하였다.
3. 방법 간 일치도는 P. intermedia의 경우 MRT-PCR법과 세균배양법이 가장높은 일치도(88.6%)를 보였고, S. mutans의 경우 MRT-PCR법과 SYBR Green qPCR법이 가장높은 일치도(80.0%)를 보였다.

후속연구

비록 본 연구는 한 기관에서 진행된 단편적인 연구였으며, 치주질환자와 정상인을 구분하여 균의 총량이나 균 종류의 분포 등을 파악할 수 있는 단계의 디자인이었다면 좀더 활용단계가 높은 유용한 결과를 도출할수 있었을 것이라는 아쉬운 점이 남는다. 향후 연구 디자인에서 치은염과 치주질환자의 병기별로 균의 총량 및 균종의 분포 등을 확인하고자 하는 임상적 연구 디자인을 시도해 보고자 한다.
비록 본 연구는 한 기관에서 진행된 단편적인 연구였으며, 치주질환자와 정상인을 구분하여 균의 총량이나 균 종류의 분포 등을 파악할 수 있는 단계의 디자인이었다면 좀더 활용단계가 높은 유용한 결과를 도출할수 있었을 것이라는 아쉬운 점이 남는다. 향후 연구 디자인에서 치은염과 치주질환자의 병기별로 균의 총량 및 균종의 분포 등을 확인하고자 하는 임상적 연구 디자인을 시도해 보고자 한다. 이러한 후속연구의 필요성에도 불구하고 본 연구의 목적으로서 TaqMan법을 기초로 하여 동시적인 다균 검출법으로서 이 등[11]이 개발한 MRT법 시스템을 활용하여 타액 내 대표적인 구강질 환균 P.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	치주질환균은 어디에 분포하는가?	또한 구강질환 정도에 따라 병원성 세균의 종류나 그 총량의 차이를 보이며, 건강한 사람간에서도 전신적 건강이나 면역성의 개별적 차이에 따라 통계적 유의성을 보이는 경우도 있다. 대부분의 치주질환균은 산소에 민감한 혐기성 세균들이기 때문에 치은연상 치면세균막에 비해 산소의 공급이 원활하지 않는 치은연하 치면세균막에 분포한다[5]. 1990년대 중반부터는 분자생물학의 비약적인 발전으로 이러한 원인균으로서 구강미생물 검출법은 25-100개의 세균만 있어도 검출이 가능한 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction, PCR)이 사용되고 있다[6].
	구강질환의 원인은 무엇인가?	구강질환은 사람의 면역력, 당뇨병 등의 전신질환 유무, 흡연 및 음주 등과 관련된 전신적 요인 및 치은연하 치면세균막 내의 세균이 원인인 국소적 요인에 의해 발병 및 진행이 되는 것으로 알려져 있다[1,2]. 이들 대부분의 요인들은 구강 내 세균들이 주요한 원인인자로서 매우 밀접한 관계가 있다[3,4].

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저자의 다른 논문 :

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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