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[국내논문] 단백질 분해효소를 이용한 오계란 가수분해물의 항산화 활성
Antioxidant Activity of Ogae Egg White Protein Hydrolysates using commercial Protease 원문보기

한국유화학회지 = Journal of oil & applied science, v.34 no.3, 2017년, pp.631 - 642  

하유진 (중부대학교 식품생명과학과) ,  지중구 (중부대학교 한방건강관리학과) ,  유선균 (중부대학교 식품생명과학과)

초록
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식물 및 동물성 단백질 유래 펩타이드 형태의 단백질 가수 분해물들은 항산화, 고혈압 완화, 면역조절, 진통완화 및 항균작용 등 생리활성이 있는 것으로 알려져 왔다. 본 연구는 6가지 프로티아제를 이용하여 오계란 단백질 가수분해물을 생산하고, 생산된 펩타이드의 항산화 능력을 평가하였다. 그 결과 가수분해도의 최대값은 protamex(46.3%)이고, DPPH 라디칼 소거능 최대값은 bromelain(57.23%), 하이드록시 라디칼 소거능 최대값은 alcalase(30.21%), 슈퍼옥사이드 라디칼 소거능 최대값은 alcalase(58.07%), $Fe^{2+}$ 킬레이션 능력 최대값은 alcalase(72.06%)로 나타났다. 더 나아가 효소별 항산화 저해 능력 $IC_{50}$ 평가하였다. 그 결과 alcalase에 의한 최대값은 금속 킬레이션 능력($IC_{50}$, 1.24 mg/mL)이고, bromelain에 의한 최대값은 DPPH 소거능($IC_{50}$, 2.46 mg/mL)이고, flavourzyme에 의한 최대값은 금속 킬레이션 능력($IC_{50}$, 1.25 mg/mL)이고, neutrase에 의한 최대값은 DPPH 소거능($IC_{50}$, 3.64 mg/mL)이고, papain에 의한 최대값은 DPPH 소거능($IC_{50}$, 3.82 mg/mL)이고, protamex에 의한 최대값은 DPPH 소거능($IC_{50}$, 1.93 mg/mL)이었다. 따라서 protease를 이용하여 오계란 단백질에서 추출한 펩타이드는 항산화 기능성 식품소재로서 활용할 가치가 높을 것으로 기대한다.

Abstract AI-Helper 아이콘AI-Helper

Protein hydrolysates derived from plants and animals having antioxidant, suppression of hypertension, immunodulatory, alleviation of pain, and antimicrobial activity has been known as playing important role like hormone. This study was performed to hydrolysis of Ogae egg white protein using the six ...

주제어

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제안 방법

  • 따라서 본 연구는 연산오계란 단백질을 다양한 프로티아제 효소를 이용하여 펩타이드형 가수분 해물을 생성하고, 오계란 단백질에서 추출된 기능성 펩타이드의 DPPH 소거능, 슈퍼옥사이드 라디칼 소거능, 하이드록시 라디칼 소거능 및 금속 킬레이션 능력을 평가하였다.
  • 연산오계란 단백질의 가수분해를 위해서 protease type별로 6종을 선발하여 사용하였다. Serine protease 계열의 Alcalase, Protamex, aspartic protease 계열의 flavourzyme 등을 선발하여 처리하였다. 상기 protease들은 추 후 항산화 건강기능식품 개발 기능성을 고려하여 식품에 사용 가능한 것들만을 선발하였다.
  • 단백질 가수분해 정도는 가수분해물의 아미노산 중에서 tyrosine 양을 대표로 하여 분석을 하였다. 가수 분해도는 오계란 0.
  • 단백질 가수분해 정도는 가수분해물의 아미노산 중에서 tyrosine 양을 대표로 하여 분석을 하였다. 가수 분해도는 오계란 0.1 g을 110 ℃ 에 서 24시간 가수분해를 실시하여 가수분해물의 tyrosine 양으로 측정을 하고 이 값을 Dmax 로 하였다. 효소 반응 t 시간 후 오계란의 가수분해물의 tyrosine 양으로 측정된 값을 Dt 로 하였다.
  • DPPH의 측정 방법은 산소인 자유 라디칼이 생체 고분자들인 지질 단백질 등과 결합을 하여 피부의 노화 및 질병을 유발하는 물질로 밝혀진 이래로 항산화 물질의 라디칼 소거능력에 이용되고 있다[37]. DPPH 라디칼 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다[38]. 항산화 특성을 평가하기 위해서 동결건조분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다.
  • DPPH 라디칼 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다[38]. 항산화 특성을 평가하기 위해서 동결건조분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다. 추출된 시료를 일정한 농도로(10%) 증류수에 용해한 후 시료가 포함된 용 액 2 mL와 DPPH-radical(0.
  • DPPH 라디칼 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다[38]. 항산화 특성을 평가하기 위해서 동결건조분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다. 추출된 시료를 일정한 농도로(10%) 증류수에 용해한 후 시료가 포함된 용 액 2 mL와 DPPH-radical(0.
  • 혼합물은 30분간 실온에서 암실 보관한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구로는 ascorbic acid를 이용하였으며 시 료와 동일한 조건으로 측정하였다. DPPHradical scavenging activity는 아래의 식에 의해 값을 산출하였다.
  • 6종의 효소를 각각 이용하여 오계란 0.1 g을 110 ℃ 에서 24시간 가수분해하였고 가수분해를 위한 추출분말의 무게/오계란 무게×100 으로 가수분해도를 계산하였다(Table 1).
  • Hydroxyl 라디칼에 대한 소거활성 측정은 Fan의 방법을 변형하여 측정하였다[39]. 항산화 특성을 평가하기 위해서 동결건조분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다.
  • Superoxide radical에 대한 소거능은 Yu의 방법을 변형하여 측정하였다[40]. 항산화 특성을 평가하기 위해서 동결건조분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다.
  • 시료용액의 metal chelating effect는 Gulcin의 방법을 약간 변형하여 측정하였다[41]. 동결건조 분말 가수 분해물을 DI water에 용해를 한 다음 10 kDa 한 외막을 이용하여 분리를 하였다.
  • 5분 동안 상온에서 반응 시킨 후 100 µL ferrozine(5 mM)을 혼합물에 첨가하 여 10분 동안 상온 에서 반응 시켰다. 562 nm에서 흡광도를 측정 하였고, 대조구로는 ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA)를 시료와 동일한 조건으로 측정하였다.
  • 이는 금속 이온 chelating 효능과 radical 소거능이 서로 다른 기작으로 작용하기 때문인 것으로 판단된다[50]. 금속 킬레이트 효과는 ferrozine이 Fe2+ 와 반응하여 붉은색을 띠게 되고 이 때 시료 추출물 중에 킬레이트 효과를 가진 성분이 존재하면 Fe2+-ferrozine 복합체 형성을 방해하여 발색이 저해되는 원리를 이용하여 측정하였다. 금속 이온을 킬레이트화 하는 가수 분해물들에 대한 능력을 Fig.
  • 이러한 이유들은 사용 효소마다 생산한 가수 분해물의 분자량의 차이와 펩타이드 종류의 차이에 원인이 있다고 볼 수 있다. 좀 더 가수 분해물들의 항산화 저해 능력을 비교하기 위해서 각각 가수 분해물에 대하여 IC50 평가하였다. 전체적으로 보면 항산화 저해능은 사용한 효소 및 항산화 저 해 대상에 따라 크게 차이가 있었다 (Table 2).
  • 본 연구는 6가지 프로티아제(alcalase, bromelain, flavourzyme, neutrase, papain, protamex) 효소를 이용하여 연산오계란 단백질 가수분해공정으로 생산된 기능성 펩타이드의 DPPH 소거능, 슈퍼옥사이드 라디칼 소거능, 하이드록시 라디칼 소거능 및 금속 킬레이션 능력을 평가하였다.  

대상 데이터

  • 본 실험에 사용된 Folin ciocalteu`s phenol (FCP) 시약은 Sigma Company(Seoul, Korea)사로부터 구입을 하였다. Tri-chloro-acetic(TCA) 산은 Sigma Company(Seoul, Korea)사로부터 구 입을 하였다.
  • 본 실험에 사용된 Folin ciocalteu`s phenol (FCP) 시약은 Sigma Company(Seoul, Korea)사로부터 구입을 하였다. Tri-chloro-acetic(TCA) 산은 Sigma Company(Seoul, Korea)사로부터 구 입을 하였다. 단백질 분해효소 alcalase, bromelain, flavourzyme, neutrase, papain와 protamex는 대종상사(Seoul, Korea)로부터 구입을 하였다.
  • Tri-chloro-acetic(TCA) 산은 Sigma Company(Seoul, Korea)사로부터 구 입을 하였다. 단백질 분해효소 alcalase, bromelain, flavourzyme, neutrase, papain와 protamex는 대종상사(Seoul, Korea)로부터 구입을 하였다. 실험에 사용된 오계란은 지산농원 (Nonsan, Choongnam, Korea)에서 제공 하였다.
  • 단백질 분해효소 alcalase, bromelain, flavourzyme, neutrase, papain와 protamex는 대종상사(Seoul, Korea)로부터 구입을 하였다. 실험에 사용된 오계란은 지산농원 (Nonsan, Choongnam, Korea)에서 제공 하였다.
  • 본 실험에 사용된 연산 오계란은 지산농원에서 제공되었다. 공급된 오계란은 100 ℃ 항온수조에서 20분 동안 가열하여 오계 노른자와 흰자를 분리하였으며 흰자만을 골라내어 골고루 다진 후 지퍼백에 넣고 샘플명, 제조날짜를 기입하고 – 20 ℃ 냉동 보관하였다.
  • 공급된 오계란은 100 ℃ 항온수조에서 20분 동안 가열하여 오계 노른자와 흰자를 분리하였으며 흰자만을 골라내어 골고루 다진 후 지퍼백에 넣고 샘플명, 제조날짜를 기입하고 – 20 ℃ 냉동 보관하였다. 연산오계란 단백질의 가수분해를 위해서 protease type별로 6종을 선발하여 사용하였다. Serine protease 계열의 Alcalase, Protamex, aspartic protease 계열의 flavourzyme 등을 선발하여 처리하였다.
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질의응답

핵심어 질문 논문에서 추출한 답변
포스비틴의 구조는 어떠한가? 특히 항암효과로 알려진 난황 단백질인 포스비틴(Phosvitin)은 아미노산 사슬의 50% 이상을 인 산화 된 serine이 차지하고 있는 특이한 구조로 되어있는데[22], 이러한 특이구조로 인해 phosvitin은 강력한 금속 킬레이트제(metal chelator)로 작용한다고 보고되고 있으며[23]. 금속 킬레이트 능력으로 인해 phosvitin이 항산화제로서 금속이온에 의해 발생되는 지방 산패를 억제할 수 있다[24-26].
항산화 작용이 질병 예방에 중요한 이유는 무엇인가? Hydroxyl radical(·OH), superoxide anion radical(·O2−), hydrogen peroxide(H2O2), peroxy radical(ROO·), singlet oxygen(1O2) 등의 활성산소(reactive oxygen species, ROS)는 정상적인 대사과정 중 미토콘드리아와 같은 세포 내 소기관에서 자연적으로 생성된다[1,2]. 생체 내에는 이들에 대한 방어기작 이 자체적으로 존재하여 체내 항산화 시스템에 의해 제거되지만[3,4], 과도한 스트레스 등과 같은 여러 요인에 의해 산화-항산화 시스템의 균형이 깨지면서 체내에 활성산소가 다량으로 존재하게 되면 세포의 구성 성분인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등을 비가역적으로 파괴되고 암을 비롯한 뇌질환과 심장질환, 동맥경화, 피부질환, 소화기 질환, 염증, 류마티스, 면역 질환 등의 각종 질병이 발생하는 것으로 알려져 있다[5-7]. 따라서 이러한 활성산소를 제거하는 항산화 작용은 인체 내의 산화적 스트레스를 감소시켜 질병 예방에 크게 기여한다[8-10].
활성산소의 종류에는 어떤 것들이 있는가?  최근 증가하고 있는 환경오염 물질, 환경 호르몬, 흡연 및 알코올 등은 인체 내 산화적 스트레스를 가중시키고 있다. Hydroxyl radical(·OH), superoxide anion radical(·O2−), hydrogen peroxide(H2O2), peroxy radical(ROO·), singlet oxygen(1O2) 등의 활성산소(reactive oxygen species, ROS)는 정상적인 대사과정 중 미토콘드리아와 같은 세포 내 소기관에서 자연적으로 생성된다[1,2]. 생체 내에는 이들에 대한 방어기작 이 자체적으로 존재하여 체내 항산화 시스템에 의해 제거되지만[3,4], 과도한 스트레스 등과 같은 여러 요인에 의해 산화-항산화 시스템의 균형이 깨지면서 체내에 활성산소가 다량으로 존재하게 되면 세포의 구성 성분인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등을 비가역적으로 파괴되고 암을 비롯한 뇌질환과 심장질환, 동맥경화, 피부질환, 소화기 질환, 염증, 류마티스, 면역 질환 등의 각종 질병이 발생하는 것으로 알려져 있다[5-7].
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