[논문]복숭아나무에서 검출된 Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus의 국내 첫 보고

박상민; 서은철; 김산영; 박원흠; 이수헌

doi:10.5423/rpd.2017.23.1.75

복숭아나무에서 검출된 Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus의 국내 첫 보고
First Report of Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus Infecting Peach Trees in South Korea 원문보기

Research in plant disease = 식물병연구, v.23 no.1, 2017년, pp.75 - 81

박상민 (경상북도농업기술원 청도복숭아연구소) , 서은철 (경상북도농업기술원 청도복숭아연구소) , 김산영 (경상북도농업기술원 청도복숭아연구소) , 박원흠 (경상북도농업기술원 청도복숭아연구소) , 이수헌 (경북대학교 응용생명과학부)

초록
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2016년 5월, 우리나라 복숭아의 주요산지인 경북 영천 지역에서 퇴록, 괴저반점, 엽맥퇴록, 황화와 같은 바이러스 병징과 이상증상을 보이는 복숭아 잎 24점을 채집하였다. 이 시료들의 바이러스 감염 여부를 확인하기 위해 RT-PCR 진단법을 이용하여 진단하였다. 진단 대상은 검역 병원체로 지정된 바이러스 또는 바이로이드를 중심으로, 국내외 연구를 참고하여 국내 발생가능성이 높거나 발생 시 위험도가 높은 종 17종이다. 진단결과, 국내에서 보고된 적이 없는 바이러스 1종(Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus, APCLSV)과 검역 바이로이드 1종(Peach latent mosaic viroid, PLMVd)을 포함하여, 총 7종의 바이러스와 바이로이드가 검출되었다. 바이러스를 동정하기 위해, RT-PCR 산물을 sequencing 하여 확인하였다. 또, 국내 미보고 종인 APCLSV가 검출된 시료를 이용하여 APCLSV의 외피단백질을 암호화하고 있는 염기서열을 증폭하여 결정하였다. 결정된 염기서열은 기 보고된 APCLSV 분리주와 97%의 상동성을 보였다. 이 외피단백질 염기서열을 Trichovirus속 바이러스들과 비교 분석하여, 최종적으로 APCLSV임을 확인하였다. 동정된 APCLSV를 Yeongcheon 분리주로 명명하고 결정된 외피단백질 염기서열은 NCBI GenBank에 등록하였다. APCLSV의 발생 양상을 보면, APCLSV가 검출된 시료들은 모두 Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV)가 복합감염되어 있었으며, APCLSV는 ACLSV와 유전학적 유연관계가 가까운 것으로 알려져 있다. ACLSV의 특성에 비추어 볼 때, APCLSV는 국내 과수 농가에 널리 퍼질 가능성이 높을 것으로 생각된다. 따라서, 추후 국내 농가에 미칠 영향 등에 관련된 연구가 필요하다.

Abstract ▼ AI-Helper

In May 2016, 24 peach samples showing abnormal and virus like symptoms were collected in one of major peach producing area, Yeongcheon-si, Gyeongsangbuk-do, Korea. We performed RT-PCR diagnosis for confirmation of viral infection. The diagnostic targets are 17 species of viruses and viroids that quarantine and high risk pathogens when it occur. As a results, seven species of viruses and viroids, including an unreported (Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus, APCLSV) and a quarantine (Peach latent mosaic viroid, PLMVd) species in Korea, were detected. For the sequence analysis of unreported virus, APCLSV, the sequence of coat protein gene were amplified and cloned. The sequence showed 97% nucleotide identity with other APCLSV isolates and compared with other seven species of reported Trichoviruses. This virus was classified as APCLSV based on the sequence and phylogenetic analysis. This isolate was named Yeongcheon. As patterns of APCLSV occurrence, all samples that APCLSV detected were co-infected with Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV). As properties of ACLSV, APCLSV has high possibility of wide spread disease in fruit tree farms in Korea. Therefore, it is necessary to do related researches, such as infection route and influence of disease in commercial orchards.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

APCLSV는 이탈리아에서 처음 보고된 이후 중국에서 보고되었으나(Niu 등, 2012), 국내에서는 아직까지 보고되지 않았다. 따라서 이번 연구에서 확인한 바이러스의 국내 발생 여부를 보고한다.

제안 방법

RT-PCR 진단에서 APCLSV 특이적 프라이머에 양성을 보인 전체 RNA를 SuperiorScript III cDNA Synthesis Kit (Enzynomics, Daejeon, Korea)와 18개의 thymine으로 구성된 Oligo dT(18) 프라이머를 이용하여, cDNA를 합성하였다. 또, 외피단백질 염기서열을 증폭하기 위해 National Center for Biotechnology Information (NCBI)의 GenBank에 기보고된 APCLSV 염기서열을 이용하여 2쌍의 프라이머를 설계하여 nested PCR에 이용하였다(outer pair: APCLSV-F6505, 5’-GTA AAA GAG AGA AGG AGG AG-3’; APCLSV-R7448, 5’-CAC TCC AAT ATT GGT TAG GAC-3’; inner pair: APCLSV-F6596, 5’-CAG CGA GTG AGG ATG AAT C-3’; APCLSVR7421, 5’-CTC CTT TGA TAA ACT GGG AC-3’).

대상 데이터

2016년 5월, 우리나라 주요 복숭아 재배 산지인 경북 영천 지역의 복숭아 재배 농가에서 퇴록(chlorosis), 괴저반점(necrotic spot), 엽맥퇴록(vein clearing), 황화(yellowing) 등 이상증상과 바이러스 병징(Fig. 1)을 보이는 복숭아 잎 24점을 채집하였다. 채집된 시료는 털복숭아 8품종(천중도, 치요마루, 진미, 미홍, 미황, 사쿠라, 수미, 유명)에서 19점, 천도복숭아 변종(P.
1)을 보이는 복숭아 잎 24점을 채집하였다. 채집된 시료는 털복숭아 8품종(천중도, 치요마루, 진미, 미홍, 미황, 사쿠라, 수미, 유명)에서 19점, 천도복숭아 변종(P. persica var. nucipersica) 2품종(천홍, 수홍)에서 5점이다(Table 1). 수집한 시료는 동결 건조하여 초저온 냉동고(–70°C)에 보관하며 추가적인 실험에 사용하였다.

이론/모형

증폭된 PCR 산물을 EZ-Pure^TM PCR/Gel Duo Kit (Enzynomics)를 이용하여 정제한 뒤 Park 등(2011)의 방법으로 클로닝하였다. X-gal이 포함된 배지 상에 형성된 백색 콜로니 중 벡터에 삽입된 염기서열 길이가 일치하는 콜로니를 배양하였다.

성능/효과

3). 따라서 이번 연구에서 밝혀진 사실들을 바탕으로 바이러스를 APCLSV로 동정하고 Yeongcheon 분리주로 명명하였다. 결정된 외피단백질 염기서열은 NCBI GenBank에 등록하였다(accession no.
양성 반응을 보인 RT-PCR 산물을 마크로젠(Macrogen, Seoul, Korea)사에 의뢰하여 direct sequencing하여 증폭 산물이 해당 바이러스 및 바이로이드의 염기서열임을 확인하였다(data not shown). 진단 결과, 5종의 바이러스와 2종의 바이로이드가 검출되었다. 검출된 바이러스는 ACLSV, APCLSV, CGRMV, PBNSPaV, PNRSV이며, 바이로이드는 HSVd, PLMVd이다.
0 프로그램(Lynnon Biosoft, Quebec, QC, Canada)을 사용하였다. 최종 결정된 염기서열을 GenBank에서 Blast한 결과 중국에서 보고된 APCLSV 분리주(accession no. JN873309)와 98%, 이탈리아에서 보고된 APCLSV 분리주(accession no. AY713380)와 97% 상동성을 보였다(data not shown). 또, Trichovirus 7종의 바이러스의 외피단백질 염기서열 유연관계를 분석한 결과, 이탈리아에서 복숭아와 자두에서 검출된 두 분리주와 가장 높은 유연관계를 가지는 것을 확인할 수 있었다(Fig.

후속연구

이러한 사실들을 바탕으로 APCLSV는 ACLSV와 비슷한 감염 양상을 보일 것으로 생각된다. 따라서, APCLSV의 전염 방법과 생물학적 특성 조사 등을 통해 복숭아를 포함한 과수 농가에 대한 피해를 예방할 필요가 있다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	국내 보고된 복숭아의 바이러스는 무엇이 있는가?	복숭아(Punus persica)는 장미과(Rosaceae) 벚나무속(Prunus)에 속하며, 우리나라의 총 재배면적은 19,303 ha로(국가통계포털, 2016), 사과, 배, 감과 함께 주요 경제과수이다. 7종의 바이러스와 바이로이드(Apple chlorotic leaf spot virus [ACLSV], Apple stem grooving virus [ASGV], Cucumber mosaic virus [CMV], Hop stunt viroid [HSVd], Little cherry virus 1 [LChV1], Peach latent mosaic viroid [PLMVd], Prunus necrotic ringspot virus [PNRSV])가 국내 복숭아에 보고되어 있다(Cho 등, 2012; Jo 등, 2016a, 2016b; Lee 등, 2004; Lim 등, 2015; Park, 2015). Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus (APCLSV)는 Trichovirus에 속하며, 이탈리아에서 처음 보고되었다(Liverti 등, 2005).
	복숭아란 무엇인가?	복숭아(Punus persica)는 장미과(Rosaceae) 벚나무속(Prunus)에 속하며, 우리나라의 총 재배면적은 19,303 ha로(국가통계포털, 2016), 사과, 배, 감과 함께 주요 경제과수이다. 7종의 바이러스와 바이로이드(Apple chlorotic leaf spot virus [ACLSV], Apple stem grooving virus [ASGV], Cucumber mosaic virus [CMV], Hop stunt viroid [HSVd], Little cherry virus 1 [LChV1], Peach latent mosaic viroid [PLMVd], Prunus necrotic ringspot virus [PNRSV])가 국내 복숭아에 보고되어 있다(Cho 등, 2012; Jo 등, 2016a, 2016b; Lee 등, 2004; Lim 등, 2015; Park, 2015).
	Apricot pseudo-chlorotic leaf spot virus는 어떻께 전파가 되는가?	APCLSV를 포함하여, 총 7종의 바이러스가 Trichovirus로 분류되어 있다(Fauquet 등, 2005). 이 바이러스는 기계적 접종, 접목 등에 의해 전파되며, 매개체는 구체적으로 밝혀지지 않았다(Liverti 등, 2005). APCLSV는 이탈리아에서 처음 보고된 이후 중국에서 보고되었으나(Niu 등, 2012), 국내에서는 아직까지 보고되지 않았다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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