선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 카카오 추출물의 알칼로이드계 성분의 함량을 관찰하고 항산화, 항균, 항염증 활성을 확인하였다. CAEt, CAMe추출물 함유 Gel을 제조하여 물리적 안정성을 관찰하였다.
- 화장품 소재로 안전성을 확인하기 위해 가장 많이 사용되는 세포독성 실험을 통해 평가하였다. MTT assay 방법으로 추출물과 추출물이 첨가된 겔 제형의 일정 농도를 배지에 용출 시켜 세포 생존률을 평가하였다.
제안 방법
- 24 시간 후 배양액을 버리고 Well 당20 ㎕의 MTT 용액을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건에서 4 시간 동안 반응시킨 후, 배양액을 버리고 DMSO 100 ㎕씩넣어 formazan을 용해한 후, ELISA 측정기(ELX 808, Biotek Instruments, Vermont, USA)를 이용하여 570 ㎚에서 측정하였다.
- 본 연구에서는 카카오 추출물의 알칼로이드계 성분의 함량을 관찰하고 항산화, 항균, 항염증 활성을 확인하였다. CAEt, CAMe추출물 함유 Gel을 제조하여 물리적 안정성을 관찰하였다. 카카오 추출물의 생리활성을 관찰하기 위해 DPPH, SOD 측정을 진행하였으며 세포독성 및 LPS로 유발시킨 일산화질소의 소거능에 대한 연구를 진행하였다.
- Column은 Agilent사의 DB-5MS(0.32 ㎜ I.d. × 60 m, 0.25 ㎛)를 사용하였고, detector는 MS이고 ESI mode에서 70 eV의 에너지로 이온화하였으며, TIC의 SCAN mode에서 검출이온질량범위 35∼350으로 설정하여 각 질량스펙트럼 중에서 가장 강도가 강한 main fragmention을 중심으로 라이브러리를 검색하여 물질을 확인, 분석하였다.
- 화장품 소재로 안전성을 확인하기 위해 가장 많이 사용되는 세포독성 실험을 통해 평가하였다. MTT assay 방법으로 추출물과 추출물이 첨가된 겔 제형의 일정 농도를 배지에 용출 시켜 세포 생존률을 평가하였다. CAEt, CAMe 추출물과 추출물이 3% 첨가된 겔 제형의 세포독성을 평가한 결과이다(Fig.
- Superoxide dismutase 효소활성은 Fridovich의 방법을 변형하여 측정하였다(Blois, 1958; Fridovich, 1975). SOD 효소 활성 검정은 분석용 Kit (Sigma사, 19160)를 사용하여 측정하였다. 즉, SOD의 효소활성이 NBT (Nitroblue Tetrazolium)의 환원을 저해하는 능력을 검정하는 photochemical NBT method를 사용하였다.
- 전자공여능은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다. Superoxide dismutase 효소활성은 Fridovich의 방법을 변형하여 측정하였다(Blois, 1958; Fridovich, 1975). SOD 효소 활성 검정은 분석용 Kit (Sigma사, 19160)를 사용하여 측정하였다.
- pH 측정은 온도별 저장 및 태양광선 노출 하에 있는 카카오추출물 함유 Gel을 매회 1 g을 취하여 증류수로 15 ㎖ 채운 후 sonicator로 1시간 동안 sonication 시킨 후 pH를 측정하였다. pH 표준 용액으로 측정 전 pH 보정에 정확성을 기하였고 측정 시 온도를 25±1℃로 유지하였다.
- 항산화 효과를 측정하기 위한 전자공여능을 측정하였다. 각 시료용액 2 ㎖에 0.2 mM의 DPPH 1 ㎖넣고 교반 한 후 30 분간 암실에서 방치한 후 517 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.
- 카카오 추출물의 생리활성을 관찰하기 위해 DPPH, SOD 측정을 진행하였으며 세포독성 및 LPS로 유발시킨 일산화질소의 소거능에 대한 연구를 진행하였다. 또한 알칼로이드계 퓨린 구조를 가진 카카오 추출물을 첨가시킨 Gel을 제조하여 60일 동안 상온에서의 안정성을 평가하였다. 카카오 추출물의 항산화 활성 검증에서는 CAEt 추출물에서 IC50 값은 43.
- 추출물의 성눙 평가를 위해 항산화, 항균, 항염증 실험을 진행하였다. 또한, 약리적 효능을 가진 염기성의 카카오 추출물을 피부외용제로 활용하기 위해 gel 제형으로 제조하고 일정기간 동안 물성을 비교한 후 물리적 안정성을 평가하였다.
- 100 ㎕ (1×107 CFU/㎖)씩을 도말하였다. 멸균된 페이퍼디스크를 배지 위에 4 개씩올려놓고, 미리 적정 농도로 희석된 추출물을 20 ㎕씩점적한 후, 37℃에서 24 시간 동안 배양한 후 생성된 생육저해환의 크기를 조사하여 항균 활성을 검정하였다.
- 배양액의 상층액을 얻은 후 동량의 Griess 시약(1% sulfanilamide+0.1% naphthylen diamine dihydro–chloride, 1:1)을 첨가하여 실온에서 10 분간 반응시키고, microplate reader (Model 550, Bio-Rad, Richmond, CA, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
- 즉 크림을 일정한 가속도로 회전하는 spindle에 움직이는 크림의 점성 저항 torque값을 검출하여 점도를 측정하는 기기를 사용하여 측정하였다. 본 실험에서는 spindle의 종류와 회전수를 spindle D, 94 rpm으로 15 초 간격으로 5 번 측정하여 평균과 편차값을 구하였고, 온도별로 저장되어 있는 크림은 항온조에서 꺼낸 후 3 시간이 지난 후에 측정하였다.
- , 2014). 본 연구에서는 카카오에 함유된 알칼로이드계 화합물 caffeine, theobromine 성분을 Gas Chromatography (GC)로 정성 및 정량적 분석을 하였다. 추출물의 성눙 평가를 위해 항산화, 항균, 항염증 실험을 진행하였다.
- 1% naphthylen diamine dihydro–chloride, 1:1)을 첨가하여 실온에서 10 분간 반응시키고, microplate reader (Model 550, Bio-Rad, Richmond, CA, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포배양액 내 NO의 농도는 sodium nitrite (NaNO)의 농도별 표준 곡선과 비교하여 산출하였다.
- 7 세포는 DMEM배지를 이용하여 1×104 cells/㎖로 조절한 후 96 well plate에 접종하고 5% CO2 incubator (MCO-15AC, Sanyo, Osaka, Japan)에서 20 시간 전 배양하였다. 세포에 1 ㎍/㎖의 LPS (Lipopoly Saccharide)와 0.125, 0.25, 0.5, 1 ㎎/㎖의 카카오 추출물에 함유된 Gel을 처리하여 24 시간 재배양하였다. 배양액의 상층액을 얻은 후 동량의 Griess 시약(1% sulfanilamide+0.
- 실험에 사용된 Gel을 T-bar spindle을 이용하여 Brookfield 점도계로 점도를 측정하였다. 즉 크림을 일정한 가속도로 회전하는 spindle에 움직이는 크림의 점성 저항 torque값을 검출하여 점도를 측정하는 기기를 사용하여 측정하였다.
- 실험에 사용된 Gel을 T-bar spindle을 이용하여 Brookfield 점도계로 점도를 측정하였다. 즉 크림을 일정한 가속도로 회전하는 spindle에 움직이는 크림의 점성 저항 torque값을 검출하여 점도를 측정하는 기기를 사용하여 측정하였다. 본 실험에서는 spindle의 종류와 회전수를 spindle D, 94 rpm으로 15 초 간격으로 5 번 측정하여 평균과 편차값을 구하였고, 온도별로 저장되어 있는 크림은 항온조에서 꺼낸 후 3 시간이 지난 후에 측정하였다.
- 본 연구에서는 카카오에 함유된 알칼로이드계 화합물 caffeine, theobromine 성분을 Gas Chromatography (GC)로 정성 및 정량적 분석을 하였다. 추출물의 성눙 평가를 위해 항산화, 항균, 항염증 실험을 진행하였다. 또한, 약리적 효능을 가진 염기성의 카카오 추출물을 피부외용제로 활용하기 위해 gel 제형으로 제조하고 일정기간 동안 물성을 비교한 후 물리적 안정성을 평가하였다.
- 카카오 추출물은 GC-MS (Shimadzu, GC MS–QP2010, Kyoto, Japan)를 이용하여 분석하였다.
- 카카오 추출물 천연소재의 생체 내 세포 독성에 안전성을 평가하기 위해 섬유아세포(Human fibroblast, KCLB-21947)를 한국 세포주 은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양 받아 MTTassay를 이용하여 관찰하였다. 카카오 추출물을 첨가시킨 Gel 제형을 0.1 g/㎖의 비율로 세포 배양 배지에 첨가하여 37℃에서 72 시간 용출하여 사용하였다. CCD-986SK 세포를 배양액에 24 시간 배양(1×105 cell/ 96well)한 후 용출액을 처리하였다.
- CAEt, CAMe추출물 함유 Gel을 제조하여 물리적 안정성을 관찰하였다. 카카오 추출물의 생리활성을 관찰하기 위해 DPPH, SOD 측정을 진행하였으며 세포독성 및 LPS로 유발시킨 일산화질소의 소거능에 대한 연구를 진행하였다. 또한 알칼로이드계 퓨린 구조를 가진 카카오 추출물을 첨가시킨 Gel을 제조하여 60일 동안 상온에서의 안정성을 평가하였다.
- , 2004). 카카오 추출물이 첨가되지 않는 대조군과 카카오추출물이 첨가된 실험군 Gel (CAEt-Gel, CAMe-Gel)을 점증제, 결합제, pH 조절제를 첨가하여 각각 제조하였다(Table 1).
- 항산화 효과를 측정하기 위한 전자공여능을 측정하였다. 각 시료용액 2 ㎖에 0.
대상 데이터
- MeOH 조건에서 추출한 CAMe 추출물의 항산화능이 높은 것을 알 수 있었다. 추출물 3%가 함유된 gel (CAEt-Gel, CAMe- Gel)을 제조하였다. 항균활성 측정 결과 CAMe 추출물이 함유된 gel 제형이 더 높은 항균성을 나타내는 것을 확인하였다.
- 카카오 분말 100 g을 70% EtOH (CAEt)와 70% MeOH (CAMe)를 이용하여 하루 동안 침적시킨 후 여과하여 사용하였다. 이 여액의 일부는 회전증발농축기(RV10, IKA®, Germany)를 이용하여 온도 80∼90℃, 회전 속도 250 rpm으로 감압여과 농축 후 진공, 동결 건조하여 분말화하였다.
- 카카오 추출 분말을 첨가하여 기능성 Gel을 제조하였다(Smitet al., 2004). 카카오 추출물이 첨가되지 않는 대조군과 카카오추출물이 첨가된 실험군 Gel (CAEt-Gel, CAMe-Gel)을 점증제, 결합제, pH 조절제를 첨가하여 각각 제조하였다(Table 1).
- 카카오 추출물 천연소재의 생체 내 세포 독성에 안전성을 평가하기 위해 섬유아세포(Human fibroblast, KCLB-21947)를 한국 세포주 은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양 받아 MTTassay를 이용하여 관찰하였다. 카카오 추출물을 첨가시킨 Gel 제형을 0.
- 카카오(Theobroma cacao L.)분말은 Navitas Naturals (USA)사에서 제조한 것으로 100% 순수 분말을 구입하여 사용하였다. EtOH, MeOH 등 각종 용매는 특급 시약을 사용하였다.
- EtOH, MeOH 등 각종 용매는 특급 시약을 사용하였다. 카카오추출물에 사용된 분석 시약은 시그마알드리치사(USA)에서 구입하였다.
이론/모형
- Nitric Oxide (NO)의 농도는 배양액 내의 nitrite 농도를Griess 반응을 이용하여 측정하였다. Raw 264.
- SOD 효소 활성 검정은 분석용 Kit (Sigma사, 19160)를 사용하여 측정하였다. 즉, SOD의 효소활성이 NBT (Nitroblue Tetrazolium)의 환원을 저해하는 능력을 검정하는 photochemical NBT method를 사용하였다. 반응액은 50 mM carbonic buffer (pH 10.
- 카카오 추출물의 항미생물 효과를 평가하기 위하여 paper disc법을 이용하여 S. aureus, S. epidermidis의 미생물에 대한 inhibition zone의 지름을 측정하였다. 그 결과 S.
성능/효과
- 3%의 CAMe 추출물 함유 Gel 제형에서 상분리 및 pH변화를 관찰한 결과 60일 동안 pH를 일정하게 유지하는 것을 관찰하였다(Fig.5a). 현재 상용화되고 있는 수분형 Gel 제품으로 알로에 조성 Gel의 점도는 3,000 CPS이며 CAEt, CAMe 추출물 함유 Gel의 경우 CAEt 추출물 첨가군은 4,500 CPS이고 CAMe 추출물이 첨가된 군은 4700 CPS로 확인되었다(Fig.
- MTT assay 방법으로 추출물과 추출물이 첨가된 겔 제형의 일정 농도를 배지에 용출 시켜 세포 생존률을 평가하였다. CAEt, CAMe 추출물과 추출물이 3% 첨가된 겔 제형의 세포독성을 평가한 결과이다(Fig. 3). CAEt, CAMe 추출물에서 세포독성이 나타나지 않았음을 알 수 있었다.
- 3). CAEt, CAMe 추출물에서 세포독성이 나타나지 않았음을 알 수 있었다. 또한, 각 추출물이 함유된 겔 제형에서도 독성을 관찰할 수 없었다.
- 57%을 확인하였다. CAMe 추출물에서는 용매 성분을 제외한 18.64% 내에 L-tyrosine 0.38%, pyrrolo l.11%,불포화지방산계인 palmitinic acid 0.8%, oleic acid 0.52% 성분이 확인되었다. 특히, theobromine 성분은 카카오 씨에 들어 있는 알칼로이드 성분으로 메틸화되면서 caffeine이 된다(Fischer et al.
- 항균활성 측정 결과 CAMe 추출물이 함유된 gel 제형이 더 높은 항균성을 나타내는 것을 확인하였다. MTT assay로 관찰한 세포독성은 80% 이상의 세포 생존율을 보였으며, LPS로 활성화된 Raw 264.7 세포에서 NO 발생을 관찰한 결과 CAMe-Gel을 처리한 군에서 NO 생성량이 유의하게 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
- 6 ㎍/㎖로 관찰되었다. MeOH 조건에서 더 많은 항산화능 성분이 추출되는 것을 관찰 할 수 있었다(Fig. 2).
- 6 ㎍/㎖로 관찰되었다. MeOH 조건에서 추출한 CAMe 추출물의 항산화능이 높은 것을 알 수 있었다. 추출물 3%가 함유된 gel (CAEt-Gel, CAMe- Gel)을 제조하였다.
- 그 결과 S. aureus에서 CAMe로 추출한 100 ㎎/㎖농도에서 12.4±1.25의 높은 저해환을 나타냈다.
- epidermidis의 미생물에 대한 inhibition zone의 지름을 측정하였다. 그 결과 S. aureus에서CAMe로 추출한 100 ㎎/㎖농도에서 높은 저해환을 관찰하였다. 카카오 추출물의 항미생물 효과를 평가하기 위하여 paper disc법을 이용하여 S.
- CAEt, CAMe 추출물에서 세포독성이 나타나지 않았음을 알 수 있었다. 또한, 각 추출물이 함유된 겔 제형에서도 독성을 관찰할 수 없었다. CAEt, CAMe 추출물이 높은 농도에서도 세포 안전성을 나타냄은 화장품 배합시 고농도까지 사용이 가능하며 다양한 범위에 폭넓게 사용이 가능할 수 있을 것이라 기대된다.
- 1). 또한, 용매 성분을 제외한 CAEt 추출물의 잔여 성분 16.31% 내에 trichloroacetic acid 0.31%, pyrrolo 0.78%, 불포화지방산계인 palmitinic acid 0.91%, oleic acid 0.57%을 확인하였다. CAMe 추출물에서는 용매 성분을 제외한 18.
- 일반적으로 알칼로이드계 화합물은 염기성으로 화장품 및 피부외용제 제형 개발시 다양한 문제점을 나타낸다. 카카오 추출물 함량이 3% 이상 첨가될때Gel 제형이 상분리가 일어나는 것을 관찰하였다.
- 5b). 카카오 추출물을 OH-와 COOH-기는 점도에 영향을 주었으며 시간에 지남에 따라 500 CPS범위의 오차가 관찰되었다.
- 5%의 수득률을 확인하였다. 카카오 추출물의 GC-MS 분석결과 유기질소를 포함하고 있는 화합물로 주요 성분으로는 CAEt 추출물에서 caffeine 25.01%, theobromine 58.68%가 확인되었으며, CAMe 추출물에서도 caffeine 29.98%, theobromine 51.66% 검출되었다(Fig. 1). 또한, 용매 성분을 제외한 CAEt 추출물의 잔여 성분 16.
- 카카오 추출물의 free radical 소거활성을 측정한 결과를 보면, 대조군으로 선정한 quercetin의 경우 IC50 값이 11.34 ㎍/㎖이며, 카카오의 추출 조건이 CAEt 추출물에서 IC50 값은 43.14 ㎍/㎖, CAMe 추출물에서는 IC50 값은 35.42 ㎍/㎖로 관찰되었다(Fig. 2).
- 카카오 추출물의 항산화 활성 검증에서는 CAEt 추출물에서 IC50 값은 43.14 ㎍/㎖, CAMe 추출물의 IC50 값은 35.42 ㎍/㎖로 관찰되었다.
- 25의 높은 저해환을 나타냈다. 카카오 추출물이 30 ㎎/㎖ (3%) 첨가된 Gel 그룹에서도 CAMe 추출물이 함유된 Gel에서 농도 의존적으로 균이 저해되는 저해환을 확인할 수 있었다(Table 2).
- 카카오분말을 각 용매로 추출한 결과 CAEt 추출물은 30%, CAMe 추출물은 36.5%의 수득률을 확인하였다. 카카오 추출물의 GC-MS 분석결과 유기질소를 포함하고 있는 화합물로 주요 성분으로는 CAEt 추출물에서 caffeine 25.
- 추출물 3%가 함유된 gel (CAEt-Gel, CAMe- Gel)을 제조하였다. 항균활성 측정 결과 CAMe 추출물이 함유된 gel 제형이 더 높은 항균성을 나타내는 것을 확인하였다. MTT assay로 관찰한 세포독성은 80% 이상의 세포 생존율을 보였으며, LPS로 활성화된 Raw 264.
- 5a). 현재 상용화되고 있는 수분형 Gel 제품으로 알로에 조성 Gel의 점도는 3,000 CPS이며 CAEt, CAMe 추출물 함유 Gel의 경우 CAEt 추출물 첨가군은 4,500 CPS이고 CAMe 추출물이 첨가된 군은 4700 CPS로 확인되었다(Fig. 5b). 카카오 추출물을 OH-와 COOH-기는 점도에 영향을 주었으며 시간에 지남에 따라 500 CPS범위의 오차가 관찰되었다.
후속연구
- 또한, 각 추출물이 함유된 겔 제형에서도 독성을 관찰할 수 없었다. CAEt, CAMe 추출물이 높은 농도에서도 세포 안전성을 나타냄은 화장품 배합시 고농도까지 사용이 가능하며 다양한 범위에 폭넓게 사용이 가능할 수 있을 것이라 기대된다.
- 본 연구에서는 위와 같은 결과를 근거로 카카오 추출물의 알칼로이드계 성분을 인체내에 적용하기 위해 제조한 Gel은 화장품 및 의료용 소재로 다양한 활용이 가능할 것으로 사료된다.
- 4). 산화적 스트레스 유발 상황에서 CAMe의 NO 생성 억제작용은 CAMe추출물의 항산화, 항염증 효과에 기인한 것으로 기능성 화장품뿐만 아니라 cosmeceutical에도 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
- 13의 저해능을 관찰되었으며, MeOH 용매로 추출한 추출물이 더 높은 항균성을 나타내는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과들은 향후 기능성 화장품 개발에 있어 유효한 천연소재로서 응용가치가 높음을 시사하는 것으로 카카오 추출의 조건에 따라 항균 효능의 차이를 기대할 수 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.