[논문]참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물의 RAW 264.7 대식세포에서 IL-1β, TNF-α, iNOS 유전자 차등 발현 연구

한효상; 홍성균

doi:10.14400/jdc.2017.15.11.513

참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물의 RAW 264.7 대식세포에서 IL-1β, TNF-α, iNOS 유전자 차등 발현 연구
Investigation of the IL-1β, TNF-α and iNOS gene differential expression in Raw 264.7 cells by the water extract of Angelicae Radix from Korea, China and Japan 원문보기

디지털융복합연구 = Journal of digital convergence, v.15 no.11, 2017년, pp.513 - 522

한효상 (남부대학교 통합의학과) , 홍성균 (남부대학교 통합의학과)

초록
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Murine macrophage cell line인 RAW 264.7 대식세포에 참당귀(AG), 중국당귀(AS), 일당귀(AA)를 6시간과 24시간을 반응시킨 뒤 시간별로 나타나는 inflammation 반응을 확인하고자 하였다. LPS-induced RAW 264.7 대식세포에 AG, AS, AA를 6시간 반응 시킨 경우 $IL-1{\beta}$, $TNF-{\alpha}$, iNOS의 mRNA 발현량을 증가시켰고, AA에서 더 높은 Anti-inflammatory effect를 확인하였다. AG, AS, AA가 RAW 264.7 대식세포의 cell viability에 미치는 영향을 확인하기 위해 MTS Assay(24시간)를 수행한 결과 $1,600{\mu}g/ml$ 농도에서 모두 증가시켰다. AG, AS, AA가 LPS를 처리하지 않은 RAW 264.7 대식세포에 6시간동안 면역반응에 미치는 영향을 확인한 결과 AG와 AA를 $200{\mu}g/ml$ 농도로 처리한 RAW 264.7 대식세포에서 $IL-1{\beta}$, $TNF-{\alpha}$, iNOS의 발현이 증가되었다. 이 연구를 통해 AG, AS, AA는 RAW 264.7 대식세포에 LPS를 처리하였을 때 inflammation 반응을 촉진하며, 24시간 뒤 inflammation의 억제를 유도한 결과를 얻을 수 있었다. 향후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 대식세포의 다양한 염증 반응 메커니즘에 미치는 작용을 확인하는 연구가 필요하다.

Abstract ▼ AI-Helper

We tried to analyze the inflammation reactions by treatment of AG, AS and AA in murine RAW 264.7 cells. To investigate the effect of AG, AS and AA on cell viability of RAW 264.7 cells, AG, AS and AA were treated for 24 h and MTS assay was performed. Cell viabilities were increased in $1,600{\mu}g/ml$ concentration by AS, AA and AG treatments, respectively. The mRNA expression levels of $IL-1{\beta}$, $TNF-{\alpha}$ and iNOS were increased by AG and AA treatment at a concentration of $200{\mu}g/ml$ in RAW 264.7 cells without Lipopolysaccharide (LPS) treatment. The mRNA expression levels of $IL-1{\beta}$, $TNF-{\alpha}$ and iNOS were increased by AG and AA 6 h treatment at a concentration of $200{\mu}g/ml$ with LPS treatment. In this study, we observed that AG, AS and AA show various activities on inflammation reaction depend on their treatment time. In the future, studies should be conducted to investigate the effects of AG, AS and AA on the various inflammatory responses of macrophages.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 RAW 264.7 대식세포에 처리하여 세포활성도 및 염증반응에 미치는 영향을 연구하였으며 이를 통해 다음과 같은 결론을 얻었다.
이에 저자는 한의학에서 많이 사용되는 있는 참당귀, 중국 당귀, 일당귀 열수 추출물이 RAW 264.7 대식세포의 세포활성도에 미치는 영향을 확인하고 참당귀, 중국당귀, 일당귀를 열수 추출하여 얻은 시료를 대상으로 LPS를 처리한 RAW 264.7 대식세포에 6 시간과 24 시간 반응시켰을 때 염증 반응에 미치는 영향을 조사하여 유의한 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.

제안 방법

LPS에 의해 염증 반응이 강하게 유도되어 있는 RAW 264.7 대식세포에 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 반응시킬 경우 나타나는 염증 작용을 확인하기 위하 여, 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 200 μg/ml 농도에 LPS와 같이 RAW 264.7 대식세포에 6 시간 반응 시킨 뒤 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA의 발현을 확인하였다.
RAW 264.7 대식세포를 96 well plate에 2,500 cells/well로 분주하고 24 시간 동안 배양한 뒤 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 25, 50, 100, 200, 400, 800, 1,600 μg/ml 농도로 첨가하고 다시 24 시간동안 배양하였다.
cDNA를 합성하기 위하여 RNA 1 μg에 dNTP mix (10mM) 1 μl, Random Hexamer (100 pmol/μl) 1 μl를 넣은 후 DEPC-treated water로 총 부피 10 μl가 되도록 조정하였다.
7 대식세포를 2 X 105 cells/well로 6 well plate에 분주하고 24 시간 동안 배양한 후 자초를 1,600 μg/ml 농도로 세포에 처리한 뒤 다시 24 시간 동안 배양하였다. 그 후 trypsin-EDTA를 처리하여 single cell을 얻은 뒤 hemocytometer로 세포 수를 측정하였다.
이후 LPS 1μg/ml, 참당귀, 중국당귀, 일본당귀 열수 추출물 200 μg/ml를 세포에 처리한 뒤 6 시간, 24 시간 배양시켰다. 그후 시료가 첨가된 배지를 제거하고 PBS를 이용해 한번세척 후 RNA를 eCube Tissue RNA Mini Kit를 이용하여 추출하고 The Qubit 2.0 Fluorometer로 정량하였다. cDNA를 합성하기 위하여 RNA 1 μg에 dNTP mix (10mM) 1 μl, Random Hexamer (100 pmol/μl) 1 μl를 넣은 후 DEPC-treated water로 총 부피 10 μl가 되도록 조정하였다.
7 대식세포(mouse로 부터 유래된 cell line)이며 한국세포주은행에서 구매하였다. 세포 배양은 표준 세포 배양법인 37℃, 5% CO2 조건을 유지해주었고, 10%(v/v) FBS와 1% antibiotic antimycotic을 첨가한 DMEM media에서 세포의 배양을 하였다.
이러한 이유로 LPS를 처리한 RAW 264.7 대식세포에 200 μg/ml 농도의 참당귀, 중국 당귀, 일당귀 열수 추출물을 24 시간 반응시킨 뒤 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현을 확인하였다.
이후 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현량을 qRT-PCR을 이용해 교하였다.
이후 LPS 1μg/ml, 참당귀, 중국당귀, 일본당귀 열수 추출물 200 μg/ml를 세포에 처리한 뒤 6 시간, 24 시간 배양시켰다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 각각의 약재를 50 g으로 정확하게 중량을 측정하고 환류추출기에 1차 증류수 2,000 ml와 함께 넣은 뒤 탕액이 끓는 시점으로 2 시간 동안 가열하여 추출한 다음, 추출액을 filter paper로 감압 여과한 여과액을 rotary vacuum evaporator를 이용하여 농축액을 얻어 동결건조기를 이용하여 건조한 분말을 시료로 사용하였다. 동결건조 추출물은 참당귀 17 g, 수율 34%, 중국당귀 27.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 LPS 처리 없이 RAW 264.7 대식세포에 처리하였을 때 면역 반응에 미치는 영향을 확인하기 위하여 세포 독성을 보이지 않으며 세포활성도에 미치는 반응의 차이가 잘 드러나는 200 μg/ml 농도로 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 RAW 264.7 대식세포에 6 시간 처리한 뒤 IL-1β, TNF-α, iNOS의 발현을 확인하였다.
그 후 MTS 시약을 첨가하고 microplate reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 처리한 실험군을 시료를 처리하지 않은 대조군과 대조하여 세포의 생존율을 백분율로 확인하였다. 세포의 생존율은 다음과 같은 식으로 계산하였다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 LPS 처리를 통해 염증 반응이 유도된 RAW 264.7 대식세포에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수추출물을 200 μg/ml 농도에서 LPS와 같이 RAW 264.7 대식세포에 6 시간, 24 시간 반응시킨 뒤 IL-1β, TNF-α, iNOS mRNA 발현 변화를 qRT-PCR로 확인하였다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 RAW 264.7 대식세포에 미치는 세포활성도를 확인하기 위하여 MTS assay(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymeth oxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt)를 수행하였다. RAW 264.
MTS assay는 MTS 용액을 세포에 처리한 뒤 생성되는 formazan을 흡광도를 측정하여 세포활성도를 확인하는 방법이다. 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 RAW 264.7 대식세포의 세포활성 도에 미치는 영향을 확인하기 위하여 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 농도별로 RAW 264.7 대식세포에 처리하고 24 시간 반응시킨 뒤 MTS assay를 수행하였다. 그 결과 중국당귀 열수 추출물의 1,600 μg/ml 농도에서 세포활성도는 124% 까지 증가시켰고, 일당귀 열수 추출물은 111% 까지 증가시켰으며, 참당귀 열수 추출물은 296%로 매우 높게 증가시켰다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 염증 반응을 촉진 시킬 수 있는 가능성을 확인하기 위하여 pro-inflammatory 사이토카인 발현이 강하게 유도되는 시간인 6 시간 동안 200 μg/ml 농도로 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 RAW 264.7 대식세포에 반응시킨 후, IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현을 확인하였다.
합성한 cDNA를 증류수로 1/5로 희석시킨 뒤 5 μl를 nuclease free water 2 μl, 2X Prime Q-mater Mix 10 μl, 10 pmol/μl forward primer 1.5 μl, 10 pmol/μl reverse primer 1.5 μl 와 섞고 AriaMx를 이용하여 qRT-PCR을 수행하였다.

대상 데이터

2, Japan) Dulbecco's modified Eagle medium (WELGENE, Korea), fetal bovine serum (WELGENE, Korea), 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin (WELGENE, Korea), DPBS (Corning, USA), Trypsin-EDTA (WELGENE, Korea), LPS from Escherichia coli 0127:B8 (Sigma, USA), MTS solution (Promega, USA), Qubit RNA Assay Kit (molecular probes, USA), eCube Tissue RNA Mini Kit (PhileKorea, Korea), 5X M-MLV RT reaction buffer (Promega, USA), M-MLV reverse transcriptase (Promega, USA), RNase inhibitor (Enzynomics, Korea), 2X Prime Q-mater Mix (GENET BIO, Korea) 등이 사용되었다. 본 실험에 사용된 기기는 ultrasonic cleaner (Branson, USA), rotary vacuum evaporator (Eyela, Japan), CO2 incubator (Thermo, USA), water bath (HAAKE, Germany), microplate reader (Molecular Devices EMax Plus, USA), The Qubit 2.0 Fluorometer (Invitrogen, USA), AriaMx (Agilent, USA) 등이다.
본 실험을 위해서 filter paper (Advantec No.2, Japan) Dulbecco's modified Eagle medium (WELGENE, Korea), fetal bovine serum (WELGENE, Korea), 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin (WELGENE, Korea), DPBS (Corning, USA), Trypsin-EDTA (WELGENE, Korea), LPS from Escherichia coli 0127:B8 (Sigma, USA), MTS solution (Promega, USA), Qubit RNA Assay Kit (molecular probes, USA), eCube Tissue RNA Mini Kit (PhileKorea, Korea), 5X M-MLV RT reaction buffer (Promega, USA), M-MLV reverse transcriptase (Promega, USA), RNase inhibitor (Enzynomics, Korea), 2X Prime Q-mater Mix (GENET BIO, Korea) 등이 사용되었다.
실험에 사용된 세포는 RAW 264.7 대식세포(mouse로 부터 유래된 cell line)이며 한국세포주은행에서 구매하였다. 세포 배양은 표준 세포 배양법인 37℃, 5% CO2 조건을 유지해주었고, 10%(v/v) FBS와 1% antibiotic antimycotic을 첨가한 DMEM media에서 세포의 배양을 하였다.
실험에 사용된 참당귀, 중국당귀, 일본당귀는 한국 서울의 동양허브 주식회사로부터 2016년 9월에 구입 (NO;2016-0901, 2016-0902, 2016-0903)하여 기원의 진위와 품질의 우열을 가천대학교 한의과대학 본초학교실에서 감정하였고, 약재는 ultrasonic cleaner를 이용하여 불순물을 제거하고 실험에 사용하였다.

데이터처리

대조군과 실험군의 평균 차이는 student's t-test로 분석하여 p-value값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의한차이가 있는 것으로 판정하였다.

이론/모형

7 cells were treated with indicated concentrations of AG, AS, and AA for 24 h. Cell viability was measured by MTS assay.

성능/효과

1. RAW 264.7 대식세포에 참당귀, 중국당귀, 일당귀열수 추출물을 1,600 μg/ml 농도로 24 시간 처리한 결과 세포활성도를 100% 이상 증가시켰으나, 1,600 μg/ml 농도로 참당귀, 일당귀 열수 추출물을 RAW 264.7 대식세포에 처리한 경우 세포 수를 감소시켰다.
2. RAW 264.7 대식세포에 참당귀, 중국당귀, 일당귀열수 추출물을 200 μg/ml 농도로 6 시간 처리한 경우 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현이 증가하였다.
3. LPS로 염증을 유도한 RAW 264.7 대식세포에 6 시간 동안 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 200 μg/ml 농도로 처리한 경우 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현을 증가시켰으며 이 효과는 일당귀 열수 추출물에서 가장 높게 나타났다.
6 시간 동안 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 각각 RAW 264.7 대식세포에 LPS와 같이 처리한 결과, LPS만처리한 RAW 264.7 대식세포보다 IL-1β, TNF-α, iNOS mRNA 발현이 높은 수치로 증가하였다.
MTS assay에 의해 측정되는 값은 주로 세포 내 NADP, NADPH 양에의해 나타난다. MTS assay를 통해 확인된 세포활성도 증가는 세포증식이 촉진되어 세포 수가 증가한 경우에서 나타날 수 있으며 또한 세포 내 NADH, NADPH의 생성량이 증가한 경우에서 나타날 수 있다. 이러한 세포활성도 증가와 세포 수 변화의 상관관계를 확인하기 위하여, RAW 264.
그 결과 200 μg/ml 농도의 참당귀, 일당귀 열수 추출물을 처리한 RAW 264.7 대식세포에서 IL-1β, TNF-α, iNOS 의 발현이 증가되었으나 중국당귀 열수 추출물은 IL-1β, TNF-α, iNOS의 발현에 큰 영향을 미치지 않았다[Fig. 2].
그 결과 6 시간 처리했을 때와 다르게 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물 모두 RAW 264.7 대식세포의 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현에 미치는 영향은 미비하였다[Fig. 3].
그 결과 LPS 자극 없이 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 처리한 결과와 같이, LPS를 단독으로 처리한 RAW 264.7 대식세포와 대비하여 참당귀, 중국당 귀, 일당귀 열수 추출물을 LPS와 같이 처리할 경우 IL-1 β, TNF-α, iNOS의 발현을 촉진시키는 것으로 확인되었으며 이 효과는 일당귀 열수 추출물을 처리한 경우에서 가장 크게 나타났다[Fig. 3].
그 결과 중국당귀 열수 추출물의 1,600 μg/ml 농도에서 세포활성도는 124% 까지 증가시켰고, 일당귀 열수 추출물은 111% 까지 증가시켰으며, 참당귀 열수 추출물은 296%로 매우 높게 증가시켰다.
그 결과 참당귀 열수 추출물과 일당귀 열수 추출물을 처리한 RAW 264.7 대식세포에서 IL-1β 발현을 유의미하게 증가시켰다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 각각의 약재를 50 g으로 정확하게 중량을 측정하고 환류추출기에 1차 증류수 2,000 ml와 함께 넣은 뒤 탕액이 끓는 시점으로 2 시간 동안 가열하여 추출한 다음, 추출액을 filter paper로 감압 여과한 여과액을 rotary vacuum evaporator를 이용하여 농축액을 얻어 동결건조기를 이용하여 건조한 분말을 시료로 사용하였다. 동결건조 추출물은 참당귀 17 g, 수율 34%, 중국당귀 27.5 g, 수율 55%, 일당귀 14 g, 수율 28%였다.
반면 LPS를 유도시킨 RAW 264.7 대식세포에 24 시간 동안 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 200 μg/ml 농도로 반응시킨 결과 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현이 LPS만 처리한 RAW 264.7 대식세포에 대비하여 유의성 있는 차이를 보이지 않았다.
이러한 세포활성도 증가와 세포 수 변화의 상관관계를 확인하기 위하여, RAW 264.7 대식세포에 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 1,600 μg/ml 농도로 24 시간 처리한 후 세포 수를 측정한 결과, 참당귀, 일당귀 열수 추출물은 RAW 264.7 대식세포의 세포 수를 대조군 대비 60% 이하로 감소시켰으며, 중국당귀 열수 추출물 또한 76% 이하로 감소시켰다.
이러한 세포활성도 증가와 세포 수 변화의 상관관계를 확인하기 위하여, RAW 264.7 대식세포에 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수추출물을 1,600 μg/ml 농도로 24 시간 처리한 후 세포 수를 측정하였고 그 결과, 참당귀, 일당귀 열수 추출물은 RAW 264.7 대식세포의 세포 수를 대조군 대비 60% 이하로 감소시켰으며, 중국당귀 열수 추출물은 76% 이하로 감소시켰다[Fig. 1B].
이를 통해 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물은 박테리아나 바이러스와 같은 외부 항원에 대한 대식세포의 pro-inflammation phase를 강하게 촉진시킴으로써 효율적인 방어를 유도한 뒤, 이후 정상적인 resolution phase 를 유도시킬 가능성 확인하였다. 향후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 대식세포의 다양한 염증 반응 메커니즘에 미치는 작용을 확인하는 연구가 진행되어야 하며, 박테리아 및 다양한 병원균에 대한 방어기작에 미치는 영향 또한 깊은 연구가 필요하다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물은 6 시간 처리에 의해 RAW 264.7 대식세포의 pro-inflammatory 사이토카인인 IL-1β, TNF-α, iNOS의 mRNA 발현을 더욱 강하게 촉진하였으며, 그 후 24 시간 한 경우 LPS로 촉진 시킨 IL-1β, TNF-α, iNOS mRNA 발현에 큰 영향을 미치지 않았다[Fig. 3].
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 LPS로 염증 반응이 유발된 RAW 264.7 대식세포에 6 시간 처리한 경우 더욱 강한 염증 반응을 유도하는 것으로 나타났다. 이러한 연구 결과는 추후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 이용한 염증 조절 영향 연구에 매우 중요할 것으로 생각된다.
참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 RAW 264.7 대식세포의 세포활성도에 미치는 영향을 확인하기 위해 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 농도별로 RAW 264.7 대식세포에 처리하고 24 시간 뒤 MTS assay를 수행한 결과, 중국당귀 열수 추출물을 1,600 μg/ml 농도로한 세포활성도는 124% 까지 증가시켰고, 일당귀 열수 추출물은 111% 까지 증가시켰으며, 참당귀 열수 추출물은 296%로 매우 높게 증가시켰다[Fig. 1A].

후속연구

향후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 대식세포의 다양한 염증 반응 메커니즘에 미치는 작용을 확인하는 연구가 진행되어야 하며, 박테리아 및 다양한 병원균에 대한 방어기작에 미치는 영향 또한 깊은 연구가 필요하다. 뿐만 아니라 LPS 자극 없이도 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 여러 pro-inflammation 사이토카인의 발현을 유도하였기 때문에 부작용 발생 가능성도 확인해야 할 것으로 사료된다.
7 대식세포에 6 시간 처리한 경우 더욱 강한 염증 반응을 유도하는 것으로 나타났다. 이러한 연구 결과는 추후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물을 이용한 염증 조절 영향 연구에 매우 중요할 것으로 생각된다.
이를 통해 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물은 박테리아나 바이러스와 같은 외부 항원에 대한 대식세포의 pro-inflammation phase를 강하게 촉진시킴으로써 효율적인 방어를 유도한 뒤, 이후 정상적인 resolution phase 를 유도시킬 가능성 확인하였다. 향후 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 대식세포의 다양한 염증 반응 메커니즘에 미치는 작용을 확인하는 연구가 진행되어야 하며, 박테리아 및 다양한 병원균에 대한 방어기작에 미치는 영향 또한 깊은 연구가 필요하다. 뿐만 아니라 LPS 자극 없이도 참당귀, 중국당귀, 일당귀 열수 추출물이 여러 pro-inflammation 사이토카인의 발현을 유도하였기 때문에 부작용 발생 가능성도 확인해야 할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	LPS는 무엇인가?	LPS (Lipopolysaccharide;리포 다당류)는 그람음성 박테리아에서 생기는 내독소 (endotoxin)의 일종으로 대식 세포 등의 면역세포를 자극하여 각종의 염증성인자들의 생성증가를 유도하며[5], 면역세포 중 대식세포는 염증 촉발 물질에 급격한 생성증가를 유발하고[6], 과잉 배출된 염증매개인자들은 염증성질환 유발시켜 자가 면역질환 악화 등의 다양한 질환을 일으키는 것으로 알려져 있다[7].
	사이토카인에 포함되는 물질에는 어떤 것들이 있는가?	사이토카인 (cytokine)이란 인체 내 핵을 가진 모든 세포에서 생산될 수 있는 조절 단백 물질이며, 숙주 방어와 손상 치유 과정에 관여하는 세포들과 조혈 세포에 사이토카인 (cytokine)이 작용하여 면역 반응 및 조혈작용을 조절하는 인자들을 말한다. 현재 사이토카인 (cytokine) 은 인터루킨 (interleukin)계 35종, 케모카인 (chemokine) 계 48종의 두 그룹으로 나누어지는 인터페론 (interferon) 계, 집락자극인자 (colony stimulating factor)계, 성장인자 (growth factor)계 및 종양괴사인자 (Tumor necrosis factor, TNF)계 등의 단백물질 200여종 이상이 사이토카인 (cytokine)에 속하게 된다[8].
	MTS assay에서 MTS 용액이 세포에 처리되었을 때 formazan은 어떻게 생성되는가?	MTS는 세포내 미토콘드리아에서 생성되는 NADH, NADPH가 주된 reducing agent로 작용하여 반응한 뒤 formazan을 생성한다[25]. MTS assay는 MTS 용액을 세포에 처리한 뒤 생성되는 formazan을 흡광도를 측정하여 세포활성도를 확인하는 방법이다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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