[논문]만성 저온 스트레스 동물모델에서의 황련(黃連)의 항염증 효능 연구

최진규; 허유진; 이원일; 김윤경; 이태희; 오명숙

doi:10.6116/kjh.2018.33.6.35.

[국내논문] 만성 저온 스트레스 동물모델에서의 황련(黃連)의 항염증 효능 연구
Anti-inflammatory effects of Coptidis Rhizoma in chronic cold stress-exposed mice 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.33 no.6, 2018년, pp.35 - 42

최진규 (경희대학교 약학대학 약학과) , 허유진 (경희대학교 일반대학원 경락의과학과) , 이원일 (경희대학교 일반대학원 나노의약생명과학과) , 김윤경 (원광대학교 약학대학 한약학과) , 이태희 (가천대학교 한의과대학 방제학교실) , 오명숙 (경희대학교 일반대학원 나노의약생명과학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The aim of this study was to investigate whether the extract of Coptidis Rhizoma inhibits inflammation in chronic cold stress (CCS)-exposed mice or not. Methods : Coptidis Rhizoma extract (CRE) was made by reflux with distilled water. Male ICR mice (7 weeks old) were divided randomly into 5 groups: (1) control, (2) CCS, (3) CCS+CRE 100 mg/kg, (4) CCS+CRE 300 mg/kg, (5) CCS+CRE 1,000 mg/kg groups. Mice were orally administered once a day for 14 days starting from 1 day before CCS. Group (2)-(5) were exposed to CCS conditions that maintained at $4^{\circ}C$ for 2 h once a day for 14 days. The levels of serum cortisol and hypothalamic prostaglandin E1 (PGE1) and PGE2 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay kit. The expression levels of several pro-inflammatory factors like heat shock protein 70 (HSP70), c-fos, and nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF-kB) were measured by western blot analysis in mouse hypothalamus. Results : Oral administration of CRE 1,000 mg/kg significantly suppressed the increase of serum cortisol levels in mice exposed to CCS. CCS-exposed mice had significantly increased the expression of HSP70, c-fos, and NF-kB in hypothalamus, while CRE treatment significantly attenuated the elevation of these pro-inflammatory factors. The ratio of PGE2/PGE1 was also higher in CCS-exposed mice than control group. CRE treatment significantly reduced the increase of PGE2/PGE1 ratio induced by CCS. Conclusion : These findings suggest that Coptidis Rhizoma may work as a potential agent to modulate inflammatory responses under the condition of cold adaptation formed by CCS.

Keyword

표/그림 (3)

그림 Fig 1. Effects of CRE on cortisol level in mouse serum after CCS.
그림 Fig 2. Effects of CRE on the expressions of HSP70, c-fos, and NF-kB in mouse hypothalamus after CCS.
그림 Fig 3. Effects of CRE on the ratio of PGE2/PGE1 levels in mouse hypothalamus after CCS.

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 황련이 만성 저온 스트레스 유도 동물모델에서의 염증 관련 인자 조절 효능을 평가하고자 하였다. 따라서, 황련 추출물을 이용하여 CCS에 노출된 마우스의 혈액 내 cortisol 농도 및 뇌 시상하부 내 pro-inflammatory 단백질 발현 변화를 enzyme-linked immunosorbent (ELISA) 또는 western blot 분석을 통하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 황련이 만성 저온 스트레스 유도 동물모델에서의 염증 관련 인자 조절 효능을 평가하고자 하였다. 따라서, 황련 추출물을 이용하여 CCS에 노출된 마우스의 혈액 내 cortisol 농도 및 뇌 시상하부 내 pro-inflammatory 단백질 발현 변화를 enzyme-linked immunosorbent (ELISA) 또는 western blot 분석을 통하여 다음과 같은 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 지속적인 저온 스트레스에 노출되어 나타나는 염증 반응에 대한 황련의 억제 효능을 알아보고자 하였다.
이상의 연구에서 황련은 cold stress 유도 동물모델에서 혈중 cortisol 농도 증가 및 뇌 시상하부에서의 HSP70, c-fos, NF-kB, PGE 등의 염증 관련 단백질의 과발현을 효과적으로 억제하는 것을 확인하여 지속적인 外寒(만성 저온 스트레스) 유도 체내 염증에 대한 황련의 조절 효능을 과학적으로 규명하였음을 밝히는 바이다.
본 연구에서는 황련 추출물(CRE)의 만성 저온 스트레스 유도 염증 억제 효능 연구를 수행하였고 다음과 같은 결론을 얻었다.

제안 방법

, South Korea)에서 구입하여 사용하였으며, 추출분말은 이전에 보고된 연구의 방법을 참고하여 제조하였다²⁴⁾. 건조된 약재 200g을 분쇄기를 이용하여 분말화한 후 10배의 2차 증류수를 가하여 환류 추출기에서 2시간 동안 가열 추출하였고 이를 2회 반복하여 합하였다. 감압 여과 후, 여과액을 동결건조하여 powder 형태의 시료(Coptidis Rhizoma extract; CRE)를 22.
동물은 5마리/cage (40㎝ × 25㎝ × 18㎝) 단위로 수용하여 사육하였으며, 사육환경은 온도 22∼24℃, 습도 50∼70%가 되도록 유지하였고, 12시간 명암주기(07:00 점등, 19:00 소등)로 조절되는 환경에서 사육하였다.
동물은 5마리/cage (40㎝ × 25㎝ × 18㎝) 단위로 수용하여 사육하였으며, 사육환경은 온도 22∼24℃, 습도 50∼70%가 되도록 유지하였고, 12시간 명암주기(07:00 점등, 19:00 소등)로 조절되는 환경에서 사육하였다. 실험기간 동안 사료는 실험동물용 고형사료를 공급하였고, 음수는 증류수를 사용하여 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 동물실험에 관련된 모든 과정은 실험동물 사육 및 사용에 관한 가이드라인(NIH publication 8^th edition, revised 2011)과 경희대학교 실험동물 사용 및 관리 가이드라인 원칙에 준하여 수행되었다(동물실험계획서 승인번호: KHP-2014-05-3).
7일간 적응 후, 실험동물을 각 군당 5마리씩 총 5군으로 나누어 투여하였다. 제1군(control) 및 제2군(chronic cold stress; CCS)은 생리식염수(saline)를 체중 ㎏당 5 ㎖로 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구투여하였다.
7일간 적응 후, 실험동물을 각 군당 5마리씩 총 5군으로 나누어 투여하였다. 제1군(control) 및 제2군(chronic cold stress; CCS)은 생리식염수(saline)를 체중 ㎏당 5 ㎖로 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구투여하였다. 제3군(CCS+CRE 100 ㎎/㎏), 제4군(CCS+CRE 300 ㎎/㎏), 제5군(CCS+CRE 1,000 ㎎/㎏)은 각각 CRE 100, 300, 1,000 ㎎/㎏ 농도로 체중 ㎏당 5 ㎖ 용량에 해당하는 양을 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구 투여하였다.
제1군(control) 및 제2군(chronic cold stress; CCS)은 생리식염수(saline)를 체중 ㎏당 5 ㎖로 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구투여하였다. 제3군(CCS+CRE 100 ㎎/㎏), 제4군(CCS+CRE 300 ㎎/㎏), 제5군(CCS+CRE 1,000 ㎎/㎏)은 각각 CRE 100, 300, 1,000 ㎎/㎏ 농도로 체중 ㎏당 5 ㎖ 용량에 해당하는 양을 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구 투여하였다. CCS 유도는 이전에 보고된 연구의 방법을 참고하여 제2군~제5군의 실험동물을 대상으로 수행하였다²⁵⁾ .
CCS 유도는 이전에 보고된 연구의 방법을 참고하여 제2군~제5군의 실험동물을 대상으로 수행하였다²⁵⁾ . 각 군의 실험동물이 있는 cage를 4℃, 습도 50~70%로 유지되는 Misco control system chamber (Samsung Co. Ltd., Seoul, South Korea)에서 2시간 동안 1일 1회 넣은 후, 이를 14일간 반복하여 CCS를 유도하였다.
각 실험동물의 혈액을 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 얻은 serum sample에 diethyl ether를 혼합한 후 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. Diethly ether 혼합물을 nitrogen 건조 후 570㎚ excitation / 590㎚ emission 조건으로 설정된 microplate reader (VERSA max, Molecular Device, Sunnyvale, USA)에서 protease 활성을 측정하였다. 측정값은 control군의 값에 대한 %로 환산하여 표시하였다.
마지막 CCS 유도 직후 실험동물을 avertin 10 ㎕/g 용량으로 복강투여하여 마취 후. 복대동맥에서 혈액을 채취하고 경추 탈골하여 희생시켰다. 이후 뇌조직을 적출하여 시상하부 부위를 분리하였다.
다음날 membrane에 2차 항체 (HRP-conjugated, 1:2000)를 1시간 동안 반응시켰다. Membrane을 ECL detection kit를 이용하여 반응시킨 후 LAS-4000 mini system (Fujifilm, Tokyo, Japan)을 이용하여 band image를 얻었다. Band intensity는 Image J (Bethesda, USA)를 이용하여 정량하였으며 β-actin의 band intensity에 대비하여 측정하였다.
. 각 실험동물의 뇌시상하부 조직 lysate와 reaction buffer를 혼합하여 상온에서 45분 동안 반응시킨 후, microplate reader (570㎚)에서 protease 활성을 측정하였다. PGE1 및 PGE2 농도값을 이용하여 PGE2/1 ratio를 구한 후, control군 값 대비 %로 환산하여 표시하였다.
각 실험동물의 뇌시상하부 조직 lysate와 reaction buffer를 혼합하여 상온에서 45분 동안 반응시킨 후, microplate reader (570㎚)에서 protease 활성을 측정하였다. PGE1 및 PGE2 농도값을 이용하여 PGE2/1 ratio를 구한 후, control군 값 대비 %로 환산하여 표시하였다.
Stress에 의해 증가하는 염증 관련 단백질인 PGE1 및 PGE2 농도에 CRE가 미치는 영향을 확인하기 위하여 CCS에 노출된 생쥐의 뇌 시상하부 내 PGE1 및 PGE2 농도 측정을 위한 ELISA assay를 수행하였다. CCS에 의한 뇌 시상하부 내 PGE2/1 비율은 control군에 비해 약 1.

대상 데이터

본 실험에 사용된 황련(C. chinensis Franch.)은 중국 사천에서 재배된 것을 옴니허브(Omni Herb Inc., South Korea)에서 구입하여 사용하였으며, 추출분말은 이전에 보고된 연구의 방법을 참고하여 제조하였다²⁴⁾. 건조된 약재 200g을 분쇄기를 이용하여 분말화한 후 10배의 2차 증류수를 가하여 환류 추출기에서 2시간 동안 가열 추출하였고 이를 2회 반복하여 합하였다.
30% acryl amide, tetramethylethylenediamine, tween-20, ECL reagent, protein assay kit는 Bio-RAD (Hercules, USA)에서 구입하였고 rabbit anti-c-fos 1차 항체, cortisol ELISA kit, prostaglandin E1 (PGE1) 및 prostaglandin E2 (PGE2) ELISA kit는 Enzo Life Sciences (Farmingdale, USA)에서 구입하였다. Goat anti-heat shock protein 70 (HSP70), rabbit anti-NF-kB, mouse anti-b-actin 1차 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc.
30% acryl amide, tetramethylethylenediamine, tween-20, ECL reagent, protein assay kit는 Bio-RAD (Hercules, USA)에서 구입하였고 rabbit anti-c-fos 1차 항체, cortisol ELISA kit, prostaglandin E1 (PGE1) 및 prostaglandin E2 (PGE2) ELISA kit는 Enzo Life Sciences (Farmingdale, USA)에서 구입하였다. Goat anti-heat shock protein 70 (HSP70), rabbit anti-NF-kB, mouse anti-b-actin 1차 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, USA)에서 구입하였다. Protein extraction buffer는 Intron biotechnology (Seongnam, South Korea) 에서 구입하였고, phosphate buffered saline (PBS), trisbuffered saline (TBS), diethyl ether는 Sigma-Aldrich (St.
Louis, USA)에서 구입하였다. Non-fat skim milk는 BD Biosciences (Bedford, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 모든 시약은 분석용 등급 이상으로 사용하였다.
실험동물은 ICR mice 수컷(7주령, 30-32g) 25마리를 오리엔트 바이오(Seongnam, South Korea)에서 구입하여 사용하였다. 동물은 5마리/cage (40㎝ × 25㎝ × 18㎝) 단위로 수용하여 사육하였으며, 사육환경은 온도 22∼24℃, 습도 50∼70%가 되도록 유지하였고, 12시간 명암주기(07:00 점등, 19:00 소등)로 조절되는 환경에서 사육하였다.
제3군(CCS+CRE 100 ㎎/㎏), 제4군(CCS+CRE 300 ㎎/㎏), 제5군(CCS+CRE 1,000 ㎎/㎏)은 각각 CRE 100, 300, 1,000 ㎎/㎏ 농도로 체중 ㎏당 5 ㎖ 용량에 해당하는 양을 CCS 유도 1시간 전부터 시작하여 1일 1회 14일간 경구 투여하였다. CCS 유도는 이전에 보고된 연구의 방법을 참고하여 제2군~제5군의 실험동물을 대상으로 수행하였다²⁵⁾ . 각 군의 실험동물이 있는 cage를 4℃, 습도 50~70%로 유지되는 Misco control system chamber (Samsung Co.
(Santa Cruz, USA)에서 구입하였다. Protein extraction buffer는 Intron biotechnology (Seongnam, South Korea) 에서 구입하였고, phosphate buffered saline (PBS), trisbuffered saline (TBS), diethyl ether는 Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)에서 구입하였다. Non-fat skim milk는 BD Biosciences (Bedford, USA)에서 구입하였다.

데이터처리

통계처리는 Graphpad Prism 5.0 software (San Diego, USA)를 이용하였으며, 통계적 유의성 평가는 독립 표본 t-검정(unpaired Student’s t-test)을 사용하여 p값이 0.05 미만일 때 유의하다고 판단하였다.
Statistical evaluations were analyzed by Student's t-test.

이론/모형

Cortisol ELISA assay는 kit manual 및 이전에 보고된 연구의 방법에 따라 수행되었다²⁶⁾ . 각 실험동물의 혈액을 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 얻은 serum sample에 diethyl ether를 혼합한 후 상온에서 2시간 동안 반응시켰다.
뇌 시상하부(hypothalamus)에서의 CCS 유도 HSP70, c-fos, NF-kB 발현에 대한 CRE의 억제 효능을 확인하기 위해, western blotting을 수행하였다. 마지막 CCS 유도 직후 실험동물을 avertin 10 ㎕/g 용량으로 복강투여하여 마취 후.
측정값은 control군의 값에 대한 %로 환산하여 표시하였다. 각 반응 간에 TBST를 이용하여 15분간 3회 세척하였으며, 단백질 정량은 Bradford 방법을 이용하였다²⁷⁾ .
PGE1 및 PGE2 ELISA assay는 kit manual 및 이전에 보고된 연구의 방법에 따라 수행되었다²⁶⁾ . 각 실험동물의 뇌시상하부 조직 lysate와 reaction buffer를 혼합하여 상온에서 45분 동안 반응시킨 후, microplate reader (570㎚)에서 protease 활성을 측정하였다.
CRE가 CCS에 의한 serum 내 cortisol 농도 증가에 미치는 영향을 확인하기 위하여 cortisol ELISA assay를 수행하였다. CCS에 노출된 생쥐에서의 serum 내 cortisol 농도는 control군에 비해 약 3.
염증 관련 단백질 발현 증가 억제 효능 CCS에 따른 염증 관련 전사 단백질인 HSP70, c-fos, NF-kB의 뇌 시상하부 내 변화에 대한 CRE의 영향을 확인하기 위하여, western blot 분석을 수행하였다. CCS 유도에 따른 mouse hypothalamus 내 HSP70 발현은 control군에 비해 약 1.

성능/효과

CRE가 CCS에 의한 serum 내 cortisol 농도 증가에 미치는 영향을 확인하기 위하여 cortisol ELISA assay를 수행하였다. CCS에 노출된 생쥐에서의 serum 내 cortisol 농도는 control군에 비해 약 3.5배 정도 증가함으로써 통계적으로 유의하였으나, CRE 1,000 ㎎/㎏ 투여에 의해 통계적으로 유의하게 감소하였다(Fig. 1).
염증 관련 단백질 발현 증가 억제 효능 CCS에 따른 염증 관련 전사 단백질인 HSP70, c-fos, NF-kB의 뇌 시상하부 내 변화에 대한 CRE의 영향을 확인하기 위하여, western blot 분석을 수행하였다. CCS 유도에 따른 mouse hypothalamus 내 HSP70 발현은 control군에 비해 약 1.7배 정도 증가함으로써 통계적으로 유의하였으나, CRE 1,000 ㎎/㎏ 투여에 의해 통계적으로 유의하게 감소하였다(Fig. 2A). 또한 CCS 유도 뇌 시상하부 내 c-fos 및 NF-kB 발현은 control군에 비해 각각 약 1.
2A). 또한 CCS 유도 뇌 시상하부 내 c-fos 및 NF-kB 발현은 control군에 비해 각각 약 1.5, 1.3배 정도 증가함으로써 통계적으로 유의하였으며, c-fos 발현은 CRE 1,000 ㎎/㎏, NF-kB 발현은 CRE 300 및 1,000 ㎎/㎏ 투여에 의해 각각 통계적으로 유의하게 감소하였다(Fig. 2B, C).
Stress에 의해 증가하는 염증 관련 단백질인 PGE1 및 PGE2 농도에 CRE가 미치는 영향을 확인하기 위하여 CCS에 노출된 생쥐의 뇌 시상하부 내 PGE1 및 PGE2 농도 측정을 위한 ELISA assay를 수행하였다. CCS에 의한 뇌 시상하부 내 PGE2/1 비율은 control군에 비해 약 1.4배 정도 증가함으로써 통계적으로 유의하였으나, CRE의 모든 용량 투여군 (100, 300, 1,000 ㎎/㎏)에서 통계적으로 유의하게 감소하였다(Fig. 3).
또한 Zhao 등³²⁾은 1일 1회 20일간 지속적인 cold stress가 주어진 상태에서 HSP70, NF-kB 등의 염증관련 인자의 발현 증가 및 glutathione 등의 항산화 효소 분비량 감소 등이 나타나 조직 손상을 일으킨다는 것을 보고하였다. 본 연구에서 CCS에 노출된 마우스의 혈청 내 cortisol 농도가 control군에 비해 통계적으로 유의하게 증가하였으며, CRE 1,000 ㎎/㎏ 투여 후 감소되는 것을 확인하였다. 또한 CRE 300 또는 1,000 ㎎/㎏ 투여가 CCS로 유도된 HSP70, c-fos, NF-kB 단백질의 뇌 시상하부 내 과발현을 통계적으로 유의하게 억제하여 항염증 효능을 나타내는 것을 확인하였다.
본 연구에서 CCS에 노출된 마우스의 혈청 내 cortisol 농도가 control군에 비해 통계적으로 유의하게 증가하였으며, CRE 1,000 ㎎/㎏ 투여 후 감소되는 것을 확인하였다. 또한 CRE 300 또는 1,000 ㎎/㎏ 투여가 CCS로 유도된 HSP70, c-fos, NF-kB 단백질의 뇌 시상하부 내 과발현을 통계적으로 유의하게 억제하여 항염증 효능을 나타내는 것을 확인하였다.
세포막 인지질의 arachidonic acid로부터 합성되는 PGE2는 cortisol에 의해 조절되며 다양한 염증 및 면역반응의 매개체로서, 특히 c-fos 활성화를 유도한다^35-38) . 본 연구에서 지속적인 CCS 노출에 따라 뇌 시상하부 내 PGE2/PGE1의 농도비가 정상군에 비해 급격히 증가하였으며, 이러한 상태는 CRE 1,000 ㎎/㎏ 투여 후 통계적으로 유의하게 개선되는 것을 확인하였다.
본 연구에서 확인한 CCS에 대한 CRE의 효능은 berberine을 포함한 함유 알칼로이드 계열 성분들의 항염증 효능에 기인하는 것으로 예상된다¹³⁾ . 대표적으로 berberine은 갈색 지방 매개 열 생산과 체내 대사를 촉진시켜 cold stress 노출 후 나타나는 체온 조절 이상과 염증 반응을 개선하고³⁹⁾ , 동맥류에서의 대식세포 침윤에 따른 pro-inflammatory 사이토카인의 분비를 억제하며⁴⁰⁾, coptisine의 경우 NF-kB/mitogenactivated protein kinase 신호전달체계 억제^41),42) , LPS/toll-like 수용체-4 매개 pro-inflammatory 전사 인자 과발현 억제 효능⁴³⁾ 등이 보고되었다.
또한 cold stress로 인한 뇌 내 염증 사이토카인 변화를 확인한 연구에서는 NF-kB 신호전달체계 인자의 활성화를 확인하였다²⁵⁾ . 따라서 cold stress 노출 시 염증 사이토카인 및 glucocorticoid 호르몬 등의 과다분비로 인해 체내 항상성의 불균형 상태가 발생하게 되며 본 연구 모델에서의 양상과 일치함을 확인할 수 있다. 이러한 관점에서 황련의 우수한 淸熱작용과 항염증 효능은 만성 저온 스트레스로 유도된 HPA 매개 cortisol 증가와 이로 인한 염증 전사 인자들의 과발현을 억제하는 데 주요한 역할을 하였음을 알 수 있다.
1. CRE는 chronic cold stress로 유도한 생쥐 혈청에서 cortisol 농도의 증가를 억제하는 효능을 나타내었다.
2. CRE는 chronic cold stress로 유도한 생쥐 뇌 시상하부에서 염증 전사 단백질인 HSP70, c-fos, NF-kB의 발현 증가를 억제하는 효능을 나타내었다.
3. CRE는 chronic cold stress로 인해 증가한 생쥐 뇌 시상하부에서 PGE2/PGE1 ratio를 유의하게 억제하는 효능을 나타내었다.
황련이 chronic cold stress에 의한 cortisol 및 pro-inflammatory 인자들의 혈액 또는 뇌 시상하부 내 급격한 증가를 억제할 수 있음을 확인하였다. 이상의 결과는 만성 저온 스트레스 노출 후 寒邪가 체내 침입하여 나타나는 inflammatory condition에 대한 황련의 조절 효능을 과학적으로 규명하였으며, 저온 스트레스의 지속적인 노출에 따른 인체 내 염증에 대한 황련의 임상 효능을 기대할 수 있다는 점에서 시사하는 바가 크다.
황련이 chronic cold stress에 의한 cortisol 및 pro-inflammatory 인자들의 혈액 또는 뇌 시상하부 내 급격한 증가를 억제할 수 있음을 확인하였다. 이상의 결과는 만성 저온 스트레스 노출 후 寒邪가 체내 침입하여 나타나는 inflammatory condition에 대한 황련의 조절 효능을 과학적으로 규명하였으며, 저온 스트레스의 지속적인 노출에 따른 인체 내 염증에 대한 황련의 임상 효능을 기대할 수 있다는 점에서 시사하는 바가 크다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	지속적인 cold stress가 이어지면 Cortisol의 분비는 어떻게 되는가?	외부 온도변화에 수반되는 cold stress는 glucocorticoid 분비를 유도하여 포도당 분해를 통한 혈당 상승을 통해 체내 항상성을 유지한다28) . Cortisol은 부신피질에서 분비되는 주요 glucocorticoid 호르몬으로서 HPA에 의해 조절되며 외부 스트레스에 대한 체내 항상성 조절에 기여하나, 지속적인 스트레스에 노출되면 cortisol이 과다 분비되어 glucocorticoid 수용체 손상에 따른 염증 반응이 나타난다29) . 이는 cortisol이 glucocorticoid 수용체/heat shock 단백질 복합체에 결합 후 HSP70, c-fos, NF-kB 등의 pro-inflammatory 전사 인자들의 활성화 및 분비를 유도하는 등 스트레스로 인한 세포 내 신호전달체계에서 중요한 역할을 담당하고 있는 것과 관련성이 높다30),31) .
	CCS는 어떠한 증상을 유발하는가?	만성적인 cold stress (chronic cold stress; CCS)는 체온 유지를 위해 열을 발생시키고 대사활동을 촉진시키지만, 이러한 상태가 계속되면 체내 전반적인 염증 및 자율신경계의 문제를 야기하여 각종 질병을 유도하기도 한다1),2) . CCS는 혈액 내 cortisol 및 뇌 시상하부 내 nuclear factor kappa-light-chainenhancer of activated B cells (NF-kB)와 같은 proinflammatory factors의 발현 증가를 유도하여 뇌 시상하부-뇌하수체-부신 축(hypothalamic-pituitary-adrenal axis; HPA)을 활성화시킴으로써 결과적으로 체온 감소, 고혈압, 불안 증상을 유발한다고 알려져 있으며3-6) , CCS가 랫트의 혈액 및 뇌 시상하부와 피질 내 pro-inflammatory cytokines의 급속한 증가와 학습 및 인지능력 감퇴를 유도하며, 이는 CCS로 인한 HPA 조절 능력의 이상과 밀접한 상관성이 있음을 밝힌 바 있다7) . 또한 Kim 및 Makino 등1),8)은 CCS 유도 HPA 매개 염증 및 산화 스트레스에 대한 한약의 억제 효능을 실험적으로 증명하여 한약의 CCS 유도 염증 조절 가능성을 제시하였다.
	황련(黃連)은 무엇인가?	황련(黃連)은 미나리아재비과에 속하는 다년생 본초인 황련(Coptis japonica Makino), 중국황련(C. chinensis Franch.), 삼각엽황련(C. deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao), 운련(C. teeta Wallich)의 뿌리를 제거한 뿌리줄기를 지칭하며 알칼로이드 계열의 berberine, coptisine 등이 주성분으로 함유되어 있다12) . 본초학적으로 황련은 주로 淸熱燥濕, 瀉火解毒의 효능을 가지며, 다양한 모델에서 황련 추출물과 함유성분의 항염증 효능이 입증된 바 있다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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