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문제 정의
- 이러한 비소의 위해성 평가를 위해 OECD 가이드라인에 제안된 어류 독성 평가 대안으로 포유류와 생리적 유사성을 지는 zebrafish를 동물모델로서 사용하였다. 따라서 본 연구는 3종의 해조류(감태, 미역, 톳)로부터 비소함량이 많은 비소 추출물 (ECAE, UPAE, 및 HFAE)의 노출이 zebrafish에서 미치는 영향에 대한 변화를 알아보고자 수행되었다.
- 따라서 본 연구에서는 3종의 해조류(감태, 미역 그리고 톳)로부터 얻은 비소 추출물의 발생독성 및 안정성을 평가하고자 in vivo 모델로서 zebrafish를 사용하였다. Zebrafish embryo의 발생단계에서 비소로 인하여 유발된 독성에 대한 생존율, 부종 크기 및 세포사멸 기전을 연구하기 위해 Real-time PCR을 통해 이와 관련된 유전자인 p53, Bax, Bcl-Xl, Caspase-3, Caspase-9, Caspase-8의 발현 양상을 평가하였다.
제안 방법
- 2회에 걸쳐 얻은 상층액을 pore size 0.45 μm의 nylon 여과 주사기를 사용하여 여과하고 동결건조 후 분말화하여 최종적으로 3종의 해조류로부터 비소함량이 많은 감태 비소추출물(Ecklonia cava arsenic-rich extract, ECAE), 미역 비소추출물(Undaria pinnatifida arsenic-rich extract, UPAE) 그리고 톳 비소 추출물(Hizikia fusiformis arsenic-rich extract, HFAE)을 얻었다 (Table 1).
- 약 3-4 hpf의 embryo를 6 well plate에 embryo media 2,850 μL를 포함하여 각각 30마리를 옮겼다. 3종의 비소 추출물(ECAE, UPAE 및 HFAE)를 100, 500 ppm의 농도로 96 hpf 까지 처리하였다. 이 후 zebrafish larvae를 eppendorf tube(e-tube)에 옮겼으며 28.
- 실험에 사용된 감태(Ecklonia cava), 미역(Undaria pinnatifida), 톳(Hizikia fusiformis)은 2014년 2-3월에 제주도 성산 연안에서 채집되었다. 3종의 해조류(감태, 미역, 톳)에 있는 소금, 모래 등 이물질 제거하고자 흐르는 물에 수세하였다. 동결건조 된 3종의 해조류는 분쇄 후 사용되었다.
- 48 hpf 일 때, 현미경을 통해 1분 동안 심박수를 측정하였으며 마취시킨 larvae의 측면을 사진을 찍은 후 yolk sac edema의 경계선을 이어서 그린 도형 안의 면적을 ISCapture 프로그램을 사용하여 평가하였다. Zebrafish embryo의 생존율은 비소 추출물에 노출 후 7 dpf (days post-fertilization)까지 측정하였고, adult zebrafish의 경우 비소 추출물에 노출 후 7일까지 측정하였다.
- 1C). 48 hpf일 때, 마취시킨 larvae의 측면 사진을 찍은 후 난황 부종의 경계선을 이어 그린 도형 안의 면적을 평가하였다. 난황 부종의 크기를 측정한 결과, 100 및 500 ppm의 농도로 노출시킨 군이 대조군에 비해 증가하였으나 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 7 μm 두께로 조직절편하였고, Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색법을 수행하였다.
- 96시간 동안 비소 추출물에 노출된 zebrafish 성체를 Bouin 용액에 24시간 동안 고정하고 탈수 및 파라핀 침투과정을 거친 후, 파라핀 블록을 제작하였다. 7 μm 두께로 조직절편하였고, Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색법을 수행하였다.
- 03% MS-222로 zebrafish larvae를 마취시켰다. CoolSNAP-Pro dolor 디지털 카메라가 장착된 현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하고 촬영 하였다. 촬영한 각각의 zebrafish larvae의 형광 강도를 image J program을 사용하여 정량화하였다.
- 03% MS-222로 zebrafish larvae를 마취시켰다. CoolSNAP-Pro dolor 디지털 카메라가 장착된 현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하고 촬영 하였다. 촬영한 각각의 zebrafish larvae의 형광 강도를 image J program을 사용하여 정량화하였다.
- 세포 손상이 일어날 경우 세포사멸을 일으키게 되는 요인 중 하나가 독성물질에 대한 손상이다. ECAE, UPAE 및 HFAE 노출에 따른 zebrafish의 세포사멸 관련 유전자 발현을 확인하였 다(Fig. 3 and 4). p53은 세포사멸과 같은 세포 스트레스 반응 경로에 관여하며, DNA를 손상시키는 자극으로부터 보호하는 중요한 조절 인자이다.
- ECAE, UPAE 및 HFAE에 의해 zebrafish의 cell death 변화 여부를 확인하고자 acridine orange로 염색하여 관찰하였다 (Fig. 2A). 해조류 비소 추출물에 노출된 군과 대조군과 비교 시 100 및 500 ppm에서 cell death의 수치가 최대 1.
- ECAE, UPAE 및 HFAE의 노출에 따른 zebrafish embryo의 잠재적 독성을 평가하고자 7 dpf까지 시간 경과에 따른 생존율 변화를 측정하였다(Fig. 1A). 본 연구에서는 해조류 비소 추출물(ECAE, UPAE 및 HFAE)은 96시간 동안 100 및 500 ppm의 농도로 노출시켰다.
- ECAE, UPAE 및 HFAE의 노출에 따른 난황 부종의 크기 변화를 통해 zebrafish larvae의 잠재적 독성을 평가하였다(Fig. 1C). 48 hpf일 때, 마취시킨 larvae의 측면 사진을 찍은 후 난황 부종의 경계선을 이어 그린 도형 안의 면적을 평가하였다.
- H&E 염색을 위해 96시간 동안 비소 추출물에 의해 노출된 성체로부터 간을 적출하고 파라핀 블록을 만들어 광학현미경을 이용하여 조직의 손상정도를 관찰한 결과 고용량 투여군에서는 구조적 손상을 관찰하였다(Fig. 5).
- Reactive Oxygen Species (ROS) 생성 측정은 zebrafish lar-vae에서 산화 반응이 일어나는 부분에 선택적으로 염색시키는 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) 시약을 이용하였다. 3종의 해조류 비소 추출물에 노출된 zebrafish를 72 hpf 때 96 well plate에 옮긴 후 20 μg/mL의 DCFH-DA 용액으로 처리하여 28.
- 역전사는 cDNA 합성 kit (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland)를 사용하여 1 µg의 총 RNA로 상보적 DNA (Complementary DNA, cDNA)을 합성하였다. Roche SYBR Green을 사용하여 3번의 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(Real-time Reverse Transcription-PCR; Real-time RTPCR)을 수행하였고 45 cycles의 cDNA 증폭시켰다. 실험에 사용된 primer는 표로 나타내었다.
- Zebrafish adult 독성평가는 OECD 가이드 라인 203에 따라 수행하였으며, 각각의 수조에 1 L 그리고 7마리씩 분배하여 3종의 해조류 비소 추출물 200과 800 ppm 농도로 96시간동안 처리하였다.
- Zebrafish embryo가 부화되는 2 dpf 시점에서 ECAE, UPAE 및 HFAE의 노출에 따른 심장 박동수를 측정하였다(Fig. 1B). 심장 박동수 측정 결과, 100 ppm의 농도로 노출시킨 군과 대조군을 비교한 결과 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 따라서 본 연구에서는 3종의 해조류(감태, 미역 그리고 톳)로부터 얻은 비소 추출물의 발생독성 및 안정성을 평가하고자 in vivo 모델로서 zebrafish를 사용하였다. Zebrafish embryo의 발생단계에서 비소로 인하여 유발된 독성에 대한 생존율, 부종 크기 및 세포사멸 기전을 연구하기 위해 Real-time PCR을 통해 이와 관련된 유전자인 p53, Bax, Bcl-Xl, Caspase-3, Caspase-9, Caspase-8의 발현 양상을 평가하였다. 또한, 간 독성을 확인하기 위해 H&E 염색법을 통해 간 조직 형태의 변화와 세포사멸 관련 인자를 평가하였다.
- 48 hpf 일 때, 현미경을 통해 1분 동안 심박수를 측정하였으며 마취시킨 larvae의 측면을 사진을 찍은 후 yolk sac edema의 경계선을 이어서 그린 도형 안의 면적을 ISCapture 프로그램을 사용하여 평가하였다. Zebrafish embryo의 생존율은 비소 추출물에 노출 후 7 dpf (days post-fertilization)까지 측정하였고, adult zebrafish의 경우 비소 추출물에 노출 후 7일까지 측정하였다. 측정 간격은 24시간마다 수행하였다.
- 5±1℃의 적정 온도를 유지하여 사육하였다. Zebrafish는 하루에 두 번 먹이(Tetra GmgH D-49304 Melle Made in Germany)를 주고 산란을 위해서는 적절한 낮과 밤의 분리가 필요하므로 14시간의 빛과 10시간의 암환경을 제공하였다. 산란 전 mating cage에 1마리의 암컷과 2마리의 수컷의 비율로 맞추어 수정시켜 다음날 아침에 빛을 켜줌으로써 자연 산란을 유발시켰다.
- 그러나, 500 ppm에서는 모든 군에서 cell death의 수치가 증가하였으며 통계적으로 유의적인 차이를 보였다. Zebrafish에서 해조류 비소 추출물에 의해 유도되는 산화적 스트레스로 인한 ROS 생성량을 측정하였다(Fig. 2B). 모든 군에서 대조군보다 ROS 생성량이 10% 이상 증가하였으며, 100 ppm에서 HFAE 군을 제외한 ECAE 과 UPAE 군에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 건조된 감태, 미역, 톳 분말 1 g을 50% methanol 를 포함한 1% HNO3 용매 10 mL로 진행하였으며, 초음파 추출기를 사용 하여 60℃에서 2시간 추출하였다. 이 후 10분간 원심분리 후 상층액을 취하고 잔사를 전 과정과 동일하게 2회 추출하였다.
- 7 μm 두께로 조직절편하였고, Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색법을 수행하였다. 광학 현미경으로 관찰하여 독성으로 인한 간세포의 변화 유무를 확인하였다.
- 따라서 본 연구에서는 3종의 해조류를 사용해 비소함량이 많은 추출물에 대하여 zebrafish model을 통해 독성평가를 수행하였다. 생존율, 심박수, 및 yolk sac edema size에서 독성을 나타 내지 않았으나, cell death, ROS 생성량, 세포사멸과 관련된 유전자 발현, 및 조직학적 관찰에서 각 고용량 투여군에서는 독성에 의한 변화가 있음을 확인하였다.
- 또한, 간 독성을 확인하기 위해 H&E 염색법을 통해 간 조직 형태의 변화와 세포사멸 관련 인자를 평가하였다.
- 본 연구에서는 OECD 가이드 라인에 따라 각 zebrafish의 embryo와 adult에서 3종의 해조류로부터 비소함량이 많은 비소 추출물의 독성평가를 수행하였다. 각각 고용량 투여군에서 비소 추출물에 의한 독성을 보였다.
- 1A). 본 연구에서는 해조류 비소 추출물(ECAE, UPAE 및 HFAE)은 96시간 동안 100 및 500 ppm의 농도로 노출시켰다. 각 시험물질을 농도에 따라 노출시킨 zebrafish embryo는 대조군에 비해 생존율이 감소하였다.
- 비소 노출이 zebrafish의 발달 변화(생존율, 심박수, 및 난황 부종 크기)에 미치는 영향을 알아보기 위해 100 과 500 ppm의 비소 추출물을 96시간 동안 노출시켰으며 7일까지 관찰하였다. 그 결과 생존율에서 비소 추출물 처리 후 대조군보다 감소하였으나 모든 그룹에서 80% 이상의 생존율을 유지하였다.
- Zebrafish는 하루에 두 번 먹이(Tetra GmgH D-49304 Melle Made in Germany)를 주고 산란을 위해서는 적절한 낮과 밤의 분리가 필요하므로 14시간의 빛과 10시간의 암환경을 제공하였다. 산란 전 mating cage에 1마리의 암컷과 2마리의 수컷의 비율로 맞추어 수정시켜 다음날 아침에 빛을 켜줌으로써 자연 산란을 유발시켰다. 수집된 수정란은 embryo media로 채운 petri dish에 보관하였다.
- 세포사멸 측정은 acridine orange 염색법을 이용해 살아있는 larvae에서 확인하였다. Acridine orange는 핵산을 선택적으로 염색시켜 세포사멸을 연구하는데 유용하다.
- 수정 후 약 3-4 hpf (hours post-fertilization)일 때 12 well plate의 각각의 well에 900 μL의 embryo media를 포함 하여 15마리의 embryo를 옮겼다. 실험 할 3종의 해조류로부터 비소함량이 많은 감태 비소추출물(Ecklonia cava arsenic-rich extract, ECAE), 미역 비소추출물(Undaria pinnatifida arsenicrich extract, UPAE) 그리고 톳 비소 추출물(Hizikia fusiformis arsenic-rich extract, HFAE)을 100, 500 그리고 1000 ppm의 농도로 선택하였다. 각각의 well에 비소추출물을 첨가하였으며 수정 후 약 96 hpf까지 노출시켰다.
- p53은 세포사멸과 같은 세포 스트레스 반응 경로에 관여하며, DNA를 손상시키는 자극으로부터 보호하는 중요한 조절 인자이다. 이 외에도 세포사멸 관련 인자로 Bax 및 Bcl-2와 실제 세포사멸이 일어나기 위해 중요한 인자인 caspase-3, caspase-9 및 caspase-8 인자들을 확인하였다.
- , 2005). 이에 우리는 먼저 세포사멸 과정에서 핵심적인 역할을 하는 것으로 알려진 caspase-3가 활성화되는지를 확인하였다. Larvae에서는 활성화되지 않았으나 성체의 간에서는 고용량 투여군에서는 활성화됨을 real-time PCR을 통해 관찰할 수 있었다.
- CoolSNAP-Pro dolor 디지털 카메라가 장착된 현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하고 촬영 하였다. 촬영한 각각의 zebrafish larvae의 형광 강도를 image J program을 사용하여 정량화하였다.
- Zebrafish embryo의 생존율은 비소 추출물에 노출 후 7 dpf (days post-fertilization)까지 측정하였고, adult zebrafish의 경우 비소 추출물에 노출 후 7일까지 측정하였다. 측정 간격은 24시간마다 수행하였다.
대상 데이터
- Zebrafish 성체는 서울 수족관에서 구입하였고 암컷과 수컷을 나누어 3 L 아크릴수조에 28.5±1℃의 적정 온도를 유지하여 사육하였다.
- 실험에 사용된 감태(Ecklonia cava), 미역(Undaria pinnatifida), 톳(Hizikia fusiformis)은 2014년 2-3월에 제주도 성산 연안에서 채집되었다. 3종의 해조류(감태, 미역, 톳)에 있는 소금, 모래 등 이물질 제거하고자 흐르는 물에 수세하였다.
데이터처리
- Means with different small letters are statistically significant differences (P<0.05) according to Duncan’s multiple range test.
- 각각의 시료에 대한 수치는 평균±표준편차로 표현하였으며 조사 항목들 간의 유의성 검증은 P<0.05 수준에서 Duncan’s multiple range test 와 Tukey’s multiple range test로 실시하였다.
- 모든 실험은 3반복으로 실시되었으며, 실험결과의 통계처리는 Windows 상에서 SPSS 프로그램(SPSS Inc. Ver. 14.0)을 사용하여 Oneway ANOVA-teat를 실시하였다. 각각의 시료에 대한 수치는 평균±표준편차로 표현하였으며 조사 항목들 간의 유의성 검증은 P<0.
이론/모형
- Zebrafish embryo 독성 평가는 Organization for Economic Co-Operation Development (OECD)가이드 라인 210에 따라 수행하였다. 수정 후 약 3-4 hpf (hours post-fertilization)일 때 12 well plate의 각각의 well에 900 μL의 embryo media를 포함 하여 15마리의 embryo를 옮겼다.
- 이러한 비소의 위해성 평가를 위해 OECD 가이드라인에 제안된 어류 독성 평가 대안으로 포유류와 생리적 유사성을 지는 zebrafish를 동물모델로서 사용하였다. 따라서 본 연구는 3종의 해조류(감태, 미역, 톳)로부터 비소함량이 많은 비소 추출물 (ECAE, UPAE, 및 HFAE)의 노출이 zebrafish에서 미치는 영향에 대한 변화를 알아보고자 수행되었다.
- 화학 물질 테스트를 위한 어류 배아 독성에 관한 새로운 가이드라인에 대한 제안은 독일연방환경청에 의해 OECD에 서술되어있다(Braunbeck and Lammer, 2006; Henn and Braunbeck, 2011). 제안된 대안 중 하나는 실험 대체 모델로서 어류의 발생 초기 단계가 사용되었다(Hutchinson, 2002; Fraysse et al., 2006).
성능/효과
- 또한 500 ppm의 농도로 노출시킨 군에서도 7 dpf까지 생존율 변화를 측정한 결과 80% 이상으로 나타났으나, UPAE가 처리된 군에서는 약 77%의 생존율을 나타내었다. 100 ppm의 농도로 노출시킨 군과 대조군을 비교한 결과 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다. 따라서, 100 ppm의 ECAE, UPAE 및 HFAE에 노출된 zebrafish embryo는 독성의 영향을 받지 않음을 확인하였다.
- Zevrafish larvae에서 세포사멸 관련 유전자의 발현 양상을 확인한 결과 p53 및 Bax는 해조류 비소 추출물 노출 농도에 따른 증가하는 발현 변화가 나타났으나 100 ppm에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다. Bcl-2는 억제 조절 인자로서 발현 양상이 감소할 경우 apoptosis가 일어났음을 확인한다.
- 본 연구에서는 해조류 비소 추출물(ECAE, UPAE 및 HFAE)은 96시간 동안 100 및 500 ppm의 농도로 노출시켰다. 각 시험물질을 농도에 따라 노출시킨 zebrafish embryo는 대조군에 비해 생존율이 감소하였다. 100 ppm의 농도로 노출시킨 군은 7 dpf까지 생존율 변화를 측정한 결과 80% 이상으로 나타내었다.
- 각각의 형광 시약을 통해 세포사멸과 ROS 생성량을 확인한 결과 500 ppm의 추출물을 처리한 모든 군에서 유의적인 차이를 보이며 100 ppm의 HFAE를 처리한 군을 제외한 나머진 군에서 유의적인 차이를 보이지 않았다. 이는 추출물에 의해 지질 과산화 및 DNA 손상이 일어나 세포사멸과 산소 라디칼이 생성된 것이며 특히 HFAE의 경우 다른 추출물에 비해 비소 함량이 높아 다른 군들에 비해 유의적인 차이가 나타나는 것으로 사료된다.
- Bcl-2는 억제 조절 인자로서 발현 양상이 감소할 경우 apoptosis가 일어났음을 확인한다. 그 결과 100 과 500 ppm에서 대조군보다 Bcl-2의 농도가 증가함에 따라 발현 량이 감소함을 확인하였으나 유의적인 차이는 보이지 않았다. Caspase-3 및 caspase-9는 대조군과 비교하여 발현량은 증가하였으나 유의적인 차이가 나지 않았다.
- 비소 노출이 zebrafish의 발달 변화(생존율, 심박수, 및 난황 부종 크기)에 미치는 영향을 알아보기 위해 100 과 500 ppm의 비소 추출물을 96시간 동안 노출시켰으며 7일까지 관찰하였다. 그 결과 생존율에서 비소 추출물 처리 후 대조군보다 감소하였으나 모든 그룹에서 80% 이상의 생존율을 유지하였다. Zebrafish의 심장은 처음 발달되고 기능을 발휘하는 기관으로 생리적 상관관계에서 심장 박동수는 어류의 대사성 질환을 예측하는데 사용되었다(Hill et al.
- Larvae에서는 활성화되지 않았으나 성체의 간에서는 고용량 투여군에서는 활성화됨을 real-time PCR을 통해 관찰할 수 있었다. 그렇다면 사망신호에 의해 유도되는 경로를 통한 것인지 미토콘드리아 경로를 통한 것인지 알아보기 위해 caspase-8과 caspase-9의 활성을 관찰한 결과 둘다 활성이 증가하였으나 저용량 투여군에서는 유의적인 차이가 없음을 관찰할 수 있었다. 미토콘드리아 경로에 관여하는 p53, Bax, 그리고 Bcl-2의 활성을 관찰한 결과 저용량 투여군의 larvae와 간에서 유의적인 차이가 나지 않음을 확인할 수 있었다.
- 48 hpf일 때, 마취시킨 larvae의 측면 사진을 찍은 후 난황 부종의 경계선을 이어 그린 도형 안의 면적을 평가하였다. 난황 부종의 크기를 측정한 결과, 100 및 500 ppm의 농도로 노출시킨 군이 대조군에 비해 증가하였으나 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 100 ppm의 농도로 노출시킨 군과 대조군을 비교한 결과 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다. 따라서, 100 ppm의 ECAE, UPAE 및 HFAE에 노출된 zebrafish embryo는 독성의 영향을 받지 않음을 확인하였다.
- 따라서, zebrafish에서 500 ppm으로 처리된 HFAE 군에서 독성의 영향이 의심되나 100 ppm의 농도에서는 ECAE, UPAE 및 HFAE에서 독성의 영향이 없음을 제시하였다.
- 또한, zebrafish 성체 간에서 세포사멸 관련 유전자 발현량을 확인한 결과 200 ppm에 노출된 군에서 모든 인자들에 대한 유의적인 차이가 나지 않음을 확인하였다. 이를 통해 larvae와 성체 간에서 비소 추출물에 의한 세포사멸 유도는 미토콘드리아를 통한 intrinsic pathway와 death receptor와 관련된 extrinsic pathway를 통해 유도되나, 최종적으로 간에서 HFAE 800 ppm를 제외한 나머지에서 caspase-3 활성이 일어나지 않음을 통해 세포사멸을 유도시킨다고 보기에는 어렵다고 사료된다.
- 2B). 모든 군에서 대조군보다 ROS 생성량이 10% 이상 증가하였으며, 100 ppm에서 HFAE 군을 제외한 ECAE 과 UPAE 군에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 그러나, 500 ppm에서는 모든 군에서 ROS 생성량의 수치가 증가하였으며 통계적으로 유의적인 차이를 보였다.
- 그렇다면 사망신호에 의해 유도되는 경로를 통한 것인지 미토콘드리아 경로를 통한 것인지 알아보기 위해 caspase-8과 caspase-9의 활성을 관찰한 결과 둘다 활성이 증가하였으나 저용량 투여군에서는 유의적인 차이가 없음을 관찰할 수 있었다. 미토콘드리아 경로에 관여하는 p53, Bax, 그리고 Bcl-2의 활성을 관찰한 결과 저용량 투여군의 larvae와 간에서 유의적인 차이가 나지 않음을 확인할 수 있었다. Caspase-3는 caspase의 최하위 단계로서 세포사멸에서 핵심적인 역할을 하고 있으며 활성화될 경우 PARP (poly ADP ribose polymerase)와 같은 단백질의 분해를 통해 신호를 전달하게 되어 결과적으로 세포사멸을 유발하게 된다(Soma et al.
- 따라서 본 연구에서는 3종의 해조류를 사용해 비소함량이 많은 추출물에 대하여 zebrafish model을 통해 독성평가를 수행하였다. 생존율, 심박수, 및 yolk sac edema size에서 독성을 나타 내지 않았으나, cell death, ROS 생성량, 세포사멸과 관련된 유전자 발현, 및 조직학적 관찰에서 각 고용량 투여군에서는 독성에 의한 변화가 있음을 확인하였다.
- 1B). 심장 박동수 측정 결과, 100 ppm의 농도로 노출시킨 군과 대조군을 비교한 결과 통계적으로 유의적인 차이를 보이지 않았다. 그러나 500 ppm의 HFAE 군과 대조군을 비교하여 유의적으로 심장 박동수가 감소하였다.
- ECAE, UPAE, 및 HFAE에 의해 zebrafish embryo의 심장 박동수를 증가 또는 감소 시켰다. 이는 zebrafish embryo가 시험물질에 의해 손상을 입혔음을 의미하지만 Fig. 1B에서의 수치가 10% 이내에서 증가 또는 감소하였으며 유의적인 차이가 없음을 통해 영향을 받지 않았음을 확인하였다.
- ECAE, UPAE, 및 HFAE에 의해 zebrafish embryo 의 난황의 크기가 증가하였다. 이는 시험물질에 의해 zebrafish embryo에 영향을 주었음을 의미하지만 Fig. 1C에서의 수치는 대조군과 비교하여 미비하였으며 유의적인 차이가 없음을 통해 발달과정에 손상을 받지 않았음을 확인하였다.
- 2A). 해조류 비소 추출물에 노출된 군과 대조군과 비교 시 100 및 500 ppm에서 cell death의 수치가 최대 1.3배까지 증가 하였다. 100 ppm에서 HFAE 군을 제외한 ECAE 과 UPAE 군에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다.
후속연구
- 실제로 섭취에 의한 안전성 평가는 추가적인 연구가 진행되어야 할 것이다. 따라서 본 연구는 추가적인 연구를 진행하는데 있어 기초자료로 활용할 수 있을 것이다.
- 각각 고용량 투여군에서 비소 추출물에 의한 독성을 보였다. 실제로 섭취에 의한 안전성 평가는 추가적인 연구가 진행되어야 할 것이다. 따라서 본 연구는 추가적인 연구를 진행하는데 있어 기초자료로 활용할 수 있을 것이다.
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