[논문]HepG2 세포에서 AMPK 활성화를 통한 호나복(胡蘿蔔) 에탄올 추출물의 간 세포 보호 효과

김도연; 박상미; 변성희; 박정아; 조일제; 김상찬

doi:10.14374/hfs.2018.26.4.329

HepG2 세포에서 AMPK 활성화를 통한 호나복(胡蘿蔔) 에탄올 추출물의 간 세포 보호 효과
Hepato-protective Effects of Daucus carota L. Root Ethanol Extract through Activation of AMPK in HepG2 Cells 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.26 no.4, 2018년, pp.329 - 340

김도연 (대구한의대학교 한의과대학) , 박상미 (대구한의대학교 한의과대학) , 변성희 (대구한의대학교 한의과대학) , 박정아 (대구한의대학교 한의과대학) , 조일제 (대구한의대학교 한의과대학) , 김상찬 (대구한의대학교 한의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : In Traditional Korean medicine, Daucus carota L. has been used for treating dyspepsia, diarrhea, dysentery and cough. Recent pharmacognosic evidence showed D. carota has anti-oxidant, anti-cancer, anti-fungal, and hypotensive effects. Present study investigated hepato-protective effect of D. carota ethanol extract (DCE) against oxidative stress in HepG2 cells. Methods : After HepG2 cells were pretreated with different concentrations of DCE, the cells were exposed to tert-butyl hydroperoxide (tBHP) for inducing oxidative stress. Cell viability, hydrogen peroxide production, glutathione concentration, and mitochondrial membrane potentials were measured to explore hepato-protective effect of DCE. Phosphorylation of AMP-activated protein kinase (AMPK) and effect of compound C on cell viability were determined to investigate the role of AMPK on DCE-mediated cytoprotection. Results : DCE significantly decreased the tBHP-mediated cytotoxicity in a concentration dependent manner and reduced the changes on apoptosis-related proteins by tBHP in HepG2 cells. In addition, DCE significantly prevented hydrogen peroxide production, glutathione depletion, and mitochondrial membrane impairment induced by tBHP. Treatment with DCE increased phosphorylation of AMPK, and the DCE-mediated cytoprotection was abolished by pretreatment with compound C. Conclusions : These results demonstrate that DCE can protect hepatocytes from oxidative stress through activation of AMPK.

주제어

표/그림 (3)

그림 Fig 1. DCE inhibited tBHP-induced apoptosis in HepG2 cells.
그림 Fig. 2. DCE prevented tBHP-induced oxidative stress.
그림 Fig. 3. DCE protected HepG2 cells from oxidative stress through AMPK activation.

AI 본문요약
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문제 정의

. DCE가 산화적 스트레스의 억제를 통해 tBHP 유도성 세포 사멸에 대한 보호 효능을 나타내는지 규명하기 위하여 우선 DCE 전처 치에 따른 세포 내 H₂O₂ 생성의 변화를 연구하였다. HepG2 세포에서 12시간 동안의 tBHP 처치는 H₂O₂ 생성을 무처치 대조세포 (1.
따라서 DCE는 300 μg/mL까지 HepG2 세포에 대한 독성이 없음을 확인하여 이후 모든 실험에서는 300 μg/mL 이하 농도의 DCE를 처치하여 DCE의 산화적 스트레스에 대한 세포 보호 효능과 분자기전을 연구하였다.
선행 연구에서 胡蘿蔔 열수 추출물 및 정유 성분에 포함된 phenol, flavonoids, terpenes 등의 성분들이 사염화탄소로 유도한 급성 간독성 병태 동물 모델에서 항산화능을 증가시켜 급성 간독성과 관련된 혈액 및 조직학적 지표들을 개선할 수 있음이 보고되었으나^26-28), 항산화 효능의 증가와 관련된 胡蘿蔔의 세포 및 분자 수준에서의 기전 연구는 상대적으로 부족하였다. 따라서 본 연구에서는 간 실질세포주인 HepG2 세포를 이용하여 胡蘿蔔 의 세포 보호 효능 및 이와 관련된 분자기전을 규명하고자 하였다.
그러나 胡蘿蔔의 항산화 효능에 관여하는 분자적 기전에 대한 연구는 상대적으로 부족하였다. 따라서본 연구에서는 HepG2 세포에 대표적 지질 과산화물 유도체 중 하나인 tert-butyl hydroperoxide (tBHP)를 처치하여 산화적 스트레스를 통한 세포 독성을 유도하였고^20-23), 胡蘿蔔 에탄올 추출물의 세포 보호 효능 및 이와 관련된 분자기전을 규명하고자 하였다.
따라서 이상의 연구를 통하여 DCE의 항산화능을 세포 수준에서 입증하였으며, DCE에 함유된 주요 활성 성분들의 항산화 효능과 관련된 후속 연구가 필요할 것으로 생각된다. 본 연구에서는 DCE가 AMPK의 인산화 증가와 더불어 AMPK 화학적 억제제 전처치시 DCE의 세포 보호 효능이 억제됨을 연구하여 산화적 스트레스에 대한 DCE의 세포 보호 효능에 AMPK의 활성화가 수반됨을 규명하였다. 본 연구실에서는 선행 연구를 통하여 산화적 스트레스로부터 간 실질세포를 보호할 수 있는 소재로써 十全大補湯, 白芍藥, 夏枯草, 密蒙花, 靑蒿로부터 분리한 tryptanthrin, 艾葉으로부터 분리한 eupatilin 등을 발굴하였으며, 이들 모두 AMPK의 활성화를 통하여 세포 보호 효능을 나타냄을 규명하였다^4-8,29).
본 연구에서는 胡蘿蔔 에탄올 추출물 (DCE)이 AMPK의 활성화를 통하여 tBHP 유도성 산화적 스트레스로부터 세포를 보호하는 항산화 효능이 있음을 규명하였다. 이후 DCE의 다른 산화적 스트레스 세포 모델에서의 효능 검증, AMPK 활성화와 관련된 상위 /하위 신호분자 연구, DCE에 포함된 주요 항산화 화합물들의 동정, 실험동물 수준에서의 in vivo 간보호 효능과 관련된 후속 연구가 지속적으로 이루어진다면 산화적 스트레스가 원인인 다양한 급만성 간질환을 치료하는 처방을 구성하는 신규 약재로서 胡蘿蔔을 활용할 수 있을 것으로 생각된다.

제안 방법

300 μg/mL DCE의 단독 처치는 무처치 대조세포와 비교하여 PARP 및 caspase-3 전구체와 Bcl-2 단백질들의 발현을 변화시키지 않았다.
DCE 처치 1시간 후 150 μM의 tBHP를 12시간 동안 처치하여 산화적 스트레스에 의한 세포 손상을 유도하였다.
DCE가 tBHP 유도성 세포 독성에 대한 보호 효능을 나타내는지 연구하기 위하여 10-300 μg/mL DCE를 전처치한 HepG2 세포에 150 μM tHBP를 12시간 동안 처치하였다.
DCE가 tBHP에 의하여 유도된 세포자멸사의 억제를 통하여 세포 보호 효능을 나타내는지 연구하기 위하여 세포자멸사 관련 단백질들의 발현 변화를 면역화학 분석으로 확인하였다. 선행 연구 보고와 유사하게^21-23), 12시간 동안의 tBHP 처치는 무처치 대조세포와 비교하여 PARP 및 caspase-3 전구체와 Bcl-2단백질의 발현을 감소시켰다.
胡蘿蔔 에탄올 추출물 (D. carota ethanol extract, DCE)은 기 보고된 방법을¹⁹⁾ 약간 변형하여 제조하였다. 胡蘿蔔은 2016년 6월에 서문시장 (Daegu, Korea) 에서 구입하고 냉동보관하였다.
胡蘿蔔 에탄올 추출물 (DCE)의 세포 보호 효능을 연구하기에 앞서 DCE의 세포독성 여부를 HepG2 세포에 3-300 μg/mL의 DCE를 12시간 동안 처치한 후 세포 생존율의 변화를 측정하여 확인하였다.
그러나, 100과 300 μg/mL의 DCE 전처치는 H2O2 생성을 각각 1.49 ± 0.11배와 1.37 ± 0.13배로 DCE 처치 농도 의존적으로 억제하였으며, 100과 300 μg/mL 의 DCE 전처치에 의한 H2O2 생성의 변화는 tBHP 단독 처치 세포와 비교하여 통계적으로 유의하였다.
다음으로 DCE에 의한 AMPK 인산화가 DCE의 세포 보호에 관여하는지 규명하기 위하여 AMPK 화학적 억제제인 compound C를 전처치한 후 300 μg/mL DCE 와 150 μg/mL tBHP를 처치하여 세포 생존율의 변화를 관찰하였다.
따라서, DCE가 산화적 스트레스로부터 보호하는 과정에 AMPK의 활성화가 관여하는지 규명하기 위하여 HepG2 세포에 300 μg/mL의 DCE를 처치하였다.
5% skim milk (또는 bovine serum albumin)로 상온에서 2시간 반응시킨 후, 표적단백 질에 대한 1차 항체와 반응시키고, horseradish peroxidase가 결합된 2차 항체와 반응시켰다. 반응이 종료된 membrane은 enhanced chemiluminescense detection kit와 Imager 600 (GE healthcare life sciences, Buckinghamshire, UK)을 이용하여 면역 화학 분석을 수행하였다. 약물 처치에 따른 표적 단백질의 상대적인 발현량의 변화는 Image J (http://imagej.
부유된 세포의 미토콘드리아 막 전위의 변화는 Partec GmbH FACS Calibur flow cytometer (Münster, Germany)를 이용하여 10,000개의 세포의 형광을 측정하여 분석하였다.
세포 내 H2O2 생성량의 변화를 측정하기 위해 약물 처치가 완료된 HepG2 세포를 30 μg/mL DCFH-DA와 10분간 반응시킨 후 세포를 회수하였다.
세포 내 생성된 formazan을 DMSO로 용해시킨 후 automated microplate reader (Infinite M200 Pro, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
생성량의 변화를 측정하기 위해 약물 처치가 완료된 HepG2 세포를 30 μg/mL DCFH-DA와 10분간 반응시킨 후 세포를 회수하였다. 세포 내부의 H₂O₂ 와 DCFH-DA가 반응하여 생성된 dichloroflurescin의 형광 강도를 485 및 530 nm 의 파장에서 automated microplate reader (Tecan) 로 측정하였다.
세포 내 생성된 formazan을 DMSO로 용해시킨 후 automated microplate reader (Infinite M200 Pro, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 무처치 세포의 흡광도에 대한 상대적인 백분율로 계산하였다.
상층액 내 존재하는 환원형 GSH 함량은 GSH determination kit (Oxis International, Portland, OR, USA)를 이용하여 automated microplate reader (Tecan)로 405 nm에서 측정하였다. 약물 처치에 따른 환원형 GSH 함량의 변화는 무처치 세포의 흡광도에 대한 백분율로 계산하였다.
여과액을 3000 ×g에서 3분간 원심분리하여 얻은 상층액을 다시 Whatman No.2 filter (Nalgene, New York, USA)로 2차 여과한 후 동결건조 (LABCONCO, Kansas, MO, USA)하여 胡蘿蔔 에탄올 추출물, DCE를 제조하였다.
특히 100 또는 300 μg/mL 의 DCE 전처치에 의한 PARP 전구체 단백질의 발현 변화와 300 μg/mL의 DCE 전처치에 의한 caspase-3 전구체 단백질의 발현 증가는 tBHP 처치 세포와 비교하여 통계적으로 유의하였다.

대상 데이터

Rhodamine 123(Rho123)과 compound C는 Calbiochem (San Diego, CA, USA)에서 구입하였다. Anti-poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), anti-caspase-3, anti-Bcl-2, anti-phosphorylated AMPK (Ser172), anti-AMPK 및 horseradish peroxidase가 결합된 2차 항체는 Cell signaling Technology (Beverely, MA, USA)에서 구입하였다.
2 filter (Nalgene, New York, USA)로 2차 여과한 후 동결건조 (LABCONCO, Kansas, MO, USA)하여 胡蘿蔔 에탄올 추출물, DCE를 제조하였다. DCE의 최종 수율은 7.41%였으며, dimethyl sulfoxide (DMSO)에 300 mg/mL의 농도로 용해하여 본 연구에 사용하였다.
Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS), phosphate-buffered saline (PBS), penicillin-streptomycin은 Gibco (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) 에서 구입하였다.
Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, DMSO는 Junsei Chemical (Tokyo, Japan)에서 구입하였다. Rhodamine 123(Rho123)과 compound C는 Calbiochem (San Diego, CA, USA)에서 구입하였다. Anti-poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), anti-caspase-3, anti-Bcl-2, anti-phosphorylated AMPK (Ser172), anti-AMPK 및 horseradish peroxidase가 결합된 2차 항체는 Cell signaling Technology (Beverely, MA, USA)에서 구입하였다.
tBHP, 3-(4.5-dimethylthlazol)-2.5-diphenyltetrazollum bromide (MTT), 2', 7'-dicholorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) 와 anti-β-actin 항체는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, DMSO는 Junsei Chemical (Tokyo, Japan)에서 구입하였다.
carota ethanol extract, DCE)은 기 보고된 방법을¹⁹⁾ 약간 변형하여 제조하였다. 胡蘿蔔은 2016년 6월에 서문시장 (Daegu, Korea) 에서 구입하고 냉동보관하였다. 胡蘿蔔 300 g을 100% 에탄올 3 L에 넣어 상온에서 3일간 용출시킨 후 거즈로 1차 여과하였다.
인체 유래 간세포주인 HepG2 세포는 American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA)에서 구입하였으며, 10% FBS, 100 units/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 포함한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하여 실험목적에 맞는 multi-well plate 바닥 면적의 80-90% 정도 성장시킨 후 실험에 이용하였다.

데이터처리

그러나, 10-300 μg/mL의 DCE 전처치는 농도 의존적으로 tBHP에 의해 감소한 세포 생존율을 증가시키는 경향을 나타내었으며, 10-300 μg/mL의 DCE 전처치에 의한 세포 생존율의 변화는 tBHP 단독 처치세포와 비교하여 통계적으로 유의하였다.
모든 실험결과는 3회 반복시행 후 mean ± standard deviation (S.D.)로 표기하였으며, 그룹간 통계적 유의성은 one way analysis of variance로 분석한 후, Tukey HSD test 또는 Dunnett T3 test로 사후 검정하였다.
특히, 300 μg/mL의 DCE 전처치에 의한 환원형 GSH 함량의 변화는 tBHP 처치 세포와 비교하여 통계적으로 유의하였다 (Fig. 2B).

이론/모형

To investigate cytotoxicity of DCE, HepG2 cells were treated with 3-300 μg/mL of DCE for 12 h. Relative cell viability was determined by MTT assay. (B) Effect of DCE on tBHP-mediated cytotoxicity.
처치가 완료된 HepG2 세포로부터 전세포 단백질 조추출액은 phosphatase 및 protease inhibitor가 첨가된 radioimmunoprecipitation buffer를 이용하여 기 보고된 방법에 따라 제조하였으며⁸⁾, bicinchoninic acid protein assay kit (Thermo Fischer Scientific, Rockford, IL, USA)를 이용하여 조추출액 내 단백질 함량을 정량하였다. 동량의 전세포 단백질 조추출액을 8-12% sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel에서 전기영동하여 분리한 후, nitrocellulose 또는 polyvinylidene difluoride membrane으로 전이 하였다.

성능/효과

1. HepG2 세포에 10-300 μg/mL DCE의 전처치는 tBHP에 의한 세포 독성을 농도 의존적으로 억제하였으며, 세포자멸사와 관련된 PARP 전구체, caspase-3 전구체, Bcl-2 단백질의 발현 감소를 억제하였다.
12시간 동안의 tBHP 처치는 세포 내 환원형 GSH 함량을 무처치 대조세포와 비교하여 20.84 ± 17.20%로 통계적으로 유의하게 감소시켰으나, 100과 300 μg/mL의 DCE 전처치는 tBHP에 의하여 감소된 환원형 GSH를 각각 44.65 ± 17.44와 107.76 ± 15.78%로 증가시켰다.
2. DCE의 전처치는 tBHP에 의한 H₂O₂ 생성 증가, 환원형 GSH 고갈과 미토콘드리아 막 전위 저하를 억제하였다.
3. DCE 처치 0.5-3시간에 AMPK의 인산화를 증가시켰으며, AMPK 화학적 억제제인 compound C 의 처치는 DCE의 세포 보호 효능을 억제하였다.
DCE 처치 시간에 따른 AMPK의 인산화를 관찰한 결과, DCE 처치 0.25, 0.5, 1, 3 및 6시간 후 AMPK의 인산화는 각각 대조세포(1.00 ± 0.49)의 1.45 ± 0.25, 2.09 ± 0.14, 2.77 ± 0.47, 2.30 ± 0.13, 및 1.66 ± 0.37배로 1시간에서 AMPK의 인산화가 가장 많이 증가하였고, 1시간 이후 감소하는 경향을 나타내었다.
HepG2 세포에 12시간 동안의 tBHP 처치는 미토콘드리아 막전위의 저하를 나타내는 낮은 Rho123 형광 강도를 가지는 세포의 비율 (RN1 fraction)을 무처치 대조세포와 비교하여 통계적으로 유의하게 증가시켰으며, 100과 300 μg/mL의 DCE 전처치는 RN1 fraction의 세포 비율을 통계적으로 유의하게 감소시켰다.
HepG2 세포에 30-300 μg/mL의 DCE 전처치는 tBHP에 의한 세포 사멸을 농도 의존적으로 통계적으로 유의하게 억제하였으며, 더불어 tBHP에 의하여 유도되는 산화적 스트레스(활성산소 종의 증가, 미토콘드리아 막전위 저하, 환원형 GSH 의 고갈)의 억제를 통하여 DCE가 세포자멸사를 억제할 수 있음을 규명하였다.
HepG2 세포에서 12시간 동안의 tBHP 처치는 H2O2 생성을 무처치 대조세포 (1.00 ± 0.07)와 비교하여 1.94 ± 0.19배 통계적으로 유의하게 증가시켰다.
MTT assay 결과, 무처치 대조세포, 3, 10, 30, 100, 및 300 μg/mL DCE 처치에 의한 세포 생존율은 각각 대조세포 (100.00 ± 2.10%)의 97.42 ± 2.86, 96.36 ± 2.49, 96.38 ± 2.28, 97.65 ± 1.96 및 97.94 ± 3.19%였으며, 3-300 μg/mL DCE의 처치는 무처치 대조세포의 세포 생존율과 비교하여 통계 적으로 유의한 변화를 나타내지 않았다 (Fig. 1A).
다음으로 DCE에 의한 AMPK 인산화가 DCE의 세포 보호에 관여하는지 규명하기 위하여 AMPK 화학적 억제제인 compound C를 전처치한 후 300 μg/mL DCE 와 150 μg/mL tBHP를 처치하여 세포 생존율의 변화를 관찰하였다. 그 결과, tBHP 유도성 세포 독성에 대한 DCE의 세포 보호 효능이 compound C 전처치에 의하여 억제됨을 확인하였다. 대조세포, tBHP 단독, tBHP + DCE, compound C, compound C + tBHP 및 compound C + tBHP + DCE의 세포생존율은 각각 100.
대조세포, tBHP 단독, tBHP + DCE, compound C, compound C + tBHP 및 compound C + tBHP + DCE의 세포생존율은 각각 100.00 ± 4.23, 30.63 ± 13.18, 68.30 ± 4.04, 94.58 ± 8.05, 17.86 ± 5.31 및 17.46 ± 6.34%였다 (Fig. 3B).
더불어 100-300 μg/mL의 DCE 전처치가 tBHP에 의하여 증가한 cleaved form의 PARP와 cleaved form의 caspase-3를 억제함을 확인하였다 (data not shown).
3B). 따라서 이상의 결과는 DCE가 AMPK의 활성화를 통하여 산화적 스트레스로부터 세포를 보호할 수 있음을 나타낸다.
300 μg/mL DCE 단독 처치에 의한 환원형 GSH 함량과 RN1 fraction의 비율은 무처치 대조세포와 비교하여 유의적인 변화는 나타내지 않았다. 따라서 이상의 결과는 DCE가 tBHP에 의하여 증가된 산화적 스트레스를 억제하여 세포 보호 효능을 나타냄을 시사한다.
또한 150 μM의 tBHP에 의하여 Bcl-2, caspase-3 전구체와 PARP 전구체 단백질의 감소를 확인하여 tBHP가 내인적 회로의 활성화로 세포자멸사를 유도함을 규명하였다.
무처치 대조세포와 비교하여 300 μg/mL의 DCE 처치 0.5, 1과 3시간의 AMPK의 인산화 증가가 통계적으로 유의하였다 (Fig. 3A).
본 연구에서도 선행 연구와 유사하게 HepG2 세포에 150 μM의 tBHP를 12시간 동안 처치한 결과 세포 내 H2O2의 생성 증가, 환원형 GSH의 고갈, 미토콘드리아 막전위의 저하가 무저치 대조세포와 비교하여 통계적으로 유의하게 증가함을 확인할 수 있었다.

후속연구

HepG2 세포에 30-300 μg/mL의 DCE 전처치는 tBHP에 의한 세포 사멸을 농도 의존적으로 통계적으로 유의하게 억제하였으며, 더불어 tBHP에 의하여 유도되는 산화적 스트레스(활성산소 종의 증가, 미토콘드리아 막전위 저하, 환원형 GSH 의 고갈)의 억제를 통하여 DCE가 세포자멸사를 억제할 수 있음을 규명하였다. 따라서 이상의 연구를 통하여 DCE의 항산화능을 세포 수준에서 입증하였으며, DCE에 함유된 주요 활성 성분들의 항산화 효능과 관련된 후속 연구가 필요할 것으로 생각된다. 본 연구에서는 DCE가 AMPK의 인산화 증가와 더불어 AMPK 화학적 억제제 전처치시 DCE의 세포 보호 효능이 억제됨을 연구하여 산화적 스트레스에 대한 DCE의 세포 보호 효능에 AMPK의 활성화가 수반됨을 규명하였다.
본 연구에서는 胡蘿蔔 에탄올 추출물 (DCE)이 AMPK의 활성화를 통하여 tBHP 유도성 산화적 스트레스로부터 세포를 보호하는 항산화 효능이 있음을 규명하였다. 이후 DCE의 다른 산화적 스트레스 세포 모델에서의 효능 검증, AMPK 활성화와 관련된 상위 /하위 신호분자 연구, DCE에 포함된 주요 항산화 화합물들의 동정, 실험동물 수준에서의 in vivo 간보호 효능과 관련된 후속 연구가 지속적으로 이루어진다면 산화적 스트레스가 원인인 다양한 급만성 간질환을 치료하는 처방을 구성하는 신규 약재로서 胡蘿蔔을 활용할 수 있을 것으로 생각된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	인체에서 산소의 역할은 무엇인가?	인체에서 산소는 호흡을 통한 에너지 생산뿐 아니라, 면역 활동을 통한 병원체의 제거, 간에서의 해독과 대사활동에 관여하며 이 과정에서 필수 불가결하게 활성산소종 (reactive oxygen species)의 생성이 수반된다. 생체 내에서 생성된 활성산소종은 반응성이 큰 자유라디칼을 포함하고 있어 불안정하기 때문에 세포 내 거대 생체 분자 (예, 핵산), 세포막 지질 및 지단백질과 결합하여 그 기능을 저하시킨다.
	활성산소종의 특징은 무엇인가?	인체에서 산소는 호흡을 통한 에너지 생산뿐 아니라, 면역 활동을 통한 병원체의 제거, 간에서의 해독과 대사활동에 관여하며 이 과정에서 필수 불가결하게 활성산소종 (reactive oxygen species)의 생성이 수반된다. 생체 내에서 생성된 활성산소종은 반응성이 큰 자유라디칼을 포함하고 있어 불안정하기 때문에 세포 내 거대 생체 분자 (예, 핵산), 세포막 지질 및 지단백질과 결합하여 그 기능을 저하시킨다. 따라서 활성산소종은 세포의 손상을 통한 인체의 노화와 각종 질병을 유발하는 주요 요인 중 하나로 인식되고 있다 1) .
	활성산소종의 축적에 간에 미치는 영향은?	특히 간은 혈장 단백질의 합성, 에너지 대사 및 해독작용을 수행하는 기관이다. 다양한 원인에 의하여 발생한 산화적 스트레스는 간 실질세포의 사멸과 이를 통한 염증세포 및 성상세포의 활성화를 통하여 간염, 지방간, 간섬유화, 간경화와 간암을 포함한 다양한 급만성 간질환을 유발하는 핵심 원인으로 인식 되고 있다 1,3) .

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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