사과 대목 M.26 (Malus pumila Mill)의 기내 대량번식 및 simple sequence repeat 마커를 이용한 증식된 식물체의 유전적 다양성 평가 In vitro micropropagation of M.26 (Malus pumila Mill) apple rootstock and assessment of the genetic diversity of proliferated plantlets using simple sequence repeat markers원문보기
본 연구는 사과 대목 M.26 (Malus pumila Mill))의 효과적인 기내 대량번식하기 위해 신초 증식과 뿌리 형성에 적합한 배지조건을 확립하고, simple sequence repeat (SSR) 마커를 이용하여 증식된 소식물체의 유전적 다양성을 분석하고자 수행하였다. MS (Murashige and Skoog) 기본배지에 benzyladenin (BA, $0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$)와 thidiazuron (TDZ, $0.01{\sim}0.1mg{\cdot}L^{-1}$)을 첨가하여 신초를 배양한 결과, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA 처리에서 절편체 당신초 수가 10.67개로 가장 많았으며 과수화 발생률은 BA 처리구보다 TDZ 처리구에서 높았다. M.26 신초 증식에 BA와 auxin과의 혼용처리 효과는 없었고, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA가 첨가된 MS 기본배지가 적합하였다. 신초 발근에 적합한 배지를 구명하고자 auxin인 indole-3-butyric acid (IBA)와 ${\alpha}$-naphthaleneacetic acid의 농도($0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$), MS 배지의 무기염류(1/4 ~ 1배) 및 sucrose 농도($0{\sim}30g{\cdot}L^{-1}$)를 달리하여 처리한 결과, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IBA, $15{\sim}20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose가 첨가된 1/2 MS 배지에서 발근율(100%), 뿌리 수(10.45 ~ 13.60개/절편체), 뿌리 길이(7.41 ~ 8.33 cm) 및 신초 길이(4.93 ~ 5.38 cm)가 양호하였다. 15종의 SSR primer를 이용하여 증식된 20개의 소식물체를 분석한 결과, 총 30개의 대립유전자가 검출되었으며 모두 동일한 밴드 패턴을 보여 온실에서 자란 M.26 식물체와 유사하여 유전적으로 안정한 것으로 판단되었다.
본 연구는 사과 대목 M.26 (Malus pumila Mill))의 효과적인 기내 대량번식하기 위해 신초 증식과 뿌리 형성에 적합한 배지조건을 확립하고, simple sequence repeat (SSR) 마커를 이용하여 증식된 소식물체의 유전적 다양성을 분석하고자 수행하였다. MS (Murashige and Skoog) 기본배지에 benzyladenin (BA, $0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$)와 thidiazuron (TDZ, $0.01{\sim}0.1mg{\cdot}L^{-1}$)을 첨가하여 신초를 배양한 결과, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA 처리에서 절편체 당신초 수가 10.67개로 가장 많았으며 과수화 발생률은 BA 처리구보다 TDZ 처리구에서 높았다. M.26 신초 증식에 BA와 auxin과의 혼용처리 효과는 없었고, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA가 첨가된 MS 기본배지가 적합하였다. 신초 발근에 적합한 배지를 구명하고자 auxin인 indole-3-butyric acid (IBA)와 ${\alpha}$-naphthaleneacetic acid의 농도($0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$), MS 배지의 무기염류(1/4 ~ 1배) 및 sucrose 농도($0{\sim}30g{\cdot}L^{-1}$)를 달리하여 처리한 결과, $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IBA, $15{\sim}20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose가 첨가된 1/2 MS 배지에서 발근율(100%), 뿌리 수(10.45 ~ 13.60개/절편체), 뿌리 길이(7.41 ~ 8.33 cm) 및 신초 길이(4.93 ~ 5.38 cm)가 양호하였다. 15종의 SSR primer를 이용하여 증식된 20개의 소식물체를 분석한 결과, 총 30개의 대립유전자가 검출되었으며 모두 동일한 밴드 패턴을 보여 온실에서 자란 M.26 식물체와 유사하여 유전적으로 안정한 것으로 판단되었다.
The objective of this study was to determine the most effective medium condition of shoot proliferation and root formation for the efficient in vitro micropropagation of M.26 (Malus pumila Mill). Simple sequence repeat (SSR) markers were used to analyze the genetic diversity of micro-propagated and ...
The objective of this study was to determine the most effective medium condition of shoot proliferation and root formation for the efficient in vitro micropropagation of M.26 (Malus pumila Mill). Simple sequence repeat (SSR) markers were used to analyze the genetic diversity of micro-propagated and greenhouse grown M.26. Shoot proliferation was carried out in MS (Murashige and Skoog) containing benzyladenin (BA, $0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$) and thidiazuron (TDZ, $0.01{\sim}0.1mg{\cdot}L^{-1}$). The highest number of shoots (10.67 shoots per explant) was induced by adding BA at a concentration $1.0mg{\cdot}L^{-1}$. TDZ treatments caused higher hyperhydricity rate in cultured explants than in BA treatments. There was no significant effect of both BA and auxin on shoot proliferation, and the optimum proliferation medium for M.26 was MS medium containing $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA. To find a suitable medium composition for shoot rooting, we tested different concentrations indole-3-butyric acid (IBA) and ${\alpha}$-naphthaleneacetic acid ($0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$), MS medium (1/4-1), sucrose ($0{\sim}30g{\cdot}L^{-1}$). The shoots showed good rooting on half-strength MS medium containing $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IBA and $15-20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose. The rooting rate (100%), number of roots (10.45 ~ 13.60 roots per explant), root length (7.41 ~ 8.33 cm), and shoot length (4.93 ~ 5.38 cm) were good on this medium. Fifteen SSR primers were detected in a total of 30 alleles in 20 micro-propagated plantlets, all SSR profiles from micro-propagated plantlets were monomorphic and similar to greenhouse grown control plantlet M.26 plant. The results indicated that M.26 micro-propagated plantlets were genetically stable.
The objective of this study was to determine the most effective medium condition of shoot proliferation and root formation for the efficient in vitro micropropagation of M.26 (Malus pumila Mill). Simple sequence repeat (SSR) markers were used to analyze the genetic diversity of micro-propagated and greenhouse grown M.26. Shoot proliferation was carried out in MS (Murashige and Skoog) containing benzyladenin (BA, $0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$) and thidiazuron (TDZ, $0.01{\sim}0.1mg{\cdot}L^{-1}$). The highest number of shoots (10.67 shoots per explant) was induced by adding BA at a concentration $1.0mg{\cdot}L^{-1}$. TDZ treatments caused higher hyperhydricity rate in cultured explants than in BA treatments. There was no significant effect of both BA and auxin on shoot proliferation, and the optimum proliferation medium for M.26 was MS medium containing $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA. To find a suitable medium composition for shoot rooting, we tested different concentrations indole-3-butyric acid (IBA) and ${\alpha}$-naphthaleneacetic acid ($0.5{\sim}5.0mg{\cdot}L^{-1}$), MS medium (1/4-1), sucrose ($0{\sim}30g{\cdot}L^{-1}$). The shoots showed good rooting on half-strength MS medium containing $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IBA and $15-20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose. The rooting rate (100%), number of roots (10.45 ~ 13.60 roots per explant), root length (7.41 ~ 8.33 cm), and shoot length (4.93 ~ 5.38 cm) were good on this medium. Fifteen SSR primers were detected in a total of 30 alleles in 20 micro-propagated plantlets, all SSR profiles from micro-propagated plantlets were monomorphic and similar to greenhouse grown control plantlet M.26 plant. The results indicated that M.26 micro-propagated plantlets were genetically stable.
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문제 정의
본 연구는 사과 대목 M.26 (Malus pumila Mill))의 효과적인 기내 대량번식하기 위해 신초 증식과 뿌리 형성에 적합한 배지 조건을 확립하고, simple sequence repeat (SSR) 마커를 이용하여 증식된 소식물체의 유전적 다양성을 분석하고자 수행하였다. MS (Murashige and Skoog) 기본배지에 benzyladenin (BA, 0.
본 연구는 사과 대목 M.26을 기내에서 효과적으로 대량번식하기 위해 신초 증식과 뿌리 형성에 적합한 배지 조건을 구명하고, simple sequence repeat (SSR) 마커를 이용하여 증식된 소식물체의 유전적 다양성을 분석하였다.
본 연구에서는 사과에서 유래한 SSR primer를 이용하여 온실에서 생육 중인 M.26 식물체와 기내배양을 통해 얻은 순화하고 있는 식물체 중 20개체를 대상으로 유전적 다양성을 분석하였다(Table 5). CH01d08 primer로부터 255 bp와 269bp 크기의 대립유전자가 모든 개체에서 동일하게 증폭되었다(Fig.
제안 방법
26의 신초 증식에 적합한 생장조절물질의 조성을 구명하고자 30 g･L-1 sucrose, 8 g･L-1 plant agar가 첨가된 MS 기본배지를 이용하여 cytokinin의 종류인 BA와 thidiazuron (TDZ)을 비교 조사하였다. BA 농도는 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 5.0 mg･L-1, TDZ 농도는 0.01, 0.05, 0.1 mg･L-1로 단용 처리하였다. Cytokinin과 auxin의 혼용 처리 효과를 알아보기 위하여 본 실험에서 적정 cytokinin으로 선발된 BA 농도(0.
Cytokinin과 auxin의 혼용 처리 효과를 알아보기 위하여 본 실험에서 적정 cytokinin으로 선발된 BA 농도(0.5, 1.0, 2.0 mg･L-1)를 달리하여 0.5 mg･L-1 IBA, 0.5 mg･L-1 indole-3-acetic acid (IAA) 및 0.2 mg･L-1 α-naphthaleneacetic acid (NAA)와 혼용으로 첨가한 배지에서 신초를 배양하였다.
2014; Werner and Boe 1980). M.26 기내 식물체의 발근에 효과적인 auxin 종류로 선발된 IBA 1.0 mg･L-1를 기본 생장조절물질로 하여 MS 배지의 무기염류의 농도를 1/4, 1/2 및 1배 수준으로 달리하고, 배지의 탄소원인 sucrose 농도를 0 ~ 30 g･L-1로 달리하여 발근 정도를 조사하였다(Table 4). 신초 당 뿌리 수는 1/4 MS + sucrose 10 g･L-1 (11.
M.26 대목의 기내 발근에 효과적인 auxin의 종류와 농도를 알아보고자 MS 기본배지에 IBA와 NAA를 각각 0.5 ~ 5.0mg･L-1 농도로 첨가하여 비교하였다(Table 3). 신초 당 뿌리 수는 1.
M.26의 기내 신초 발근에 효과적인 auxin 종류와 농도를 구명하고자 30 g･L-1 sucrose, 8 g･L-1 plant agar가 첨가된 MS 기본 배지에 IBA와 NAA를 각각 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 5.0 mg･L-1로 처리하여 발근 정도를 비교하였다. 또한 발근에 적합한 배지의 무기염류 농도와 sucrose의 농도를 구명하고자 1.
M.26의 신초 증식에 적합한 생장조절물질의 조성을 구명하고자 30 g･L-1 sucrose, 8 g･L-1 plant agar가 첨가된 MS 기본배지를 이용하여 cytokinin의 종류인 BA와 thidiazuron (TDZ)을 비교 조사하였다. BA 농도는 0.
PCR 반응은 thermocycler (iCycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 94°C에서 2분 30초간 초기 변성시키고 94°C에서 30초, 60°C에서 30초, 72°C에서 1분간 35회 반복한 후 72°C에서 5분간 처리하였다.
PCR 반응은 thermocycler (iCycler, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 94°C에서 2분 30초간 초기 변성시키고 94°C에서 30초, 60°C에서 30초, 72°C에서 1분간 35회 반복한 후 72°C에서 5분간 처리하였다. PCR 증폭 산물은 Fragment analyzer (Advanced analytical technologies, USA)을 이용하여 전기 영동하였고 PROSize2.0 프로그램을 활용하여 M.26 기내 식물체 개체별로 대립유전자(allele)의 차이를 분석하였다.
26 기내 식물체의 유전적 다양성을 분석하기 위하여 온실에 생육하고 있는 조직배양의 시험재료로 이용한 식물체와 기내 배양하여 순화 중인 20개의 식물체를 이용하였다. 각각의 식물체에서 어린잎을 채취하고 DNeasy plant mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 genomic DNA를 추출하였다. 추출된 DNA는 0.
26을 사용하였다. 기내배양을 하기 위해서 왕성하게 생육하고 있는 신초(5 cm)를 채취하여 2~3매의 잎을 남기고 정리한 다음, 수도물에 수차례 세척 후 70% 에탄올에 침지하여 약 30초 간 표면 살균하였다. 이후, 클린벤치 내에서 1% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite, NaOCl)에 2~3분간 침지하여 2차표면 살균을 하였다.
0 mg･L-1로 처리하여 발근 정도를 비교하였다. 또한 발근에 적합한 배지의 무기염류 농도와 sucrose의 농도를 구명하고자 1.0 mg･L-1 IBA와 8 g･L-1 plant agar를 첨가하고 MS 배지의 농도를 1/4 (1.1 g･L-1), 1/2 (2.2 g･L-1), 1 (4.4 g･L-1)로 하였고, sucrose 농도를 0, 10, 15, 20, 30 g･L-1로 처리하여 발근 정도를 비교하였다. 시험구 배치는 증식배지 실험과 동일하게 각 처리별로 완전 임의배치법 3반복으로 하였고 반복당 50 ml의 배지가 첨가된 450 ml 배양병에 약 2.
하에서 명주기 16시간/일로 배양하였다. 배양 6주 후에 신초 증식에서는 신초 수, 신초 길이, 생체중, 과수화 발생률을 조사하였으며, 발근에서는 발근율, 뿌리 수, 뿌리길이 등을 조사하였다. 통계처리는 SAS 프로그램(SAS 9.
0 mg･L-1 범위로 보고하였다. 본 연구에서는 M.26의 발근에 있어 효과적인 auxin의 종류와 농도는 순화 시 생존율을 높이기 위해 뿌리 길이와 신초 길이를 고려하여 IBA 1.0 mg･L-1 처리인 것으로 판단되었다.
2 mg･L-1 α-naphthaleneacetic acid (NAA)와 혼용으로 첨가한 배지에서 신초를 배양하였다. 시험구 배치는 각 처리별로 완전임의배치법 3반복으로 하였고 반복당 50 ml의 배지가 첨가된 450 ml 배양병에 약 2.0 cm 크기의 절편체를 7개씩 치상하였다.
4 g･L-1)로 하였고, sucrose 농도를 0, 10, 15, 20, 30 g･L-1로 처리하여 발근 정도를 비교하였다. 시험구 배치는 증식배지 실험과 동일하게 각 처리별로 완전 임의배치법 3반복으로 하였고 반복당 50 ml의 배지가 첨가된 450 ml 배양병에 약 2.0 cm 크기의 절편체를 5~7개씩 치상하였다.
신초 발근에 적합한 배지를 구명하고자 auxin인 indole-3-butyric acid (IBA)와 α-naphthaleneacetic acid의 농도(0.5 ~ 5.0 mg･L-1), MS 배지의 무기염류(1/4 ~1배) 및 sucrose 농도(0 ~ 30 g･L-1)를 달리하여 처리한 결과, 1.0 mg･L-1 IBA, 15 ~ 20 g･L-1 sucrose가 첨가된 1/2 MS 배지에서 발근율(100%), 뿌리 수(10.45 ~ 13.60개/절편체), 뿌리 길이(7.41 ~ 8.33 cm) 및 신초 길이(4.93 ~ 5.38 cm)가 양호하였다.
기내배양을 하기 위해서 왕성하게 생육하고 있는 신초(5 cm)를 채취하여 2~3매의 잎을 남기고 정리한 다음, 수도물에 수차례 세척 후 70% 에탄올에 침지하여 약 30초 간 표면 살균하였다. 이후, 클린벤치 내에서 1% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite, NaOCl)에 2~3분간 침지하여 2차표면 살균을 하였다. 표면 살균된 신초는 0.
추출된 DNA는 0.8% agarose gel 에 전기 영동하여 확인하였고 DNA 양은 NanoDrop spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, MA, USA)로 정량한 후 5 ng･µL-1의 농도로 희석하여 SSR-polymerase chain reaction (PCR) 분석에 이용하였다.
이후, 클린벤치 내에서 1% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite, NaOCl)에 2~3분간 침지하여 2차표면 살균을 하였다. 표면 살균된 신초는 0.5 cm 크기로 절단하여 1.0 mg･L-1 BA (benzyladenine), 0.1 mg･L-1 IBA (indole-3-butyric acid), 30 g･L-1 sucrose, 8 g･L-1 plant agar가 첨가된 MS (Murashige and Skoog, 1962)배지에서 배양하였으며, 증식된 신초를 다양한 식물생장조절제가 첨가된 배지에 치상하여 신초 증식 및 발근 배지 구명에 이용하였다.
대상 데이터
본 실험에 사용한 SSR primer는 Liebhard et al. (2002)에 의해 보고된 CH02a10 등 15종이었다(Table 5). PCR 증폭은 Cho et al.
시험재료는 농촌진흥청 국립원예특작과학원 온실에서 생육하고 있는 사과 대목 M.26을 사용하였다. 기내배양을 하기 위해서 왕성하게 생육하고 있는 신초(5 cm)를 채취하여 2~3매의 잎을 남기고 정리한 다음, 수도물에 수차례 세척 후 70% 에탄올에 침지하여 약 30초 간 표면 살균하였다.
조직배양을 통해 얻은 M.26 기내 식물체의 유전적 다양성을 분석하기 위하여 온실에 생육하고 있는 조직배양의 시험재료로 이용한 식물체와 기내 배양하여 순화 중인 20개의 식물체를 이용하였다. 각각의 식물체에서 어린잎을 채취하고 DNeasy plant mini kit (Qiagen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 genomic DNA를 추출하였다.
데이터처리
통계처리는 SAS 프로그램(SAS 9.2, SAS Institute Inc., NC, USA)을 이용하였으며 Duncan의 다중검정(p < 0.05)으로 평균치 간의 차이에 대한 유의성을 검정하였다.
이론/모형
PCR 증폭은 Cho et al. (2010)의 방법에 따라 genomic DNA 20 ng, 0.36 µM의 forward와 reverse primer, 200 µM dNTP, 1×PCR buffer, 0.4 unit Taq DNA polymerase (TaKaRa, Japan)를 혼합하여 총 반응액을 15 µL로 조정하여 실시하였다.
성능/효과
0 mg･L-1 이상으로 높아질수록 뿌리 길이와 신초 길이는 감소하는 경향이었다. 1.0 mg･L-1 NAA 처리구에서도 신초 당 뿌리 수가 11.60개로 많았지만 뿌리 길이와 신초 길이가 각각 2.11 cm와 5.36 cm로 1.0 mg･L-1 IBA 처리구보다 짧았다. NAA 처리구에서는 대체적으로 뿌리 길이가 0.
38 cm)가 양호하였다. 15종의 SSR primer를 이용하여 증식된 20개의 소식물체를 분석한 결과, 총 30개의 대립유전자가 검출되었으며 모두 동일한 밴드 패턴을 보여 온실에서 자란 M.26 식물체와 유사하여 유전적으로 안정한 것으로 판단되었다.
3). 15종의 primer를 이용하여 분석한 결과 primer별로 각각 2개의 대립유전자가 증폭되어 총 30개의 대립유전자가 검출되었는데 모두 동일한 밴드 패턴을 보였다. 이는 사과 대목 ‘Merton 793’의 기내 식물체를 ISSR 분석한 결과 모 식물체와 동일한 밴드 패턴을 나타내어 조직배양을 통한 액아 증식이 본연의 특성을 가진 식물체를 증식하는 가장 안전한 방법이라고 제시한 Pathak and Dhawan (2012)의 보고와 일치하였다.
Auxin이 첨가되지 않은 MS 기본 배지에서의 발근율은 4.77%였고 IBA가 첨가된 처리구에서는 86.7 ~ 100%, NAA가 첨가된 처리구에서는 93.3 ~ 100%의 높은 발근율을 나타내었다. Yeps and Aldwinckle (1994)은 사과 13종의 접수 및 대목 품종을 대상으로 발근 실험한 결과 발근에 적합한 IBA의 농도는 품종에 따라 달라 0.
40 cm로 발근이 양호하였다. IBA의 농도가 2.0 mg･L-1 이상으로 높아질수록 뿌리 길이와 신초 길이는 감소하는 경향이었다. 1.
M.26 대목의 기내 신초 증식에 효과적인 cytokinin의 종류와 농도를 알아보고자 MS 기본배지에 BA와 TDZ를 첨가하여 비교한 결과, 신초 수는 1.0 mg･L-1 BA가 첨가된 배지에서 10.67개로 가장 많았으며 다음이 0.5 mg･L-1 BA가 첨가된 배지로 9.37개였다. (Table 1).
67개로 가장 많았으며 과수화 발생률은 BA 처리구보다 TDZ 처리구에서 높았다. M.26 신초 증식에 BA와 auxin과의 혼용처리 효과는 없었고, 1.0 mg･L-1 BA가 첨가된 MS 기본배지가 적합하였다. 신초 발근에 적합한 배지를 구명하고자 auxin인 indole-3-butyric acid (IBA)와 α-naphthaleneacetic acid의 농도(0.
26 (Malus pumila Mill))의 효과적인 기내 대량번식하기 위해 신초 증식과 뿌리 형성에 적합한 배지 조건을 확립하고, simple sequence repeat (SSR) 마커를 이용하여 증식된 소식물체의 유전적 다양성을 분석하고자 수행하였다. MS (Murashige and Skoog) 기본배지에 benzyladenin (BA, 0.5 ~ 5.0 mg･L-1)와 thidiazuron (TDZ, 0.01 ~ 0.1 mg･L-1)을 첨가하여 신초를 배양한 결과, 1.0 mg･L-1 BA 처리에서 절편체 당 신초 수가 10.67개로 가장 많았으며 과수화 발생률은 BA 처리구보다 TDZ 처리구에서 높았다. M.
TDZ 처리에서는 농도가 높아질수록 신초 형성 수와 생체중은 증가하고 신초 길이는 감소하는 경향이 뚜렷하였다. TDZ 0.
28개로 가장 많았다. 그러나 신초 수가 BA 단용 처리보다는 BA와 auxin 혼용처리에서 낮아 사과대목 M.26 신초 증식에는 BA와 auxin의 혼용 처리는 효과가 없는 것으로 판단되었다.
발근율은 1/2 MS + sucrose 10 ~ 30 g･L-1 처리에서 100%로 높았고, sucrose가 첨가되지 않은 배지에서는 MS 배지의 무기염류 농도가 1, 1/2, 1/4로 낮아질수록 발근율은 13.3, 66.7, 73.3%로 높아지는 경향이었다. Sucrose가 첨가되지 않은 배지에서도 M.
0 mg･L-1로 높아짐에 따라 모든 auxin 혼용 처리구에서 신초 수와 신초 길이는 감소하는 경향이었다. 본 연구에서는 M.26의 기내 증식에 있어 신초 생육과 증식률을 고려하여 1.0 mg･L-1 BA 단용 처리(Fig. 1)가 적합한 것으로 판단되었다. Sun et al.
(2009)의 보고와 일치하였다. 본 연구에서는 무기염류 농도 수준인 낮은 1/4 MS 처리구에서는 신초의 엽이 갈변되는 증상이 나타나 양분이 부족한 것으로 판단되었다(자료 미제시). 이러한 결과를 종합하여 M.
본 연구에서는 무기염류 농도 수준인 낮은 1/4 MS 처리구에서는 신초의 엽이 갈변되는 증상이 나타나 양분이 부족한 것으로 판단되었다(자료 미제시). 이러한 결과를 종합하여 M.26기내 식물체의 발근에는 1.0 mg･L-1 IBA,15-20 g･L-1 sucrose가 첨가된 1/2 MS 배지가 적합한 것으로 판단되었다(Fig. 2).
후속연구
(2014)은 러시아와 중국에서 도입한 내한성과 왜성 또는 반왜성의 특성을 가지고 있는 3종의 사과 대목(Budagovosky 60-160, Budagovosky 71-3-150, GM256)의 신초 증식에 6-benzylaminopurine 과 IBA를 혼용 처리한 배지에서 신초 증식에 효과적이었음을 보고하였다. 따라서 사과의 신초 증식에 cytokinin과 auxin의 혼용효과에 대하여는 금후 많은 품종에서 다양한 연구가 이루어져야 한다고 생각되었다.
(2002)은 기내 배양한 차나무(Camellia sinensis)에서의 유전적 변화는 배양조건보다는 유전자형과 더 높은 관련이 있다고 보고하였다. 본 연구에서는 기내 배양된 M.26 개체들이 SSR 마커 분석을 통해 유전적으로 안정한 편으로 판단되었으나, 추후 형태적인 특성 검정 결과를 종합하여 검토할 필요가 있다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
과수화(hyperhydricity)가 식물에 미치는 영향과 요인은?
9%로 높아 배(Pyrus pyrifolia) ‘풍수’ 와 ‘행수’ 품종의 조직배양에서 adenine 유도체인 BA와 kinetin보다 합성 phenylurea 유도체인 TDZ와 N-(2-chloro-4-pyridyl)-N´-phenylurea (CPPU)에서 더 많은 과수화된 신초가 발생하였다는 Kadota and Niimi (2003)의 결과와 일치하였다. 과수화 현상은 산화적 스트레스와 연관이 있으며 식물체의 구조와 생리에 변화를 주어 결과적으로 식물체의 분화, 증식 및 이식 후의 생존율에 영향을 미친다(Picoli et al. 2001; Ziv 2005). 과수화에 영향을 미치는 요인은 고농도의 cytokinin, 높은 습도와 온도, 낮은 광도의 기내 배양환경, 고농도의 sucrose와 염류 등 다양하며(Chakrabarty et al. 2005), 과수화 현상을 효과적으로 억제하는 방법에 대한 연구가 진행되어 왔다(de Klerk and Pramanik 2017; Ivanova and Van Staden 2011; Liu et al.
조직배양을 이용한 기내 대량 번식 방법의 특징은?
조직배양을 이용한 기내 대량 번식 방법은 균일한 묘목을 급속히 증식할 수 있을 뿐만 아니라 생장점 배양을 통해 바이러스 무병묘의 생산이 가능하다. 사과 조직배양에 관한 연구는 1960년대 후반부터 시작하여 다양한 사과 접수 및 대목 품종을 대상으로 수행되었고, 사과나무의 번식에 조직배양 방법이 성공적으로 적용되어 왔다(Castillo et al.
사과 대목은 주로 영양번식인 묻어떼기 방법의 문제점은?
26 (Malus pumila Mill)이다. 사과 대목은 주로 영양번식인 묻어떼기 방법으로 증식하고 있어 번식 효율이 낮고 병이나 바이러스 감염에 대한 문제점을 가지고 있다(Dobránszki and Teixeira da Silva2010).
참고문헌 (40)
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