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문제 정의
- 본 연구에서는 대표적인 그람음성균과 그람양성균인 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 에 대한 荊芥連 翹湯 加減方의 항균 효능과 활성산소를 효과적으로 제거할 수 있는 항산화 효능과 LPS에 의해 염증 반응이 유도된 RAW 264.7 세포에 荊芥連翹湯 加減方을 처리할 경우 나타나게되는 NF-κB 신호전달의 억제 메커니즘과 NF-κB 신호전달에 의해 조절되어지는 대표적인 사이토카인인 IL-1β의 mRNA 발현 조절 효능을 분석하고자 하였다.
- 본 연구에서는 대표적인 그람음성균과 그람양성균인 Escherichia coli와 Staphylococcus aureus에 대한 荊芥連 翹湯 加減方의 항균 효능과 활성산소를 효과적으로 제거할 수 있는 항산화 효능, LPS에 의해 염증 반응이 유도된 RAW 264.7 세포에 荊芥連翹湯 加減方을 처리하여 나타나는 NF-\(κ\)B 신호전달의 억제 메커니즘과 NF-κB 신호전달에 의해 조절되어지는 대표적인 사이토카인인 IL-1\(β\)의 mRNA 발현을 조절하는 荊芥連翹湯 加減方의 효능을 분석하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 荊芥連翹湯은 明代 龔廷賢의《萬病回春》3)에 최초로 수록되어 淸熱, 祛濕, 和血, 解毒 작용으로 風熱이 上發하여 頭上諸症을 야기시킨 것을 다스리는 대표적인 방제이며, 荊芥, 連翹, 防風, 當歸, 川芎, 白芍藥, 柴胡, 枳殼, 黃芩, 梔子, 白芷, 桔梗, 甘草로 구성되어 있다. 이번 실험에서는 항염증 효능에 대해 보고되어있는 白 茯苓을 連翹, 柴胡, 白芷 대신 추가한 荊芥連翹湯 加減方을 이용해 항염증 치료제 개발을 위한 연구를 진행하였다4).
가설 설정
- 우리는 荊芥連翹湯 加減方이 RAW 264.7 세포의 IκBα인산화 반응을 억제하는 것을 확인하였기 때문에 荊芥連翹湯 加減方이 IL-1β의 mRNA 발현 또한 억제할 것으로 가정하였다.
제안 방법
- 7 세포는 ATCC에서 구매하여 연구에 사용하였다. 10% (v/v) FBS와 1% (v/v) Penicillin-Streptomycin이 포함된 DMEM media에서 RAW 264.7 세포를 유지시켜주었으며 5% CO2와 37℃가 유지되는 CO2 incubator에서 배양하였다. Escherichia coli (KCTC, Korea, 108)와 Staphylococcus aureus (KCTC, Korea, 1621)는 LB 배지를 이용하여 37℃ 에서 배양하였다.
- Water bath를 이용하여 65℃에서 5 분간 반응시킨 뒤 각 sample에 RNase inhibitor 1 ㎕, M-MLV RT reaction buffer 4 ㎕, M-MLV reverse transcriptase 1 ㎕, DEPC-treated water 4 ㎕를 추가로 첨가하였다. 50℃에서 1 시간 동안 cDNA를 합성한 뒤, 증류수를 이용하여 1/5로 희석하였으며, 희석한 cDNA 5 ㎕와 2X Prime Q-mater Mix 10 ㎕, 증류수 2 ㎕, forward primer (10 pmol/㎕) 1.5 ㎕, reverse primer 1.5 ㎕를 섞고, AriaMx 를 이용해 quantitative real-time PCR (qRT-PCR)을 수행 하였다. Primer는 다음과 같이 제작하였다: IL-1β, 5'-AGG TCA AAG GTT TGG AAG CA-3', 5'-TGA AGC AGC TAT GGC AAC TG-3'; β-actin, 5'-ATCA CCC ACA CTG TGC CCA TCT ACG', 5'-CAG CGG AAC CGC TCA TTG CCA ATG-3'
- 7 부근이 되도록 ABTS working 용액을 만들었다. ABTS working 용액 80 ㎕와 sample 20 ㎕혹은 증류수 20 ㎕를 96 well plate의 각 well에 혼합한 뒤 5분간 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 650 ㎚의 흡광도를 측정하였으며, 증류수 80 ㎕ 와 荊芥連翹湯 加減方 20 ㎕ 를 혼합한 용액의 650 nm 흡광도를 측정해서 荊芥連翹湯 加減方 자체의 흡광도를 보정해주었다. 항산화 효능은 다음 식을 이용하여 계산하였다.
- IκBα의 인산화 작용은 다양한 pro-inflammatory 사이토카인의 발현 조절에 매우 중요하기 때문에 荊芥連翹湯 加減方이 염증성 사이토카인인 IL-1β의 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인하였다.
- RAW 264.7 세포의 배양액을 제거한 뒤 PBS로 세척 후 eCube Tissue RNA Mini Kit를 이용해 RNA를 추출하였다. The Qubit 2.
- SDS/PAGE를 통해 lysate를 분리시킨 뒤 anti-p-IκBα, anti-IκBα, anti-p65, anti-Tubulin을 이용한 immunoblot analysis를 수행하였다.
- 0 Fluorometer을 이용하여 추출한 RNA를 정량한 뒤 RNA 500 ng을 DEPC-treated water를 이용해 8 ㎕로 부피를 조정한 후 random hexamer (100 pmol/㎕) 1 ㎕, dNTP mix (10 mM) 1 ㎕를 각각 넣어주었다. Water bath를 이용하여 65℃에서 5 분간 반응시킨 뒤 각 sample에 RNase inhibitor 1 ㎕, M-MLV RT reaction buffer 4 ㎕, M-MLV reverse transcriptase 1 ㎕, DEPC-treated water 4 ㎕를 추가로 첨가하였다. 50℃에서 1 시간 동안 cDNA를 합성한 뒤, 증류수를 이용하여 1/5로 희석하였으며, 희석한 cDNA 5 ㎕와 2X Prime Q-mater Mix 10 ㎕, 증류수 2 ㎕, forward primer (10 pmol/㎕) 1.
- 荊芥, 桔梗, 防風, 黃芩, 白茯苓, 地殼, 甘草, 川芎, 白芍藥, 梔子, 當歸를 각각 960g으로 중량을 측정한 뒤 증류수 40 L와 함께 환류추출기에 넣고 110℃에서 4 시간 동안 추출하였다. 이후 제작한 荊芥連翹湯 加減方 100 ㎖을 동결건조기를 이용하여 건조한 분말을 제작하였으며, 제작된 동결건조 분말의 무게는 2.
- 荊芥連翹湯 加減方의 항산화 효능을 확인하기 위하여 ABTS assay를 실시하였으며, 항산화제로 잘 알려진 resveratrol을 이용해서 실험 시스템을 검증하였다13). Resveratrol 농도의 증가에 따라 ABTS 라디칼 소거능이 증가하였으며, 荊芥連翹湯 加減方 또한 ABTS 라디칼을 농도의존적으로 소거하는 것을 확인하였다.
- 荊芥連翹湯 加減方이 염증 반응에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 荊芥連翹湯 加減方 0.5 ㎎/㎖을 RAW 264.7 세포에 12 시간 동안 처리한 후 LPS를 처리하여 염증 반응을 유도하였다. 그 후 immunoblot analysis를 실시하여 염증 반응을 주요하게 조절하는 NF-κB 신호 작용에 荊芥連翹湯 加減方이 미치는 영향을 확인하였다14).
- 5, 1, 2 ㎎/㎖ 농도로 처리해주고 24 시간 동안 다시 배양하였다. 그 후 MTS 용액을 20 ㎕ 첨가해 주고 microplate reader를 이용하여 490 ㎚ 흡광도를 측정하였으며, 荊芥連翹湯 加減方 자체의 흡광도 또한 MTS 용액 20 ㎕를 첨가해준 뒤 흡광도를 측정하여 보정해주었다. 荊芥連翹湯 加減方 처리에 의한 세포독성을 계산하기 위하여 다음 식을 이용하였다.
- 그 후 immunoblot analysis를 실시하여 염증 반응을 주요하게 조절하는 NF-κB 신호 작용에 荊芥連翹湯 加減方이 미치는 영향을 확인하였다14).
- 그람음성균인 Escherichia coli 와 그람양성균인 Staphylococcus aureus 에 대한 荊芥連翹湯 加減方의 항균 효능을 확인하기 위하여, 荊芥連翹湯 加減方을 농도의존적으로 희석한 고체 LB 배지에 균주를 도말한 후 생존한 colony의 수를 측정하였다. 그 결과 荊芥連翹湯 加減方의 농도 증가에 따라 두 균주 모두 colony의 수가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 4 ㎎/㎖ 농도 이상의 荊芥連翹湯 加減方 고체 LB 배지에서 배양한 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 의 colony 수가 대조군 대비 절반 이하로 감소하였다.
- 그 후 희석한 배양액 400 ㎕를 荊芥連翹湯 加減方이 농도의존적으로 희석된 고체 LB 배지에 도말한 뒤 37℃ incubator에서 15 시간 동안 배양해주었다. 배양 후 자란 colony의 수를 count 해서 荊芥連翹湯 加減方의 항균 효능을 확인하였다.
- 하지만 생성된 활성산소의 제거 작용이 미흡할 경우 인접 조직 세포의 사멸을 유도하게 되어 염증성 질환의 주요한 원인이 된다17). 염증성 질환 치료를 위해서는 활성산소를 효과적으로 제거하게 되는 항산화 효능이 매우 중요하기 때문에 荊芥連翹湯 加減方의 항산화 효능을 ABTS assay를 통해 확인하였다. 그 결과 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 항산화 효능이 있음을 확인할 수 있었으며, 이를 통해 荊芥連翹湯 加減方이 활성산소에 의해 야기되는 염증 반응을 억제할 것으로 추측되나, in vivo 에서도 荊芥連翹湯 加減方이 염증 반응에 의해 생성된 활성산소를 억제할 수 있음을 확인하는 추가적인 연구의 진행이 필요하다.
- 이러한 이유로 荊芥連翹湯 加減方을 0.5 ㎎/㎖ 농도로 RAW 264.7 세포에 3 시간 처리한 뒤 LPS를 처리한 후 시간 경과에 따라 나타나게 되는 IL-1β의 mRNA 발현량 변화를 qRT-PCR을 통해 확인하였다.
- 荊芥, 桔梗, 防風, 黃芩, 白茯苓, 地殼, 甘草, 川芎, 白芍藥, 梔子, 當歸를 각각 960g으로 중량을 측정한 뒤 증류수 40 L와 함께 환류추출기에 넣고 110℃에서 4 시간 동안 추출하였다. 이후 제작한 荊芥連翹湯 加減方 100 ㎖을 동결건조기를 이용하여 건조한 분말을 제작하였으며, 제작된 동결건조 분말의 무게는 2.04 g으로 측정되었다.
- 추가적으로 荊芥連翹湯 加減方 처리 여부에 따라 나 타나게 되는 IL-1β의 mRNA 발현량의 변화를 LPS 처리 후 시간의존적으로 확인하였다.
- 7 세포에 독성을 나타내었으나 1 ㎎/㎖ 농도를 처리할 경우 큰 세포독성을 나타내지 않았다. 하지만 1 ㎎/㎖의 荊芥連翹湯 加減方은 RAW 264.7 세포의 형태에 영향을 주는 것을 현미경 관찰을 통해 확인하였으며 (데이터 제공되지 않음), 이 결과를 통해 추가적인 연구를 위한 RAW 264.7 세포에 처리하게 되는 荊芥連翹湯 加減方의 농도를 0.5 ㎎/㎖ 이하로 설정하였다.
대상 데이터
- RAW 264.7 세포는 ATCC에서 구매하여 연구에 사용하였다. 10% (v/v) FBS와 1% (v/v) Penicillin-Streptomycin이 포함된 DMEM media에서 RAW 264.
- 본 실험을 위해서 LB (Luria-Bertani) broth (LPS solution, Korea), agar powder (BD, USA), ABTS (2,2'-azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid, SIGMA, USA) DMEM media (WELGENE, Korea), FBS (Gibco, USA), 100 U/㎖, Penicillin-Streptomycin (WELGENE, Korea), PBS (Phoshate-buffered saline, Corning, USA), MTS solution ((3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3- carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetraz olium, Promega, USA), Laemmli Sample Buffer (BIORAD, USA), anti-p-IκBα(Cell signaling, USA), anti-IκBα(Cell signaling, USA), anti-p65 (Santa cruz, USA), anti-Tubulin (SIGMA, USA), SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate (Thermo Fisher, USA) Hybrid-R RNA purification kit (GeneAll, Korea), Qubit RNA Assay Kit (Molecular probes, USA), M-MLV reverse transcriptase (Promega, USA), RNase inhibitor (Enzynomics, Korea), eCube 2X Prime Q-master Mix (GENETBIO, Korea)가 사용되었다. 본 실험에 사용된 기기는 CO2 incubator (Thermo Fisher, USA), microplate reader (Molecular Devices EMax Plus, USA), LuminoGraph 1 (ATTO, Japan), The Qubit 2.0 Fluorometer (Invitrogen, USA), AriaMx (Agilent, USA)가 사용되었다.
- 본 실험을 위해서 LB (Luria-Bertani) broth (LPS solution, Korea), agar powder (BD, USA), ABTS (2,2'-azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid, SIGMA, USA) DMEM media (WELGENE, Korea), FBS (Gibco, USA), 100 U/㎖, Penicillin-Streptomycin (WELGENE, Korea), PBS (Phoshate-buffered saline, Corning, USA), MTS solution ((3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3- carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetraz olium, Promega, USA), Laemmli Sample Buffer (BIORAD, USA), anti-p-IκBα(Cell signaling, USA), anti-IκBα(Cell signaling, USA), anti-p65 (Santa cruz, USA), anti-Tubulin (SIGMA, USA), SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate (Thermo Fisher, USA) Hybrid-R RNA purification kit (GeneAll, Korea), Qubit RNA Assay Kit (Molecular probes, USA), M-MLV reverse transcriptase (Promega, USA), RNase inhibitor (Enzynomics, Korea), eCube 2X Prime Q-master Mix (GENETBIO, Korea)가 사용되었다.
- 실험에 사용된 荊芥, 桔梗, 防風, 黃芩, 白茯苓, 枳殼, 甘草, 川芎, 白芍藥, 梔子, 當歸는 채움생 주식회사에서 구입하였으며, 진위와 품질의 우열은 가천대학교 한의과대학 본초학교실에서 감정하였다.
데이터처리
- 대조군에 대한 실험군의 유의성을 student's t-test로 계산해서 p 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의한 것으로 판단하였다.
이론/모형
- 7 cells were treated with indicated concentration of HYT for 24 h. Cell viability was measured by MTS assay. ***p < 0.
성능/효과
- 1. 荊芥連翹湯 加減方은 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus에 대한 농도의존적인 항균 효능을 나타내었다.
- 2. ABTS assay를 실시한 결과 荊芥連翹湯 加減方은 항산화 효능이 뛰어남을 확인하였다.
- 3. LPS로 염증 반응을 유도한 RAW 264.7 세포의 IκBα의 인산화 작용을 荊芥連翹湯 加減方이 효과적으로 억제하였다.
- 4. RAW 264.7 세포에 LPS를 이용해 염증 반응을 유도해서 증가되는 IL-1β의 mRNA 발현량을 荊芥連翹湯 加減 方이 효과적으로 억제하였다.
- RAW 264.7 세포에 6 시간 동안 LPS만 처리하여 염증 반응을 유도한 경우 IL-1β의 mRNA 발현량이 매우 높게 증가하였으나, 荊芥連翹湯 加減方을 처리한 RAW 264.7 세포에 LPS를 6 시간 동안 처리할 경우 IL-1β의 mRNA 발현이 절반 이하로 억제되는 것을 확인할 수 있었으며, RAW 264.7 세포에 荊芥連翹湯 加減方만 처리할 경우는 IL-1β의 mRNA 발현량에 큰 변화를 미치지 않았다.
- RAW 264.7 세포에 처리하기 위한 荊芥連翹湯 加減方의 농도를 설정하기 위하여, 荊芥連翹湯 加減方을 다양한 농도로 RAW 264.7 세포에 24 시간 처리한 뒤 MTS assay를 실시한 결과 2 ㎎/㎖ 농도의 荊芥連翹湯 加減方을 처리할 경우 RAW 264.7 세포에 독성을 나타내었으나 1 ㎎/㎖ 농도를 처리할 경우 큰 세포독성을 나타내지 않았다. 하지만 1 ㎎/㎖의 荊芥連翹湯 加減方은 RAW 264.
- . Resveratrol 농도의 증가에 따라 ABTS 라디칼 소거능이 증가하였으며, 荊芥連翹湯 加減方 또한 ABTS 라디칼을 농도의존적으로 소거하는 것을 확인하였다. 이를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 항산화 효능을 가지고 있음을 확인할 수 있었다.
- 그 결과 6 시간 LPS를 처리했을 때와 마찬가지로 12 시간 24 시간 동안 LPS를 처리하여 촉진된 IL-1β의 mRNA 발현이 荊芥連翹湯 加減方을 처리함으로써 효과적으로 억제되었다.
- 그 결과 荊芥連翹 湯 加減方을 처리한 RAW 264.7 세포에 6 시간, 12 시간, 24 시간 LPS를 처리한 경우 IL-1β의 mRNA 발현량이 효과적으로 억제되었다.
- 그람음성균인 Escherichia coli 와 그람양성균인 Staphylococcus aureus 에 대한 荊芥連翹湯 加減方의 항균 효능을 확인하기 위하여, 荊芥連翹湯 加減方을 농도의존적으로 희석한 고체 LB 배지에 균주를 도말한 후 생존한 colony의 수를 측정하였다. 그 결과 荊芥連翹湯 加減方의 농도 증가에 따라 두 균주 모두 colony의 수가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 4 ㎎/㎖ 농도 이상의 荊芥連翹湯 加減方 고체 LB 배지에서 배양한 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 의 colony 수가 대조군 대비 절반 이하로 감소하였다. 이 결과를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 의 세포수를 감소시키는 항균 효능이 있음을 확인하였다.
- 그 결과 荊芥連翹湯 加減方의 처리는 p65의 단백질 발현 수준을 변화시키진 않았으나, 놀랍게도 LPS 처리에 의해 촉진된 IκBα의 인산화 작용을 절반 이하로 억제시켰다 (n=3, p < 0.01).
- 또한 RAW 264.7 세포에 LPS를 이용해 유도한 IL-1βmRNA 발현이 荊芥連翹湯 加減方에 의해 효과적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
- 또한 荊芥連翹湯 加減方은 RAW 264.7 세포에 LPS를 처리하여 p-IκBα, total IκBα, p65, Tubulin 항체를 이용한 immunoblot analysis를 실시하여 NF-κB 신호 작용에 荊芥 連翹湯 加減方이 미치는 영향을 확인한 결과 IκBα의 인산화 작용을 효과적으로 억제하였다.
- 또한 염증 반응 유도에 의한 RAW 264.7 세포의 IκBα인산화 작용을 억제하며, NF-κB 신호전달에 의해 발현이 조절되는 IL-1β의 mRNA 발현량을 억제하는 것을 확인하였다.
- 먼저 荊芥連翹湯 加減方이 그람음성균인 Escherichia coli 와 그람양성균인 Staphylococcus aureus에 미치는 항균 효능을 확인하기 위하여, 荊芥連翹湯 加減方을 농도의존적으로 희석한 고체 LB 배지에 두 균주를 도말한 후 생존한 colony의 수를 측정한 결과 荊芥連翹湯 加減方은 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus에 대한 농도의존적인 항균 효능을 나타냈으며, ABTS assay를 실시한 결과 荊芥連翹湯 加減方의 ABTS 라디칼소거능이 농도의존적으로 증가하는 것을 확인 하였으며, 이를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
- 우리는 RAW 264.7 세포에 LPS를 이용해 염증 반응을 유도함으로써 나타나게 되는 IκBα의 인산화의 작용이 荊芥連翹湯 加減方 처리에 의해 효과적으로 억제된다는 것을 확인했으며, 이를 통해 荊 芥連翹湯 加減方은 염증 반응을 효과적으로 억제하는 효능이 있음을 규명할 수 있었다.
- 다양한 병원균의 감염은 염증성 질환을 발병시키게 되는 일차적인 원인이며, 이에 대한 방어 작용을 위해 나타나게 되는 면역 반응들이 장기간 지속될 경우 다양한 염증성 질환들을 야기하게 된다. 우리는 이번 연구를 통해 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus에 대한 荊芥連翹湯 加減方의 항균 효능을 확인할 수 있었다. 하지만 항염증 효능을 검증하기 위한 RAW 264.
- 이 결과를 통해 荊芥連 翹湯 加減方은 IκBα의 인산화 작용을 효과적으로 억제함으로써 RAW 264.7 세포에서 나타나는 염증 반응을 조절할 것으로 생각하였다.
- 그 결과 荊芥連翹湯 加減方의 농도 증가에 따라 두 균주 모두 colony의 수가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 4 ㎎/㎖ 농도 이상의 荊芥連翹湯 加減方 고체 LB 배지에서 배양한 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 의 colony 수가 대조군 대비 절반 이하로 감소하였다. 이 결과를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 Escherichia coli 와 Staphylococcus aureus 의 세포수를 감소시키는 항균 효능이 있음을 확인하였다.
- 이러한 결과를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 IκBα의 인산화 억제함과 동시에 IL-1β의 mRNA 발현 량를 조절하여 염증 반응을 억제함을 확인할 수 있었다.
- Resveratrol 농도의 증가에 따라 ABTS 라디칼 소거능이 증가하였으며, 荊芥連翹湯 加減方 또한 ABTS 라디칼을 농도의존적으로 소거하는 것을 확인하였다. 이를 통해 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 항산화 효능을 가지고 있음을 확인할 수 있었다.
- 이상의 결과들을 통해 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 염증 반응 조절 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
- 이상의 결과를 종합하면 荊芥連翹湯 加減方은 염증 반응을 유도하는 다양한 미생물의 생존을 억제하는 항균 효능이 있으며, 염증성 질환의 원인으로 작용하는 활성산소를 제거하는 항산화 효능이 있음을 확인하였다. 또한 염증 반응 유도에 의한 RAW 264.
후속연구
- 荊芥連翹湯 加減方에 의한 IL-1βmRNA 발현 억제가 IκBα의 인산화 억제 작용에 의해 나타나게 되었는지 추가적인 연구가 필요하다.
- 염증성 질환 치료를 위해서는 활성산소를 효과적으로 제거하게 되는 항산화 효능이 매우 중요하기 때문에 荊芥連翹湯 加減方의 항산화 효능을 ABTS assay를 통해 확인하였다. 그 결과 荊芥連翹湯 加減方은 뛰어난 항산화 효능이 있음을 확인할 수 있었으며, 이를 통해 荊芥連翹湯 加減方이 활성산소에 의해 야기되는 염증 반응을 억제할 것으로 추측되나, in vivo 에서도 荊芥連翹湯 加減方이 염증 반응에 의해 생성된 활성산소를 억제할 수 있음을 확인하는 추가적인 연구의 진행이 필요하다.
- 7 세포의 IκBα인산화 작용을 억제하며, NF-κB 신호전달에 의해 발현이 조절되는 IL-1β의 mRNA 발현량을 억제하는 것을 확인하였다. 이 연구 결과들을 통해 荊芥連翹湯 加 減方은 새로운 천연 항염증 치료제로 개발할 수 있는 가능성을 확인할 수 있었다.
- 등은 알레르기 비염 유발 생쥐에 대한 荊芥 連翹湯의 iNOS 생성 억제 효과를 보고한 바 있다. 하지만 荊 芥連翹湯 加減方이 염증 반응을 조절하는 다양한 효능들과 이에 대한 메커니즘은 아직 더 연구가 필요하다.
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