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문제 정의
- 이에 본 연구는 치과 유니트 공급수의 플러싱하기 전과 플러싱 후 시간경과에 따른 미생물의 정량적 분석 및 정성적 분석을 통해 병원성 여부를 파악하고, 치과 수관관리에 대한 적정 방안 마련에 기초자료로 활용되고자 한다.
- 치과 유니트에 장착된 고속 핸드피스, 초음파 치석제거기, 공기-물 분사기의 공급수를 플러싱하기 전과 플러싱 후 시간 경과에 따른 세균수를 정량적, 정성적 분석하여 병원성 여부를 파악함으로써 세균감염으로부터 환자와 치과종사자를 보호하는데 기여하고자 연구를 시행하였다.
제안 방법
- 준비된 시료의 분석에는 Agilent technologies 6890 gas chromatography를 이용하였으며, separation column은 A30 × 0.320 mm × 0.25 μm crosslinked methyl siloxane column (HP-1P)을 사용하였다.
- 채취한 50 ml 치과용수를 원심 분리하여 상층액을 제거하고 phosphatebufferedsaline(PBSBuffer, Biosesang, Korea)에 시료를 10배 단계희석(10-1 ~ 10-2)하여 혈액한천배지(BAP, HANIL COMED, Korea)에 500 μl를 도말하였다.
- 치과용수는 1회 50 ㎖씩 총 120개(10대, 4회, 3기구)를 채취하였다. 채취한 용수를 4℃ 상태에서 보관한 뒤 실험실로 이동하여 곧바로 생균수 측정을 시행하였다.
- 2013년 10월 경상남도 1개 치과 의료기관에서 진료가 끝난 후 치과용 진료의자 10대를 멸균한 고속 핸드피스와 초음파 치석제거기, 공기-물 분사기의 공급수를 대상으로 연구를 수행하였다. 치과용수 채취 전 조사자는 멸균된 장갑을 착용하고, 플러싱하기 전과 플러싱 후 2분, 4분, 6분에 치과용수를 멸균된 수집용기(Conical tube)에 채취하였다. 치과용수는 1회 50 ㎖씩 총 120개(10대, 4회, 3기구)를 채취하였다.
대상 데이터
- 2013년 10월 경상남도 1개 치과 의료기관에서 진료가 끝난 후 치과용 진료의자 10대를 멸균한 고속 핸드피스와 초음파 치석제거기, 공기-물 분사기의 공급수를 대상으로 연구를 수행하였다. 치과용수 채취 전 조사자는 멸균된 장갑을 착용하고, 플러싱하기 전과 플러싱 후 2분, 4분, 6분에 치과용수를 멸균된 수집용기(Conical tube)에 채취하였다.
- 균 동정은 한 국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms; KCCM)에서 수행하였고, 19개 중 ‘no matches’ 3 개를 제외한 총 16개의 균주가 동정되었다.
- 혈액한천배지에 백금이로 도말 접종하여 순수 분리 후 37℃, CO2 호기성 조건에서 3일간 배양하였다. 배양된 plate 중 플러싱하기 전의 균들로 비슷한 형질을 제외한 19개의 균을 분리 동정하였다. 균 동정은 한 국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms; KCCM)에서 수행하였고, 19개 중 ‘no matches’ 3 개를 제외한 총 16개의 균주가 동정되었다.
- 치과용수 채취 전 조사자는 멸균된 장갑을 착용하고, 플러싱하기 전과 플러싱 후 2분, 4분, 6분에 치과용수를 멸균된 수집용기(Conical tube)에 채취하였다. 치과용수는 1회 50 ㎖씩 총 120개(10대, 4회, 3기구)를 채취하였다. 채취한 용수를 4℃ 상태에서 보관한 뒤 실험실로 이동하여 곧바로 생균수 측정을 시행하였다.
데이터처리
- 모든 자료는 SPSS(Ver. 18.0, Chicago, Illinois, USA)를 이용하여 분석하였으며, 통계적 유의성 검정은 α=0.05로 하였다.
- 분석된 profile은 Microbial Identification System(MIDI; Microbial ID, Inc., Newark, Dealware USA)의 sherlock software 내 있는 표준미생물의 library의 fatty acid profiles과 비교하여 자동적으로 data화함으로써 계산된 값에 따라 유사도 지수(Sim index)를 구하였고, 0.3 ~ 0.9를 신뢰성 있는 동정 결과로 판정하였다.
- 핸드피스, 초음파 치석제거기, 공기-물 분사기의 공급수에서 나온 세균 집락수는 평균과 표준편차를 구하였고, 시간경과에 따른 세균 집락 수의 변화는 집단 간 반복측정 분산분석(Repeatmeasure ANOVA)을 하 였다. 모든 자료는 SPSS(Ver.
이론/모형
- 본 분석은 분리 균주를 Miller[17]의 방법에 따라 균체지방산조성을 이용하여 동정하였다. 배양한 약 40 mg의 cell을 teflon-lined screwcap tube에 옮긴 후, 50% 메탄올에 15% NaOH를 첨가한 용액 1 ml를 넣고 100℃ 에서 30분간 가열하여 실온에서 식힌 다음 methanolic-HCl 2 ml을 첨가하여 80℃에서 10분간 가열한 뒤 급 냉한 후 1.
성능/효과
- 1. 치과용수관에서 최대 80,000CFU/ml의 세균이 검출되었고, 음용기준을 초과하는 비율이 62.5%로 나타나 치과용수가 세균에 오염될 가능성이 큰 것으로 나타났다.
- 2. 플러싱하기 전보다 플러싱 2분 후 세균수가 급격히 감소하여 플러싱의 필요성 및 효과를 알 수 있었다.
- 3. 세균 분리 동정 결과 대부분 기회감염균이었지만, 일부 병원성균도 분리되었다. 향후 치과진료실에서 교차감염 및 원내감염의 위험을 최소화하기 위해 치과용수에 관한 종사자 교육 및 수질관리를 보다 철저히 수행해야 할 것이다.
- 동정된 전체 16개 균 중 핸드피스에서 7종의 균이 분리되었고, 전체의 1/3이 Sphingomonas이었다. Sphingomonas는 1990년 정의된 그람음성간균으로 Sphingobium, Novosphingobium, Sphingosinicella 및 Spingopyxis의 4개 속으로 세분화되며, 토양, 흡한 환경과 저온에서 성장 가능한 균주로 일부 종은 호흡기와 관련된 기회감염을 일으킨다.
- 치과용수관에서 발견되는 병원균들로는Legionella, Pseudomonas그리고 Mycobacterium이 보고되고 있다 [23,24]. 본 연구에서 분리된 그람양성균은 Enterococcus faecalis, Micrococcus lylae, Mycobacterium aichiense, Mycobacterium fallax, Microbacterium imperiale, Paenibacillus validus, Rothia dentocariosa, Staphylococcussciuri이 고, 그람음성균은 Bacillus, Brevundimonas diminuta, Novosphingobium aronaticivorans, Novosphingobium subterraneum, Psychrobacterimmobilis, Serratia odorifera, Sphyingomonas capculata였다. 이는 Szymańska[18]의 연구와 일부 일치하는 결과였으며, 가장 흔히 분리된 세균은 Ralstonia pichettii로 본 연구의 Novosphingobium subterranea와는 차이가 있었다.
- 본 연구에서도 핸드피스 공급수는 플러싱하기 전 평균 27,208 CFU/ml, 플러싱 2분 후 2,180 CFU/ml 및 4분 후 900 CFU/ml였고, 초음파 치 석제거기의 공급수에서는 플러싱 전 18,869CFU/ml에서 플러싱 2분 후 1,526CFU/ml 및 4분 후 1,483CFU/ ml로 플러싱하기 전보다 플러싱 2분 경과 후 세균수가 급격히 줄어들어 플러싱의 필요성을 뒷받침해준다.
- 핸드피스 공급수에서 분리된 세균은 Brevundimonas diminuta, Microbacterium imperiale, Micrococcus lylae, Novosphingobiumsubterraneum, Novosphingobiumaromaticivorans, Rothiadentocariosa 및 Sphingobium yanoikuyae 였으며, 초음파 치석제거기 공급수에서 분리된 세균은Enterococcus faecalis, Paenibacillus validus, Psychrobacter immobilis 및 Serratia odorifera였고, 공기-물 분사기 공급수에서 분리된 세균은 Bacillus, Mycobacterium aichiense, Mycobacterium fallax, Novosphingobium subterraneum, Sphingomonas capsulata 및Staphylococcus sciuri였 다. 이 중 N. subterraneum이 전체 16종의 균 중 가장 많이(16.7%) 분리되었다[Table 2].
- 핸드피스 공급수에서 분리된 세균은 Brevundimonas diminuta, Microbacterium imperiale, Micrococcus lylae, Novosphingobiumsubterraneum, Novosphingobiumaromaticivorans, Rothiadentocariosa 및 Sphingobium yanoikuyae 였으며, 초음파 치석제거기 공급수에서 분리된 세균은Enterococcus faecalis, Paenibacillus validus, Psychrobacter immobilis 및 Serratia odorifera였고, 공기-물 분사기 공급수에서 분리된 세균은 Bacillus, Mycobacterium aichiense, Mycobacterium fallax, Novosphingobium subterraneum, Sphingomonas capsulata 및Staphylococcus sciuri였 다.
- 핸드피스와 초음파 치석제거기의 평균 세균 집락 수는 시간이 경과할수록 통계적으로 유의하게 감소하였다(p<0.05).
후속연구
- 수관으로 역류되는 것을 방지하기 위해서 핸드피스 및 급수라인에는 anti-retraction valve를 설치하여야 하며, 매 환자 진료 전후, 일과 종료 시 환자 구강에 들어가는 모든 기기로부터 최소 2 분 이상 플러싱하여야 한다. 또한 치과용수관의 생물막 제거를 위한 화학적 소독과 물리적 제거를 병행하여야 하며, 정기적인 수관 미생물 검사를 실시하여 모니터링(Monitoring)하여야 한다.
- 본 연구는 1개 치과 의료기관을 대상으로 하였기 때문에 본 결과를 우리나라 전체 치과 의료기관으로 일 반화하기에는 무리가 있으며, 실험시기에 비해 연구발표가 늦어진 것과 치과용수관 물 샘플의 세균 배양에 R2A agar 배지가 추천되고 있지만[16] 본 연구에는 혈액한천배지를 사용하였다는 제한점이 있다. 하지만 이러한 제한점에도 불구하고 본 연구는 우리나라에서 치과 유니트 공급수의 플러싱하기 전과 플러싱 후 시간경과에 따른 세균 수에 대해 정량적 분석 및 정성적 분석을 동시에 시행한 첫 번째 연구로써 그 의의가 있다고 할 수 있겠다.
- 본 연구는 1개 치과 의료기관을 대상으로 하였기 때문에 본 결과를 우리나라 전체 치과 의료기관으로 일 반화하기에는 무리가 있으며, 실험시기에 비해 연구발표가 늦어진 것과 치과용수관 물 샘플의 세균 배양에 R2A agar 배지가 추천되고 있지만[16] 본 연구에는 혈액한천배지를 사용하였다는 제한점이 있다. 하지만 이러한 제한점에도 불구하고 본 연구는 우리나라에서 치과 유니트 공급수의 플러싱하기 전과 플러싱 후 시간경과에 따른 세균 수에 대해 정량적 분석 및 정성적 분석을 동시에 시행한 첫 번째 연구로써 그 의의가 있다고 할 수 있겠다. 향후 치과의료기관별, 지역별 치과용수관 내 미생물 평가가 필요할 것으로 사료된다.
- 하지만 이러한 제한점에도 불구하고 본 연구는 우리나라에서 치과 유니트 공급수의 플러싱하기 전과 플러싱 후 시간경과에 따른 세균 수에 대해 정량적 분석 및 정성적 분석을 동시에 시행한 첫 번째 연구로써 그 의의가 있다고 할 수 있겠다. 향후 치과의료기관별, 지역별 치과용수관 내 미생물 평가가 필요할 것으로 사료된다.
- 세균 분리 동정 결과 대부분 기회감염균이었지만, 일부 병원성균도 분리되었다. 향후 치과진료실에서 교차감염 및 원내감염의 위험을 최소화하기 위해 치과용수에 관한 종사자 교육 및 수질관리를 보다 철저히 수행해야 할 것이다.
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