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문제 정의
- 이에 본 연구에서는 안전한 축산물의 제공을 위하여 경남 동물위생시험소에서 가축 도체 및 분변에서 분리한 식중독 유발 균, Salmonella spp. 및 E. faecalis의 오염도를 조사하고, 질병을 유발할 수 있는 이들의 독성 인자의 특성을 조사하고자 하였다.
제안 방법
- 배양 후 투명한 집락을 대상으로 VITEK MSTM (BioMérieux, Inc, France)으로 동정하였다.
- 분홍색 집락을 대상으로 다시 mEA 배지에 도말하고 같은 조건에서 배양 후, Trypticase Soy Agar (TSA) 평판 배지에 접종하여 같은 조건에서 배양 후 하얀색 집락을 대상으로 VITEK MSTM (BioMérieux, Inc, France)으로 동정하였다.
- Genomic 및 plasmid DNA 추출: 분리된 Salmonella spp. 및 E. faecalis의 게놈 DNA를 추출하기 위해서 ExgeneTM Cell SV kit를 이용하여 제조사의 지침대로 실시하였다. 또한 Salmonella spp.
- 또한 Salmonella spp.로부터 플라즈미드 DNA 추출을 위해서 Hybrid-QTM kit를 이용하여 제조사의 지침대로 실시하였다.
- faecalis 독성 인자 검출: PCR을 이용하여 Salmonella spp. 및 E. faecalis를 대상으로 독성 인자를 조사하기 위하여, 분리된 게놈 및 플라즈미드 DNA를 대상으로 PCR을 수행하였다. PCR에 이용한 primer 서열 및 anneling 조건은 Salmonella spp.
- faecalis는 Table 2에 제시하였으며, PCR 조건은 initial denaturation을 94℃에서 10분간 실시하였고, denaturation 94℃에서 1분, extension 72℃에서 1분 조건으로 총 35회 실시하였으며, last extension 72℃에서 5분간 실시하였다. PCR 증폭 산물은 2% 아가로스겔에 DNA 전기 영동 버퍼를 이용하여 전기영동을 실시하였으며, GelDoc(Bio-Rad, U.S.A)을 이용하여 결과를 확인하였다.
대상 데이터
- 2017년 3월에서 9월까지 경남 동물위생시험소에서 가축 도체 및 분변으로부터 분리한 164개의 시료로부터 분리한 대표적인 병원성 미생물 Salmonella spp. 및 E. faecalis을 대상으로 하였다.
성능/효과
- 으로 동정한 결과 4균주의 Salmonella spp. (2.43%)와 32균주의 E. faecalis (19.5% 균주)가 분리 및 동정되었다.
- E. faecalis 독성 인자: 분리된 32균주의 E. faecalis를 대상으로 독성 인자 esp, cylA, cylB, cylM, gelE, fsrA, fsrB, 그리고 fsrC를 PCR로 확인한 결과, cylA는 1균주(3.1%), cylB와 cylM는 3균주(9.3%)로 검출되었고, esp인자는 검출이 되지 않았다[Fig. 2]. gelE, fsrA, fsrB 그리고 fsrC는 17균주(53.
- 특히 spvC는 최근 pohsphothreonine lyase 활성이 있어 항-세포 사멸 인자를 활성 시키는 p38 MAP kinase 억제시켜 세포사멸을 유도하는 것으로 보고되었다(Li 등, 2007). 이에 spvR 및 spvC를 조사해 본 결과, spvC는 게놈 및 플라즈미드 DNA에 관계없이 4균주 중 1균주(25%)만 검출이 되었다. 그러나, spvR의 경우 게놈에서는 1균주(25%) 그리고 플라즈미드에서는 4균주(100%) 모두에서 검출이 되었다.
- enteritidis에서 spvC가 모두 검출됨을 보였다. 본 연구에서는 그 이유를 설명할 수 없으나 spvC의 경우 25%의 검출율을 보였고, spvR의 경우 플라즈미드 DNA에 100%의 검출율을 보였다. 본 연구에서는 분리된 Salmonella 균주의 표본이 너무 적고, 표현형에 대한 조사가 이루어지지 않아 정확히 판단할 수 없으나, fimA, invA, stn그리고 spvR 독성인자가 100%로 나타나는 것으로 보아 분리 균주 모두 숙주 장 점막의 침투력 및 독소원성이 매우 높을 것으로 판단된다.
- 본 연구에서는 그 이유를 설명할 수 없으나 spvC의 경우 25%의 검출율을 보였고, spvR의 경우 플라즈미드 DNA에 100%의 검출율을 보였다. 본 연구에서는 분리된 Salmonella 균주의 표본이 너무 적고, 표현형에 대한 조사가 이루어지지 않아 정확히 판단할 수 없으나, fimA, invA, stn그리고 spvR 독성인자가 100%로 나타나는 것으로 보아 분리 균주 모두 숙주 장 점막의 침투력 및 독소원성이 매우 높을 것으로 판단된다.
- 8%)로 다른 연구 결과와 거의 비슷하게 나타났다(Poeta 등, 2006). 본 연구에서 분리된 E. faecalis의 독성 인자는 부착 및 집락화에 관여하는 독성 인자가 낮게 나왔지만, 다수의 용혈소 및 젤라틴 분해효소 독성 인자가 나타난 것으로 보아, 많은 분리균주가 독성이 높을 것으로 판단된다.
- 결론적으로, 보다 더 안전한 축산물 제공을 위해 축산물 도체로부터 병원성 미생물 분리 및 독성 인자를 조사해 본 결과, 분리된 Salmonella spp.및 E.
- 3%로 검출되었고 esp 인자는 검출되지 않았다. gelE, fsrA, fsrB 그리고 fsrC는 53.1%로 나타났으며, 17균주 모두 gelE, fsrA, fsrB 그리고 fsrC 인자를 가지고 있었다. 본 연구에서는 분리된 Salmonella균주는 그 표본이 너무 적고, 표현형에 대한 조사가 이루어지지 않아 정확히 판단할 수 없으나, fimA, invA 그리고 stn 독성인자가 100%로 나타나는 것으로 보아 분리 균주 모두 침투 및 독소원성이 매우 높을 것으로 판단되며, E.
- 1%로 나타났으며, 17균주 모두 gelE, fsrA, fsrB 그리고 fsrC 인자를 가지고 있었다. 본 연구에서는 분리된 Salmonella균주는 그 표본이 너무 적고, 표현형에 대한 조사가 이루어지지 않아 정확히 판단할 수 없으나, fimA, invA 그리고 stn 독성인자가 100%로 나타나는 것으로 보아 분리 균주 모두 침투 및 독소원성이 매우 높을 것으로 판단되며, E. faecalis의 독성 인자는 부착 및 집락화에 관여하는 독성 인자가 낮게 나왔지만, 다수의 용혈소 및 젤라틴 분해효소 인자가 나타난 것으로 보아, 많은 분리균주가 독성이 높을 것으로 판단된다. 결론적으로, 보다 더 안전한 축산물 제공을 위해 축산물의 도축 및 축산물 생산에 있어 위생관리를 더 철저히 해야 한다.
- faecalis의 독성 인자는 부착 및 집락화에 관여하는 독성 인자가 낮게 나왔지만, 다수의 용혈소 및 젤라틴 분해효소 인자가 나타난 것으로 보아, 많은 분리균주가 독성이 높을 것으로 판단된다. 결론적으로, 보다 더 안전한 축산물 제공을 위해 축산물의 도축 및 축산물 생산에 있어 위생관리를 더 철저히 해야 한다.
후속연구
- 결론적으로, 보다 더 안전한 축산물 제공을 위해 축산물 도체로부터 병원성 미생물 분리 및 독성 인자를 조사해 본 결과, 분리된 Salmonella spp.및 E. faecalis에서 독성이 높을 것으로 판단되며, 축산물의 도축 및 축산물 생산에 있어 보다 위생에 주의를 더 기울여야 된다고 생각된다.
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