[논문]TNF-α로 유도된 HaCaT 각질형성세포의 염증반응에서 해죽순의 항염증 효과

배기상; 박성주

doi:10.6116/kjh.2019.34.1.51.

TNF-α로 유도된 HaCaT 각질형성세포의 염증반응에서 해죽순의 항염증 효과
Anti-inflammatory Effect of Nypa fruticans Wurmb. on tumor necrosis factor (TNF)-α-induced Inflammatory response in HaCaT cells 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.34 no.1, 2019년, pp.51 - 57

배기상 (원광대학교 한의과대학 본초학교실) , 박성주 (원광대학교 한의과대학 본초학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Nypa fruticans Wurmb. (NF) have been used as a traditional medicine to treat inflammatory diseases in East-South Asia. However, it is largely undiscovered whether NF water extract could exhibit anti-inflammatory activities against tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$)-induced inflammatory responses on human keratinocytes, HaCaT cells. Therefore, this study was aimed to investigate the anti-inflammatory activity of NF water extract on TNF-${\alpha}$-induced inflammatory responses in HaCaT cells. Methods : To investigate the anti-inflammatory activites of NF water extract in HaCaT cells, the inflammatory model of HaCaT cells was established under a suitable concentration (10 ng/ml) of human TNF-${\alpha}$ (hTNF-${\alpha}$). HaCaT keratinocyte cells were pre-treated with NF water extract for 1 h, and then stimulated with hTNF-${\alpha}$. Then, the cells were harvested to measure the inflammatory mediators such as inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase (COX)-2 and prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$), and pro-inflammatory cytokine including TNF-${\alpha}$ and interleukin (IL)-6. In addition, we examined the inhibitory mechanisms of NF, mitogen activated protein kinases (MAPKs) and inhibitory kappa B alpha ($I{\kappa}-B{\alpha}$) Results : The treatment of NF inhibited the hTNF-${\alpha}$-induced elevation of iNOS, COX-2, and $PGE_2$ in HaCaT cells. In addition, NF treatment inhibited the hTNF-${\alpha}$-induced elevation of TNF-${\alpha}$ and IL-6. Furthermore, NF treatment inhibited the activation of MAPKs but not degradation of $I{\kappa}-B{\alpha}$. Conclusions : Taken together, our result suggest that treatment of NF could inhibit the hTNF-${\alpha}$-induced inflammatory responses via deactivation of MAPKs in HaCaT cells. This study could suggest that NF could be a beneficial agent to prevent skin damage or inflammation.

주제어

표/그림 (5)

그림 Fig. 1. Effect NF water extract on cytotoxity in HaCaT cells.
표 Table 1. The sequences of RT-PCR primer
그림 Fig. 2. Effect NF water extract on hTNF-α induced iNOS, COX2 and PGE2 production in HaCaT cells.
그림 Fig. 3. Effect NF water extract on hTNF-α induced TNF-α and IL-6 production in HaCaT cells.
그림 Fig. 4. Effects of NF water extract on the activation of MAPKs and the degradation of Iκ-Bα in HaCaT cells.

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

이에 본 연구에서는 사람 각질 형성 세포주인 (Human Adμlt low Calcium High Temperature: HaCaT)세포에서 해죽순 물 추출물의 항염증 효과 및 항염증 기전을 연구하였다.
해죽순을 이용하여, 항산화 효능을 보일 수 있는 폴리페놀 및 활성성분 연구도 활발하며, 혈당억제, 인지개선 효과도 탁월하다고 보고되어있다^{12, 13, 15)}. 최근 본 연구팀은 해죽순 물 추출물의 항염증 효과를 보고한 바가 있으며¹⁴⁾, 그 연구 결과를 바탕으로 해죽순물 추출물이 피부 염증 개선에 유의성 있는 효과가 있을 것으로 판단되어 본 연구를 진행하였다. 연구를 진행한 결과, 해죽순 물 추출물은 각질형성세포 염증 시 발생하는 다량의 염증성 매개물질을 억제하였고, 또한 염증성 매개물질 조절하는 주요 기전인 MAPKs를 억제하는 것을 발견할 수 있었다.

제안 방법

HaCaT 세포에 TNF-alpha로 피부 염증을 유도하여 염증반응을 조사하였고, 항염증 기전을 조사하기 위하여 Mitogen activated protein kinases (MAPKs)의 활성과 inhibitory kappa B alpha ($I_k - B_a$) 의 분해를 조사하였다.
HaCaT 세포에 해죽순 물 추출물을 1, 10, 20, 및 50, μg/ mL의 농도로 1시간 전처리하고, hTNF-α로 24시간 동안 자극 후, iNOS, COX-2, PGE2의 변화를 관찰하였다.
HaCaT 세포에 해죽순 물 추출물을 1, 10, 20, 및 50, μg/ mL의 농도로 1시간 전처리하고, hTNF-a로 24시간 동안 자극 후, TNF-a, IL-6의 변화를 관찰하였다.
HaCaT 세포에 해죽순 물 추출물을 1, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 250 및 500 μg/ mL의 농도로 처리하여 24시간 동안 배양한 후, 세포 생존율을 관찰하였다.
HaCaT 세포에 해죽순 물 추출물을 50 μg/ mL의 농도로 1시간 전처리하고, hTNF-a로 세포 자극 후, MAPKs 활성과 Iκ-Ba 분해(degradation)를 관찰하였다.
PCR 반응이 끝난 후 1% agarose gel에 10 μl씩을 넣고 전기영동한 후에 mRNA 발현 정도를 확인하였다.
사람각질형성세포 HaCaT세포에 TNF-a로 염증 반응을 일으켰을 때, 해죽순 물 추출물의 항염증 효과와 항염증 기전을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다.

대상 데이터

3,3′,5,5′-tetramethylb enzidine (TMB), dimethyl sμlfoxide (DMSO), avidin peroxidase (AP), 2-propanol, 3-(4,5-Dimethylthiazol -2-yl)-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) 는 Sigma Aldrich (Saint Louis, Missouri, USA)에서 구입하였다.
Fetus bovine serum (FBS), dμlbecco modified eagle medium (DMEM) high glucose, antibiotics (Gaithersburg, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다. Diethylpyrocarbonate (DEPC), trizol 용액은 Invitrogen (Carlsbad, CA, USA),high-capacity RNA-to-cDNA kit는 Applied biosystems (ABI, San Diego, CA, USA), 2X taq PCR pre-mix kit는 Solgent (Daejeon, South Korea)사에서 각각 구입하여 사용하였다. Human TNF-a (hTNF-a) 재조합 단백질 및 prostaglandin E₂ (PGE₂), TNF-a, IL-6 enzyme linked immunosorbant assay (ELISA) 분석을 위한 항체는 R&D Systems (Minneapolis, MN, USA), total 및 phosphospecific mitogen activated protein kinases (MAPKs)항체 (extracellμlar signal-regμlated kinase 1/2 [ERK 1/2], c-Jun NH2-terminal protein kinase [JNK], p38)는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA), inhibitory kappa (I_k)-Ba는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)사의 제품을 사용하였다.
전염증성 사이토카인의 염증매개물질은 세포 상층액에서 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)법으로 정량하였다. ELISA는 BD pharmingen (CA, USA)에서 Human ELISA kit for PGE₂, IL-6, TNF-a를 구입하여 시행하였다.
Fetus bovine serum (FBS), dμlbecco modified eagle medium (DMEM) high glucose, antibiotics (Gaithersburg, MD, USA)에서 구입하여 사용하였다.
Human TNF-a (hTNF-a) 재조합 단백질 및 prostaglandin E2 (PGE2), TNF-a, IL-6 enzyme linked immunosorbant assay (ELISA) 분석을 위한 항체는 R&D Systems (Minneapolis, MN, USA), total 및 phosphospecific mitogen activated protein kinases (MAPKs)항체 (extracellμlar signal-regμlated kinase 1/2 [ERK 1/2], c-Jun NH2-terminal protein kinase [JNK], p38)는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA), inhibitory kappa (Ik)-Ba는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)사의 제품을 사용하였다.
본 실험에서는 정상 사람 피부의 각질형성세포와 형태 및 반응 양식이 동일하면서, 계대배양이 제한되어 있지 않다는 장점을 지닌 형질 전환 각질형성세포인 HaCaT 세포를 한국세포주은행(KCLB; Seoμl, Korea)로부터 분양 받아 실험에 사용하였다.
해죽순은 토디팜코리아(서울, 대한민국)에서 구입하여 사용하였다. 해죽순은 미얀마에서 수입되어 건조된 것을 원광대학교 한의과대학 본초학교실에서 정선한 후 사용하였다. 해죽순 물 추출물을 얻기 위하여 증류수 1ℓ에 해죽순 100 g을 넣고 150분 동안 전탕한 액을 여과한 후, 여과액을 동결 건조하여 3차 증류수에 녹여서 필터한 후 사용하였다.
해죽순은 토디팜코리아(서울, 대한민국)에서 구입하여 사용하였다. 해죽순은 미얀마에서 수입되어 건조된 것을 원광대학교 한의과대학 본초학교실에서 정선한 후 사용하였다.

데이터처리

모든 실험 결과는 3회 이상 실시하여 그 평균값을 기초로 Mean ± S.E. 로 나타내었다.
로 나타내었다. 실험결과에 대한 통계처리는 SPSS 분석프로그램의 one way ANOVA 분석 후least-significant differences (LSD) test로 사후검증을 실시하였고, p-value가 0.05 미만일 경우 유의한 것으로 판정하였다.

이론/모형

전염증성 사이토카인의 염증매개물질은 세포 상층액에서 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)법으로 정량하였다. ELISA는 BD pharmingen (CA, USA)에서 Human ELISA kit for PGE₂, IL-6, TNF-a를 구입하여 시행하였다.

성능/효과

1. 해죽순 물 추출물은 HaCaT세포에서 50 μg/ml이하의 농도에서 세포독성을 나타내지 않았다.
2. 해죽순 물 추출물은 HaCaT세포에서 iNOS, COX-2, PGE2의 생성을 억제하였다.
3. 해죽순 물 추출물은 HaCaT세포에서 IL-6, TNF-α와 같은 전염증성 cytokine의 생성을 억제하였다.
4. 해죽순 물 추출물은 HaCaT세포에서 MAPK의 활성을 억제하였다.
그 결과, hTNF-a를 활성화된 MAPKs가 해죽순 물 추출물에 의하여 억제되었으나, NF-κB 활성에 따른 Iκ-Ba의 degradation에 대하여 해죽순 물 추출물은 유의한 억제효과를 보여주지 못했다.
HaCaT 세포에 해죽순 물 추출물을 1, 10, 20, 및 50, μg/ mL의 농도로 1시간 전처리하고, hTNF-a로 24시간 동안 자극 후, TNF-a, IL-6의 변화를 관찰하였다. 그 결과, 정상군에 비하여 hTNF-a를 처리한 군에서 염증반응 매개물질인 TNF-a, IL-6의 생성이 mRNA 및 단백질 수준에서 증가되었다 (Fig. 3A). 그러나 해죽순 물 추출물 처리에 의하여 hTNF-a로 인한 TNF-a, IL-6 생성이 mRNA 및 단백질수준에서 농도 의존적으로 감소하였다 (Fig.
의 변화를 관찰하였다. 그 결과, 정상군에 비하여 hTNF-a를 처리한 군에서 염증반응 매개물질인 iNOS, COX-2의 생성이 mRNA 수준에서 증가되었다 (Fig. 2A). 그러나 해죽순 물 추출물 처리에 의하여 hTNF-a로 인한 iNOS, COX-2 증가가 mRNA 수준에서 농도 의존적으로 감소하였다 (Fig.
그 결과, 해죽순물 추출물은 50 μg/ml농도까지는 유의성 있는 세포 독성을 보이지 않았고, 100 μg/ml농도에서 부터는 유의성 있게 세포 독성을 보였다.
본 연구에서는 hTNF-a를 HaCaT세포에 처리하였을 때, MAPKs의 phosphorylation와 IK-Bα의 degradation 을 통해 MAPKs와 NF-KB의 활성이 일어남을 알 수 있었다 (Fig.4).
따라서 피부 염증 반응시, 각질형성세포에서 분비되는 전염증성 사이토카인 및 염증성 매개물질의 조절 및 억제는 염증 반응 및 염증 질환에서 중요하다. 본 연구에서는 해죽순 물 추출물을 전 처리한 후 TNF-a로 각질형성세포를 자극하였을 때, 전염증성 사이토카인 및 염증성 매개물질이 억제되었다. 이는 대식세포 염증시 해죽순이 염증성 매개물질 및 전염증성 사이토카인을 억제했던 것과 비슷한 결과로¹⁴⁾, 해죽순 물 추출물이 대식세포 염증 외에도 피부 염증 반응 억제에 유익한 효과가 있음을 보여준다 (Fig.
최근 본 연구팀은 해죽순 물 추출물의 항염증 효과를 보고한 바가 있으며¹⁴⁾, 그 연구 결과를 바탕으로 해죽순물 추출물이 피부 염증 개선에 유의성 있는 효과가 있을 것으로 판단되어 본 연구를 진행하였다. 연구를 진행한 결과, 해죽순 물 추출물은 각질형성세포 염증 시 발생하는 다량의 염증성 매개물질을 억제하였고, 또한 염증성 매개물질 조절하는 주요 기전인 MAPKs를 억제하는 것을 발견할 수 있었다.
이상의 결과는 해죽순 물 추출물이 HaCaT 세포에서 MAPKs 의 활성 억제를 통하여 iNOS, COX-2, PGE2와 TNF-α, IL-6의 생성을 억제하였음을 보여준다. 해죽순은 추후 다양한 피부 염증 질환에 응용하여 화장품 및 질병 치료제 개발에 응용될 수 있다고 사료된다.
이상의 결과를 종합하면, 해죽순 물 추출물은 MAPKs의 활성 억제를 통해 iNOS, COX-2, PGE2와 TNF-α, IL-6의 생성을 억제하였다.
4). 하지만 MAPKs 인산화 및 활성이 해죽순 물 추출물 투여로 인하여 억제됨을 발견하였고, 이는 해죽순 물 추출물이 MAPKs 억제를 통해 염증성 매개인자 및 전염증성 사이토카인을 억제할 수 있었음을 추측할 수 있었다.

후속연구

피부 염증 질환의 치료약 개발이 미비한상황에서, 해죽순을 이용하여 항염증 효과를 처음 보고한 것은 큰 의미가 있다고 생각된다. 추후, 해죽순의 피부 세포 보호를 기반으로 아토피 등 염증성 피부 질환 동물실험 및 기타염증 모델에 응용하여 추가적으로 연구할 가치가 있다고 사료된다.
이상의 결과는 해죽순 물 추출물이 HaCaT 세포에서 MAPKs 의 활성 억제를 통하여 iNOS, COX-2, PGE2와 TNF-α, IL-6의 생성을 억제하였음을 보여준다. 해죽순은 추후 다양한 피부 염증 질환에 응용하여 화장품 및 질병 치료제 개발에 응용될 수 있다고 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	전염증성 사이토카인의 과도한 생성은 신체에 어떠한 영향을 미치는가?	특히 각질형성세포는 각질층을 형성하여 세균이나 화학물질의 침투에 대하여 효율적인 방어벽을 이루고 전염증성 사이토카인인 tumor necrosis factor(TNF)-$\alpha$와 interleukin(IL)-6을 생산하여 다양한 염증반응과 면역반응에 관여한다2-4). 전염증성 사이토카인의 과도한 생성은 피부 세포의 손상, 세포증식 속도 감소 등을 유도하여 피부 노화, 아토피성 피부염, 건선등과 같은 피부 염증 질환을 발생시킨다5). 따라서 피부 손상 및 염증 질환을 치료하기 위해서는 피부각질형성세포의 염증반응을 조절하는 것이 중요하다5).
	해죽순 물 추출물의 항염증 효과를 연구한 결과는 어떻게 나타났는가?	최근 본 연구팀은 해죽순 물 추출물의 항염증 효과를 보고한 바가 있으며14), 그 연구 결과를 바탕으로 해죽순 물 추출물이 피부 염증 개선에 유의성 있는 효과가 있을 것으로 판단되어 본 연구를 진행하였다. 연구를 진행한 결과, 해죽순 물 추출물은 각질형성세포 염증 시 발생하는 다량의 염증성 매개물질을 억제하였고, 또한 염증성 매개물질 조절하는 주요 기전인 MAPKs를 억제하는 것을 발견할 수 있었다.
	피부의 정의는 ?	피부는 인체의 표면을 덮고 있는 물리적 장벽으로서 외부 환경에 직접적으로 노출되어있어 자외선 등의 물리·화학적인 자극으로부터 신체를 보호하는 기관으로 신체의 일차적인 방어기능을 담당한다1). 특히 각질형성세포는 각질층을 형성하여 세균이나 화학물질의 침투에 대하여 효율적인 방어벽을 이루고 전염증성 사이토카인인 tumor necrosis factor(TNF)-$\alpha$와 interleukin(IL)-6을 생산하여 다양한 염증반응과 면역반응에 관여한다2-4).

참고문헌 (22)

Athar M. Oxidative stress and experimental carcinogenesis. Indian J. Exp. Biol. 2002 ; 40 : 656-667.

상세보기
Kim NM, Koo BS, Lee SK, Hwang EI, So SH, Do JH, Effect of Korean red ginseng on collagen biosynthesis and MMP-I activity in human dermal fibroblast. J. Ginseng Res. 2007 ; 31 : 86-92.

원문보기 상세보기
Beissert S, Cavazzana I, Mascia F, Meroni P, Pastore S, Tessari G, Girolomoni G. Mechanisms of immune-mediated skin diseases: an overview. Clin. Exp. Rheumatol. 2006 ; 24 : S1-6.

상세보기
Seo SH, Bae GS, Choi SB, Jo IJ, Kim DG, Shin JY, Song HJ, Park SJ, Choi MO. The antioxidative and cytoprotective effect of Lonicerae japonicae Flos water extracts on the ultraviolet(UV)B-induced human HaCaT keratinocyte. Kor. J. Herbology. 2014 ; 29(6) : 63-71.

원문보기 상세보기
Kwon DJ. Bae YS, Ju SM, Goh AR, Choi SY, Park J. Casuarinin suppresses TNF- ${\alpha}$ -induced ICAM-1 expression via blockade of $NF-{\kappa}B$ activation in HaCaT cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2011 ; 409 : 780-85.

상세보기
Gates T. Atopic dermatitis : diagnosis, treatment, and aeromedical implications. Aviat. Space Environ. Med. 2007 ; 78 : 29-37.

상세보기
Jo IJ, Kim MS, Kim KY. Anti-inflammatory Effect of Nardostachys jatamansi on TNF-alpha-induced Inflammatory Response in HaCaT Cells. J. Invest. Cosmetol. 2017 ; 13(4) : 321-329.

상세보기
Seo SH, Choi MO. Protectvie effects of Lonicerae Japonicae Flos against hydrogen peroxidase-induced oxidative stress on Human keratinocyte, HaCaT cells. Kor. J. Herbology. 2013 ; 28(4) : 57-62.

원문보기 상세보기
Kim BA. Anti-inflammation effect of extract from Zostera marina using UVB-induced damage on keratinocytes. Kor J. Herbology. 2016 ; 31(4) : 87-91.

원문보기 상세보기
Tamunaidu P, Saka S. Chemical characterization of various parts of nipa palm (Nypa fruticans). Ind. Crop Prod. 2011 ; 34: 1423-28.

상세보기
Tang SY, Hara S, Melling L, Goh KJ, Hashidoko Y. Burkholderia vietnamiensis isolated from root tissues of nipa palm (Nypa fruticans) in Sarawak, Malaysia, proved to be its major endophytic nitrogen-fixing bacterium. Biosci. Biotech. Bioch. 2010 ; 74(9) : 1972-7.

상세보기
Prasad N, Yang B, Kong KW, Khoo HE, Sun J, Azlan A, Ismail A, Romli ZB. Phytochemicals and Antioxidant Capacity from Nypa fruticans Wurmb. Fruit. Evid-Based Compl. Alt. 2013 ; 2013 : 154606.
Yusoff NA, Ahmad M, Al-Hindi B, Widyawati T, Yam MF, Mahmud R, Razk KN, Asmawi MZ. Aqueous Extract of Nypa fruticans Wurmb. Vinegar Alleviates Postprandial Hyperglycemia in Normoglycemic Rats. Nutrients. 2015 ; 7(8) : 7012-26.

상세보기
Bae GS, Park SJ. The Anti-inflammatory Effect of Nypa fruticans Wurmb. Fruit on Lipopolysaccharideinduced Inflammatory response on RAW 264.7 cells. Kor. J. Herbology. 2016 ; 31(5) : 79-84.
Reza H, Haq WM, Das AK, Rahman S, Jahan R, Rahmatullah M. Anti-hyperglycemic and antinociceptive activity of methanol leaf and stem extract of Nypa fruticans Wurmb. Pak. J. Pharm. Sci. 2011 ; 24(4) : 485-8.
Cho NJ, Lee BK, Lee WH, Kim KK, Kim KE, Han HS. Investigation of the effect of Lithospermi Radix on tight-junction related genes in HaCaT cells. Kor. J. Herbology. 2017 ; 32(3) : 55-61,

원문보기 상세보기
Hur S, Lee YS, Yoo H, Yang JH, Kim TY. Homoisoflavanone inhibits uvb-induced skin inflammation through reduced cyclooxygenase-2 expression and nf-kappab nuclear localization. J. Dermatol. Sci. 2015 ; 59 : 163-9.
Sirsjo A, Karlsson M, Gidlof A, Rollman O, Torma H. Increased expression of inducible nitric oxide synthase in psoriatic skin and cytokine-stimulated cultured keratinocytes. Br. J. Dermatol. 1996 ; 134 : 643-48.

상세보기
Zhang M, Zhou J, Wang L, Li B, Guo J, Guan X, Han Q, Zhang H. Caffeic acid reduces cutaneous tumor necrosis factor alpha ( $TNF-{\alpha}$ ), IL-6 and $IL-1{\beta}$ levels and ameliorates skin edema in acute and chronic model of cutaneous inflammation in mice. Biol. Pharm. Bull. 2014 ; 37 : 347-54.

상세보기
Cobb MH, Goldsmith EJ. Dimerization in mapkinase signaling. Trends Biochem. Sci. 2000 ; 25 : 7-9.

상세보기
Celec P. Nuclear factor kappa b-molecular biomedicine: the next generation. Biomed. Pharmacother. 2004 ; 58 : 365-71.

상세보기
Qi T, Huan Y, Enmie L, Hya W. P38/ERK MAPK signaling pathways are involved in the regulation of filaggrin and involucrin by IL-17. Mol, Med. Rep. 2017 ; 16(6) : 8863-7.

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증