[논문]백삼 추출물이 아토피 피부염 관련 사이토카인 분비 및 항산화, 항노화에 미치는 영향

홍창의; 유수연

백삼 추출물이 아토피 피부염 관련 사이토카인 분비 및 항산화, 항노화에 미치는 영향
Effects of Three Korean White Ginseng Extracts on Atopic Dermatitis-Related Cytokines, and Antioxidant and Anti-aging Activities 원문보기

생약학회지, v.50 no.2, 2019년, pp.102 - 111

홍창의 (전북대학교 생물학과) , 유수연 (순천대학교 약학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Inflammation that is considered to be mainly related to pathogenesis of atopic dermatitis (AD) is the biological response of a host to stimuli, such as cellular injury or infection. In this study, we investigated the anti-inflammatory and anti-oxidative activities of white ginseng roots by ultra high pressure extraction (Gin-UHP), fermentation followed by ultra high pressure extraction (Gin-UHPF), and polyol extraction (Gin-POL). As a result, ginseng extracts were able to decrease the secretion of pro-inflammatory cytokines (interleukin-8 and tumor necrosis factor-alpha) and immunoglobulin E. Also, Gin-POL had the highest DPPH radical scavenging activity and when we compared the SOD-like activity, Gin-UHP had the highest. Moreover, we looked into the effect of these ginseng extracts on anti-aging to show the possible usefulness as a raw material of cosmetics. As a result, ginseng extracts were able to reduce the production of melanin, and inhibit the tyrosinase and elastase activities in a dose-dependent manner. The extracts also decreased the expression of MMP-1 and had a significant hyaluronidase inhibitory activity. Taken together, these results demonstrate that ginseng extracts may have an improvement effect on AD by using its anti-inflammatory and antioxidant properties.

주제어

표/그림 (11)

그림 Fig. 1. Effect of white ginseng extracts on cell viability.
그림 Fig. 2. Effect of white ginseng extracts on the production of (A) IL-8 in TNF-α-stimulated HaCaT cells, and (B) TNF-α in LPS-stimulated THP-1 cells.
그림 Fig. 3. Effect of white ginseng extracts on the production of IgE in LPS-stimulated U266B1 cells.
그림 Fig. 4. Inhibition of hyaluronidase activity by white ginseng extracts. Hyaluronidase solution (5 unit/mL) was preincubated with extracts of white ginseng extracts for 60 min at 37℃, and the mixture was added to hyaluronic acid (0.03%) for 45 min at 37℃.
그림 Fig. 5. DPPH free radical scavenging activity white ginseng extracts. Alpha-tocopherol was used as a positive control.
표 Table I. Free radical scavenging activity of alpha-tocopherol
그림 Fig. 6. SOD-like activity of white ginseng extracts.
그림 Fig. 7. Inhibitory effect of white ginseng extracts on mushroom tyrosinase activity.
그림 Fig. 8. Inhibitory effect of white ginseng extracts on (A) tyrosinase activity and (B) melanin synthesis in B16F10 melanoma cells.
그림 Fig. 9. Effects of white ginseng extracts on the (A) cell viability of HDF-n cells and (B) the production of MMP-1.
그림 Fig. 10. Elastase inhibitory activity of white ginseng extracts.

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

³⁸⁾ 따라서 HAase의 활성저해제는 항알레르기 작용과 보습작용을 가지는 것으로 생각되어져 저해 물질이 항염증 약물 및 화장품의 재료로 사용된다.³⁹⁾ 그러므로 본 연구에서는 백삼 추출물에서 HAase저해 효과를 조사하였다. 그 결과, Fig.
^43,44) Melanosome 내에서의 melanin 생성과정은 tyrosine이 tyrosinase의 작용에 의해 DOPA, DOPA quinone으로 산화되고, 이들은 효소의 작용 및 자동산화 반응에 의해 DOPA chrome, indole carboxylic acid, indole quinone류 등으로 대사되어 최종적으로 melanin을 합성한다.^45,46) 백삼 추출물이 B16F10 melanoma 세포의 신호전달경로를 통하여 간접적으로 tyrosinase 활성에 관여하는지를 확인하기 위하여 melanin 합성에 대한 백삼 추출물의 억제작용을 알아보았다. 우선 추출물을 농도 별로 처리하고 48시간이 지난 후 melanin 생성량을 측정하였다.
또한, 화장품으로서의 가치를 평가하기 위하여 백삼 추출물의 미백 및 항노화 활성도 알아보았다. 로션이나 크림 등을 이용한 피부 장벽을 강화시키는 것은 AD를 예방하는 첫걸음이다^.

제안 방법

이전에 본 연구진은 이미 홍삼 물추출물이 사람의 피부 각질 세포에서 항염증 및 항산화 효과가 있다고 밝힌 바가 있다.²⁰⁾ 이번 연구에서 우리는 한국산 백삼의 초고압, 발효 초고압 및 폴리올 추출물을 이용하여 다양한 세포(사람 각질 형성 세포, 단핵구 세포, B 세포) 내에서 아토피 피부염 관련 사이토카인을 측정하고, 항산화 효능을 알아보았다.
²²⁾ 또한 tyrosinase는 피부 색소 침착과 관련 있는 멜라닌 합성과 관련이 있으며,²³⁾ 피부 광노화에 중요한 역할을 담당하고 있는 matrix metalloproteinase-1(MMP-1)은 피부 교원질의 결핍을 초래한다고 알려져 있다.²⁴⁾ 그러므로 본 실험에서는 HAase, elastase, MMP-1, tyrosinase 저해 활성 등도 함께 측정하였다.
MTT assay는 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT tetrazolium을 청자색을 띄는 비수용성의 MTT formazan으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법으로 550 nm 근처에서 최대가 되며, 이는 대사적으로 왕성한세포의 농도를 반영하는 것이다.³⁰⁾ HaCaT, THP-1, U266B1, B16F10 세포에 각각 백삼 추출물을 농도 별로 처리하고 48시간 배양하여 세포의 생존율을 확인하였다. 그 결과, 모든 백삼 추출물은 1mg/mL 이하의 농도에서 80% 이상의 생존률을 보여 세포 생존에 영향을 끼치지 않는 것으로 나왔으며(Fig.
31,32) HaCaT cell에 TNF-α 처리 후 백삼 추출물을 농도 별로 처리한 다음 24시간 배양 후 TNF-α에 의해 활성화된 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 ELISA kit를 이용하여 측정하였다.
37) 사람 B세포인 U266B1 세포에서 LPS(4 μg/mL)에 의해 분비된 IgE의 억제 효과를 확인하기 위해 백삼 추출물을 농도 별로 처리한 후 24시간 동안 배양하여 IgE에 대한 효과를 ELISA kit를 이용하여 확인하였다.
47) 이러한 UVA에 의해 발현이 증가되는 MMP-1에 백삼 추출물이 미치는 영향을 알아보기 전에, 먼저 섬유아세포인 HDF-n에 UVA를 조사한 후, 백삼 추출물의 영향을 MTT assay를 통해 알아보았다. UVA가 조사된 HDF-n 세포에 백삼 추출물을 처리하고, 48시간 배양하여 세포의 생존률을 확인한 결과 1mg/mL 이하의 농도에서는 세포 생존에 큰 영향을 끼치지 않는 것을 알 수 있었다(Fig.
백삼은 수세 후 70% 에탄올로 소독하고 건조한 다음 백삼 초고압 추출(Gin-UHP), 발효 초고압 추출(Gin-UHPF), 그리고 폴리올 추출(Gin-POL)하여 실험에 사용하였다. Gin-UHP는 백삼 분말 100 g과 증류수 1,000 g을 1,000 Mpa, 25℃에서 초고압 추출기(FOOD CIP-70-350-80, Ilshin autoclave, Daejoen, Korea)를 이용하여 24시간 추출하였다. Gin-UHPF는 백삼 분말 100 g과 증류수 1,000 g에 saccharomyces를 1×10⁷ cells/mL로 접종하여 48시간동안 발효하였다.
HAase 저해 활성 - HAase 활성은 hyaluronic acid가 HAase 와 반응하고 남는 hyaluronic acid를 침전시켜 측정하여 HAase 의 활성을 결정하였다.
HaCaT, B16F10, HDF-n세포는 각각 10% fetal bovine serum(FBS, GibcoBRL, Grand Island, USA), 1% penicillin/streptomycin(GibcoBRL) 이 첨가된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM, GibcoBRL) 배지로 배양하였다.
7에 나타내었다. Tyrosinase에 대한 추출물들의 직접적인 영향을 알아보기 위하여 추출물을 다양한 농도로 조제한 후, L-tyrosine을 이용하여 tyrosinase의 활성 억제율을 알아보았다. 각 추출물들은 농도 의존적으로 tyrosinase 억제 활성을 나타내었으며, 특히 Gin-POL은 100 mg/ml의 농도에서 43.
³⁰⁾ HaCaT, THP-1, U266B1, B16F10 세포에 각각 백삼 추출물을 농도 별로 처리하고 48시간 배양하여 세포의 생존율을 확인하였다. 그 결과, 모든 백삼 추출물은 1mg/mL 이하의 농도에서 80% 이상의 생존률을 보여 세포 생존에 영향을 끼치지 않는 것으로 나왔으며(Fig. 1), 이 결과를 바탕으로 다음 단계의 실험을 진행하였다.
에 따라 측정하였다. 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)₃-p-nitroanilide를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 410 nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험 용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 0.
9A). 다음으로 HDF-n에 6.3 J/cm² UVA를 조사하고 추출물을 첨가하여 24시간 동안 배양한 후 MMP-1 발현 저해 효과를 ELISA를 통해 알아보았다. 그 결과 Fig.
Melanoma 세포 내 Tyrosinase 저해 활성 및 Melanin생성량 - Tyrosinase 활성억제제는 피부 내에서 멜라닌 polymer 합성을 효과적으로 저해할 수 있기 때문에 중간 생성단계에서 tyrosinase에 의해 생성되는 반응 산물인 DOPA chrome의 저해 정도를 확인하는 L-DOPA oxidase 방법을 채택하였다. 백삼 추출물이 B16F10 melanoma 세포의 tyrosinase 활성도에 미치는 영향을 알아보기 위해 추출물을 농도 별로 처리하여 배양한 후, 세포를 수거해 tyrosinase 활성을 측정해 보았다. 그 결과 Fig.
백삼 추출물이 염증 관련 사이토카인에 미치는 영향 - 백삼 추출물이 염증성 사이토카인을 억제할 수 있는지 알아보기 위하여 ELISA를 이용하여 IL-8과 TNF-α의 분비량을 측정하였다.
표본은 순천대학교 약학과 천연물의약품 실험실에 보관하고 있다. 백삼은 수세 후 70% 에탄올로 소독하고 건조한 다음 백삼 초고압 추출(Gin-UHP), 발효 초고압 추출(Gin-UHPF), 그리고 폴리올 추출(Gin-POL)하여 실험에 사용하였다. Gin-UHP는 백삼 분말 100 g과 증류수 1,000 g을 1,000 Mpa, 25℃에서 초고압 추출기(FOOD CIP-70-350-80, Ilshin autoclave, Daejoen, Korea)를 이용하여 24시간 추출하였다.
사람 피부각질형성 세포인 HaCaT을 TNF-α(100 ng/mL)로 자극하여 IL-8의 분비량을 측정하였고, 사람 단핵구 세포인 THP-1은 LPS(100 ng/mL)로 자극하여 TNF-α의 분비량을 측정하였다.
^45,46) 백삼 추출물이 B16F10 melanoma 세포의 신호전달경로를 통하여 간접적으로 tyrosinase 활성에 관여하는지를 확인하기 위하여 melanin 합성에 대한 백삼 추출물의 억제작용을 알아보았다. 우선 추출물을 농도 별로 처리하고 48시간이 지난 후 melanin 생성량을 측정하였다. Tyrosinase 활성의 결과와 유사하게 백삼 추출물을 B16F10 세포에 처리했을 때 melanin 생성량이 크게 감소하는 것을 확인할 수 있었다(Fig.
Gin-UHPF는 백삼 분말 100 g과 증류수 1,000 g에 saccharomyces를 1×10⁷ cells/mL로 접종하여 48시간동안 발효하였다. 이후 발효물을 1,000 Mpa, 25℃에서 초고압 추출기(FOOD CIP-70-350-80, Ilshin autoclave)의 조건으로 24시간 추출하였다. Gin-POL은 시료 100 g에 400 g의 1,3-butylene glycol과 증류수 600 g의 혼합액을 넣어 7일간 상온에서 침지하였다.
cells/mL로 분주한 다음 24시간 동안 배양하였다. 자외선 조사 직전에 PBS로 1회 세척하여 배지 내 serum을 제거 후, PBS를 세포가 살짝 잠길 정도로 넣어 준 상태에서 plate 뚜껑을 열고 6.3 J/cm²의 자외선(UVA)을 조사하였다. HDF-n 세포에 UVA를 조사한 후 시료를 농도 별로 처리하여 24시간 동안 배양한다.
전자공여능 측정 - 전자공여능은 Blois의 방법25)을 변형하여 측정하였다.
기질로서 N-succinyl-(L-Ala)₃-p-nitroanilide를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 410 nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험 용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 0.5 mL씩 시험관에 취하고, 50 mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(2.5 U/mL)용액 0.5 mL를 가한 후 기질로 50 mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)₃-p-nitroanilide(0.5 mg/mL)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. Elastase 저해활성은 시료 용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

대상 데이터

louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Bovine serum albumin (BSA)은 VWR life science(Radnor, PA, USA)에서 구입하였다.
HaCaT, B16F10, HDF-n세포는 각각 10% fetal bovine serum(FBS, GibcoBRL, Grand Island, USA), 1% penicillin/streptomycin(GibcoBRL) 이 첨가된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM, GibcoBRL) 배지로 배양하였다. U266B1과 THP-1 세포는 각각 10% fetal bovine serum(FBS, GibcoBRL, Grand Island, USA), 1% penicillin/streptomycin(GibcoBRL)이 첨가된 RPMI-1640(GibcoBRL) 배지로 사용하였고, 모든 세포는 CO₂ incubator(Sanyo, Japan, 5% CO₂, 95% air, 37℃)에서 배양하였다. 세포 생존률을 측정하기 위해3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay를 사용하였다.
사이토카인 분비 변화 측정 - Enzyme-linked immu-nosorbent assay(ELISA) sets(IL-8, TNF-α, IgE)는 BD Pharmingen(UK)에서 구입하였다.
세포 배양 및 생존률 측정 - 사람 각질형성세포(HaCaT), 사람 B세포(U266B1), 마우스 멜라노마 세포(B16F10)는 American type culture collection(ATCC, Rockvill, USA)에서, 사람 단핵구 세포(THP-1)는 한국세포주은행(Seoul, Korea)에서, 사람 피부 아세포(Human dermal fibroblast)인 HDF-n 세포는 Modern Tissue Technology(MTT, Seoul, Korea)에서 분양 받아 사용하였다.
시약 - Folin-Denis reagent, tannic acid, 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), ascorbic acid, pyrogallol, xanthine oxidase, nitro blue tetrazolium(NBT), HAase, hyaluronic acid, L-3,4-dihydroxyl phenylalanine(DOPA), mushroom tyrosinse, porcine pancreas elastase, N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, lipopolysaccharide(LPS)는 Sigma(St. louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.
시험 물질 - 본 실험에 사용한 시료인6년근 백삼은 2009년 10월에 영천에서 구입하였으며, 서울여자대학교 자연과학대학 이종석 교수가 감별하였다.

데이터처리

통계처리 - 결과 통계 처리는 SPSS 10.0을 사용하였으며, 유의차 검증은 student’s t-test에 따라 분석하였다.

이론/모형

(A) HaCaT, (B) THP-1, (C) U266B1 and (D) B16F10 cells were treated with different concentration of white ginseng extracts for 48 h. Cell viability was measured by MTT assay. Viability of untreated control cells was defined as 100% and the values are expressed as the means ± S.
Elastase 저해 활성 측정 - Elastase 저해 활성 측정은 Cannell 등의 방법29)에 따라 측정하였다.
HaCaT, THP-1, U266B1, B16F10 세포에 대한 백삼추출물의 세포 독성 - 백삼 추출물이 세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다.
Melanoma 세포 내 Tyrosinase 저해 활성 및 Melanin생성량 - Tyrosinase 활성억제제는 피부 내에서 멜라닌 polymer 합성을 효과적으로 저해할 수 있기 때문에 중간 생성단계에서 tyrosinase에 의해 생성되는 반응 산물인 DOPA chrome의 저해 정도를 확인하는 L-DOPA oxidase 방법을 채택하였다.
Melanoma 세포에서의 Melanin 생성량 측정 - 피부 melanoma 세포로부터의 melanin 생합성 저해 측정은 Hosoi 등의 방법28)에 따라 측정하였다.
Superoxide Dismutase(SOD) 유사 활성 측정 - SOD유사 활성은 Marklund의 방법26)에 따라 측정하였다.
Tyrosinase 저해 활성 - Tyrosinase 저해 활성 측정은 Yagi 등의 방법27)에 따라 측정하였다.
U266B1과 THP-1 세포는 각각 10% fetal bovine serum(FBS, GibcoBRL, Grand Island, USA), 1% penicillin/streptomycin(GibcoBRL)이 첨가된 RPMI-1640(GibcoBRL) 배지로 사용하였고, 모든 세포는 CO₂ incubator(Sanyo, Japan, 5% CO₂, 95% air, 37℃)에서 배양하였다. 세포 생존률을 측정하기 위해3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay를 사용하였다. 백삼 추출물을 세포에 처리한 뒤, phosphate buffered saline(PBS)에 녹인 MTT dye reagent를 50 μL씩 분주하고 4시간을 배양하였다.

성능/효과

2,3) 시중에는 수삼, 백삼, 홍삼, 흑삼 등 다양한 인삼을 접할 수 있는데, 생삼인 수삼, 수삼의 주근을 벗겨서 말린 백삼, 2 – 3시간 동안 95 – 100℃의 수증기로 한 번 쪄서 말린 홍삼, 홍삼을 아홉 번 찌고 말린 흑삼 등이 있다.
36) IgE가 원인이 되는 아토피 피부염은 전체 아토피 피부염의 약 70 − 80%를 차지하며, 특이 IgE 항체의 농도와 질병의 중증도 사이의 연관성이 보고되고 있다.
40) 백삼 추출물을 다양한 농도에서 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, Fig. 5와 같이 Gin-UHP가 약 5mg/ml 농도에서 EC₅₀을 나타내어 높은 항산화력을 보였다. 하지만, Gin-POL과 Gin-UHPF는 100 mg/ml의 농도에서 EC₅₀를 나타내어 소거 효과가 없는 것으로 분석되었다.
사람의 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인인 melanin은 피부의 광노화나 일광각화증을 억제할 뿐만 아니라, 기미, 주근깨, 검버섯 등의 부분적인 hyperpigmentation을 일으키는 역할을 하고 있다.^43,44) Melanosome 내에서의 melanin 생성과정은 tyrosine이 tyrosinase의 작용에 의해 DOPA, DOPA quinone으로 산화되고, 이들은 효소의 작용 및 자동산화 반응에 의해 DOPA chrome, indole carboxylic acid, indole quinone류 등으로 대사되어 최종적으로 melanin을 합성한다.^45,46) 백삼 추출물이 B16F10 melanoma 세포의 신호전달경로를 통하여 간접적으로 tyrosinase 활성에 관여하는지를 확인하기 위하여 melanin 합성에 대한 백삼 추출물의 억제작용을 알아보았다.
¹¹⁾ 또한 대부분의 AD 환자는 말초 혈액 내 호산구와 혈청 면역글로블린 E(immunoglobulin E, IgE)가 증가되어 있는 상태이다.⁷⁾ AD 환자들에게서 나타나는 IgE의 증가는 TH2 사이토카인의 발현이 증가되었다는 뜻으로 볼 수가 있다.¹²⁾
7) 지난 수십년 간 AD의 발병률은 서서히 증가하고 있는데 이 질환은 TH1/TH2 면역 반응과 큰 연관이 있다.⁸⁾ 항원이 제시되면 원시 T 세포(naïve T cell)은 인터루킨(interleukin, IL)-12, IL-18, 또는 IL-4에 노출되어 TH1이나 TH2 세포로 분화된다.
9) TH1 세포는 염증성 사이토카인인 인터페론 감마(interferon-gamma, IFN-γ)와 종양괴사인자(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)를 분비하며 TH2를 억제하는 반면, TH2 세포는 IL-4, IL-5, IL-13 등을 분비하며 TH1 반응을 억제한다.
6와 같이 나타났다. Gin-UHP의 경우 SOD 유사 활성이 각 추출물의 농도가 증가할수록 농도 의존적으로 증가하였으며, 70 mg/mL에서 ED₅₀를 나타내어, 추출물 중 가장 높은 활성을 보였다. 그러나 Gin-POL와 Gin-UHPF의 경우 큰 SOD 유사 활성을 볼 수가 없었다.
우선 추출물을 농도 별로 처리하고 48시간이 지난 후 melanin 생성량을 측정하였다. Tyrosinase 활성의 결과와 유사하게 백삼 추출물을 B16F10 세포에 처리했을 때 melanin 생성량이 크게 감소하는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 8B). 특히 Gin-UHP와 Gin-UHPF 추출물은 100 μg/ml에서 멜라닌 생성량을 각각 32.
⁴⁷⁾이러한 UVA에 의해 발현이 증가되는 MMP-1에 백삼 추출물이 미치는 영향을 알아보기 전에, 먼저 섬유아세포인 HDF-n에 UVA를 조사한 후, 백삼 추출물의 영향을 MTT assay를 통해 알아보았다. UVA가 조사된 HDF-n 세포에 백삼 추출물을 처리하고, 48시간 배양하여 세포의 생존률을 확인한 결과 1mg/mL 이하의 농도에서는 세포 생존에 큰 영향을 끼치지 않는 것을 알 수 있었다(Fig. 9A). 다음으로 HDF-n에 6.
Tyrosinase에 대한 추출물들의 직접적인 영향을 알아보기 위하여 추출물을 다양한 농도로 조제한 후, L-tyrosine을 이용하여 tyrosinase의 활성 억제율을 알아보았다. 각 추출물들은 농도 의존적으로 tyrosinase 억제 활성을 나타내었으며, 특히 Gin-POL은 100 mg/ml의 농도에서 43.2%를 억제하여 눈에 띄는 저해 활성을 나타내었다.
백삼 추출물이 B16F10 melanoma 세포의 tyrosinase 활성도에 미치는 영향을 알아보기 위해 추출물을 농도 별로 처리하여 배양한 후, 세포를 수거해 tyrosinase 활성을 측정해 보았다. 그 결과 Fig. 8A와 같이 백삼 추출물은 모두 큰 tyrosinase 저해 활성을 보였다. 특히 100 μg/ml의 농도에서, Gin-UHPF는 약 37.
그 결과 Fig. 9B와 같이100 μg/mL의 농도에서 Gin-UHPF와 Gin-UHP는 40% 저해효과를 보였으며, Gin-POL은 10 μg/mL의 농도에서 50%의 MMP-1 저해 활성을 나타내었다.
³⁹⁾ 그러므로 본 연구에서는 백삼 추출물에서 HAase저해 효과를 조사하였다. 그 결과, Fig. 4와 같이 백삼 추출물들은 농도가 증가에 따라 의존적으로HAase의 활성을 저해시켰으며, Gin-POL은 10 mg/mL에서 EC50을 나타내어 뛰어난 HAase저해활성을 나타내었다. 이에 비해, Gin-UHPF는 40 mg/mL, Gin-UHP는 100 mg/mL의 농도에서 EC₅₀을 보여 Gin-POL에 비해 낮은 HAase저해 활성을 보였다.
10과 같이 전반적으로 농도가 증가함에 따라 저해 활성이 증가하였다. 그 중 Gin-POL과 Gin-UHPF는 다른 추출물에 비해 elastase 저해 활성이 높게 나타났다.
특히 추출물 중 Gin-UHP가 아토피 피부염과 관련하여 가장 뛰어난 효과를 보여주었다. 또한 항산화 효과, HAase 저해를 통한 보습 효과, tyrosinase 저해 활성 및 melanin 생성량 측정을 통한 미백 효과, elastase, MMP-1 저해 효과를 통한 항노화 효과를 알아본 결과, 백삼 추출물에서 우수한 효과를 확인할 수 있었으며, 그 중 Gin-POL이 가장 뛰어난 효과를 나타내었다.
2B와 같이 나타났다. 모든 추출물에서 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으며, 특히 1 mg/mL의 농도에서 Gin-UHP는 38%, Gin-UHPF는 30%를 감소시켰다.
³⁷⁾ 사람 B세포인 U266B1 세포에서 LPS(4 μg/mL)에 의해 분비된 IgE의 억제 효과를 확인하기 위해 백삼 추출물을 농도 별로 처리한 후 24시간 동안 배양하여 IgE에 대한 효과를 ELISA kit를 이용하여 확인하였다. 모든 추출물에서 농도의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으며, 1 mg/mL의 농도에서 Gin-UHP는 38%, Gin-UHPF는 36%, Gin-POL은16%를 감소시켰다(Fig. 3).
백삼 추출물의 항염증 효과를 측정한 결과 사람 각질형성 세포와 단핵구 세포에서 각각 염증성 사이토카인인 IL-8과 TNF-α의 분비를 억제하였고, 사람 B세포에서 아토피를 매개하는 면역글로불린인 IgE를 억제하였다.
^31,32) HaCaT cell에 TNF-α 처리 후 백삼 추출물을 농도 별로 처리한 다음 24시간 배양 후 TNF-α에 의해 활성화된 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 ELISA kit를 이용하여 측정하였다. 추출물들이 염증성 사이토카인인 IL-8의 생성 억제에 미치는 영향을 조사 한 결과 Fig. 2A와 같이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으며 1mg/mL의 농도로 처리하였을 때 Gin-UHP, Gin-UHPF, 그리고 Gin-POL이 각각 34%, 17%, 20% 감소시켰다. TNF-α는 LPS를 비롯한 여러 가지의 자극에 반응 하여 monocytes와 macrophages에 의해 방출되는 peptide mediator로 endotoxin의 제거효과를 가지는 가장 중요한 것으로 알려져 있다.
백삼 추출물의 항염증 효과를 측정한 결과 사람 각질형성 세포와 단핵구 세포에서 각각 염증성 사이토카인인 IL-8과 TNF-α의 분비를 억제하였고, 사람 B세포에서 아토피를 매개하는 면역글로불린인 IgE를 억제하였다. 특히 추출물 중 Gin-UHP가 아토피 피부염과 관련하여 가장 뛰어난 효과를 보여주었다. 또한 항산화 효과, HAase 저해를 통한 보습 효과, tyrosinase 저해 활성 및 melanin 생성량 측정을 통한 미백 효과, elastase, MMP-1 저해 효과를 통한 항노화 효과를 알아본 결과, 백삼 추출물에서 우수한 효과를 확인할 수 있었으며, 그 중 Gin-POL이 가장 뛰어난 효과를 나타내었다.

후속연구

¹⁴⁾ Omata 등은 산소/질소 라디칼 균형이 무너졌거나, 산화적 스트레스가 증가되는 현상을 유아기 AD의 병태생리와 연관지어 설명하고, 산화적 스트레스를 억제하는 것이 AD 치료에 도움이 될 것이라고 하였다.¹⁵⁾산화적 스트레스가 AD 발병과 깊은 연관이 있으므로, 생활 환경을 개선하고, 심리적 스트레스를 줄이면서 피부 장벽을 증가시키고, 항산화 보조제를 섭취하는 것이 중요할 것으로 생각된다.¹³⁾
이 결과는 Table I의 양성 대조군을 사용된 alpha-tocopherol이 약 20 μg/ml에서 EC50을 나타낸 것에 비해서 미비하나 백삼 추출물이 alpha-tocopherol이 단일 물질인 것을 감안하여 판단할 필요가 있을 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	아토피 피부염(atopic dermatitis, AD)은 어떤 질환인가?	아토피 피부염(atopic dermatitis, AD)은 만성적이며 재발하기 쉬운 염증성 피부 질환이며, 학교, 가정, 사회 생활에 큰 불편을 겪을 수 있는 등 삶의 질이 저하될 수 있는 질환이다.7) 지난 수십년 간 AD의 발병률은 서서히 증가하고 있는데 이 질환은 TH1/TH2 면역 반응과 큰 연관이 있다.
	인삼의 사용 목적 및 효능은 무엇인가?	Meyer, Araliaceae)은 아시아, 미주, 그리고 유럽 등 세계에서 가장 널리 쓰이는 천연 면역 조절제 중 하나이다.1) 전통적으로 인삼은 스트레스를 완화해주거나, 항암, 항당뇨, 항산화, 동맥경화 및 고혈압 예방 등 여러 목적으로 사용되어 왔다. 인삼의 주요 활성 물질은 진세노사이드(ginsenosides), 다당체(polysaccharides) 등이 알려져 있다.

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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