[논문]위생탕(衛生湯)의 LPS로 유도된 RAW264.7 세포에서 염증매개체에 대한 억제효과

김정희; 김태준; 김이화; 김용민

doi:10.6114/jkood.2019.32.3.048

위생탕(衛生湯)의 LPS로 유도된 RAW264.7 세포에서 염증매개체에 대한 억제효과
Inhibitory Effects of Wisaengtang on Inflammatory Mediators in LPS-induced RAW264.7 Cells 원문보기

韓方眼耳鼻咽喉皮膚科學會誌 = The journal of Korean Medicine Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology, v.32 no.3, 2019년, pp.48 - 57

김정희 (세명대학교 한방바이오융합과학부) , 김태준 (세명대학교 한의과대학 한방안이비인후피부과학교실) , 김이화 (세명대학교 한의학과대학 경락경혈학교실) , 김용민 (세명대학교 한방바이오융합과학부)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : This study examined the inhibitory effects of Wisaengtang(WST) on inflammatory mediators($NF-{\kappa}B$, COX-2, iNOS, IL-6) in cellular inflammatory responses induced by lipopolysaccharide(LPS). Methods : To investigate the cytotoxicity of WST, MTT assay was used. The inhibitory effects of inflammatory mediators were confirmed by real-time PCR and DPPH scavenging activity was measured to confirm the antioxidative effect. Results : When the $NF-{\kappa}B$ mRNA expression was inhibited, the levels of COX-2, iNOS, and IL-6 mRNA in the inflammatory response decreased significantly. iNOS is involved in the production of nitric oxide (NO), and it is confirmed that WST inhibits the expression of iNOS mRNA and thus the production of NO. Conclusions : These results suggest that WST can be a therapeutic substance for oxidation and inflammation through elimination of DPPH free radical and inhibition of $NF-{\kappa}B$ activity.

주제어

표/그림 (9)

표 Table 1. Contents of WST
표 Table 2. Gene Name and Assay ID Number in real-time PCR Analysis
그림 Fig. 1. Effect of WST on Cytotoxic in RAW 264.7 Cells. Con: untreated group; 25, 50, 100, 200 and 400: treated with WST(25, 50, 100, 200 and 400㎍/㎖).
그림 Fig. 2. Effect of WST on NO Production in RAW 264.7 Cells. Con: untreated group; LPS: treated with LPS(1㎍/㎖); 25, 50, 100 and 200: treated with LPS and WST(25, 50, 100, 200㎍/㎖).
그림 Fig. 3. Effect of WST on LPS-induced Expression of COX-2 mRNA. Con: untreated group;LPS: treated with LPS(1㎍/㎖); 25, 50, 100 and 200: treated with LPS and WST(25, 50, 100 and 200㎍/㎖).
그림 Fig. 4. Effect of WST on LPS-induced Expression of iNOS mRNA. Con: untreated group; LPS: treated with LPS(1㎍/㎖); 25, 50, 100 and 200: treated with LPS and WST(25, 50, 100, 200㎍/㎖).
그림 Fig. 5. Effect of WST on LPS-induced Expression of IL-6 mRNA. Con: untreated group; LPS: treated with LPS(1㎍/㎖); 25, 50, 100 and 200: treated with LPS and WST(25, 50, 100, 200㎍/㎖).
그림 Fig. 6. Effect of WST on LPS-induced Expression of NF-κB mRNA. Con: untreated group; LPS: treated with LPS(1㎍/㎖); 25, 50, 100 and 200: treated with LPS and WST(25, 50, 100 and 200㎍/㎖).
그림 Fig. 7. Effect of WST on DPPH Radical Scavenging Test. AC: treated with ascorbic acid. 25, 50, 100 and 200㎍/㎖: treated with various concentrations of WST.

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

衛生湯(Wisaengtang, WST)은 《醫學心悟附錄外科症治方藥》⁹⁾에 수록되어 있는 처방으로 白芷, 連翹, 天花粉, 荊芥, 甘草, 牛蒡子, 防風, 乳香, 沒藥, 金銀花, 貝母, 當歸尾로 구성되어 있고, “解毒消癰淸熱活血止痛初起相宜” 하는 효능으로 염증반응의 억제에 사용가능한 처방으로 생각되나, 현재까지 본 처방에 대한 실험적 연구는 미비한 실정이다. 이에 본 연구에서는 WST가 LPS로 활성된 RAW 264.7 cell에서 cytokine 및 염증매개물질의 변화에 미치는 영향을 살펴보았다.

대상 데이터

본 연구에서 사용된 RAW264.7 cells은 37℃, 5% CO_₂ 조건에서 10% FBS, penicillin(100units/㎖)이 첨가된 DMEM 배지로 배양하였다.
본 연구에서 사용된 WST는 위의 한약재 224g을 정량한 후 heating mantle에 증류수 2000㎖와 함께 투여하고 4시간 가열하여 추출하였다. 추출액을 여과지로 여과한 후 감압 농축하여 100㎖의 농축액을 얻었다.
본 연구에서 사용된 약재는 ㈜HMAX에서 구입하여 사용하였다.

데이터처리

, Chicago IL, USA) 프로그램을 이용하였다. WST의 효과를 판정하기 위한 통계학적 분석은 student t-test를 통하여 비교분석하였다. WST의 농도를 각각 25, 50, 100 및 200㎍/㎖ 처리 했을 때를 대조군과 비교하였다.

이론/모형

RAW 264.7cells에서 WST의 NF-κB, COX-2, iNOS 및 IL-6의 발현 억제효과를 확인하기 위해 real-time PCR 분석을 진행하였다. 5×10⁵ cells/well 의 농도로 6-well plate에 분주한 후 24hrs 동안 37℃, 5% CO_₂ incubator에서 배양하였다.
WST의 세포독성과 생존율을 알아보기 위하여 MTT assay를 실행하였다. RAW264.

성능/효과

1. RAW 264.7 세포에 WST를 처리하여 세포독성을 확인한 결과, RAW 264.7세포에서 WST(25-200㎍/㎖)가 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다.
2. WST는 LPS로 처리한 대조군에 비해 산화질소(NO)의 생성을 유의하게 억제하였고 COX-2, iNOS, IL- 6, NF-κB에 대한 유전자 발현을 농도 의존적으로 감소시켰음을 확인하였다.
3. 라디칼 소거능을 확인하기 위해 대조군인 Ascorbic acid와 비교한 결과, WST가 농도 의존적으로 라디칼 소거능을 가진 것으로 확인되었다.

후속연구

따라서 이러한 WST의 염증 억제효과는 아토피 피부염, 류마티스 관절염 등의 염증성 제반 질환에 활용할 수 있을 것으로 판단된다. 하지만 본 연구에서는 WST가 어떠한 기전으로 항염증 및 항산화 효과를 내는지에 대해서는 밝히지 못하였기에 향후 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	염증은 무엇인가?	염증은 만성 통증, 심혈관 질환, 노화, 자가 면역 질환 등에 대한 인체의 방어기전이다1). 그러나 지속적인염증반응은 만성염증질환 및 종양 등의 유발 원인이 되기도 한다2).
	유해산소는 어떻게 생산되는가 ?	유해산소라 불리는 활성산소는 에너지 대사과정에서생산된다. 생성된 활성산소는 생체에 산소독성을 일으키며 여러 질환의 원인이 되고 있다19,25).
	염증반응을 일으키는 중 염증매개물질들의 형성은 어떻게 되는가?	LPS 등과 같은일차적인 자극에 의해서4) 염증반응이 일어나게 되면 대식세포와 같은 면역세포들은 NF-κB로 부터 시작하여초기 염증반응 유도 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 interleukin(IL), tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)와 염증매개물질인 cyclooxygenase-2(COX-2), inducible NOS(iNOS)등을 분비한다3). 이와 같은 염증매개물질들의 형성은 arachidonic acid가 leukotriene, thromboxane, prostaglandin 등으로 바뀌는 과정 및 nitricoxide(NO)의 대량 생성에 관여하게 되며, 숙주에 치명적 결과를 초래한다고 알려져 있다6). 이 중 NO는 반응성이 높은 물질로 NO synthase(NOS)는 L-arginine으로부터 생성되며 NOS는 constitutive NOS와 iNOS로 나누어진다.

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증