[논문]동애등에의 항혈전 활성

표수진; 원준; 강덕경; 손호용

doi:10.5352/jls.2020.30.4.386

[국내논문] 동애등에의 항혈전 활성
Antithrombotic Activity of Hermetia illucens (Black Soldier Fly) 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.30 no.4, 2020년, pp.386 - 393

표수진 (안동대학교 식품영양학과) , 원준 (안동대학교 식품영양학과) , 강덕경 (안동대학교 식품영양학과) , 손호용 (안동대학교 식품영양학과)

초록
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최근, 환경오염의 심화, 식량·에너지 부족, 지구온난화 문제에 대한 대안으로 곤충산업이 주목받고 있다. 본 연구에서는 환경정화 곤충 및 사료용 곤충으로 각광받고 있는 동애등에(Black soldier fly, Hermetia illicens)의 고부가 가치화를 위해, 생육시기별로 유충(2령~6령), 번데기, 용각 및 성충을 회수하여 이의 에탄올 추출물을 조제하고, 이의 유용성분 함량, 혈액응고저해 및 혈소판 응집저해 활성을 평가하였다. 동애등에 유충은 15일 사육(2령~6령) 동안 25배 무게가 증가하였으며, 흰색-미색-흑갈색으로 변화하였으며, 에탄올 추출수율은 생육시기에 따라 1.0~18.5%로 다양하였다. 추출물의 총 폴리페놀 함량은 용각(17.2 mg/g)에서 가장 높았으며, 번데기, 성충, 2령 순으로 나타났으며, 총 플라보노이드 함량은 번데기(3.4 mg/g), 용각, 6령 순으로 나타났다. 반면 총당 함량은 6령(37.6 mg/g)에서 특이하게 높게 나타났으며, 용각, 번데기, 5령순으로 나타났다. 혈액응고 저해 활성 평가결과, 용각 추출물에서 가장 우수한 트롬빈저해, 내인성 및 외인성 응고 저해를 나타내었으며, 6령 및 번데기 추출물에서도 우수한 항응고 활성을 확인하였다. 혈소판 응집저해 활성 평가에서는 3령, 용각 및 성충 추출물에서 우수한 응집저해능이 나타났으며, 4령 및 5령 추출물은 오히려 혈소판 응집을 촉진함을 확인하였다. 현재까지 동애등에의 항혈전 활성은 보고된 바 없으며, 특히 생육시기별 활성 평가도 보고된 바 없다. 본 연구결과는 동애등애 번데기 및 용각을 이용한 항혈전 소재 개발이 가능함을 제시하고 있다.

Abstract ▼ AI-Helper

Insect industry has been focused as production of food, animal feed, pollinator and for environmental remediation. Hermetia illicens, called as black soldier fly (BSF) is famous as nutritive feed. In this study, to evaluate the antithrombotic activities of BSF, the larvae (instar 2~6), pupae, residue after adult emergence [RAAE] and adult of Hermetia illicens [black soldier fly, BSF] were collected and their ethanol extracts were prepared. Growth of BSF larvae was very rapid and the weight of larvae was increased to 25-folds during 10 days cultivation. The ethanol extraction ratios showed from 1.0% (pupae) to 18.5%(adults). The highest total polyphenol, total flavonoid, and total sugar contents were observed in RAEE (17.2 mg/g), pupae (3.4 mg/g), and instar 6 (37.6 mg/g), suggesting that metabolic changes occur during the life cycle of the BSF. Anti-coagulation assay showed that extracts of RAEE, instar 6 and pupa of BSF significantly inhibited thrombin, prothrombin, and blood coagulation factors. Furthermore, the extracts of RAEE, instar 3 and adult of BSF showed a strong platelet aggregation inhibitory activity. Our results suggest that pupae and RAEE of BSF have potential as antithrombotic agents. This is the first study to provide evidence of the antithrombotic activity of the BSF and bioactivity alterations during its life cycle.

주제어

표/그림 (8)

그림 Fig. 1. Photography of the black soldier fly (Hermetia illucens) used in this study Symbols: L2 ~L6: Larvae stage (instar 2~ instar 6), P: Pupae, R: Residue after adult emerge, and A: Adult.
표 Table 1. The average size and weight of the black soldier fly (Hermetia illucens) used in this study during life cycle
그림 Fig. 2. Extraction yields and component analysis of the ethanol extract of black soldier fly (Hermetia illucens).
표 Table 2. Platelet aggregation inhibitory activities of the ethanol extracts of black soldier fly (Hermetia illucens)
그림 Fig. 3. Effect of the ethanol extracts of black soldier fly (Hermetia illucens) on blood coagulation.
표 Table 3. Hemolytic activity of the extracts of black soldier fly (Hermetia illucens) against human red blood cells
그림 Fig. 4. Diagram of impedance changes during platelet aggregation after addition of aspirin and the extracts of black soldier fly (Hermetia illucens) in whole blood aggregometer.
그림 Fig. 5. Hemolytic activity of amphotericin B and the extracts of instar 2, residue after adult emerge, and adult of black soldier fly (Hermetia illucens) against human red blood cells at different concentrations.

AI 본문요약
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문제 정의

동애등에와 관련된 주요 연구는 주로 생태 특성[18, 22] 및 사료로서 이용성에 집중되어 있으며[12, 13], 최근 유충 및 성충의 항산화 활성[11, 28, 30], 항균 활성[3, 25, 27], 면역증강 활성[2, 16], 미백 활성[33]이 보고되고 있으나, 기타 유용생리 활성에 대한 연구는 미미한 실정이며, 특히 동애등에의 성장환(Life cycle)에서 생육 시기별 성분 변화 및 활성 평가 연구는 전무한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 동애등에의 보다 효율적인 이용을 위해 생육 시기별 유충(2령~6령), 번데기, 용각 및 성충 추출물을 조제하여, 이들의 항혈전 활성을 평가하여 동애등에 추출물이 신규의 식의약품 및 화장품 소재로 개발 가능함을 제시하고자 하였다.

제안 방법

다양한 생육시기에 회수하여 조제한 동애등에 추출물의 항응고 활성을 TT, PT, aPTT를 각각 측정하여 평가하였다. 먼저 활성대조구인 aspirin은 임상에서 항혈전제로 사용하고 있으며, 통상 사용농도인 1.
다양한 생육시기에서 회수한 동애등에 유충(2령~6령), 번데기, 용각 및 성충의 ethanol 추출물을 제조한 후 이의 유용성분을 분석하였으며, 그 결과는 Fig. 2에 나타내었다.
생육 시기별 동애등에 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성은 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100 μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 추출물 100 μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500 rpm)하여 상등액 100 μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO (2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100 (1 mg/ml)및 amphotericin B를 사용하였다.
생육 시기별 동애등에 추출물의 항응고 활성은 thrombin time (TT), prothrombin time (PT) 및 activated partial thromboplastin time (aPTT)을 각각 측정하여 평가하였다[19]. TT는 37℃에서 thrombin (0.

대상 데이터

본 실험에 사용된 동애등에는 경북 문경의 고려청계영농조합에서 2019년 6월~8월에 사육한 동애등에 유충(2령~6령), 번데기 용각 및 성충들을 제공받아 사용하였다(Fig. 1, Table 1).

데이터처리

각각의 분석결과는 3 회 반복한 실험의 평균과 편차로 나타내었다. 실험 결과는 SPSS 23.0 버전을 사용하여 mean ± SD로 나타내었으며, 각군간의 차이는 ANOVA로 분석하였으며, 유의수준은 p<0.05로 하였다.

이론/모형

Total flavonoid (TF) 및 Total polyphenol (TP) 함량 측정은 기존의 보고된 방법[31]에 따라 측정하였으며, 각각 rutin과 tannic acid를 표준시약으로 사용하였다. TF의 경우 시험관에 시료 100 μl와 10% aluminum nitrate 20 μl, 1 M potassium acetate 20 μl, 에탄올 300 μl를 혼합한 이후 증류수 560 ul를 가하여 1시간 동안 방치하였다.
시료의 흡광도는 tannic acid로 표준곡선을 작성하여 TAE (tannic acid equivalent)로 나타내었다. 총당 정량의 경우에는 phenol-sulfuric acid법을 이용하였으며[34], 시료 100 μl에 5% phenol 300 μl와 진한 황산 1.5 ml를 가하고 30℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 490 nm에서 측정하였다. 시료의 흡광도는 sucrose로 표준곡선을 작성하여 SE (sucrose equivalent)로 나타내었다.

성능/효과

48배 증가시켜 우수한 항응고 활성을 확인하였다. 동애등애 추출물(5 mg/ml)의 경우 2령~5령 및 성충 추출물은 유의한 트롬빈 및 프로트롬빈 저해활성이 인정되지 않았으며, 6령, 번데기 및 용각 추출물에서 용매 대조구에 비해 각각 1.38배, 1.25배 및 1.53배의 연장된 TT 및 1.40배, 1.33배 및 1.72배의 연장된 PT를 확인하였다(Fig. 3A, Fig.
7%의 혈소판 응집율을 나타내어 농도 의존적인 강력한 혈소판 응집저해 활성을 나타내었다. 동애등에 추출물 (0.25 mg/ml)의 경우 2령, 6령 및 번데기의 경우 각각 81.6, 87.4 및 83.6%의 응집율을 나타내어 양호한 혈소판 응집저해 능을 나타내었으며, 3령, 용각 및 성충의 경우 66.2, 78.2 및 54.4% 응집율을 나타내어 아스피린 0.125 mg/ml에 비교되는 활성을 우수한 응집 저해활성을 나타내었다(Table 2). 이러한 결과는, 최근 강력한 혈소판 응집저해 활성이 알려진 복분자 [21], , 모링가[24] 및 마가목 열매[19]와 비교되는 우수한 활성으로 동애등에 추출물의 실제적 항혈전제 이용 가능성을 제시 하고 있다.
2D). 따라서 동애등에의 경우 다양한 시기의 유충보다는 번데기, 용각에서 우수한 생리활성이 나타나리라 예상되었다.
이는 6령과 번데기 시기에서는 많은 생리적 변화가 나타나고 있음을 의미하고 있다. 또한 성충과 용각에서는 각각 18.5% 및 2.5% 추출수율을 나타내어 우화시기에도 많은 생리적 변화가 수반됨을 확인되었다(Fig. 2A).
다양한 생육시기에 회수하여 조제한 동애등에 추출물의 항응고 활성을 TT, PT, aPTT를 각각 측정하여 평가하였다. 먼저 활성대조구인 aspirin은 임상에서 항혈전제로 사용하고 있으며, 통상 사용농도인 1.5 mg/ml 농도에서 용매 대조구에 비해 TT, PT, aPTT를 각각 1.83, 1.29 및 1.48배 증가시켜 우수한 항응고 활성을 확인하였다. 동애등애 추출물(5 mg/ml)의 경우 2령~5령 및 성충 추출물은 유의한 트롬빈 및 프로트롬빈 저해활성이 인정되지 않았으며, 6령, 번데기 및 용각 추출물에서 용매 대조구에 비해 각각 1.

후속연구

1 이하로 나타나, 추출물의 TP, TF 및 총당 함량과 혈소판 응집과 직접적인 연관은 인정되지 않았다. 따라서 동일한 동애등에 유충이라도 생육시기에 따라 혈전생성 억제 또는 촉진 활성을 나타낼 수 있음을 확인하였으며, 향후 용각 및 성충 추출물의 관련 물질의 정제 및 기작 연구가 필요하다고 판단된다.
또한 76종의 곤충 추출물 중 트롬빈 저해활성이 우수 하다고 보고[29]된 방아깨비, 왕잠자리, 비단노린재, 끝검은메뚜기보다도 우수한 활성이었다. 상기 곤충 약재들이 대량사육 되지 않아 충분한 양을 확보할 수 없으며 고가임을 고려한다면, 상기 결과는 동애등에 추출물을 이용한 경제성 있는 항응고제 개발이 가능함을 제시하고 있으며, 향후 동애등에 용각 추출물을 이용한 활성물질 분리 및 특성 연구가 필요하다고 판단된다.
이상의 결과는, 환경정화 곤충 및 사료용 곤충으로 대량 사육되고 있는 동애등에의 용각 추출물이 강력한 트롬빈 저해, 프로트롬빈 저해, 혈액응고인자 저해, 혈소판 응집저해를 통한 항혈전 활성을 나타내며, 대량 생산 후 폐기되고 있는 동애등에 번데기 및 용각을 이용한 다양한 식의약품, 화장품 소재로 개발이 필요함을 제시하고 있다. 향후 동애등에 번데기 및 용각으로부터 활성물질의 정제와 관련기작의 연구가 필요하며, 항산화, 항균, 항염증 등의 기존의 식용곤충에서 보고된 유용활성 평가도 필요하다.
이상의 결과는, 환경정화 곤충 및 사료용 곤충으로 대량 사육되고 있는 동애등에의 용각 추출물이 강력한 트롬빈 저해, 프로트롬빈 저해, 혈액응고인자 저해, 혈소판 응집저해를 통한 항혈전 활성을 나타내며, 대량 생산 후 폐기되고 있는 동애등에 번데기 및 용각을 이용한 다양한 식의약품, 화장품 소재로 개발이 필요함을 제시하고 있다. 향후 동애등에 번데기 및 용각으로부터 활성물질의 정제와 관련기작의 연구가 필요하며, 항산화, 항균, 항염증 등의 기존의 식용곤충에서 보고된 유용활성 평가도 필요하다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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