[논문]연교(連翹)와 금은화(金銀花) 에탄올 추출물의 항염증 효능 연구

류효경; 정민재; 최유진; 양승정; 조성희

doi:10.15204/jkobgy.2020.33.3.040

연교(連翹)와 금은화(金銀花) 에탄올 추출물의 항염증 효능 연구
Research of the Anti-inflammatory Effects of Forsythiae Fructus and Lonicerae Flos Ethanol Extracts 원문보기

大韓韓方婦人科學會誌 = The Journal of Korean obstetrics & gynecology, v.33 no.3, 2020년, pp.40 - 59

류효경 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실) , 정민재 (평동한의원) , 최유진 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실) , 양승정 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실) , 조성희 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: The purpose of this study was to investigate the anti-inflammatory effects of ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos in vitro, which has been frequently used in inflammatory diseases. Methods: In this experiment, the anti-inflammatory effects of ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos were evaluated by checking the following substances of LPS-activated Raw264.7 cell: Prostaglandin E2 (PGE2), Nitric oxide (NO), Cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible Nitric oxide synthase (iNOS), Interlukine-1β (IL-1β), Interlukine-6 (IL-6), Tumor necrosis factor-α (TNF-α), mitogen-activated protein kinase (MAPK), Inhibitor of kappa B-α (IκBα), Nuclear factor kappa B (NF-κB). And additionally measured reactive oxygen species (ROS) and free radicals to check the antioxidant effect of ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos which affect inflammatory responses. Results: As a result of measuring anti-inflammatory efficacy, PGE2, NO, IL-1β, IL-6, TNF-α production amounts were reduced in the ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos groups compared with the control group, and decreased the amount of COX-2 mRNA, iNOS mRNA gene expression. Expression of MAPK (ERK, JNK, p38) pathway was decreased. Expression of IκBα was increased and NF-κB was decreased. It is demonstrated that ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos, by reducing NF-κB, regulate the expression of the inflammatory genes and reduce the inflammatory mediators. Ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos also decreased ROS production and free radicals, which shown to have antioxidant efficacy and influence anti-inflammatory effects. Conclusions: These data suggest that ethanol extracts from Forsythia viridissima Lindley's fructus and Lonicera japonica Thunberg's flos can be used to treat various inflammatory diseases.

주제어

표/그림 (14)

표 Table 1. The Sequences of Primers for Real-Time PCR
그림 Fig. 1. HPLC chromatograms of arctigenin.
그림 Fig. 2. HPLC chromatograms of chlorogenic acid.
그림 Fig. 3. Cell viability of FVL and LJT in Raw264.7 cells.
그림 Fig. 4. DPPH radical scavenging activity of FVL and LJT.
그림 Fig. 5. The effects of FVL and LJT on ROS production in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 6. The effects of FVL and LJT on PGE₂ producion in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 7. The effects of FVL and LJT on NO production in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 8. The effects of FVL and LJT on COX-2 mRNA expression in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 9. The effects of FVL and LJT on iNOS mRNA expression in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 10. The effects of FVL and LJT on IL-1β level in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 11. The effects of FVL and LJT on IL-6 level in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 12. The effects of FVL, LJT on TNF-α level in LPS-stimulated Raw264.7 cells.
그림 Fig. 13. The effects of FVL and LJT on ERK, JNK, p38, IκBα and NF-κB in LPS-stimulated Raw264.7 cells.

AI 본문요약
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문제 정의

이에 본 연구에서는 부인과 염증성 질환의 다빈도 천연물인 연교와 금은화의 효능을 관찰하여 염증성 질환에 미치는 영향을 파악하기 위해 연교와 금은화의 에탄올 추출 실험을 통해 항염증 효과를 알아보았다.

제안 방법

따라서 본 연구에서는 같은 淸熱解毒藥으로서 부인과 염증 질환에 다용되는 연교와 금은화의 항염증 효능을 비교해 보고자 70% EtOH로 가열 추출한 연교 에탄올 추출물(이하 FVL)과 금은화 에탄올 추출물(이하 LJT)이 LPS로 유도된 Raw264.7 cell의 ROS, NO, PGE2, Cytokine생성과 COX-2, iNOS 및 염증 관련 전사조절인자들의 발현에 미치는 영향을 통하여 항염증 효능과 이에 대한 기전을 연구 관찰하였다.

대상 데이터

본 실험에 사용한 연교 에탄올 추출물(Forsythia viridissima Lindley(의성개나리)의 과실, 이하 FVL으로 표기), 금은화 에탄올 추출물(Lonicera japonica Thunberg(인동덩굴)의 꽃봉오리, 이하 LJT로 표기)의 연교와 금은화는 각각 충남 금산군, 경남 산청군에서 생산된 것을 사용하였다.
시약은 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(Gibco BRL, U.S.A.), Fetal bovine serum(Gibco BRL, U.S.A.), Penicillin-Streptomycin(Gibco BRL, U.S.A.), Sample loading buffer(BIO-RAD Co., Japan), 30% Acrylamide/Bis Solution 29:1(3.3%C) (BIO-RAD Co., Japan), Skim Milk(BD Co., France), Pierce BCA Proein Assay Kit(Thermo Co., U.S.A.), TEMED(BIO-RAD Co., Japan), Protease inhibitor cocktail (Sigma Co., U.S.A), Phosphatase inhibitor cocktail(Sigma Co., U.S.A), Total RNA prep kit(Intronbio, Korea), ECL solution (Intronbio, Korea), EZ-Cytox(Daeil Lab, Korea), NE-PER™ Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents(Thermo Co., U.S.A.), AccuPower CycleScript RT PreMix(Bioneer, Korea), NO assay kit(Intronbio, Korea), Primer ACTIN, iNOS, COX-2(Bioneer, Korea), PGE2(Prostaglandin E2) ELISA Kit(R&D systems Co., U.S.A.), Luminex Kit(Merck Co., U.S.A.), SYBR Green(Qiagen, Germany), Primary Antibody ERK, JNK, p38, IκBα, NF-κB, Actin(Cell signaling, Danvers, MA), Peroxidase IgG(Immuno Research PA, USA) 등을 사용하였다.

데이터처리

실험 결과는 SPSS 18.0의 ANOVA와 unpaired student's T-test를 사용하여 통계처리를 하였고 p<0.001, p<0.01 및 p<0.05수준에서 그 유의성을 검정하였다.

성능/효과

1. FVL과 LJT는 DPPH radical 소거능을 농도 의존적으로 증가시켰다.
2. FVL과 LJT는 세포 내 ROS 생성량과 NO, PGE₂의 생성량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰다.
3. FVL과 LJT는 iNOS 유전자 발현량과 IL-1β, IL-6, TNF-α의 생성량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰다. COX-2유전자 발현량은 LJT군에서만 유의한 감소를 보였다.
4. FVL과 LJT는 ERK, p38, NF-κB 단백질 발현량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰고 IκBα 단백질 발현량의 경우 대조군에 비해 유의하게 증가시켰다. JNK 단백질 발현량은 LJT에서만 유의적인 감소를 나타냈다.

후속연구

본 연구결과를 바탕으로 항염증, 항산화 작용이 뛰어난 연교와 금은화를 방광염, 질염, 급만성 골반염, 유방의 염증성 질환, 자궁경부염과 같은 폭넓은 부인과 질환에 적극적으로 활용할 수 있을 것으로 사료되며 향후 자세한 항염증 기전의 검증과 심화된 실험연구를 통하여 다양한 질환에도 응용 가능할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	에탄올로 추출한 연교 에탄올 추출물(FVL), 금은화 에탄올 추출물(LJT)의 항염증 효과를 관찰한 결과 얻은 결론은 무엇인가?	1. FVL과 LJT는 DPPH radical 소거능을 농도 의존적으로 증가시켰다. 2. FVL과 LJT는 세포 내 ROS 생성량과 NO, PGE2의 생성량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰다. 3. FVL과 LJT는 iNOS 유전자 발현량과 IL-1β, IL-6, TNF-α의 생성량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰다. COX-2유전자 발현량은 LJT군에서만 유의한 감소를 보였다. 4. FVL과 LJT는 ERK, p38, NF-κB 단백질 발현량을 대조군에 비해 유의하게 감소시켰고 IκBα 단백질 발현량의 경우 대조군에 비해 유의하게 증가시켰다. JNK 단백질 발현량은 LJT에서만 유의적인 감소를 나타냈다.
	비스테로이드성 소염진통제의 부작용은?	염증치료의 상용 약물인 비스테로이드성 소염진통제의 경우 부작용으로 궤양, 출혈을 동반한 위장관 질환이 가장 흔하게 나타나고5), 신경색6), 간질성 신염7) 등 신장질환의 발생도 보고되고 있다. 이러한 소염진통제의 부작용을 줄이기 위한 관련 연구가 활발하게 진행되고 있으며 한의학적으로도 항염증 효과를 가진 단일약재 및 처방에 대한 실험이 다양하게 이루어지고 있다.
	연교 추출물의 효과는 무엇인가?	천연물에 대한 실험연구 중 단일약재로 연교와 금은화 추출물의 연구는 많이 진행되어 있다. 연교 추출물은 항염증 작용을 하며8-10) 항노화11), 항산화12), 멜라닌 생성 억제 및 미백 등의 효과13), 아토피 피부염14) 등의 효과가 보고되었으며 금은화 추출물은 항염증 효능15-7) 항바이러스18), 항균19), 미백20), 아토피 피부염21) 역류성 식도염22), 지방세포 분화 억제23), 항소양24), 항암25,26) 등의 효과가 보고되어 연교와 금은화 추출물이 염증성 질환과 여성피부질환 및 비만에 응용될 수 있음을 시사한다. 더불어 연교는 질염균에 대한 항균효과가 보고되었고27) 금은화를 사용한 처방은 여성 질환 중 대하28, 만성골반염29)의 치료에 응용되고 있으며 금은화와 연교가 함께 들어간 처방은 질염30)과 유선염31)에 활용되는 등 임상에서 여성 질환에 흔히 사용된다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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