[논문]내병성 자포니카 벼 계통 육성과 저항성 유전자 집적효과

김우재; 백만기; 박현수; 이건미; 이창민; 김석만; 조영찬; 서정필; 정오영

doi:10.7740/kjcs.2020.65.4.314

내병성 자포니카 벼 계통 육성과 저항성 유전자 집적효과
Development of Disease-resistant Japonica Rice Varieties and Effects of Pyramiding Resistance Genes 원문보기

Korean journal of crop science = 韓國作物學會誌, v.65 no.4, 2020년, pp.314 - 326

김우재 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 백만기 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 박현수 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 이건미 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 이창민 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 김석만 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 조영찬 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 서정필 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과) , 정오영 (농촌진흥청 국립식량과학원 작물육종과)

초록
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본 연구는 유전자의 확대와 집적을 통해 벼 흰잎마름병균 K3a에 대응하는 저항성 계통을 육성하였고 육성계통에 대한 육종과정, 병 저항성반응을 분석하여 저항성 계통의 기초자료와 재배 효과를 제공하여 우수한 벼 흰잎마름병 저항성 품종 개발에 활용하고자 실험을 수행하였다. 벼 흰잎마름병 저항성 Xa3 유전자를 가지고 있는 중만생 자포니카 품종 황금누리를 반복친으로, Xa21 유전자를 가진 중만생 인디카 근동질유전자계통 IRBB21을 수여친으로 인공교배 후 3번 여교배하여 ABLs21을 얻었다. 생물검정과 분자표지검정을 활용하여 저항성 유전자 Xa3, Xa21이 집적을 확인하였다. ABLs21이 보유한 저항성 유전자는 분자표지 9643.T4 (Xa3), U1/I1 (Xa21)로 PCR 한 결과 모두 증폭되어 저항성 유전자를 가지는 것으로 확인되었다. ABLs21과 모부본의 벼 흰잎마름병 레이스에 대한 저항성 반응은 황금누리, IRBB3가 K1, K2, K3 레이스에 저항성 반응을 보였지만 K3a, K4, K5에는 감수성 반응을 나타냈다. IRBB21은 K1에 감수성 반응이었고 K2~K5에는 저항성 반응이었다. K3a 레이스 균주 접종 시 유묘단계에서 황금누리, IRBB21, ABL21-1, 분얼단계에서 황금누리, IRBB21, 성체단계에서 황금누리가 감수성 반응이었다. ABL21-1은 분얼단계에서 중도저항성을, 성체단계에서 저항성 반응을 나타냈다. K3a 레이스 18개 균주 접종 결과 ABL21-1은 각각의 수여친보다 병반길이와 표준편차가 작아 안정적인 저항성을 보여주었다. 18개 균주 각각의 반복간 병반길이의 유의차는 없어 균주의 병원성은 안정적이었으며 군집분석 결과 HB4032 균주의 병원력이 가장 큰 것으로 나타났다. ABLs21의 분자표지 다형성은 63.2%이며 평균 86.1 cM의 염색체단편이 이입되었다. ABLs21의 Xa21 유전자 부위로 추정되는 곳에 수여친의 염색체단편 이입이 일어났다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study was carried out to develop a resistant variety against the K3a race of bacterial blight, Xanthomonas oryzae pv. oryzae, through expansion and pyramiding of resistance genes. To develop an elite bacterial blight-resistant cultivar, the breeding process and bacterial blight resistance reactions in advanced backcross lines (ABLs) were analyzed. ABLs21 which contain Xa3 and Xa21, were developed by double backcrossing japonica cultivar Hwanggeumnuri, which has bacterial blight resistant Xa3 gene, and indica variety IRBB21, which havs Xa21 gene, followed by disease resistance bioassay and marker-assisted selection. The resistance genes of ABLs21 were amplified by PCR with the molecular markers 9643.T4 (Xa3) and U1/I1 (Xa21). Hwanggeumnuri and IRBB3 showed resistance reactions against K1, K2, and K3 races, and a susceptible reaction against K3a, K4, and K5 races. IRBB21 showed resistance reactions against K2, K3, K3a, K4 and K5 races, and a susceptible reaction against K1 race. Hwanggeumnuri showed susceptible reactions at the seedling, tillering and adult stages (all stages), whereas ABL21-1 showed moderate resistance at the tillering stage. ABL21-1 showed stable resistance against 18 isolates of K3a race, and the lesion length was shorter than that of the donor parents. In cluster analysis, the HB4032 isolate showed the highest pathogenicity among the 18 isolates. The molecular marker polymorphisms and average substituted chromosome segment lengths of ABLs21 were 63.2 % and 86.1 cM, respectively. Insertion of the donor chromosomal segments occurred in the predicted region of the Xa21 gene of ABLs21.

주제어

표/그림 (15)

표 Table 1. List of recurrent/donor parents, ABLs21, and check varieties used in this study.
표 Table 2. DNA markers and restriction enzymes used to detect R-genes (bacterial blight and rice stripe virus).
그림 Fig. 1. Pedigree diagram of advanced backcross lines (ABLs) 21.
표 Table 3. Segregation ratio of the resistance reaction in BC3F2 against bacterial blight K3a race, Xanthomonas oryzae pv. oryzae HB1009.
그림 Fig. 2. Scheme for ABLs21 development by the backcross method.
그림 Fig. 3. PCR amplification of the rice stripe virus resistance gene in ABLs21. N and P denote negative (susceptible variety; IRBB21) and positive (resistant variety; Hwanggeumnuri), respectively. M: DNA size marker, 1: ABL21-1, 2: ABL21-2, 3: ABL21-3, 4: ABL21-4, 5: ABL21-5.
그림 Fig. 4. Confirmation of bacterial blight resistance genes in recurrent/donor parents and ABLs21. Xa3 and Xa21 genes were amplified with primer 9643.T4 (Taqα I, A) and U1/I1 (B), respectively. P3: IRBB3, P21: IRBB21, N: Nampyeong, HN: Hwanggeumnuri, I: IRBB21, 1: ABL21-1, 2: ABL21-2, 3: ABL21-3, 4: ABL21-4, 5: ABL21-5.
표 Table 4. Reaction patterns of recurrent/donor parents, ABLs21, and check varieties to Korean bacterial blight races (K1, K2, K3, K3a, K4, and K5).
그림 Fig. 5. Comparison of resistance reactions between recurrent/ donor parents and ABLs21 at various growth stages (seedling stage, A; tillering stage, B; adult stage, C). **, *, and ns means significantly different at p=0.05, p=0.01, and no significant by t-test, respectively.
표 Table 5. Resistance reaction of recurrent/donor parents, ABLs21, and check varieties against K3a race, Xoo HB1009 at various growing stages.
표 Table 6. Resistance reaction of recurrent/donor parents, advanced backcross line 21-1 with different genotypes against 18 Korean Xanthomonas oryzae pv. oryzae isolates.
표 Table 7. Simple sequence repeat markers with polymorphism between recurrent parents and substituted chromosome segments from donor parent in ABLs21.
그림 Fig. 6. Substituted chromosome segments in ABLs21 of chromosome 1 to 6. Letters A, B, C, D, and E on top are ABL21-1, ABL21-2, ABL21-3, ABL21-4 and ABL21-5, respectively.
표 Table 8. Length of substituted segments of donor (IRBB21) of ABLs21.
그림 Fig. 7. Substituted chromosome segments in ABLs21 of chromosome 7 to 12. Letters A, B, C, D, and E on top are ABL21-1, ABL21-2, ABL21-3, ABL21-4 and ABL21-5, respectively.

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구는 유전자의 확대와 집적을 통해 벼 흰잎마름병에 대응하는 저항성 계통을 육성하고, 육성계통에 대한 주요 농업형질, 벼 흰잎마름병원균 저항성반응, 염색체 단편 이입을 분석하여 저항성 품종 육종에 대한 기초자료를 제공하고자 하였다.
본 연구는 유전자의 확대와 집적을 통해 벼 흰잎마름병균 K3a에 대응하는 저항성 계통을 육성하였고 육성계통에 대한 육종과정, 병 저항성반응을 분석하여 저항성 계통의 기초자료와 재배 효과를 제공하여 우수한 벼 흰잎마름병 저항성 품종 개발에 활용하고자 실험을 수행하였다. 벼 흰잎마름병 저항성 Xa3 유전자를 가지고 있는 중만생 자포니카 품종 황금누리를 반복친으로, Xa21 유전자를 가진 중만생 인디카 근동질유전자계통 IRBB21을 수여친으로 인공교배 후 3번 여교배하여 ABLs21을 얻었다.
따라서 병 전파 지연, 병원균 집단의 안정화 및 단일 저항성 유전자 품종의 지속성을 위해 다양한 저항성 유전자를 가진 품종을 육성하고 재배하여야 할 것으로 보인다. 이에 맞춰 본 연구는 저항성 유전자 확대를 위해 저항성 유전자가 다양한 인디카와의 원연교배를 수행하고 전통육종과 분자육종을 활용하여 우리나라에 적합한 자포니카 품종을 개발하는데 노력하였다.

가설 설정

z) All isolates infringe the Xa3 gene.

제안 방법

1.5~2% agarose gel에서 PCR 산물을 5 μl를 로딩하고 100 V 50~100분간 전기영동하여 EtBr로 염색한 후 UV transilluminator (MiniBIS pro, DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Israel)로 유전자형을 판정하였다.
, 2002). ABLs21 유전체에 수여친 IRBB21의 염색체 단편 이입의 다형성을 동정하기 위해 19,480개 SSR 마커 중에서 평균 7.5 cM 간격으로 배치될 수 있게 12개의 염색체 분포 위치를 알고 있는 211개의 SSR 마커를 재선별하였다. 모본(반복친) 황금누리와 부본(수여친) IRBB21의 DNA를 211개의 SSR 마커로 PCR을 수행하였다.
벼 흰잎마름병 K3a 레이스 접종과 반복친과 비슷한 형질 선발을 계속 실시하여 BC₃F₃8계통에서 계통당 5개체씩 선발하여 40계통을 BC₃F₄로 전개하였다. BC₃F₄계통에서 다시 이삭과 초형이 우수한 개체를 계통당 5개체씩선발하여 BC₃F₅50계통을 전개하였다. 또한 BC₃F₂~BC₃F₅에서는 생물검정과 동시에 잎도열병 밭못자리검정을 수행하여 도열병에 감수성인 개체는 도태시켰고 BC₃F₅에서는 줄무늬잎마름병 분자표지검정을 통해 저항성 유전자 Stv-bⁱ의 보유 여부를 확인하였다.
Genomic-DNA는 계통별 파종 후 2~3엽기의 어린잎을 1 cm 크기로 잘라 마쇄한 후 Biosprint 96 (Qiagen Co., Germany) DNA plant kit를 활용하여 추출하였고 분광광도계(Biospecnano, Shimadzu Co., Japan)으로 농도를 측정하여 10 ng/ul로 조절하여 사용하였다. 저항성 유전자를 확인하기 위해 연관된 마커를 사용하였다(Table 2).
PCR (Bio-Rad, PTC-200 Thermocycler, Germany) 증폭 조건은 U1/I1는 pre-denaturation 95°C 4분간 1회, denaturation 95°C 30초, annealing 65°C (10603. T10Dw)/ 56°C (U1/I1) 30초, extension 72°C 1분을 35회, final-extension 72°C 10분을 하였다.
PCR (Bio-Rad, PTC-200 Thermocycler, Germany) 증폭 조건은 pre-denaturation 94°C 5분간 1회, denaturation 94°C 30초, annealing 60°C 30초, extension 72°C 1분을 35회, final-extension 72°C 5분을 하였다.
UK)로 병원균 농도를 10⁸~10⁹cells/ml로 조정하여 접종에 사용하였다. 계통육성시험과 생산력검정시험 특성검정은 3반복으로 HB1009 (K3a) 균주를 최고분얼기에 잎 선단 5 cm 부위를 가위절엽 접종하고 3주 후에 가장 긴 병반을 보인 3개 엽의 병반장을 측정하여 평균 병반장 길이가 1 cm 이하는 고도저항성(HR; highly resistant), 5 cm 미만은 저항성(R; resistant), 5~9 cm는 중도저항성(MR; moderately resistant), 10 cm 이상은 감수성(S; susceptible)으로 구분하였다(RDA, 2012).
BC₃F₄계통에서 다시 이삭과 초형이 우수한 개체를 계통당 5개체씩선발하여 BC₃F₅50계통을 전개하였다. 또한 BC₃F₂~BC₃F₅에서는 생물검정과 동시에 잎도열병 밭못자리검정을 수행하여 도열병에 감수성인 개체는 도태시켰고 BC₃F₅에서는 줄무늬잎마름병 분자표지검정을 통해 저항성 유전자 Stv-bⁱ의 보유 여부를 확인하였다. 최종적으로 BC₃F₆에서 BC₃F₆5계통(ABL21-1, ABL21-2, ABL21-3, ABL21-4, ABL21-5) 을 선발하였다(Fig.
Marker-assisted selection (MAS)를 활용하여 저항성 계통을 육성하기 위해 탐침하고자 하는 저항성 유전자의 선발이 용이한 분자표지를 선발하였다. 모본 황금누리와 부본 IRBB21의 벼 흰잎마름병 저항성 유전자는 기존의 연구를 통해 이미 알려져 있어 해당 분자표지의 PCR을 통해 확인하였다.
모본(반복친) 황금누리와 벼 흰잎마름병에 강한 저항성을 가진 부본(수여친) IRBB21을 교배하여 육성한 ABLs21에 대하여 부본(수여친) IRBB21의 염색체단편의 이입 정도를 알기 위해 유전적 배경 분석을 수행하였다. 총 211개의 SSR 분자표지를 선발하여 벼 전체 게놈의 1504.
5 cM 간격으로 배치될 수 있게 12개의 염색체 분포 위치를 알고 있는 211개의 SSR 마커를 재선별하였다. 모본(반복친) 황금누리와 부본(수여친) IRBB21의 DNA를 211개의 SSR 마커로 PCR을 수행하였다. PCR (Bio-Rad, PTC-200 Thermocycler, Germany) 증폭 조건은 pre-denaturation 94°C 5분간 1회, denaturation 94°C 30초, annealing 60°C 30초, extension 72°C 1분을 35회, final-extension 72°C 5분을 하였다.
선발한 개체 중 자포니카 품종 선발을 위해 인디카의 특징인 장립형과 심복백이 있는 계통을 도태시키고 이삭, 초형, 간장, 수장, 분얼 각도, 출수기 등이 모본(반복친)과 유사한 BC₃F₃55개체를 전개하였다. 벼 흰잎마름병 K3a 레이스 접종과 반복친과 비슷한 형질 선발을 계속 실시하여 BC₃F₃8계통에서 계통당 5개체씩 선발하여 40계통을 BC₃F₄로 전개하였다. BC₃F₄계통에서 다시 이삭과 초형이 우수한 개체를 계통당 5개체씩선발하여 BC₃F₅50계통을 전개하였다.
벼 흰잎마름병(K1·K2·K3)과 줄무늬잎마름병에 강한 중만생종 고품질 품종인 황금누리를 모본(반복친)으로 하고 저항성 유전자 Xa21을 가진 IRBB21을 부본(수여친)으로 교잡하여 F1 HR28291 (황금누리/IRBB21)을 육성하였다(Fig. 1).
벼멸구 유묘기 저항성 검정은 재료를 파종하고 4~5엽기에 유묘 개체 당 2~3령의 벼멸구 유충을 10마리씩 접종하였다. 충 접종 후 감수성 품종인 남평벼가 완전히 고사한 시점에 검정재료의 저항성 정도를 전 개체 중 0~20% 고사하면 강(R), 30~50% 고사하면 중강(MR), 60~70% 고사하면 중약(MS), 80~100% 고사하면 약(S)으로 조사 판정하였다(RDA, 2012).
, 2000). 본 연구에서 육성된 ABLs21은 자포니카/인디카 원연교배로 반복친자포니카 유전적 배경에 인디카 수여친의 염색체단편이 이입된 계통으로 유전분석의 기초자료로 활용하기 위해 211개의 SSR 분자표지(McCouch et al., 2002; IRMI, 2003)를 이용하여 ABLs21의 부본(수여친) IRBB21의 염색체단편의 이입 정도를 알아보았다. 여교배 육종법으로 육성된 ABLs21은 반복친의 유전적 배경이 여교배 횟수로 볼 때 87.
양성된 F₁을 다시 황금누리와 교배하여 BC₁F₁을 만든 후 우리나라 벼 흰잎마름병원균 K3a (HB1009) 레이스로 접종하여 저항성 반응을 나타낸 계통을 선발하였다. 선발된 BC₁F₁을 다시 황금누리로 교배하여 BC₂F₁을 만들고 K3a 레이스로 접종하여 저항성 검정하였다. 황금누리/IRBB21 후대는 이 과정을 한번 더 반복하여 BC₃F₁을 만들었다.
BC₃F₂에서 987개체의 벼 흰잎마름병 저항성과 감수성 반응은 저항성 752개체, 감수성 235개체가 측정되었고 적합도 검정 결과 표현형 분리가 기대분리비 3 : 1에 일치함을 보였다(Table 3). 선발한 개체 중 자포니카 품종 선발을 위해 인디카의 특징인 장립형과 심복백이 있는 계통을 도태시키고 이삭, 초형, 간장, 수장, 분얼 각도, 출수기 등이 모본(반복친)과 유사한 BC₃F₃55개체를 전개하였다. 벼 흰잎마름병 K3a 레이스 접종과 반복친과 비슷한 형질 선발을 계속 실시하여 BC₃F₃8계통에서 계통당 5개체씩 선발하여 40계통을 BC₃F₄로 전개하였다.
longistaminata를 4번 여교배하여 육성된 근동질유전자계통 IRBB21을 모부본으로 인공교배하여 F₁을 각각 양성하였다. 양성된 F₁을 다시 황금누리와 교배하여 BC₁F₁을 만든 후 우리나라 벼 흰잎마름병원균 K3a (HB1009) 레이스로 접종하여 저항성 반응을 나타낸 계통을 선발하였다. 선발된 BC₁F₁을 다시 황금누리로 교배하여 BC₂F₁을 만들고 K3a 레이스로 접종하여 저항성 검정하였다.
하지만 기존 연구와 본 실험에서 사용한 SSR 마커세트가 상이하고 재배환경이 다르며 각각 5개의 고정된 계통의 농업적 특성을 조사한 것이기에 표현형 분산에 편의가 발생할 수 있어 ABLs21의 염색체단편이입 분석을 가지고 환경변이의 영향이 큰 QTL의 직접적인 비교는 어려울 것으로 판단하였다. 이들 ABLs의 농업형질과 연관된 QTL에 대한 해석은 후대계통 F₂ 분석이 수반된 실험을 통해 이뤄져야 할 것이라 생각하며 본 실험에서는 전체 게놈에 단편이 들어간 전체적인 그림을 그리는 단계까지 수행 하였다. ABLs21에서 Xa21 유전자 부위라 추측되는 RM5997 부위는 수여친 IRBB21에서 온 것으로 나타난 반면 Xa3 유전자 추측 부위인 RM7170 영역은 다형성이 나타나지 않았다.
황금누리/IRBB21 후대는 이 과정을 한번 더 반복하여 BC₃F₁을 만들었다. 이후 세대진전하여 BC₃F₂세대에서는 집단선발법을, BC₃F₃ 이후부터는 계통육종법으로 선발하였고 내병충성 특성검정은 벼 흰잎마름병검정(K3a 레이스), 도열병 밭못자리검정, 벼멸구 유묘검정을 실시하였다. BC₃F₅세대에서는 벼 흰잎마름병 저항성 유전자 Xa3·Xa21, 줄무늬잎마름병 저항성 유전자 Stv-bⁱ 보유여부를 분자표지로 확인하였다.
잎도열병 밭못자리 검정은 전주, 상주, 운봉, 철원, 계화 5개지역에서 실시하여 잎도열병에 매우 약한 계통은 도태시켰다.
증폭 PCR 산물은 6~40% polyacrylamide gel에 4 μl를 로딩하고 100 V 130분간 전기영동하여 EtBr로 염색한 후 UV transilluminator (MiniBIS pro, DNR Bio-Imaging Systems Ltd., Israel)로 유전자형을 판정하였다.
모본(반복친) 황금누리와 벼 흰잎마름병에 강한 저항성을 가진 부본(수여친) IRBB21을 교배하여 육성한 ABLs21에 대하여 부본(수여친) IRBB21의 염색체단편의 이입 정도를 알기 위해 유전적 배경 분석을 수행하였다. 총 211개의 SSR 분자표지를 선발하여 벼 전체 게놈의 1504.6 cM을 평균 간격은 7.5 cM으로 커버할 수 있는 물리지도를 만들었다. 211개 SSR 분자표지를 PCR 한 후 다형성 분석 결과 135개의 SSR 분자표지가 다형성을 나타냈으며 비율은 63.
벼멸구 유묘기 저항성 검정은 재료를 파종하고 4~5엽기에 유묘 개체 당 2~3령의 벼멸구 유충을 10마리씩 접종하였다. 충 접종 후 감수성 품종인 남평벼가 완전히 고사한 시점에 검정재료의 저항성 정도를 전 개체 중 0~20% 고사하면 강(R), 30~50% 고사하면 중강(MR), 60~70% 고사하면 중약(MS), 80~100% 고사하면 약(S)으로 조사 판정하였다(RDA, 2012).

대상 데이터

1). F₁을 황금누리와 여교배하고 BC₁F₁에서 K3a 레이스를 접종하여 저항성 반응을 가진 BC₁F₁개체를 선발하였다. 이 과정을 2번 반복하여 저항성 반응을 가지며 외관 표현형이 우수한 BC₃F₁20개체를 선발하였다.
www.gramene.org에서 19,480개의 simple sequence repeat (SSR) 마커정보를 수집하였다(www.gramene.org/markers/ microsat, McCouch et al., 2002). ABLs21 유전체에 수여친 IRBB21의 염색체 단편 이입의 다형성을 동정하기 위해 19,480개 SSR 마커 중에서 평균 7.
벼 흰잎마름병 저항성 실험에 사용한 균주는 국립식량과학원에서 분양받은 우리나라 벼 흰잎마름병 균주 HB1013 (K1), HB1014 (K2), HB1015 (K3), HB1009 (K3a), HB3079 (K4), HB4044 (K5)를 PS (Potato Sucrose) 액체배지에 28°C 항온진탕기로 3일간 배양한 후 멸균수로 희석하여 분광광도계(Ultrospec 4300 pro. UK)로 병원균 농도를 108~109cells/ml로 조정하여 접종에 사용하였다.
50계통을 생물검정과 분자표지를 사용하여 저항성 유전자 보유 여부를 확인한 결과 모든 계통에서 Xa3와 Xa21 유전자가 검출됐으며 이들 중 외관 표현형질과 미질이 나쁘며 이형접합계통은 도태하였다. 벼흰잎마름병 저항성 비교품종으로 저항성 유전자가 없는 남평과 저항성 유전자 Xa3와 xa5를 가진 안백을 사용하였다.
(2009)은 K3a 레이스 18개 균주 접종 시 Xa4 단일 유전자는 8개 균주에, xa5+Xa21 조합은 14개 균주에, Xa4+ xa5+Xa21 조합은 18개 균주에 저항성을 나타낸다고 하였으며 Park (2016)은 Xa3+Xa21, xa5+Xa21 조합보다는 세 개의 유전자가 집적된 Xa3+xa5+Xa21 조합이 더 강한 저항성 반응을 나타낸다고 하였다. 본 연구의 저항성 그룹에서 병반 길이는 짧은 순서로 ABL21-1 (Xa3+Xa21, 1.84), IRBB21(Xa21, 2.05), 안백(Xa3+xa5, 2.18) 이었다. 하지만 두 개의 유전자를 가진 안백 보다는 단일 유전자의 IRBB21의 병반 길이가 더 짧았으며 표준편차도 작은 이유는 안백의 Xa3+ xa5 집적효과보다 Xa21 유전자가 가진 저항성 능력이 보다 높았던 것으로 추측되며 ABL21-1은 Xa21+Xa3 유전자 집적이 상호보완적인 저항성을 나타내 전체적인 저항성 수준을 끌어올린 것으로 생각된다(Suh et al.
여교배를 통한 진전 된 내병성벼 계통(Advanced Backcross Lines; ABLs) ABLs21을 육성하기 위해 중만생종이며 Xa3 유전자를 보유한 고품질 품종 황금누리와 IR24에 Xa21 유전자를 보유한 O. longistaminata를 4번 여교배하여 육성된 근동질유전자계통 IRBB21을 모부본으로 인공교배하여 F₁을 각각 양성하였다. 양성된 F₁을 다시 황금누리와 교배하여 BC₁F₁을 만든 후 우리나라 벼 흰잎마름병원균 K3a (HB1009) 레이스로 접종하여 저항성 반응을 나타낸 계통을 선발하였다.
F₁을 황금누리와 여교배하고 BC₁F₁에서 K3a 레이스를 접종하여 저항성 반응을 가진 BC₁F₁개체를 선발하였다. 이 과정을 2번 반복하여 저항성 반응을 가지며 외관 표현형이 우수한 BC₃F₁20개체를 선발하였다. BC₃F₁에서 Xa21 유전자를 검출하는 U1/I1 마커를 사용하여 분자표지검정(Markerassisted selection; MAS)도 함께 수행하였다.
BC₃F₁에서 Xa21 유전자를 검출하는 U1/I1 마커를 사용하여 분자표지검정(Markerassisted selection; MAS)도 함께 수행하였다. 저항성 반응을 나타내는 BC₃F₁20개체에서 개체군당 60개체씩 총 1,200 개체를 이앙하였고, 그 중 K3a 레이스(HB1009)에 저항성이며 출수기가 중만생종이고 이삭과 초형이 우수한 BC₃F₂120개체를 선발하였다. BC₃F₂에서 987개체의 벼 흰잎마름병 저항성과 감수성 반응은 저항성 752개체, 감수성 235개체가 측정되었고 적합도 검정 결과 표현형 분리가 기대분리비 3 : 1에 일치함을 보였다(Table 3).
, Japan)으로 농도를 측정하여 10 ng/ul로 조절하여 사용하였다. 저항성 유전자를 확인하기 위해 연관된 마커를 사용하였다(Table 2). 벼 흰잎마름병 저항성 유전자 Xa3는 9643.
BC₃F₅세대에서는 벼 흰잎마름병 저항성 유전자 Xa3·Xa21, 줄무늬잎마름병 저항성 유전자 Stv-bⁱ 보유여부를 분자표지로 확인하였다. 최종적으로 BC₃F₆세대에서 5계통을 선발하였다(Table 1).
또한 BC₃F₂~BC₃F₅에서는 생물검정과 동시에 잎도열병 밭못자리검정을 수행하여 도열병에 감수성인 개체는 도태시켰고 BC₃F₅에서는 줄무늬잎마름병 분자표지검정을 통해 저항성 유전자 Stv-bⁱ의 보유 여부를 확인하였다. 최종적으로 BC₃F₆에서 BC₃F₆5계통(ABL21-1, ABL21-2, ABL21-3, ABL21-4, ABL21-5) 을 선발하였다(Fig. 2).

데이터처리

이 과정을 2번 반복하여 저항성 반응을 가지며 외관 표현형이 우수한 BC₃F₁20개체를 선발하였다. BC₃F₁에서 Xa21 유전자를 검출하는 U1/I1 마커를 사용하여 분자표지검정(Markerassisted selection; MAS)도 함께 수행하였다. 저항성 반응을 나타내는 BC₃F₁20개체에서 개체군당 60개체씩 총 1,200 개체를 이앙하였고, 그 중 K3a 레이스(HB1009)에 저항성이며 출수기가 중만생종이고 이삭과 초형이 우수한 BC₃F₂120개체를 선발하였다.
본 연구에 사용된 모든 통계분석은 R (ver. 3.3.2)과 Excel (ver. 2016)를 사용하였으며 분산분석의 다중 평균간과 두 평균간의 유의성은 1%, 5% 수준으로 각각 Least Significant Difference (LSD), t-test를 수행하여 분석하였다. SSR 마커사이의 염색체 단편 이입의 분포를 표현하기 위해 MapChart (ver.

이론/모형

2016)를 사용하였으며 분산분석의 다중 평균간과 두 평균간의 유의성은 1%, 5% 수준으로 각각 Least Significant Difference (LSD), t-test를 수행하여 분석하였다. SSR 마커사이의 염색체 단편 이입의 분포를 표현하기 위해 MapChart (ver. 2.2)를 이용하였다.

성능/효과

2% 였다. 12개 염색체 중 염색체 2번이 50%로 분자표지 다형성이 가장 낮았으며 염색체 7번이 84.2%로 가장 높은 분자표지 다형성을 보였다. ABL21-1은 염색체 9번에서 16.
K3a 레이스 18개 균주 접종 결과 ABL21-1은 각각의 수여친보다 병반길이와 표준편차가 작아 안정적인 저항성을 보여주었다. 18개 균주 각각의 반복간 병반길이의 유의차는 없어 균주의 병원성은 안정적이었으며 군집분석 결과 HB4032 균주의 병원력이 가장 큰 것으로 나타났다. ABLs21의 분자표지 다형성은 63.
5 cM으로 커버할 수 있는 물리지도를 만들었다. 211개 SSR 분자표지를 PCR 한 후 다형성 분석 결과 135개의 SSR 분자표지가 다형성을 나타냈으며 비율은 63.2% 였다. 12개 염색체 중 염색체 2번이 50%로 분자표지 다형성이 가장 낮았으며 염색체 7번이 84.
저항성 반응을 나타내는 BC₃F₁20개체에서 개체군당 60개체씩 총 1,200 개체를 이앙하였고, 그 중 K3a 레이스(HB1009)에 저항성이며 출수기가 중만생종이고 이삭과 초형이 우수한 BC₃F₂120개체를 선발하였다. BC₃F₂에서 987개체의 벼 흰잎마름병 저항성과 감수성 반응은 저항성 752개체, 감수성 235개체가 측정되었고 적합도 검정 결과 표현형 분리가 기대분리비 3 : 1에 일치함을 보였다(Table 3). 선발한 개체 중 자포니카 품종 선발을 위해 인디카의 특징인 장립형과 심복백이 있는 계통을 도태시키고 이삭, 초형, 간장, 수장, 분얼 각도, 출수기 등이 모본(반복친)과 유사한 BC₃F₃55개체를 전개하였다.
BC3F2에서 BC3F4까지는 생물검정으로만 선발을 하였고 전개한 BC3F5 50계통을 생물검정과 분자표지를 사용하여 저항성 유전자 보유 여부를 확인한 결과 모든 계통에서 Xa3와 Xa21 유전자가 검출됐으며 이들 중 외관 표현형질과 미질이 나쁘며 이형접합계통은 도태하였다.
ABL21-1은 분얼단계에서 중도저항성을, 성체단계에서 저항성 반응을 나타냈다. K3a 레이스 18개 균주 접종 결과 ABL21-1은 각각의 수여친보다 병반길이와 표준편차가 작아 안정적인 저항성을 보여주었다. 18개 균주 각각의 반복간 병반길이의 유의차는 없어 균주의 병원성은 안정적이었으며 군집분석 결과 HB4032 균주의 병원력이 가장 큰 것으로 나타났다.
IRBB21 은 K1에 감수성 반응이었고 K2~K5에는 저항성 반응이었다. K3a 레이스 균주 접종 시 유묘단계에서 황금누리, IRBB21, ABL21-1, 분얼단계에서 황금누리, IRBB21, 성체단계에서 황금누리가 감수성 반응이었다. ABL21-1은 분얼단계에서 중도저항성을, 성체단계에서 저항성 반응을 나타냈다.
K3a 레이스의 18개 벼 흰잎마름병 균주에 대한 ABL21-1의 저항성 반응 검정결과 황금누리에서도 15 cm 이상의 병반 길이를 보이며 18개 모든 균주에 대해 감수성 반응을 나타냈다. 부본인 IRBB21과 ABL21-1은 18개 균주에 대해 강한 저항성 반응을 보였다.
분산분석 결과 ABL21-1은 부본 IRBB21과 같은 그룹을 형성해 유의차가 인정되었다. T-test 결과 ABL21-1과 황금누리, IRBB21 간에는 유의차가 인정되었다(Table 5, Fig. 5).
분산분석 결과 ABL21-1은 황금누리, IRBB21과 서로 다른 그룹을 형성해 유의차는 인정되었다. T-test 결과 ABL21-1은 IRBB21과 유의차가 인정되었다. 파종 후 60~65일 사이 분얼단계에서도 유묘단계와 마찬가지로 황금누리, IRBB21은 병반길이 5 cm 이상의 감수성 반응을 나타냈다.
ABLs21이 보유한 저항성 유전자는 분자표지 9643.T4 (Xa3), U1/I1 (Xa21)로 PCR 한 결과 모두 증폭되어 저항성 유전자를 가지는 것으로 확인되었다. ABLs21과 모부본의 벼 흰잎마름병 레이스에 대한 저항성 반응은 황금누리, IRBB3가 K1, K2, K3 레이스에 저항성 반응을 보였지만 K3a, K4, K5에는 감수성 반응을 나타냈다.
T4로 PCR 후 제한 효소(Taqα I) 처리하여 350 bp에서 IRBB3와 똑같은 밴드로 증폭한 결과를 얻었다.
, Israel)로 유전자형을 판정하였다. 다형성 판정기준은 ABLs21이 수여친과 같은 밴드를 보이면 수여친 염색체 단편 100%, 반복친과 같은 밴드를 보이면 수여친 염색체 단편 0% 및 반복친 염색체 단편 100%, 반복친, 수여친 밴드와 둘 다 다른 밴드이거나 모두 같으면 다형성이 없는 것으로 판정하였다.
벼 줄무늬잎마름병 저항성 검정 결과 ABLs21의 모본인 황금누리는 벼 줄무늬잎마름병에 저항성을 나타내며 저항성 유전자인 Stv-bⁱ을 가지고 있었다. 이에 ABLs에 대해서도 BC₃F₅세대에 저항성 유전자 분자표지 검정을 탐침 마커 Indel7으로 PCR 한 결과 ABLs21 모두 Stv-bⁱ유전자를 가지고 있는 것으로 확인됐다.
벼멸구 유묘 저항성 결과 ABLs21, 황금누리, IRBB21 모두 벼멸구에는 저항성이 없는 것으로 나타났다.
ABL21-1과 모부본에서도 특정 균주가 검정 계통 간 동일한 침해 경향을 보이진 않았다. 병반길이 평균값의 분산분석 결과 감수성인 남평과 황금누리는 유의차가 인정되었으나 저항성인 ABL21-1, IRBB21은 유의차가 인정되지 않았다(Table 6).
하지만 Zhang & Mew (1985, 1989)는 성체저항성이 모든 레이스와 품종에 적용되는 것이라고 볼 수 없다고 하였다. 본 실험에서도 IRBB21은 유묘기와 분얼기에 감수성 반응을 보였고 성체기인 100일 이후에는 저항성 반응을 보였다. 하지만 ABL21-1은 유묘기에 감수성 반응이지만 분얼기에는 중도저항성을 보여 다른 반응을 보였다.
K3a 레이스의 18개 벼 흰잎마름병 균주에 대한 ABL21-1의 저항성 반응 검정결과 황금누리에서도 15 cm 이상의 병반 길이를 보이며 18개 모든 균주에 대해 감수성 반응을 나타냈다. 부본인 IRBB21과 ABL21-1은 18개 균주에 대해 강한 저항성 반응을 보였다. ABL21-1도 부본인 IRBB21의 형질을 이어 받은 것으로 나타났다.
생육단계별 벼 흰잎마름병 K3a 레이스 저항성 반응을 보면 K3a 레이스에 침해 된다고 보고되어 있는 Xa3 유전자 보유 모본 황금누리는 파종 후 30~35일 사이 유묘단계에서 감수성 반응을 보였다. 반면 Xa21을 가진 IRBB21은 유묘 단계에서는 7.
, 2002; IRMI, 2003)를 이용하여 ABLs21의 부본(수여친) IRBB21의 염색체단편의 이입 정도를 알아보았다. 여교배 육종법으로 육성된 ABLs21은 반복친의 유전적 배경이 여교배 횟수로 볼 때 87.5% 이상으로 보고 수여친의 염색체단편 이입은 12.5% 이하로 추정하였는데 실험결과 수여친 염색체 단편이 확실한 것은 ABLs21에서 4.1~8.0% 범위를 나타냄을 알 수 있었다. ABLs21의 양적형질이 관여하는 주요 농업적 형질의 모부본과의 차이는 여교배 과정에서 반복친의 유전적 배경의 회복이라 보이고 질적형질이 관여하는 벼 흰잎마름병 저항성의 차이는 이입된 수여친 염색체단편의 영향으로 생각된다.
염색체 3번, 8번, 10번은 이입된 염색체단편이 하나도 없었으며 염색체 1번 7번, 11 번, 12번은 전 계통에서 염색체단편 이입이 일어났다. 염색체 11번과 12번은 모든 ABLs21의 동일한 부위에 염색체단편이 들어갔으며 특히 염색체 11번의 RM5997 부위는 벼 흰잎마름병 저항성 유전자 Xa21 유전자 주변으로 추정되는 곳으로(Wang et al., 1995) 분자표지 다형성을 보여 그 부위가 염색체단편이 이입 된 것을 확인하였고 Xa3 유전자 부위로 추정되는 RM7170 부위는 다형성이 나타나지 않았다(Table 7, Table 8, Fig. 6, Fig. 7).
하지만 ABL21-1은 유묘기에 감수성 반응이지만 분얼기에는 중도저항성을 보여 다른 반응을 보였다. 이 결과로 레이스와 품종간 상호작용에 따라 저항성 유전자의 발현 양상이 달라질 수 있음을 알 수 있었다. 또한, Zhang et al.
을 가지고 있었다. 이에 ABLs에 대해서도 BC₃F₅세대에 저항성 유전자 분자표지 검정을 탐침 마커 Indel7으로 PCR 한 결과 ABLs21 모두 Stv-bⁱ유전자를 가지고 있는 것으로 확인됐다. 생물검정은 실시하지 못하였다(Fig.
파종후 100~105일 사이 성체 단계(최대분얼기)에 접종하였을 때 유묘·분얼단계와는 다르게 IRBB21과 ABL21-1은 병반 길이 2.5 cm, 1.8 cm로 저항성 반응을 나타냈다.

후속연구

다형성이 나타나지 않은 부위는 반복친과 수여친 중 어느 쪽인지 명확하지 않아 SSR 마커를 확 대하여 매핑 할 필요가 있을 것으로 생각된다. ABLs21에서는 염색체 11번의 염색체단편 이입이 많지 않았는데 여교배 횟수와 단일저항성 유전자 선발에 따른 육종 선발강도의 차이로 생각되지만 보다 면밀한 검토가 필요할 것으로 판단된다.
벼의 가장 큰 병 중 하나인 벼 흰잎마름병은 저항성 품종보다 감수성 품종에서 더욱 빠르게 증식하며 보다 많은 피해를 준다. 따라서 병 전파 지연, 병원균 집단의 안정화 및 단일 저항성 유전자 품종의 지속성을 위해 다양한 저항성 유전자를 가진 품종을 육성하고 재배하여야 할 것으로 보인다. 이에 맞춰 본 연구는 저항성 유전자 확대를 위해 저항성 유전자가 다양한 인디카와의 원연교배를 수행하고 전통육종과 분자육종을 활용하여 우리나라에 적합한 자포니카 품종을 개발하는데 노력하였다.
이 결과로 레이스와 품종간 상호작용에 따라 저항성 유전자의 발현 양상이 달라질 수 있음을 알 수 있었다. 또한, Zhang et al. (1984)은 성체저항성은 파종 후 55일(9엽기)과 68일 (11엽기) 사이에 발현한다고 하였는데 본 실험에서 분얼기를 파종 후 60~65일로 설정 한 만큼 IRBB21과 ABL21-1 간의 저항성 발현 시기가 유전적 배경이 다른 차이에서 오는 것인지 IRBB21과 다르게 ABL21-1이 가진 Xa3 유전자의 상가적 반응인지에 대한 연구는 더 진행되어야 할 것으로 생각된다.

참고문헌 (32)

Cao, Y., X. Ding, M. Cai, J. Zhao, Y. Lin, X. Li, C. Xu, and S. Wang. 2007. The expression pattern of a rice disease resistance gene Xa3/Xa26 is differentially regulated by the genetic backgrounds and developmental stages that influence its function. Genetics 177 : 523-533.

상세보기
Choi, Y. C., M. S. Yun, M. S. Han, and Y. S. Cho. 1981. A study of Bacterial groups distribution of Xanthomonas oryzae (Uyeda et Ishiyama) Dowson in Korea. Annual Report for 1981. RDA. pp. 294-300.
Ho, B. L. and W. C. Lim 1976. Effects of bacterial blight on the yield of rice at various stages of growth. MARDI Res. Bull. 4(2) : 13-22.
Horino, O. and A. Ezuka. 1973. A simple screening method for bacterial leaf blight resistance of rice derived from Wase Aikoku 3. Proc. Assoc. Plant Prot. Hokuriku 21 : 29-32.
Huang, N., E. Angeles, J. Doming, G. Magpantay, S. Singh, G. Zhang, N. Kumaravadivel, J. Bennett, and G. Khush. 1997. Pyramiding of bacterial blight resistance genes in rice: markerassisted selection using RFLP and PCR. Theor. Appl. Genet. 95 : 313-320.

상세보기
Inoue, Y. and Y. Tsuda. 1960. Damage caused by bacterial leaf blight of rice. Shokubutsu Boeki (Plant Prot.) 14 : 348-352.
Kang, J. W., P. Yang, Y. T. Yun, and S. N. Ahn. 2011. Mapping grain weight QTL using near isogenic lines from an interspecific cross. Kor. J. Breed. Sci. 43(4) : 225-231.
Kang, M. H., T. H. Noh, B. C. Lee, S. M. Kim, and H. M. Kim. 2015. Race distribution of rice bacterial leaf blight from 2012 to 2014 and disease severity by rice bacterial leaf blight strains and combinations to IRBB series for resistnat analysis. J. Agri. & Life Sci. 46 : 1-8.
Kaul, M. H. and K. K. Sharma. 1987. Bacterial blight in rice-a review. Biol. Zentralbl. 106 : 141-167.
Kwon, T., J. H. Lee, S. K. Park, U. H. Hwang, J. H. Cho, D. Y. Kwak, Y. N. Youn, Y. S. Yeo, U. C. Song, J. Nam, H. W. Kang, M. H. Nam, and D. S. Park. 2012. Fine mapping and identification of candidate rice genes associated with qSTV11SG, a major QTL for rice stripe disease resistance. Theoretical and Applied Genetics. DOI 10.1007/s00122-012-1893-8.

상세보기
Mazzola, M., J. E. Leach, T. W. Mew, and F. F. White. 1993. Effect of plant age on IRBB21 resistance to Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo). Int. Rice Res. Notes 18(1) : 21-22.
McCouch, S. R., L. Teytelman, Y. B. Xu, K. B. Lobos, K. Clare, M. Walton, B. Y. Fu, R. Maghirang, Z. K. Li, Y. Z. Xing, Q. F. Zhang, I. Kono, M. Yano, R. Fjellstom, G. Declerck, D. Scheider, S. Cartinhour, D. Ware, and L. Stein. 2002. Development and mapping of 2240 new SSR markers of rice (Oryza sativa L.). DNA Res. 9 : 199-207.
Mew, T. W., A. M. Alvarez, J. E. Leach, and J. Swings. 1993. Focus on bacterial blight of rice. Plant Dis. 77 : 5-12.

상세보기
Mew, T. W., C. M. Veracruz, and E. S. Medalla. 1992. Changes in race frequency of Xanthomonas oryzae pv. oryzae in response to rice cultivars planted in the Philippines. Plant Dis. 76 : 1029-1032.

상세보기
National Crop Pest Management System. 2020. Available from:Philippines. http://ncpms.rda.go.kr/npms. Accessed March 20, 2020.
Noh, T. H., K. Y. Kim, D. G. Lee, H. K. Shim, M. Y. Kang, and J. C. Park. 2008. Disease Incidence, Yield and quality comparisons among rice varieties with different resistance to bacterial leaf blight. Res. Plant Dis. 14(3) : 171-175.

원문보기 상세보기
Noh, T. H., D. K. Lee, M. H. Kang, M. S. Shin, H. K. Shim, and S. Y. Na. 2003. Identification of new race of Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) in Korea. Phytopathology. 93 : S66.
Noh, T. H., D. K. Lee, H. K. Shim, S. J. Seo, M. Y. Choi, J. C. Park, C. H. Paik, and H. S. Kim. 2013. Changes distribution and disease occurrence of rice bacterial leaf blight on rice in Korea. J. Agri. & Life Sci. 44 : 5-10.
Ou, S. H. 1985. Rice Diseases. 2nd ed. Commonwealth Mycological Institute, Kew, Surrey, England. pp. 61-96.
Park, H. S. 2016. Pyramiding of effective resistance genes for the disease resistance improvement to bacterial blight in japonica rice. Doctoral Thesis Ph. D., Department of Agronomy, Graduate School, Chungnam National University, Daejeon, Korea.
RDA. 1992 - 2016. Annual Report of Development New Variety of Crops.
RDA. 2012. Manual for Standard Evaluation Method in Agricultural Experiment and Research.
Shin, M. S., T. H. Noh, K. Y. Kim, S. H. Shin, J. K. Ko, and J. K. Lee. 2005. Reaction of Korean rice varieties to new bacterial blight race, K3a. Korean J. Crop Sci. 50(3) : 151-155.
Suh, J. P., T. H. Noh, K. Y. Kim, J. J. Kim, Y. G. Kim, and K. Kshirod. 2009. Expression levels of three bacterial blight resistanc genes against K3a race of Korea by molecular and phenotype analysis in japonica rice (O. sativa L). J. crop Sci. Biotechnol. 12 : 103-108.

원문보기 상세보기
Suh, J. P., J. U. Jeung, T. H. Noh, Y. C. Cho, S. H. Park, H. S. Park, M. S. Shin, C. K. Kim, and K. J. Kshirod. 2013. Development of breeding lines with three pyramided resistance genes that confer broad-spectrum bacterial blight resistance and their molecular analysis in rice. Rice. 6 : 5.

상세보기
Takeuchi, H. 1930. Occurrence of bacterial leaf blight of rice. Bull. Chosen Sotokufu Agric. Exp. Stn. 5(1) : 62-64.
Veracruz, C. M., J. Bai, I. Oa, H. Leung, R. J. Nelson, T. W. Mew, and J. E. Leach. 2000. Predictin durability of a disease resistance gene based on an assessment of the fitness loss and epidemiological consequences of avirulence gene mutation. Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 97 : 13500-13505.

상세보기
Wang, G. L., T. E. Holsten, W. Y. Song, H. P. Wang, and P. Ronald. 1995. Construction of rice bacterial artifical chromosome and identification of clones linked to the Xa21 disease resistance locus. Plant. 7 : 525-533.
Yano, M., Y. Katayose, M. Ashikari, U. Yamanouchi, L. Monna, T. Fuse, T. Baba, K. Yamamoto, Y. Umehara, and T. Sasaki. 2000. Hd1, a major photoperiod sensitivity quantitative trait locus in rice, is closely related to the Arabidopsis flowering time gene CONSTANS. Plant Cell 12 : 2473-2484.

상세보기
Zhang, D. P., Y. F. Xie, and T. W. Mew. 1984. Studies on adult plant resistance to bacterial blight in rice. Sci. Agric. Sin. 1984-1 : 40-50.
Zhang, Q. and T. W. Mew. 1985. Adult-plant resistance of rice cultivars to bacterial blight. Plant Dis. 69 : 896-898.
Zhang, Q. and T. W. Mew. 1989. Types of resistance in rice to bacterial blight. In bacterial Blight of Rice. Proceedings of the International Workshop on Bacterial Blight of Rice, 14-18 March 1988. International Rice Research Institute, P.O. Box 933, Manila, Philippines. pp. 125-134..

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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