[논문]흰쥐의 자궁에 대한 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선 방호효과

이윤지; 김장오; 전찬희; 이지은; 정근우; 정도영; 민병인

doi:10.7742/jksr.2020.14.6.747

[국내논문] 흰쥐의 자궁에 대한 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선 방호효과
Radiation Protection Effect of Mixed Extracts of Artemisia asiatica Nakai and Moringa oleifera Lam on Rats Uterus 원문보기

한국방사선학회 논문지 = Journal of the Korean Society of Radiology, v.14 no.6, 2020년, pp.747 - 753

이윤지 (인제대학교 재난관리학과) , 김장오 (인제대학교 재난관리학과) , 전찬희 (인제대학교 재난관리학과) , 이지은 (인제대학교 재난관리학과) , 정근우 (인제대학교 재난관리학과) , 정도영 (인제대학교 재난관리학과) , 민병인 (인제대학교 재난관리학과)

초록
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본 연구의 목적은 항산화 식품으로 알려진 애엽과 모링가를 적절한 비율로 혼합하여 제조한 추출물의 방사선방호제 개발 가능성을 검토하였다. 애엽-모링가 혼합 추출물을 암컷 SD Rat 2주간 경구 투여 후 7 Gy 방사선을 조사하여 1일 7일, 21일 후에 혈구 성분의 변화, SOD활성 및 자궁의 조직 변화를 관찰하였다.AM + IR Group이 IR Group에 비하여 백혈구(p<0.05) 및 혈소판(p<0.05) 수치 회복 경향이 더 높은 것으로 확인하였다. 또한 SOD 활성을 증가시켰으며 자궁 조직에서는 세포사가 감소한 것을 확인 하였다.이 결과를 토대로 A와 B의 혼합추출물은 방사선 피폭으로 인한 혈구 및 자궁피해를 감소시킬 수 있는 방사선 방호제로서 유용할 것으로 기대된다.

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study was to examine the potential for the development of radioprotective agent in extracts manufactured by mixing Artemisia asiatica Nakai and Moringa oleifera Lam known as antioxidant food with the appropriate ratio. Their whole body were irradiated 7Gy radiation after oral administration of a mixed extract of Artemisia asiatica Nakai and Moringa oleifera Lam to SD Rat for two weeks. And 1 day, 7days, 21days later, changes in blood cell components, SOD activations and tissue changes in the uterus were observed.It was confirmed that the AM + IR group had a higher tendency to recover leukocyte (p<0.05) and platelet (p<0.05) levels than the IR group. It was also confirmed that SOD activity was increased and cell death was decreased in uterine tissue.Based on these results, the mixed extract of A and B is expected to be useful as a radiation protection agent capable of reducing blood cell and uterine damage caused by radiation exposure.

Keyword

표/그림 (6)

그림 Fig. 1. Agility, ELEKTA, Stockholm Sweden, 2010.
표 Table 1. Experimental animal group
표 Table 2. Result of WBC(100/μL) after Irradiation
표 Table 3. Result of Platelet(103/μL) after Irradiation
그림 Fig. 2. Observation of rats' Uterine Cells on H&E stained by optical microscopy (A) NM (B) AM (C) IR (D)AM+IR.
표 Table 4. Result of Final SOD Activity in Rat 21 days after 7 Gy irradiation

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구는 애엽-모링가 혼합추출물을 암컷 SD Rat에 2주간 경구투여 한 후 방사선을 조사하였다. 이때 발생하는 혈구 및 자궁의 조직 변화를 관찰하여 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선방호효과를 알아보고자 한다.
본 연구는 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선방호효과를 확인하기 위하여 애엽-모링가 혼합 추출물을 SD Rat에 경구투여 한 후 7 Gy의 방사선을 전신 조사하였다. 7Gy 선정 이유는 혈구성분 및 자궁의 조직변화를 관찰하기 위해 최적화된 선량이기 때문이다.
본 연구는 암컷 흰쥐에 7 Gy 방사선을 조사 시킨 후 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선방호효과 연구를 진행하였다. 애엽-모링가 혼합추출물 투여 후 방사선조사군(AM + IR Group)이 방사선조사군(IR Group)보다 혈구 성분의 더 빠른 회복 효과를 보였으며 SOD 활성이 더 높은 것을 확인하였다.

제안 방법

방사선이 정확하게 조사되기 위해서 특수 제작한 아크릴 케이스(30×30 cm2)를 이용하여 실험동물들이 서로 겹치지 않게 넣어 고정시켰다.
따라서 본 연구는 애엽-모링가 혼합추출물을 암컷 SD Rat에 2주간 경구투여 한 후 방사선을 조사하였다. 이때 발생하는 혈구 및 자궁의 조직 변화를 관찰하여 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선방호효과를 알아보고자 한다.
시료로 사용된 애엽과 모링가는 100 % 분말 형태로 ㈜열린약초(Seoul, Korea) 및 부산시 국제시장에서 구매하였다. 사전연구에 따라 애엽-모링가 혼합물의 비율 중에서 항산화 효과에 기여하는 폴리페놀(Polyphenol) 및 플라보노이드(Flavonoid) 함량이 가장 높으며 자유라디칼 소거능력이 가장 높은 비율을 참조하여 시료를 제조(Artemisia asiatica Nakai : Moringa oleifera Lam = 3: 1)하였다. 분말 시료와 증류수 비율을 1:10으로 첨가하여 100 ℃에서 3 시간 동안 환류냉각을 2회 실시한 후 시료를 추출하였다.
실험동물은 실내온도 20 ~ 22℃, 습도 50 ~ 60%, 조명시간 12시간/Day cycle로 일정 조건의 Clean Room(인제대학교 동물자원센터)에서 사육하였다. 7 일간의 검역 순화를 가지며 표준사료와 탈이온수를 자유 급식하였다. 환경적응기간이 끝난 실험동물은 Table 1.
과 같이 분류하였다. 그리고 애엽-모링가 혼합추출물 투여군(AM Group)과 애엽-모링가 혼합추출물 투여 후 방사선조사군(AM + IR Group)은 2주간 존대를 이용하여 애엽-모링가 혼합추출물을 경구투여 하였다. 실험동물의 모든 취급은 인제대학교 동물실험윤리위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인(승인번호: 인제 2020-003)하여 수행되었다.
방사선이 정확하게 조사되기 위해서 특수 제작한 아크릴 케이스(30×30 cm²)를 이용하여 실험동물들이 서로 겹치지 않게 넣어 고정시켰다. 깊이 1.5 cm지점에 100 % 선량이 되도록 6 Mev X선으로 7 Gy/1회 전신 조사하였다.
박절한 시료를 염색(H&E staining)하여 광학 현미경으로 관찰하였다
혈액 시료는 방사선 조사후 1일, 7일, 21일에 채취하였다. 자궁은 1일과 21일에 채취하였다.
채취한 혈액은 혈액 응고 방지제(Heparin Lithium)가 처리된 EDTA 튜브에 담아 콜드 믹서(Coulter mixer)를 이용하여 15 분간 혼합하였다. 혈액은 동물전용 혈구분석기(PocH-100i, Japan)를 이용하여 분석하였으며 2 가지 혈구(백혈구, 혈소판)를 분석하였다.
1, 1/5, 1/5², 1/5³, 1/5⁴, 1/5⁵, 1/5⁶의 비율 별로 희석한 시료를 20 μL를 96-well plate에 분주하였다. ELISA reader(biotek, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였으며 매뉴얼에 기술된 공식으로 SOD activity를 계산하였다.
조직학적 관찰을 위하여 채취한 자궁 조직은 10% 포르말린에 고정한 후 실험에 사용하였다. 고정된 조직은 70 % 에탄올(Ethanol)로 탈수하고, 자일렌(Xylene)으로 치환하여 파라핀 블록(Paraffin block)을 제작하였다. 박절한 시료를 염색(H&E staining)하여 광학 현미경으로 관찰하였다
7Gy 선정 이유는 혈구성분 및 자궁의 조직변화를 관찰하기 위해 최적화된 선량이기 때문이다. 그 다음 혈구 변화, SOD측정 및 자궁의 조직관찰을 실시하였다.

대상 데이터

시료로 사용된 애엽과 모링가는 100 % 분말 형태로 ㈜열린약초(Seoul, Korea) 및 부산시 국제시장에서 구매하였다. 사전연구에 따라 애엽-모링가 혼합물의 비율 중에서 항산화 효과에 기여하는 폴리페놀(Polyphenol) 및 플라보노이드(Flavonoid) 함량이 가장 높으며 자유라디칼 소거능력이 가장 높은 비율을 참조하여 시료를 제조(Artemisia asiatica Nakai : Moringa oleifera Lam = 3: 1)하였다.
분말 시료와 증류수 비율을 1:10으로 첨가하여 100 ℃에서 3 시간 동안 환류냉각을 2회 실시한 후 시료를 추출하였다. 이 추출물은 여과지(Toyo roshi kaisha, Ltd, Japan)로 여과한 후 감압 농축한 다음 회전 증발기(R-100, BUCHI)를 이용하여 건조 후 실험에 사용하였다.
실험동물은 생후 5주령 된 암컷 흰쥐(Sprague Dawley Rat, SD rat) 72 마리를 하나바이오(Gyeonggi-do, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 실험동물은 실내온도 20 ~ 22℃, 습도 50 ~ 60%, 조명시간 12시간/Day cycle로 일정 조건의 Clean Room(인제대학교 동물자원센터)에서 사육하였다.
실험동물은 생후 5주령 된 암컷 흰쥐(Sprague Dawley Rat, SD rat) 72 마리를 하나바이오(Gyeonggi-do, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 실험동물은 실내온도 20 ~ 22℃, 습도 50 ~ 60%, 조명시간 12시간/Day cycle로 일정 조건의 Clean Room(인제대학교 동물자원센터)에서 사육하였다. 7 일간의 검역 순화를 가지며 표준사료와 탈이온수를 자유 급식하였다.
혈액 시료는 방사선 조사후 1일, 7일, 21일에 채취하였다. 자궁은 1일과 21일에 채취하였다. 실험 동물은 2 % Isoflurane를 사용하여 흡입 마취 시킨 후 복부를 절개하여 복강 대정맥에서 전혈을 채취하였다.
자궁은 1일과 21일에 채취하였다. 실험 동물은 2 % Isoflurane를 사용하여 흡입 마취 시킨 후 복부를 절개하여 복강 대정맥에서 전혈을 채취하였다. 자궁 조직은 적출하여 PBS(Phosphate Buffer saline)로 세척한 후 10% 포르말린(Formalin)으로 고정시켰다.
조직학적 관찰을 위하여 채취한 자궁 조직은 10% 포르말린에 고정한 후 실험에 사용하였다. 고정된 조직은 70 % 에탄올(Ethanol)로 탈수하고, 자일렌(Xylene)으로 치환하여 파라핀 블록(Paraffin block)을 제작하였다.

데이터처리

실험결과는 SPSS(IBM SPSS statistics ver. 26) 프로그램을 이용하여 Student's t-test로 분석하여 평균 ± 표준편차(Mean ± SD)로 표시하였다.

이론/모형

실험동물의 방사선 조사는 임상치료용인 선형가속기(Agility, ELEKTA, Stockholm Sweden, 2010)를 사용하였다. 방사선이 정확하게 조사되기 위해서 특수 제작한 아크릴 케이스(30×30 cm²)를 이용하여 실험동물들이 서로 겹치지 않게 넣어 고정시켰다.
SOD 활성 변화를 관찰하기 위하여 SOD Assay kit - WST(Dojindo Inc, Rockville, MD, Japan)를 사용하여 제공된 메뉴얼 방법대로 측정하였다. 대조구는 Dilution buffer을 사용하였으며 세포는 Incubater(DS-10S, Dasol scientific co.

성능/효과

또한 7일 차에 비하여 21일 차 애엽-모링가 혼합추출물 투여후 방사선조사군(AM+IR Group)의 혈소판 수는 1746 ⨉ 103/μL 회복하였으며, 방사선조사군 (IR Group)은 1388⨉ 103/μL 만큼 회복하였다.
(p < 0.05) 방사선 조사 7일 차에서 방사선을 조사한 두 그룹은 혈소판(Platelet)의 수치가 급격하게 감소하였으며, 21일 차가 되었을 때 혈소판 수치는 회복하는 경향을 나타내었다.
또한 1일 차에 비하여 애엽-모링가 혼합추출물 투여후 방사선 조사군(AM+IR Group)의 백혈구 수는 3.85 ⨉ 103/μL 회복하고 방사선조사군(IR Group)은 2.98 ⨉ 103/μL 만큼 회복하였다.
68 U/ml 로 나타났다. 따라서 애엽-모링가 투여후 방사선조사군(AM + IR Group)이 방사선조사군(IR Group)에 비해 SOD 활성화가 더 높게 관찰되었다.
혈구 성분의 변화를 관찰한 결과 방사선 감수성이 가장 높은 혈구 중 하나인 백혈구는 방사선 조사 1일 차에서부터 다른 혈구 성분들에 비해 빠른 반응을 보였다. 방사선 조사군(IR Group)과 애엽-모링가 혼합 추출물 투여후 방사선 조사군(AM + IR Group) 1일 차에서 모두 급감하였다.
자궁(Uterine)은 수정란이 착상하여 태아가 성장하는 장소로서 태아를 출생할 때까지 보호하며 모체로부터 영양분을 공급해 주는 기관이다. 방사선 조사군(IR Group, AM+IR Group)이 방사선 비조사군(NM Group, AM Group)에 비하여 세포가 응축되는 경향이 현저히 나타났으며 애엽-모링가 혼합추출물 투여 후 방사선조사군(AM+IR Group)이 방사선조사군(IR Group)에 비하여 세포가 응축되는 경향이 감소한 것을 관찰 할 수 있었다. 이로써 애엽-모링가 혼합추출물은 방사선조사에 의한 자궁세포가 응축되는 경향을 줄일 수 있을 거라 기대된다.
본 연구는 암컷 흰쥐에 7 Gy 방사선을 조사 시킨 후 애엽-모링가 혼합추출물의 방사선방호효과 연구를 진행하였다. 애엽-모링가 혼합추출물 투여 후 방사선조사군(AM + IR Group)이 방사선조사군(IR Group)보다 혈구 성분의 더 빠른 회복 효과를 보였으며 SOD 활성이 더 높은 것을 확인하였다. 또한 자궁에서는 방사선에 의해 세포가 응축되는 경향이 감소한 것을 확인할 수 있었다.

후속연구

68 U/ml)에서 활성도가 더 높게 나타났다. 이는 애엽-모링가 혼합추출물은 방사선으로 인해 생성된 자유라디칼 소거 능력이 우수할 것으로 기대된다.
방사선 조사군(IR Group, AM+IR Group)이 방사선 비조사군(NM Group, AM Group)에 비하여 세포가 응축되는 경향이 현저히 나타났으며 애엽-모링가 혼합추출물 투여 후 방사선조사군(AM+IR Group)이 방사선조사군(IR Group)에 비하여 세포가 응축되는 경향이 감소한 것을 관찰 할 수 있었다. 이로써 애엽-모링가 혼합추출물은 방사선조사에 의한 자궁세포가 응축되는 경향을 줄일 수 있을 거라 기대된다.
본 연구를 통해 애엽-모링가 혼합추출물은 천연 방사선 방호제로서의 중요한 영향을 미칠 것으로 기대된다.
또한 자궁에서는 방사선에 의해 세포가 응축되는 경향이 감소한 것을 확인할 수 있었다. 따라서 애엽-모링가 혼합추출물은 천연 방사선 방호제로서 가능성이 있을 것이라 기대된다. 하지만 간접작용에서 애엽-모링가 혼합추출물 성분의 방사선 방호효과에 대한 매커니즘은 계속 연구가 되어야 된다고 사료된다.
따라서 애엽-모링가 혼합추출물은 천연 방사선 방호제로서 가능성이 있을 것이라 기대된다. 하지만 간접작용에서 애엽-모링가 혼합추출물 성분의 방사선 방호효과에 대한 매커니즘은 계속 연구가 되어야 된다고 사료된다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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